TR201809630T4 - Çok değerlikli siyalik asit türevleri. - Google Patents

Abstract

Bir bağlayıcı aracılığıyla 3 veya 4 siyalik asit kalıntısının bağlandığı bir çekirdek kısım içeren üç veya dört değerlikli siyalik asit türevleri açıklanmaktadır. Bu tür türevler, insan hücrelerine adenovirüsün bağlanmasını inhibe etmektedir, bu suretle epidemik keratokonjonktivit gibi enfeksiyonlar üç veya dört değerlikli siyalik asit türevlerinin uygulanması ile tedavi edilebilmektedir veya önlenebilmektedir.

Description

TARIFNAME ÇOK DEGERLIKLI SIYALIK ASIT TÜREVLERI Teknik Alan Mevcut bulus, yeni çok degerlikli siyalik asit türevleri, bu gibi türevlerin farmasötik bilesimleri ve bu tür bilesimlerin kullanIiEIile epidemik keratokonjonktivit (EKC) ve hücre yüzeyi üzerindeki terminal siyalik kallEtllâra baglanan virüs tarafIan meydana gelen diger gözle ilgili hastallElarI tedavisi veya önlenmesinin bir yönteminde kullanl]B1ak üzere söz konusu bilesikler ile ilgilidir. Önceki Teknik Memeli adenovirüs cinsine (Mastadenov/rus) ait olan insan adenovirüsleri (HAdV:s), yaygI bir sekilde bulaslîünaddeler ile karsllâsmaktadß Insanlarda, adenovirüsler, konjunktivit ve epidemik keratokonjonktivit (EKC) gibi gözle ilgili hastalHZJarEüçeren çesitli klinik semptomlarEl ile iliskilidir.

Su zamana kadar, adenovirüs enfeksiyonlarlElI tedavisi için mevcut maalesef hiçbir özel antiviral ilaç yoktur. Adenovirüsler, hücrelerin replikasyon makinelerine tamamen bagIEl oldugunu gösteren zorunlu hücre içi parazitlerdir. Bu yüzden antiviral bilesikler tarafIan adenovirüs replikasyonunun seçici inhibisyonu, konak hücrelerin önemli fonksiyonlari. bazllârII degisebilmesinden dolayülilasllmasüordur. Bununla birlikte, günümüz antiviral ilaç arastünas- bir yaklasIl, virüslerin hücresel reseptörlerini bloke etmeyi içermektedir, böylece hücrelere baglantlgEl ve penetrasyonu imkanslîl klIJEtnaktadlEl Epidemik keratokonjonktivitin (EKC) tedavisinde kullan! için bu tür bloke etmeye dayanan hiçbir ilaç kaydedilmistir.

Adenovirüsler, dogada yaygIlEl ve bu yüzden yeni serotipler hala kesfedilmektedir.

DolayElgla, birinci HAdV:s'nin izolasyonundan sonra yaklasllZl 60 yil] yedi türe (A-G) gruplandlülân 50'nin üzerinde yeni serotip belirlenmistir.

EKC, her yIElminonIarca Insan tarafIan kapllân ciddi ve oldukça bulasEEgözle ilgili bir enfeksiyondur. EKC, HAdV-8, HAdV-19 ve HAdV-37'den sorumlu adenovirüs serotipleri arasIa enfeksiyonun basllîla nedensel maddeleri olmaya devam etmektedir, ancak son zamanlarda HAdV-53, HAdV-54 ve HAdV-56, EKC'ye neden olan türler olarak yeni ortaya çlKlnIStlEl Iliskili semptomlar keratit, konjonktivit, ödem, agrü Iakrimasyon, psödomembranlarl olusumu ve azalmlglgörmedir. Bu virüsler temasla (örnegin, el ile göz temasLIlyayIlgiEiçin EKC, yogun nüfuslu alanlarda ve yetersiz hijyen önlemleri ile hastane koguslarIa s[Kça görülmektedir. Enfeksiyon genellikle iki haftaya kadar sürmektedir; bununla birlikte, bazElhastalar birkaç ay, yil] hatta kallîljolarak görme bozuklugundan muzdariptirler.

Viral yasam döngüsü, adenovirüslerin homotrimerik fiber bogumlarüvasüâslîla, kornea ve/veya konjonktivada epitelyal hücreler üzerinde yer alan siyalik asit içeren glikanlar- baglanmasEiIe baslatüßîaktadü Adenovirüs viryonundan ç-Üapan 12 fiberin her birinin en uzak kEtnIa bulunan fiber bogumlar, karbonhidrat tanIia alanlarIEltutmaktadlB Son zamanlarda GDla gangliosidlerindeki glikanlara karsHJEl gelen glikanlara sahip glikoproteinler, EKC'ye neden olan adenovirüsler tarafIan gözle ilgili hücrelerin enfeksiyonu için fonksiyonel reseptörler olarak kaniflbnmlgtü HAdV-37-GDla kompleksinin kristal yapEIJGDla glikanII iki kolunun her birine yerlesmis terminal siyalik asit kallEtUârIE, HAdV-37 fiber bogumu üzerinde üç karbonhidrat tan a bölgesinden ikisinde yer ald [glIIIçliöstermistin Bu nedenle, adenovirüslerin dogal veya sentetik siyalik asit türevleri ile inhibisyonu, viryonun baglanarak yeni hücrelere nüfuz etmesini ve enfekte olmasIElönleyebiImektedir (bakIIZl digerleri araslfiha WO 01/037846). Bir sonuç olarak, enfeksiyon sIIHlandlEllâcaktlEl Önemli ve özellikle EKC durumunda, hlîlßerum klirensi ve zaylühücresel alma sahip olan karbonhidrat bazlElilaçIarI zayif] farmakolojik özellikleri topikal bir uygulama seklinin kullanüßîasma (örnegin, krem, merhem, göz damlasDîlatlanabilmektedir.

WO 01/037846, adenoviral enfeksiyonlar ve özellikle keratokonjunktivit gibi gözle ilgili adenoviral enfeksiyonlarIEl, siyalik asit gibi terapötik olarak etkili bir miktarda siyalik asit ve virüs araleUaki etkilesimi engelleyerek bir maddenin uygulanmasljlle tedavi edilebilmektedir veya hafifletilebilmektedir. Maalesef, karbonhidratlar ve proteinler arasIaki zayif] etkilesimler, ilaç olarak karbonhidratlarlEl kullanIilElßIlEllamaktadlE Karbonhidratlar ve proteinler araleUaki etkilesimleri gelistirmek için çok degerlikli bilesiklerin sentezlenmesinin çesitli yollarü teknolojide açlklanmlgtlîl (örnegin, bakIlZl Organic and Söz konusu sIIIEIlamalar üstesinden gelme girisimleri, insan serum albümine (SA-HSA) baglü birkaç siyalik asit türevi ile bir glikokonjugat kullanilârak yapllîhlgtlîl Bununla birlikte, bu tür çok degerlikli glikokonjugatlar ilaç farmasötikler olarak uygun olmayan birçok neden içindir.

SA-HSA'nI tam yapEEl/e bilesimi farklElnoleküller arasIa degisiklik gösterecektir. Buna göre SA-HSA yaplglal olarak tanIiIanmasüzor olan bir yapEtürünü temsil etmektedir. AyrlEla, SA-HSA türevlerinin bilesimi, aynEIsekilde üretilse bile farkIElseriler arasüda degisiklik gösterecektir. Güvenli ve düzenleyici bir perspektiften, bu önemli bir dezavantajdlE Buna ek olarak bir proteinin yani insan plazmasian türetilen HSA'nI kullanIiEIönemli bir dezavantajdlîl HSA'nI kökeni, HSA bazlEbir farmasötigin daha büyük miktarlarlElEüretmeyi zor hale getirmektedir. Ayrlîla, virüsler veya prionlar gibi bulaslElIlajanlar tarafIan kontaminasyon, insan plazmasIan türetilen HSA'da hariç tutulamaz. Uygun bir sekilde, HSA bazlübir ürün, bir farmasötik ürün olarak uygun degildir ve birçok degerlikli alternatif oldukça cazip olacaktlEI asit türevleri açlElanmaktadlEl Agregatlar, SA-HSA ile iliskili dezavantajlari üstesinden gelmek için aç[lZ]anmaktadlî,l bu suretle EKC tedavisinde faydalIlEI Bu türevlerin baska AyrlEh, insan korneal epitelyal (HCE) hücrelerinin HAdV-37 enfeksiyonunun kovalent olarak baglanmlgl çok degerlikli verimli siyalik asit-bazlünhibitörleri teknikte bildirilmistir (bakIEl göreceli olarak düsük verimliliginden kurtulmak Için, yazarlar HAdV-37 fiber bogumda trimer baglanma bölgesinin faydasIlZlgörmüstür. Spjut ve ark. tarafIian açllZIandiglîlgibi, her bogum için birden fazla karbonhidrat tania alan. eszamanlEblarak baglanabilen üç ve dört degerlikli siyalik asit türevlerinin kullanIiÇl tek degerlikli siyalik asit bilesikleri ile karsllâst-[glia inhibitör potansiyelini arttlîilnßitlü Örnegin, squarik asitin merkezi bir çekirdek birimine siyalik asiti baglamak için kullan-[gü sentetik bir üç degerlikli siyalik asit türevi olan, MEO322 ile simgelendirilen bir bilesik, dogal siyalik asit monosakkaritlerden daha potansiyel dört sifa büyüklük ile bildirilmistir. AyrlEh MEO322, fiber boguma virüsün baglanmasIElönlemede 17-degerlikli siyalik asit-HSA konjugatEblarak yeterince etkili idi. Ilginç bir sekilde, ME0322, HAdV-37 tarafIan insan korneal epitelyal (HCE) hücrelerinin enfeksiyonunu inhibe etmede HSA-konjugatian açlKl ara daha fazla potansiyel olarak bulunmustur.

Söz konusu bilesik asla ilginç özellikler gösterirken, insan korneal epitelyal (HCE) hücrelerine HAdV-37 viryonlarII baglanmaslßngellemesi bak“an gelismis potansiyele sahip birçok degerlikli siyalik asit türevini saglamak için faydallîilacaktE Dolaylîlîla, insan korneal epitelyal (HCE) hücrelerine HAdV-37 viryonlarlElI baglanmalel önlemede yüksek verimlilik gösteren düsük moleküler, çok degerlikli siyalik asit türevine teknikte hala ihtiyaç vardlE Böyle bir türev, EKC'nin tedavi edilmesinde ve önlenmesinde faydalüilacaktß Kßh Aç[lillama Sonuç olarak, mevcut bulus, üç veya dört degerlikli siyalik asit türevini saglayarak tek bas. veya kombinasyon halinde dezavantajlarda ve teknikte yukarida belirlenen eksikliklerin biri veya daha fazlasIEI hafifletmek, azaltmak, ortadan kaldlElnak veya geçirmek için çabalamaktadlîl formül A veya B'ye göre 3 veya 4 gruba kadar bir çekirdek klgmEilçeren söz konusu türev baglanmaktadlEl R1 H 0 X/(CH2M`N' "N R1 g 0 X/(CHZ)"2\(I\!`*Ãa R1, C1-3 alkildir; tamsaylîlni", 2 ila 8'dir; tamsaylZlnZ”, 1 ila 8'dir; ve dalgalEçizgi, çekirdek klim- baglanma noktasIEgöstermektedir; burada söz konusu çekirdek klglnEliormüller II ve V'den herhangi birine göre bir k-idlîl 0,5 alkil H *ti av›` ve “k (V) k-i II'ye baglanmlggruplar Formül A'ya göre gruplar ise, Formül II'deki tamsaylîlm 1" 1 k-i II'ye baglanmlglgruplar Formül B'ye göre gruplar ise, Formül II'deki tamsaylîlm 1” 2 tamsaylZlmZ" 1 ila 8'dir; ve dalgalmizgiler formül A veya B'ye göre gruplara baglanma noktaslmöstermektedir; bir serbest baz, yüksüz protonlanmlglformdaki bir asit, bir ikiz iyon, bir farmasötik olarak uygun ilave tuz, solvat veya bunlari bir tuzunun solvatlîrblarak.

Bulusun yönlerine göre: olabilmektedir; söz konusu gruplar formül A'ya göre gruplar olabilmektedir ve/veya kendi serbest formunda söz konusu türevin moleküler aglEll[gll:ll,500 Da veya daha azü olabilmektedir; veya olabilmektedir; söz konusu gruplar formül B'ye göre gruplar olabilmektedir; ve/veya kendi serbest formunda söz konusu türevin moleküler aglElllglEIl,500 Da veya daha azEl olabilmektedir.

Baska yöne göre, en az bir farmasötik olarak uygun yardIicEmadde ve burada yukari açlElanan türün siyalik asit türevini içeren göze uygulanmasüîçin bir farmasötik bilesim mM'sini Içeren bir sulu bilesim olabilmektedir. Su içerigi, bu tür bir sulu bilesimin aglülilîça en az °/090'|:blabilmektedir. AyrlEla bu tür bir sulu bilesim, bir izotonik çözelti saglamak için gliserol gibi bir madde içerebilmektedir.

Baska bir yöne göre, burada yukar- açllaandigilîgibi siyalik asit türevi veya bu tür bir türev içeren farmasötik bilesim terapide kullan a yöneliktir.

Baska bir yöne göre, bu tür bir türev içeren farmasötik bilesim veya burada yukarlElia açlKlanan siyalik asit türevi, söz konusu virüs tarafIan bulasacak hücrenin hücre yüzeyi üzerinde mevcut olan terminal siyalik kallütllâra baglanan bir virüs kaynaklEbir gözle ilgili enfeksiyonun tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanIi içindir. Enfeksiyon, HAdV-8, HAdV- oldugu bir enfeksiyon olabilmektedir. AyrlEia enfeksiyon, epidemik keratokonjonktivit olabilmektedir.

Ayrlîa, bulusun çesitli düzenlemelerinin avantajlElözeIlikleri, bagIIZIistemlerde ve detaylEl tarifname içinde tanIiIanmaktadEl Tercih edilen yaptllind Elnalai-I ayrItlIüçllillamasEl Burada kullanIlglljljibi, “ilave tuz" terimi ile organik veya inorganik asitler gibi bir farmasötik uygun asit veya bir farmasötik olarak uygun bazI eklenmesi ile tuzlarI olusturulmasü amaçlanmaktadlü Organik asit, asetik, propanoyik, metansülfonik, benzensülfonik, laktik, malik, sitrik, tartarik, süksinik veya maleik asit olabilmektedir, ancak bunlarla sIlîllüIegildir.

Inorganik asit, hidroklorik, hidrobromik, sülfürik, nitrik asit veya fosforik asit olabilmektedir, ancak bunlarla sIlEIlüdegildir. Baz, alkali veya alkali toprak metallerin amonyak ve hidroksitleri olabilmektedir, ancak bunlarla sIlEllIIrllegildir. "Ilave tuz” terimi ayrlEla hidratlar ve alkolatlar gibi hidratlar ve çözücü ekleme formlarllîda içermektedir.

Burada kullanI[g]I:gibi, tek bas. ya da bir son ek ya da ön ek olarak kullanilan “alkil”in, belirli say. karbon atomuna sahip olan hem dallara ayrllüilgl hem de düz zincirli doymus alifatik hidrokarbon gruplarIElkapsamasümaçlanmaktadlEl Örnegin "Cl-6 alkil" 1, 2, 3, 4, 5 veya 6 karbon atomuna sahip olan alkili belirtmektedir.

Bilesik/er HAdV-37 insan korneal epitelyal hücrelerin baglanmalelElnhibe etmek için teknikte bilinen ME0322 (asag- bakIEl olarak simgelenen üç degerlikli siyalik asit türevi, üç ana eleman, bir çekirdek klglnüsiyalik asit kalütllârü/e çekirdek kEmEl/e siyalik asit kallEtllârIElbaglayan baglaylEllâra sahiptir. Baglay-, squarik asite bagIIZI olan bir kenetleme kallEtlîEl bulunmaktadlE Üç degerlikli siyalik asit türevi ME0322, eszamanlüilarak fiber bogumun tüm üç siyalik asit baglanma bölgeleri ile etkilesime izin vermesi için yeterli esneklik saglayacak sekilde tasarlanmlstlü Görünüste, HAdV-37 fiber basElve ME0322'nin bir kompleksinin çözünük bir kristal yapElJeszamanlßlarak tüm üç siyalik asit baglanma bölgelerine bilesigin baglanabilmesini dogrulamaktadlü bu suretle baglaylîllâr tarafIan saglanan esnekligin yeterli oldugu dogrulanmaktadB Siyalik asit Squarik asit kallEtlîEile diger kenetleme kallEt-I yer degistirmesi, HAdV-37 fiber bogumda karbonhidrat tanIia bölgeleri ile ilave temas olusturulmasüiçin araçlarI saglanmasi. baglanma afinitesini potansiyel olarak arttßbilecegi tahmininde bulunulmustur. SasIlEDJir sekilde, mevcut bulus sahipleri, bir triazol asit kenetleme kallEtlîEiIe ME0322'de mevcut oldugu gibi, squarik asit kenetleme kallEt-I yer degistirmesinin, insan korneal epitelyal hücrelere HAdV-37'nin baglanmasIEbnlemek için artmlgl potansiyel ile çok degerlikli siyalik asit türevleri ile sonuçland @IEogrulamlgtIEl Dolaylîlýla, bir yapilândlülna, üç veya dört siyalik asit türevi ile ilgilidir, formül A veya B'ye göre 3 veya 4 gruba kadar bir çekirdek klîinlîçeren söz konusu türev baglanmaktadlEl R1 II:: 0 X/ (CH2)n1"N' "N 71/ 0 *< R1, C1-3 alkildir; tamsaylîlnl", 2 ila 8'dir; tamsayDnZ”, 1 ila 8'dir; ve dalgalEizgi, çekirdek klim- baglanma noktaslülügöstermistir.

Bu tür bilesikler, serbest bazlar, kendi yüksüz protonlanmSl formunda asitler, farmasötik olarak uygun ilave tuzlar, solvatlar veya farmasötik olarak uygun ilave bir tuzun solvatlarEl olarak mevcut olabilmektedir. Bilesikler bir alkalin triazol kallEtlîElve hatta bir asidik karboksilik ki içermesinden dolayÇl ikiz iyon olarak bulunabilmektedirler. Ayrlîla, söz konusu bilesik, saf steroizomer veya söz konusu bilesigi içeren bir rasemik, diasteromerik, skalemik veya anomerik karlgEii olarak mevcut olabilmektedirler. Tercihen, söz konusu bilesik, bir saf stereoizomer veya bir anizomer karElmüilarak mevcuttur.

Eger bir anomerik karlgm içinde mevcut ise, a-anomerin üstün geldigi durum tercih edilmektedir. Uygun bir sekilde, bir bilesigin %75 veya daha fazlasiZl°/o90, %95, %99 veya hatta %99,9'dan daha fazlasÜx-anomer olarak bulunursa tercih edilmektedir. KarsiJIKJ gelen B-anomerleri asagida örneklendirilmektedir.

HOOH X/(CH2)n1\N'N\`N HOOH X/(CHýinPVN/sî R1\n/ N- ve S-glikositleri ilgi alani girse bile, O-glikositleri tercih edilmektedir. Dolaylîlgla, bir yapliândlünaya göre Formül A ve B'deki “X”, “O"dur (oksijen).

Bir önceki ile ilgili olan önceki HSA türevleri için, R1'in HAdV-37 Über bogumun karbonhidrat tanIia bölgeleri için afiniteye sahip bilesiklerde metile sIlîllandlEllIhadlglEldaha önceden açlEland [glügibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi metil ile sIlHlandlElIIhazsa, R1'in metil oldugu durum seçilmektedir.

Burada açlKlandlgllîgibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinde, siyalik asit kallEtEEbir alkilen arac[[[gllýla triazol kallEt- baglanmaktadE Bir alkilen tercih edilirken, siklopropil (bulusun parçasEldegil) gibi bir sikloalkil k! içeren bir baglaylElJveya bir ki& PEG- baglay-I belirtilmesi ile alkilenin yer degistirmesi planlanmaktadE Alkilen çesitli uzunluklarda olabilmektedir, yani, formül A'ya göre gruplar içeren üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi için etilenden oktilene ve formül B'ye göre gruplar içeren üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi için metilenden oktilene gibi. Bununla birlikte, alkilenin etilen veya propilen oldugu durum tercih edilmektedir. Dolaylglýla, formül A'ya göre gruplar içeren üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinde tamsayEl`n1”in 2 veya 3 oldugu durum tercih edilmektedir. Benzer sekilde, formül B'ye göre gruplar içeren üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinde tamsaylIlnZ'hin 1, 2 veya 3 oldugu durum tercih edilmektedir.

Burada açllZlandlgllîgibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi, baklEl(I) katalizlenmis azit- alkin Huisgen sikloilavesinde (asaglkine baska deneysel ayriEtlBr ile bakllû etin gruplarEl içeren bir çekirdek klima sahip azit grubu içeren siyalik asit kallEt-I birlestirilmesiyle elde edilmektedir. Benzer sekilde, etin grubu içeren bir siyalik asit kallEtEÇlbaklrîlG) varllglIa azit gruplarIEilçeren bir çekirdek k-i ile birlestirilebilmektedir. Bir yapilândlElnaya göre, burada aç[Eland [gllîlgibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevleri formül A'ya göre gruplar içermektedir. Diger yapllândlîilnaya göre, burada aç[lZland[glgibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevleri formül B'ye göre gruplar içermektedir. Görünüste, bilesikler, formül A'ya göre en az belirli baglaylElJJzunluklarlEla sahip gruplar içeren bilesiklerden formül B'ye göre gruplar içeren bilesiklerden daha fazla potansiyele sahip olabilmektedir.

Slßslýla tripoargilamin ve tr/'s (Z-az/doet/Uamin/'n, HAdV-37 fiber bogumda karbonhidrat tanIia bölgeleri için artmlglafiniteye sahip üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinin elde edilmesinde çekirdek k-ilarElolarak faydalDolduklarElbulunmustur, mevcut bulus, üç degerlikli çekirdek klîinII sadece bu türü ile hiçbir sekilde sIlEllandlElllIhamaktadE Üç veya dört etin veya azit gruplarlîiçeren yaplglal olarak iyi tanIilanmlgJ diger küçük moleküler bilesikler, üç veya dört siyalik asit türevleri elde etmek için bak. (1) varllglmla siyalik asit kallEtllârEile birlestirilebilmektedir.

Bir yapllândlîilnaya göre, kendi serbest formunda üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinin veya daha azIE Fiber bogumun üç siyalik asit baglanma bölgesi birbirine oldukça yakI konumlandlglIan (yani, yaklaslEl olarak 10 Â) dolayÇl üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinin siyalik asit kallEtllârIlEl ayrlIIhad[gll:tlurum tercih edilmektedir. AyrlEla, siyalik asit kallEtllârEarasIaki çok esnek bir çekirdek klglnEl/eya çok büyük mesafe, fiber boguma türevin baglanmasIlZblumsuz bir sekilde etkileyebilmektedir. Küçük ve daha leEbir türev, fiber bogum proteinine baglandlglIa daha az entropi kaybEile sonuçlanacaktlElve dolaylîlîla gelismis potansiyele katki bulunacaktlE Daha önce açllZlandlglEgibi, çekirdek k-i çesitli türlerde olabilmektedir. Bir yapllândlîilnaya göre, çekirdek klgl'nlîllormül II ila V'den birine göre bir kidlEl C1-5 aIkII H k-i I'e baglanan formül A veya B'ye göre gruplar, formül A'ya göre gruplardlB k-i II'ye baglanan formül A veya B'ye göre gruplar. Formül A'ya göre gruplar oldugu durumda Formül II'deki tamsayElmi” 1 ila 8'dir; k-i II'ye baglanmßformül A veya B'ye göre gruplarI Formül B'ye göre gruplar oldugu durumda Formül II'deki tamsayljml" 2 ila 8'dir; tamsayElmZ” 1 ila 8'dir; ve dalgalßizgi, formül A veya B'ye göre gruplara baglanma noktaslügiöstermektedir. Çekirdek klginII tam dogasübaglanma afinitesi için daha az önemli iken, çekirdek klgInII formül II'ye göre bir k-i oldugu durumun her durumda tercih edildigi bulunmustur. Buna ek olarak, tercihen tamsayü"m1” 1 ila 3'tür ve tamsaylZl"m2" 1 ila 3'tür. AyrEb, bir yapllândlîrlnaya göre, k-i II'ye baglanan formül A veya B'ye göre gruplar, Formül A'ya göre gruplardE Diger yapllândlElnaya göre, bunlar Formül B'ye göre gruplardE Bir yapllândlElnaya göre, burada açllZlandlglgibi bir üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi, Formül A'ye göre gruplar içermektedir ve asag-kileri içeren gruptan seçilmektedir: Tris ((1-(2-0-(5-N-asetamido-3,5-dide0ksi-D-glisem-on-D-galakto-Z-nonülopiranosilonik asit))-2-0ksoetil-1H-1,2,3-triazoI-4-il)metil) amin; Tris ((1-(2-0-5-N-asetamid0-3,5-dide0ksi-D-glisem-or-D-galakto-Z-nonülopiranosilonik asit))-3-0ksopr0piI-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amin; Tris ((1-(2-0-(5-N-propanoilamido-3,5-dideoksi-D-glisero-a-D-gaIakt0-2- nonülopiranosilonik asit))-2-0ksoetil-1H-1,2,3-triazoI-4-il)metil)amin; ve Tris ((1-(2-0-(5-N-propanoilamid0-3,5-dideoksi-D-glisero-a-D-gaIakto-2- nonülopiranosilonik asit))-3-0ksopr0piI-1H-1,2,3-triazoI-4-il)metil)amin Bu tür bir yapllândiüinaya göre, üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinin Tris ((1-(2-0-(5- N-asetamid0-3,5-dideoksi-D-gIisero-a-D-galakto-Z-nonüIopiranosilonik asit))-3-0ksopr0pil- 1H-1,2,3-triazoI-4-il)metil)amin oldugu durum tercih edilmektedir.

Bir yapilândlüinaya göre, burada açiKIand[gi®ibi bir üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi, Formül B'ye göre gruplar içermektedir ve asag-kileri içeren gruptan seçilmektedir: Tris ((4-(2-0~(5-N-asetamIdo-3,5-dide0ksi-D-glisero-or-D-galakto-Z-nonÜlopiranosilonik asit))-2-0ksometil-1H-1,2,3-triazoI-1-il)etil)amin; Tris ((4-(2-0(5-/i/-propanoilamido-3,5-dideoksi-D-glisero-or-D-galakto-Z- nonülopiranosilonik asit))-2-oksometII-1H-1,2,3-triaz0l-1-il)etil)amin; Tris ((4-(2-0-(5-Nasetamido-3,5-dide0ksi-D-gliser0-0i-D-galakto-Z-nonülopiranosilonik asit))-2-0ksoetil-1H-1,2,3-triazol-1-il)etil)amin; ve Tris ((4-(2-0-(5-/V-propanoiIamido-3,5-dideoksi-D-glisero-or-D-galakto-Z- nonülopiranosilonik asit))-2-0ksoetil-1H-1,2,3-triazol-1-il)etil)amin.

Bu tür bir yapllândiîiinaya göre, üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinin Tris ((4-(2-0-(5- N-asetamido-3,5-dide0ksi-D-gIisero-u-D-galakto-Z-nonülopiranosilonik asit))-2-oksometiI-1H- 1,2,3-triazol-1-il)etil)amin oldugu durum tercih edilmektedir.

Farmasötik bilesim Bulusun diger yapllândlîilnasüörnegin burada açllZlandigiEgibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi içeren EKC'nin tedavisi ve/veya önlenmesi için bir ilaç gibi bir farmasötik bilesim ile ilgilidir. Bu tür bir farmasötik bilesim, ayrlEla taslîilalâr, seyrelticiler ve/veya stabilizatörler gibi farmasötik olarak uygun yard ncülnaddeler içerebilmektedir. Uygulanabilir düzenlemeye baglü olarak, farmasötik bilesim, gözde bir enfeksiyonunun önlenmesi veya tedavisi için bir tllîbi cihaz veya bir farmasötik olarak ayrlEh sIlfllandlElâbilmektedir. Bilesimin burada bir farmasötik bilesim olarak ifade edildigi gerçegi, tIi bir cihaz olarak bilesimin kayd hariç tutulmasügibi degerlendirilmemelidir. Üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinin virüs baglanma özellikleri, örnegin bir lens çözeltisi formunda gibi kontak lenslerin kirliliginin önlenmesi için kullan [lâbilecegini ifade etmektedir.

Bu baglamda “Farmasötik olarak uygun”, yardIicÜnaddenin kullanllân konsantrasyon ve dozajda uyguland[g]l3üjede istenmeyen etkilere neden olmad[g]l]inlam- gelmektedir. Bu tür farmasötik olarak uygun yard iclîilnaddeler teknikte iyi bilinmektedir.

Bir yapllândlîmaya göre, burada açlEJand[glügibi bu tür bir farmasötik bilesim, göze uygulanmaya uygun bir farmasötik bilesimdir. Klgflhma olmakslZIEl, göze uygulanmaslîiliygun farmasötik bilesimlerin tipik örnekleri, göz damlalarümerhemler, Spreyler, pansumanlar ve jelleri içermektedir.

Göze uygulanmasliilçin uygun bir farmasötik bilesim sulu bir bilesim olabilmektedir. Bu tür bir dört degerlikli siyalik asit türevi içeren bir sulu bilesim, üç veya dört degerlikli siyalik asit AyrEla, bir sulu bilesim, bir izotonik çözelti saglamak için bir madde içerebilmektedir. Uygun bir sekilde, bir sulu bilesim, sükroz gibi disakkaritler ve glikoz ve mannitol gibi monosakkaritler gibi sakkaritler, sodyum klorür, gliserol, polietilenglikol içeren gruptan seçilmis bir madde içerebilmektedir.

Bir yapllând lünaya göre, burada açllîland [gllgibi farmasötik bir bilesim, sodyum klorür gibi bir elektrolit içeren 5qu bir bilesimdir. Tercihen, elektrolit içerigi, sodyum klorür için yaklaslKl aglElllIZça %09 gibi izo-ozmotik konsantrasyona yakI olmalIE Bir yapßndlElnaya göre, burada açlElandlglÜJIbi farmasötik bir bilesim, gliserol içeren sulu bir arasIa olabilmektedir. Tercihen, söz konusu içerik, aglEllEEça yaklaslEI %26 gibi izo-ozmotik konsantrasyona yaklEl olmalIlE AyrlEla, fizyolojik bilesime yakI bir pH'a sahip bir bilesim saglamak için, farmasötik bilesimin pH'II ayarlanmasülgi alanlîblabilmektedir. DolayElýla, bir yapllândünaya göre farmasötik bilesim, yaklasllg 6.5 ila 8 araletla bir pH'a sahip 5qu bir farmasötik bilesim olmaktadB Tercihen, söz konusu pH, yaklas[lZl7.2 ila 7.8 gibi ûzyolojik pH'a yaklEdlEl Burada açllZlanan üç veya dört degerlikli siyalik asit türevleri asidik karboksilik asit hatta triazol k-ilarEilçeren alkalin k-ilarEilçermektedir, farmasötik bilesim, pH'lIilstenen seviyeye ayarlamak için farmasötik olarak uygun bir asit ve/veya baz içerebilmektedir. AyrlEla, farmasötik bilesim tamponlanabilmektedir. Tamponlanmlsl bir farmasötik bilesim tipik olarak farmasötik bilesim borat tamponlu olabilmektedir.

Diger yapllândlîilnaya göre, farmasötik bilesimin pH'lZl/aklasüîl 5 ila 7 gibi fizyolojikten biraz daha düsüktür. Örnegin 7'nin altIa asidik bir pH'a sahip bir bilesim, mikroorganizmalar. büyümesine daha az duyarllîiblma avantajlüa sahiptir. Ayrlîa, mikroorganizmalar. büyümesi, farmasötik bilesime bir koruyucu madde eklenmesiyle önlenebilmektedir. Bir yapllândünaya göre, burada aç[lZland[g]lIr_liibi farmasötik bir bilesim, bir koruyucu madde içermektedir. Bu tür koruyucu maddelerin örnekleri benzalkonyum klorür, benzoik asit, bütillenmis hidroksianizol, butil paraben, propil paraben, etil paraben, metil paraben ve bunlar. karlSIr-nllarlîlgibi parabenler, fenoksietanol, feniletil alkol veya sorbik asittir. Bir koruyucu içeren bir farmasötik bilesim, depolama için daha uygun olabilmektedir. Ayrlîla, burada açllZland[gil:Igibi bir farmasötik bilesim, Eßterilizasyonu veya steril filtrasyon aracügiûla sterilize edilebilmektedir.

Burada açilîland[gll:gibi farmasötik bilesim ayrlîla antioksidanlar, ilave izotonisite maddeleri, renklendirici maddeler ve benzerleri gibi diger farmasötik olarak uygun yardIicüInaddeleri de içerebilmektedir.

Sulu farmasötik bilesimler ile ilgili yapllând lîilnalarda, bilesim noniyonik yüzey aktif maddeler, hidrofilik polimerler ve benzerleri gibi ask. tutma ve sabitleme maddelerini içerebilmektedir.

Bir yapüândlîilnaya göre, burada açllaandlgllîlgibi farmasötik bir bilesim, bir klübmlastlElED madde içerebilmektedir. Tipik olarak, klîlamlllâstlîllâcak bir farmasötik bilesim suludur.

Klîlamlastlîrlna maddeleri, klîlamlllâstüllüîglçözelti, jel, surup, krem veya merhem olusturmak için kullanilâbilmektedir. Klýhmlastlîlllüîgl çözelti veya jel olusturmak için, bir hidrojel Olusturucu malzeme kullanllâbilmektedir. Bu tür bir hidrojel Olusturucu malzeme, sentetik polimerler, yarl3entetik polimerler ve dogal zamklardan olusan gruptan seçilebilmektedir.

Sentetik polimer örnekleri, polivinilalkol, polivinilpirolidon, poliakrilik asit, polietilen glikol, poloksamer blok kopolimerlerini içermektedir. YarElsentetik polimerlerin örnekleri arasIa karboksimetilselüloz, hidroksietilselüloz, hidroksipropilselüloz, metilselüloz, hidroksipropilmetilselüloz ve etilhidroksietilselüloz gibi selüloz eterleri bulunmaktadlB Dogal zamk örnekleri, akasya, aljinat, karajenan, kitosan, pektin, nisasta, ksantan zamkIEl içermektedir.

KlîlamlastlEEElçözelti veya bir jel hiyalüronik asit ve bunlar. türevleri, karbomer ve polikarbofil türlerinin çapraz bagllgboliakrilik asitleri ve mukoz membranüb güçlü bir sekilde tutundugu bilinen jelleri olusturan polimerler gibi malzemelerin kullanlEhasElile mukoz yaplgkanlüiiale getirilebilmektedir.

Bir yapilândlElnaya göre, burada açlEJandtgllîgibi farmasötik bir bilesim, poloksamer türünün bir blok kopolimerini içerebilmektedir. Suda dagllh'îlgl belirli poloksamerler EEHersinir olduklarldan dolayi: polietilen glikol ve polipropilen glikol bloklarIEiçeren polimerler gibi poloksamer türünün blok kopolimerinin kullanllBwaslZIavantajIIB Isüßersinir poloksamer örnekleri, poloksamer 188 ve poloksamer 407'dir.

Suda dagllüigl Ellîkersinir poloksamerler düsük bir vizkoziteye sahiptir, ancak vücut sIElakllgJIa bir jel olusumu ile sonuçlanarak yüksek slîlaklllZlarda belirli bir vizkozite artglîl göstermektedir. Böylece, göreceli olarak ll]]Zl korneaya uygulanan farmasötik bir formülasyonun temas süresi uzatllâbilmektedir. Uygun bir sekilde, bulusun bir yapllândlîilnasü burada açllîlandlgiügiibi Ellîlersinir olan bir farmasötik bilesim ile ilgilidir.

Bir yapllândlEnaya göre, burada açlElandlgllZlgibi farmasötik bir bilesim, ilave bir antiviral bilesik içerebilmektedir. Bu tür bilesiklerin örnekleri aras-a N-klorotaurin ve Povidon-iyot (PVP-I) bulunmaktadlEl N-klorotaurin (C1-HN-CH2-CH2-SO3H) endojen bir antimikrobiyal maddedir. Oksidatif patlama sÜsIa, granülositler ve monositler tarafIan üretilen hafif bir aktif klorür bilesigidir. Çünkü, örnegin amino gruplarlEl, tiyo ve aromatik bilesiklerin oksidasyonu gibi belirli olmayan reaksiyon mekanizmasIan dolayÇlantiseptiklere benzer genis spektrumlu mirobisid aktivitesine sahiptir. N-klorotaurinin (Cl-HN-CHZ-CHZ-SO3Na) sodyum tuz çözeltisi, in vitro bakteri ve mantarda öldürücü olarak gösterilmistir. Buna ek olarak, bir virüsle ilgili etki gösterilmistir. Povidon-iyot polivinilpirolidon (povidon, PVP) ve elementel iyotun kararIEl bir kimyasal kompleksidir.

Burada açlElandlglElgibi bir yapüândlü'maya göre bir farmasötik bilesim, bir ilave antiviral bilesik içerebilmektedir, burada söz konusu antiviral bilesik herpes kaynaklEbnfeksiyonlarEl topikal olarak tedavi etmek için faydaIEbir bilesiktir. Bu tür bilesikler, guanosin analoglarEl asiklovir, valasiklovir, pensiklovir ve famkiklovir ve foskarneti (sodyum fosfonatformat hekzahidrat) içermektedir.

Bir yapilândlElnaya göre, burada açlElandlglEgibi farmasötik bir bilesim, bir lokal anestezik içerebilmektedir. EKC çok agrü/eren bir hastalllZJ olabildiginden, agrlýlgidermek için bir lokal anestezik içermek avantajlüalabilmektedir. Ayrlîla, bu tür bir agrÇluygulamanI kendisi çok agrElverici olabilmesine ragmen, tedaviyi devam ettirmek için hastanlîil desteklenmesi avantajlEla sahip olabilmektedir. Buna ek olarak, hlîllîlbir baslanglgl ile lokal anestezik kullanIilÇIbilesimin dogrudan korneaya uygulanmaleb olanak saglamak amacüla hastanI gözünün tamamen açllE1asIElsaglayabilmektedir. FaydallZllokal anesteziklerin örnekleri Terapi Diger yapllândünaya göre, üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi veya burada açllZJandiglIl gibi bir farmasötik bilesim terapide kullan Uâbilmektedir.

Göz/e ilgi/i enfekS/yon/ariâ feda V/S/ Yukarldh açllaand[g]l]gibi, üç veya dört degerlikli siyalik asit türevleri, burada açUZland [gllîgibi insan korneal hücrelerine HAdV-37'nin baglanmaslljhhibe ettigi bulunmustur.

Uygun bir sekilde, bulusun bir yapllândlElnasIJsöz konusu virüs tarafütlan bulasacak hücrenin hücre yüzeyi üzerinde bulunan terminal siyalik asit türevlerine baglanan virüs tarafIan kaynaklanan bir gözle ilgili enfeksiyonun önlenmesi ve/veya tedavi edilmesinde kullanilBiak üzere burada açllZJandEglEgibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi ya da farmasötik bir bilesim ile ilgilidir.

Benzer sekilde, bulusun bir yapilândlElnasüsöz konusu virüs tarafIdan bulasacak hücrenin hücre yüzeyi üzerinde bulunan terminal siyalik asit türevlerine baglanan virüs tarafIan kaynaklanan bir gözle ilgili enfeksiyonun önlenmesi ve/veya tedavi edilmesinde kullanilmak üzere bir ilaci üretilmesi için burada açllgandlglügiibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi ya da farmasötik bir bilesim ile ilgilidir. InsanEkapsayan bir memeliye uygulanmaylîiçeren EKC gibi virüs tarafIan bulasacak hücrenin hücre yüzeyi üzerinde bulunan terminal siyalik asit kaIlEtllâr- baglanan söz konusu virüs kaynakIEl bir gözle ilgili enfeksiyonun önlenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde bir yöntem, bu tür bir önleme ve/veya tedavi etme ihtiyacIa, terapötik olarak etkili bir miktarda burada açiElandlgiEgibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi ya da burada açllîlandigllîgibi üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinin terapötik olarak etkili bir miktarIEiÇeren farmasötik bir bilesim açllîlanmaktadlB Tercihen, söz konusu üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi veya farmasötik bilesim bu tür bir yöntemde göze uygulanmaktadEl Terminal siyalik asit kallEtllârlEla baglanan virüs örnekleri hücre yüzeyi üzerinde içeren gözle ilgili enfeksiyonlar gibi enfeksiyonlara neden olacak söz konusu hücrelerin enfeksiyonuna izin vermektedir. Hücre yüzeyi üzerinde bulunan terminal siyalik asite baglanarak gözle ilgili enfeksiyonlara neden olan adenovirüslerin örnekleri, HAdV-8, HAdV-19 ve HAdV-37'yi içermektedir, tipik bir örnek HAdV-37'dir.

Bir yapllândlEnaya göre, mevcut üç veya dört degerlikli siyalik asit türevi veya bilesiminin kullanllîhasEl/asltâislýla tedavi edilecek ve/veya önlenecek gözle ilgili enfeksiyon, epidemik keratokonjonktivittir (EKC).

Burada yapllândlülnalara göre bir farmasötik bilesim, farmasötik olarak etkili bir dozda bir hastaya uygulanabilmektedir. "Farmasötik olarak etkili doz”, uygulandEglEldurum ile ilgili istenen etkileri üretmek için yeterli olan doz anlamlEla gelmektedir. Aslljdoz, üç veya dört degerlikli siyalik asit türevinin aktivitesine, uygulanma sekline, rahatsEllKl ve/veya hastaliglI dogasElve siddetine ve hastanI vücut aglElIlgiElve yasElgibi genel durumlara baglü olabilmektedir.

Bir yapllândüriaya göre, burada açlElandiglügibi bir farmasötik bilesim, günde bir veya birkaç kere uygulanacaktE Tipik olarak, diger doz rejimi de kullanllIhas- ragmen, bu tür bir farmasötik bilesim günde üç kere uygulanacaktlE Burada kullanIiglIia, “önlemekte/önleyen” ifadelerinden, burada açiKlandlglü gibi önlenmenin gerçeklesmesi için yapllândlünalara göre farmasötik bilesim veya bir bilesigin kullanIiIan sonra bir durum veya bir hastallgll asla meydana gelemeyecegi anlam- geldigi manasüllîlartilîhamal- Ayrüa, terim, söz konusu durumu önlemek için kullanIiEtan sonra, en azIan bir noktaya kadar meydana gelmeyen bir durum anlamlEla geldigi aç[lZlanmalIEl Bunun yerine, “önlemekte/önleyen", bu tür bir kullanIia ragmen meydana gelmesinin bu tür kullanIi olmadan daha az siddetli olacagülurumda, durumun önlenecegini ifade etmektedir.

Bir yapllândlEInaya göre, tedavi, örnegin profilaktik tedavi gibi tedavi öncesini kapsamamaktadlü Gene/ /Saret/er Mevcut bulus, belirli örneklendirici yaplßndlElnalara referans ile yukari açllZlanmalela ragmen, burada ortaya konulan belirli formun sIlElhndlElE1amas- niyetlenilmektedir.

Yukarida deginilen yapilândlüinalarl herhangi bir kombinasyonu, bulusun kapsamüiahilinde olarak degerlendirilmelidir. Bunun yerine, bulus, eslik eden sekiller taraflEUan sIlEllandmamaktadIEl ve yukari belirli olanlar yerine diger yapHândHnalar, bu ekli istemlerin kapsamülahilinde esit derecede olasIE Istemlerde, “içermekte/içeren” terimi diger tür ve adllarI varlfgilElEhariç tutmamaktadlB Ilave olarak, ayrEözelIikler farlestemlere dahil edilmelerine ragmen, bunlarI avantajlüair sekilde birlestirilmesi olaslîblmayabilmektedir, ve farklEistemlere dahil edilme, özelliklerin bir kombinasyonunun uygulanabilir ve/veya avantajlEbImad[glIl:lfade etmemektedir. Buna ek olarak, tek referanslar çogullugu dahil etmemektedir. Örnegin "bir”, “birinci”, “ikinci", bir çogullugu olanakslîlastlîihîamaktadlü “En az bir” veya “bir veya daha fazla" ifadeleri, örnegin Deneysel Asaglki örnekler, sadece örneklerdir ve bulusun kapsamIEhiçbir sekilde sIlEllamamak amaclýla yorumlanmalIE Bundan ziyade, bulus sadece eslik eden istemler tarafIan sIlEIlandmîaktadIEl Sekillerin klîia aglKlamasEi Sekil la, 2a ve 2b: HCE hücrelerinin enfeksiyonu ve bu hücrelere HAdV-37'nin baglanmasEl üzerinde üç degerlikli siyalik asit türevleri takili etkisi - FarklEkonsantrasyonlarda inhibitörlerin varliglia viryon baglanmasüûnhibitör olmadan elde edilen deger olan kontrolün %'si olarak veri sunulmaktadlE).

Sekil lb, 3a ve 3b: HCE hücrelerinin enfeksiyonu ve bu hücrelere HAdV-37'nin baglanmasü üzerinde üç degerlikli siyalik asit türevleri takIiII etkisi - Inhibitörlerin farklEl konsantrasyonlarlEUa enfeksiyon (inhibitör olmadan elde edilen deger olan kontrolün %'si olarak veri sunulmaktadlE).

Genel Kimyasal Prosedürler spektrometre ile kaydedilmistir. NMR deneyleri 298 K'de, CDCIg'de (çözücü kallEtlîübiki= 7.26 ppm (öH)), CD3OD'de (çözücü kallEtEIIpiki = 3.31 ppm (öH) ve 49.00 ppm (öC)) ve DZO'da (çözücü kallEtlîljbiki = 4.79 ppm (öH)) gerçeklestirilmistir. ile yürütülmüstür, her ikisi de formik asit içeren (%02) suda CH3CN'nin lineer gradyanüle ayrlgtlEiIRiISIB 1.5 mL/dak akghlîlîkullanllüilgtlîive tespit 214 nm'de gerçeklestirilmistir. Kütle spektrumlarÇl pozitif ve negatif elektrosprey iyonlasmasEkullanHârak bir Su mikrokütle ZQ YarElhazlEllllZl HPLC ayrllB1alarÇl214 nm'de tespit, 20 mL/dak aklghlîlîlle bir Nucleodur C-18 kolonu HTEC 5 um (VP 250/21) kullanllârak bir Gilson sistemi HPLC üzerinde yürütülmüstür.

Kolon kromotografisi silika jel (Merck, 60 Ã, üzerinde gerçeklestirilmistir. Ince Tabaka Kromotografisi (TLC), UV Iglgilîiltia tespit ve/veya EtOH ve Optik dönmeler 20 °C'de Perkin-Elmer 343 polarimetresi ile ölçülmüstür. Organik çözücüler moleküler gözenek 3Â üzerinde kurutulmus olan CH3CN ve MeOH dlglEUa bir Glass Contour Solvent Systems (SG Water ABD) kullanIrak kurutulmustur.

Tüm ticari reaktifler, alIi[glL_c_l;ibi kullanllBilgtlE ME0322 olarak simgelendirilen bilesik, yay-anan prosedüre göre sentezlenmistir (bakIlîl göre 2%95 saf idi. Istatistikler, GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc, La Jolla, CA) kullanllârak hesaplanmlgtlE Sentetik Prosedürler Mevcut bulusun bilesikleri, örnegin bir azit grubu (bakIlZJ asaglöh sola dogru gösterilen bilesik) veya etin grubu (bakIlîJ asagi saga dogru gösterilen bilesik) gibi reaktif bir uç- gruba sahip tipik olarak alkilen baglayEÜgibi bir baglayEEile siyalik asitin donatllîhasüle elde edilebilmektedir. Örnegin tipik olarak katalizör olarak görev yapan bakE (I) varllglIa bir azit-alkin Huisgen sikloilavesinde azit veya etin k-ilarügibi 3 veya 4 reaktif gruba sahip bir çekirdek klgnl bir reaktif uç-grup ile donatllân siyalik asiti ile reaksiyona girmesine olanak saglayarak, mevcut bulusun bilesikleri elde edilebilmektedir. Teknikte uzman kisi tarafIan bilindigi gibi, sentezin çesitli asamaleda farkllZlgrupIarI korunmaslZlfaydalüveya hatta gerekli olabilmektedir.

Teknikte uzman kisi, hangi gruplarI kullanllâcagliîla asinadlEI Çek/?dek kEnE/arak Tripopargi/ami'n ku//anElÜ Tris ((1-(2-0-(5-N-asetamid0-3,5-dideoksi-D-gIIsero-a-D-galakto-2-nonülopiranosilonik asit))- dideoksi-D-glisero-a-D-galakto-Z-nonülopiranosilonik asit))-3-0ksopropil-1H-1,2,3-triazol-4- il)metil)amin (ME0386) gibi modifiye olmamlgl NAsil üç degerlikli siyalik asitlere rota, anlasllllîl sekilde kanElhnmlgtlEl ve anahtar ara ürün 1'den bes adIida veya piyasada satlIBiakta olan kimyasallardan sekiz adIida ulasllâbilmektedir (Sema 1). Ticari siyalik asitten hazlîllanmlgl olan siyalik asit tiyofenil türevi 1'in sentezi, yay-anmlgl prosedürlere göre daha sonra bilesik 1 ile karslHKl gelen alkolün (slüslîla 2-bromoetan0l ve 3-bromopropan-1- ol) glikosilasyonu ile iyi dönüstürmede degerlendirilmistir. Diger bromoalkollerin kullanIllîJ diger uzunluklara sahip yapEbloklarIlleaglayacaktE Sonuç eliminasyon ürünü ile birlikte anomerlerin ayrlibaz bir karlglmlîl ile sonuçlanan reaksiyon, bu asamada ayrIEla saflastlElllBwamlgIlE Bromo türevleri (3a ve 3b), kendi azido analoglar- (Sa ve 5b) dönüstürülmüstür. Standart Zemplén kosullarIEkuIIanarak sonraki Odeasilasyon, sßslýla üç adIi üzerinden %40 ve %58 verimlerde anomerik olarak saf 7a ve 7b'yi vermistir. Ardian, bilesikler (7a ve 7b), bir baleb kataliz edilmis azit-alkin sikloilave reaksiyonunda (“klik” reaksiyonu) tripoargilamin ile reaksiyona girmistir. Dolaylîlýla, metil esterler (9a ve 9b), slßslýla %51 ve %45 verimlerinde elde edilmistir. Sonraki saponifikasyon, slßslýla %76 ve BakEIkatalizlenmis azit-alkin sikloilavesinde tripropargilaminclen ziyade diger etin türevlerinin kullanUBiasÇl üç veya dört degerlikli siyalik asit türevlerinin diger türlerine erisim saglayacaktlîl *7 7 .. ,a, rw_ ,Na , .-- .Na RIIÇHN.{`_IT- ' "SPh L RCOHN.:W"OI 1"^n L PÇOHN.:-." '1)' "'O' '4' `n ;i- RCOi-HvÇ'I-U_ *o* `”in ru?` wc .saw «w ”95” 50350 "Pi” 03# PCOHNÜJ'7'" ' "ak/“N ""51 I RCOl-Nz'çf` " "OH/"N MN en h` › f“î 53"”, I '" cozum "I ß` ,41, W* ' '" 00 H -H J` N'” ` n09” HIC/?H coq-i Fa; htu'. ' " HÖOH Rcoinnfî' "0" 'o' 12': "N Sema 1.a ME0385 ve ME0386'nISentezi aReakt/'fler ve kosu/lar.' (a) i'.' mo/ekL'i/er gözenek/er 3Â, Z-bromoetano/ veya 3- bromopropan-J-OL Cch'N/CHZOZ (3.'2), oda ::Ek/%2 saat, //'.' AgOTf, [Br, -73 'C 4.5 saat, Hi.' DIPEA, -73 °C, 30 dak. (b) NaN3, TBAI, DMSO, oda sÜk/güâ saat (c) i'.' NaOMe, MeOH, oda sÜk/@Üj' saat, 17'.' H+ iyon degis/m reçinesi'. (d) Tr/propargi/am/n, Cu504, sodyum askorbat; THF/H20 (1.1), 50 °C, 3 saat ardß'i'an oda sÜk/Zgüw saat. (e) i'.' L/'OH, MeOH, oda sük/W saat, 17.' H* iyon degisim reç/hesi'.

Tris ((1-(2-0-(5-N-propanoilmid0-3,5-dideoksi-D-glisero-a-D-galakto-Z-nonülopiranosilonik propanoilamido-3,5-dideoksi-D-glisero-a-D-galakto-Z-nonülopiranosilonik asit))-3-oksopropil- 1H- gibi N-modifiye olmus üç degerlikli siyalik asitler piyasada satllüiakta olan siyalik asitten 13 adnda veya anahtar ara ürün Z'den bes adnda üretilebilmektedir (Sema 1). Bilesik 2'nin sentezi, yayIanmlSl prosedürlere göre bilesikler MEO385 ve MEO386'ya daha önceden açilZlanmlS sentetik yolun analogladei.

DolayElýla, ardlglKl glikosilasyon, azit olusumu ve O-deasilasyon reaksiyonlarüsßsüla üç adi Üzerinden %46 ve %55 verimlerinde anomerik olarak saf ürün 8a ve 8b'yi vermistir.

Sonraki “kIik” reaksiyonu, slßslßa %50 ve %34 verimlerde üç degerlikli bilesikler (10a ve 10b) saglamlSIIB Sonuç olarak, metil esterlerin (10a ve 10b) saponifikasyonu iyi verimlerde hedef ürünler (MEO vermistir.

G//kos//asyon reaksiyonu için genel yöntem.

Glikosil donörü 1 veya 2 (1.0 esdeg) ve yeni hazlîllanmlglezilmis moleküler gözenek 3Ã (1.5 g/mmol), oda slîhkllglia ve azot atmosferi altIa CH3CN/CH2CI2 (3:2; 35 mL/mmol) karlglülüba çözünmüstür/asklýb allEtnlStlB 2-Brom0etanol veya 3-brom0pr0pan-1-0I (4.5 esdeg) eklenmistir ve karlîlîni 2 saat boyunca karlgtüllîhlgtiîl Reaksiyon lglthan korunmustur ve CH3CN'de gümüs triflatI (2.0 esdeg) bir çözeltisi eklenmistir. Karlglili -73 °C'ye (-70 °C < t < -75 °C) sogutulmustur ve IBr ( eklenmistir. Reaksiyonun -73 °C'de 4.5 saat yürütülmesine izin verilmistir. Reaksiyon tamamlandithan sonra, DIPEA (6.0 esdeg) eklenmistir. Reaksiyon karElEliB73 °C'de 30 dakika daha karlgtlîllßîlgtlrîlve ardIan oda slîlakllgl. sogumas. izin verilmistir. KarElEJi bir Celite® tampon ile filtrelenmistir, CHZClz veya CH3CN ile ylKbnmlSIlElve çözeltiler kuruluk için konsantre hale getirilmistir. takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlElna (gradyan n- Heptan/EtOAc), bilesik 3a'yIZIve karsl1]]Zl gelen ters anomeri vermistir. Bilesik 3a, ilave saflastlîilna olmadan bir sonraki adIida kullanHÜilIsIlEl gala/(to-Z-non//opiranosiw-onat (3b). Bilesik 3b, glikosilasyon reaksiyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlElna (gradyan I?- Heptan/EtOAc), bilesik 3b'yi ve karsUJE gelen ters anomeri vermistir. Bilesik 3b, ilave saflastIEma olmadan bir sonraki adlda kullaniIIhEtEI gala/(to-Z-non//op/'ranosiw-onat (4a). Bilesik 4a, glikosilasyon reaksiyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlElna (Toluen/EtOH, 10:1), bilesik 4a'yü/e karsllîlKl gelen ters anomeri (390 mg, %95; q/ß (6:1)) vermistir. Bilesik 4a, ilave saflastlEIna olmadan bir sonraki adIida kullanllüilgtlîl ga/a/(to-2-non//0p/ranos/0)-0nat (4b). Bilesik 4b, glikosilasyon reaksiyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlîilna (Toluen/EtOH, 8:1), bilesik saflastlEma olmadan bir sonraki adlda kullanümlgtlîl Az/do türev/er/h/'n sentezi için genel yöntem.

DMSO'da (40 mL/mmol) çözünmüs bromo türevlerine (1.0 esdeg) damla damla sodyum azit ( basarllElbir sekilde eklenmistir. Reaksiyonun, oda slîbkllglia ve azot atmosferi altlEtla 6 saat boyunca yürütülmesi saglanmStlE Reaksiyonun tamamlanmasian sonra, karlgß CHZClz ile seyreltilmistir, su ve tuzlu su ile yllZbnmlSIlEl MgSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve kuruluk için konsantre edilmistir. edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastHna (CHZCIz/MeOH, 95:5), bilesik 5a'yl:lve karSIIJEl gelen ters anomeri (ci/ß (5:1)) vermistir. Bilesik 5a, ilave saflastlEma olmadan bir sonraki adIida kullanlliilgtlü gala/(ta-2-n0n//0p/'I'anosiw-0nat (5b). Bilesik 5b, azido türevlerinin sentezi için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlîilna (CHZClz/MeOH, 95:5), bilesik 5b'yi ve karslülö gelen ters anomeri (on/ß (n.d.)) vermistir. Bilesik 5b, ilave saflastlEina olmadan bir sonraki adIida kullanllfnlgtß takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlîilna (Toluen/CHZClz/MeOH, vermistir.

Bilesik 6a, ilave saflastlîilna olmadan bir sonraki adIida kullanllüilgtß D-ga/akto-2-n0ni70p/ran05/D)-onat (Gb). Bilesik 6b, azido türevlerinin sentezi için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlüna (Toluen/CHZCIz/MeOH, 8:2:0.5), bilesik 6b'yi ve karsiIJKI gelen ters anomeri (419 mg, nicel; (x/ß (22:3)) vermistir. Bilesik 6b, Ilave saflastlîrlna olmadan bir sonraki adIida kullanüüîlStlEl Siya/osit/er/'n 0-d685/785V0/7U icin Genel yöntem.

MeOH'de (70 mL) çözünmüs perasillenmis siyalosit (1.0 esdeg) sodyum metoksite (3.9 esdeg) eklenmistir. Reaksiyonun, oda leakHgilEUa ve azot atmosferi altlîitja 3 saat boyunca yürütülmesi saglanmStlEl Reaksiyon tamamlandlthan sonra, çözelti buzul AcOH'I damla damla eklenmesi ya da Amberlyst® 15 ile nötr hale getirilmistir. Çözücü daha sonra, kuruluk için konsantre hale getirilmistir. onat (73). Bilesik 7a, siyalositlerin O-deasilasyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlElna (EtOAc/EtOH/HZO, 4:1:0.1), bilesik 7a'yl:l ve karslülîl gelen ters anomeri (256 mg, üç adIi üzerinden %46 verim) vermistir. 1HNMR (, 3.80-3.84 (m, 2H, H-8, H-9b), , C14H+ 415.14 için hesaplanan ESI-MS m/z, Met/7 (3-az/d0-pr0p//0ksi( 5 -Nasetam/do -3, 5 -d/dea/(s/-D-g/i'sero-a -D-ga/akta -2- non/Yop/'ranosiw-onat (7b). Bilesik 7b, siyalositlerin Odeasilasyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlüna (EtOAc/EtOH/HZO, 4:1:0.1), bilesik 7b'yi ve karslIJEI gelen ters anomeri (289 mg, üç adli üzerinden %55 verim) vermistir. 1H NMR (, 3.77 (t, 75,45 1H, H-6), , 3.38 (t, C15H+ 429.16 için hesaplanan ESI-MS m/z, non/'lop/ranos/w-onat (83). Bilesik 8a, siyalositlerin O-deasilasyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlüna (Toluen/CHZClz/MeOH, 3.5:6:0.5 ila 3:6:1), bilesik 8a'yEl/e karsi gelen ters anomeri (120 mg, üç adIi üzerinden %46 verim) vermistir. 1H NMR (, 3.80-3.84 = , 3.57 (dd, 76,5 = 10.2 ve n0n//0pi'ran05//))-0nat (8b). Bilesik 8b, siyalositlerin O-deasilasyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlElna (Toluen/CHZClz/MeOH, 3.5:6:0.5 ila 3:6:1), bilesik 8b'yi ve karsilik] gelen ters anomeri (157 mg, üç adli üzerinden %55 verim) vermistir. 1H NMR (, C16H+ 443.18 için hesaplanan ESI-MS m/z, ÜC deger/Mi' sii/a/ik asit sentezi icin qene/ yöntem.

THF/HZO'da (1:1, 81 mL/mmol) çözünmüs azido türevlerine (3.7 esdeg) sodyum askorbat (0.9 esdeg), CuSO4 (0.9 esdeg) ve tripropargilamin (1.0 esdeg) basarlüiîlbir sekilde eklenmistir. Reaksiyonun, 50 °C'de 3 saat ve oda slîlakllglia 18 saat boyunca yürütülmesi saglanmlglîl BaslanglÇl azitinin tüketilmesi tamamlandllZIan sonra, THF, vakum altlEUa buharlastlîlßîlgtlîlve ham olan dondurularak kurutulmustur. Ham katlJJMSO'da çözülmüstür CF3COOH, organik faz gradyanEP/o7 ila %25). Toplanmlg bilesik içeren kesitler, saf ürün vermesi için dondurularak kurutulmustur.

Tr/'s ((1-(2-0-((meÜ/(5-N-asetami'd0-3,5-Wde0ks/-D-g/I'ser0-a-D-ga/akto-Z-noni/op/'ranosiv- (40 mg, %51 verim) sentezi için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. 1H NMR (, 4.60 asitin (60 mg, %45 verim) sentezi için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. 1H NMR (, 3H-9b, 3H-6), , 9H, 3-COCH3), . degerlikli siyalik asitin (60 mg, %50 verim) sentezi için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. 1H NMR (, Jseqgax = , 1.74 (t degerlikli siyalik asitin (45 mg, %34 verim) sentezi için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. 1H NMR (, 4.50 3H, 3H-6), , 2.68 (dd, J3eq,3ax = , 2.10- C57H+ 1414.62 IçIn hesaplanan ESI'MS Met/7 ester/'n sapan/Ü“kasyonu [Cm qene/ yöntem.

MeOH'da (135mL/mm0l) çözünmüs üç degerlikli metil ester türevlerine (1.0 esdeg) LiOH'I (1M, 9.0 esdeg) sulu bir çözeltisi eklenmistir. Karlglm oda leiaklIglIa 9 saat yürütülmesine izin verilmistir. Reaksiyon tamamlandlKtan sonra, reaksiyon karlSImEDowex ile nötr hale getirilmistir. Dowex reçinesinin ortamdan uzaklastlülhaslüdan sonra, çözücü vakum aItIa buharlastlîllüißtlîlve suda çözünmüs olan ham madde HZO ile bir C-18 tlîilasüiizerinde ayrlStEIIIhlStlEl Kesitler içeren bilesik, saf üç degerlikli siyalik asit türevi elde etmek için dondurularak kurutulmustur.

Tris ((1-(2-O-(5-N-asetamid0-3,5-dideoksi-D-glisero-or-D-galakto-Z-nonilopiranosilonik asit))- mg/mL, HZO). 1H NMR (, 4.60 = , 1.67 (t olarak görünmektedir, J3eq,3aX z .733x,4 = 12.0 Hz, 3H, 3H'3ax). hesaplanan ESI-MS m/z, 1266.29 olarak bulunmustur.

Tris ((1 -(2-0-(5-N-asetamid0-3,5-d/deoksi-D-g//ser0-a-D-ga/a/(to-Z-non//op/'ranos//onik asit))- . ME0386, metil ester (27 mg, %75 verim) saponifikasyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. [4150 -3.83 (c 3.9 mg/mL, HZO). 1H NMR (, 3.92 (bs, 6H, asit))-Z-oksoetiY-JH-I,. MEO408, metil ester (19 mg, 4.6 mg/mL, H20). 1H NMR (, 4.07-4.20 (m, 9H, 3ax), . 1H NMR (, Çekirdek kgnm/arak Tris (Z-azidoetiüamm kul/anmÜ Tris ((4-(2-0-(5-N-asetam/'d0-3, 5-d/'deoksi-D-g//3er0-a-D-ga/akto-Z-nonÜ/opiranosi/onik asit»- iUet/Uam/h (ME0462) gibi modifiye olmamlgiN-Asil üç degerlikli siyalik asitlere rota, anlasMEi sekilde kanifllanmlstlEI ve anahtar ara ürün 1'den (Sema 2) dört adIida veya piyasada satilîhakta olan kimyasallardan sekiz adIida ulasilâbilmektedir. Ticari siyalik asitten hazlEiianmlgl olan siyalik asit tiyofenil türevi 1'in sentezi, yayIanmlSl prosedürlere göre daha sonra bilesik 1 ile karsHJE] gelen alkolün (sßslýla propargil alkol ve 3-butin-1-0I) glikosilasyonu ile iyi dönüstürmede degerlendirilmistir. Diger alkin alkollerinin kullanilBiaslîJ diger uzunluklara sahip baglaylîilâr ile yapEbIokIarEsaglayacaktlEi Sonuç eliminasyon ürünü ile birlikte anomerlerin ayrilÜiaz bir karmlîile sonuçlanan reaksiyon, bu asamada ayrlEia saflastiEliiB1amlStiEl Standart Zemplen kosullarIlIkullanarak sonraki O-deasilasyon, slîasüla iki adli üzerinden ArdIan, bilesikler (12a ve 12b), bir baklIIla kataliz edilmis azit-alkin sikloilave reaksiyonunda (“klik” reaksiyonu) Tr/Ls (Z-az/doet/Uam/'n (13) ile reaksiyona girmistir.

Tris azido türevi (13), piyasada satilüiakta olan trietanolaminden iki adIida sentezlenmistir.

Ilk olarak, trietanolamin, yayIanmlgl prosedüre göre tris (2-kl0r0etil)amine türevi kendi azido analoguna (13) dönüstürülmüstür (Not: 13, yüksek oranda patlay-lü bu yüzden her zaman karanlitha ve çözelti içinde saklanmasEönemlidir). Metil esterler (14a ve 14b), sßslýla %76 ve %53 verimlerinde elde edilmistir.

Sonraki saponifikasyon, leaisMa nicel ve %88 veriminde son hedef bilesiklerini (ME0462 ve ME0461) saglamlgtEI Aci? 002.., M3) cogu` i. L CÜzMC &NAN/Vu.` MWM i. ml ' 01"& _. wwog . 1 1 n=1:12a(%48,23dü) "3 n=2:11b fw CW::: /\N^VN Nî//XUL 0% .:50 r . aci: = - o Hozc / Acar`a” MN “-0" Sema 2.a MEO462 ve MEO461'In Sentezi aReakÜ/?er ve kosu/lar.' (a) 12' moleküler gözenek/er 3/7, 3-but/'n-lo/ veya propargil alkol, CH3CN/CH2CIZ (32), oda yük/@72 saat, li.' AgOTIS [Br, -73 °C) dak. (b) i.' NaOMe, MeOH, oda yük/W.? saat, 17.' H* /yon degis/m reçinesl (c) 60504, MeO/-l, oda sük/@Üý saat, ii: H* iyon degis/m reçihesi.

G//kos/lasyon reaksiyonu icin aene/ yöntem.

Glikosil donörü 1 (1.0 esdeg) ve yeni hazlElanmlg ezilmis moleküler gözenek 3Â (1.5 g/mmol), oda slaakllglia ve azot atmosferi altIa CH3CN/CH2CI2 (3:2; 35 mL/mmol) karlglâliliîtla çözünmüstür/asklîb allümlgtlü 3-Butin-1-ol veya propargil alkol (4.5 esdeg) eklenmistir ve karlglEli 2 saat boyunca karlStlEllBüStlEl Reaksiyon lglEIan korunmustur ve CH3CN'de gümüs triflatI (2.0 esdeg) bir çözeltisi eklenmistir. KarlSlEli -73 °C'ye (-70 °C < t < -75 °C) sogutulmustur ve IBr ( eklenmistir. Reaksiyonun -73 °C'de eklenmistir. Reaksiyon karlSlEJllZl 73 °C'de 30 dakika daha karlStlBlBilStlElve ardlEUan oda lelakllgllEla sogumalela izin verilmistir. KarlglEli bir Celite® tampon ile filtrelenmistir, CHZCIZ veya CH3CN ile y[lZlanmlgtlElve çözeltiler kuruluk için konsantre hale getirilmistir. galakto-Z-nonÜ/opiranos/w-onat (11.9). Bilesik 11a, glikosilasyon reaksiyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlîüna (gradyan n- Heptan/EtOAc), bilesik 11a'yEl/e karsilJKI gelen ters anomeri vermistir. Bilesik 11a, ilave saflastlElna olmadan bir sonraki adIida kullaannStlEl gala/(to-Z-nonÜ/op/ran05/0)-0nat (11b). Bilesik 11b, glikosilasyon reaksiyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlîiina (gradyan n- Heptan/EtOAc), bilesik 11b'yi ve karsllllîl gelen ters anomeri vermistir. Bilesik 11b, ilave saflastlîilna olmadan bir sonraki adIida kullaniEnlStlEl Si'za/osi't/er/h O-deasi/aszonu için genel Köntem.

MeOH'de (70 mL) çözünmüs perasillenmis siyalosit (1.0 esdeg) sodyum metoksite (3.9 esdeg) eklenmistir. Reaksiyonun, oda slîlakllgllia ve azot atmosferi alt-a 3 saat boyunca yürütülmesi saglanmlgtß Reaksiyon tamamlandEKtan sonra, çözelti buzul AcOH'I damla damla eklenmesi ya da Amberlyst® 15 ile nötr hale getirilmistir. Çözücü daha sonra, kuruluk için konsantre hale getirilmistir.

Metil 2-(pr0p-2-iniIoksi(5-N-asetamido-3,5-dideoksi-D-glisero-a-D-galakto-Z- n0nü|opiranosil))-onat (123). Bilesik 12a, siyalositlerin O-deasilasyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. HPLC ile saflastlüna (A: H20'da 5qu %0.005 HCOOH, B: CH3CN'de %, bilesik 12a'yl:(178 mg, iki adn üzerinden %48 verim) vermistir. 1H NMR (, 4.33 (dd, #4.3 Hz, 11.8 Hz, 1H).

Metil 2-(but-3-iniloksi(5-N-asetamido-3,5-dideoksi-D-glisero-a-D-galakto-2-n0nülopiranosil))- onat (IZb). Bilesik 12b, siyalositlerin O-deasilasyonu için genel yöntem takip edilerek sentezlenmistir. Kolon kromotografisi ile saflastlEna (EtOAc/EtOH/HZO, 4:1:0.1), bilesik 12b'yi (218 mg, üç adli üzerinden %31 verim) vermistir.

Tris (Z-az/doet/Uam/'n (13) çözeltisi, karlgtlüna ile 0.8 mL CHCI3'de tiyonil klorürün ( bir çözeltisi içine yavas yavas eklenmistir. Eklendikten sonra, reaksiyon karlglînlEH saat boyunca geriakn slîlakllgl- Elfllîhlglü Oda slîlakligil sogutulduktan sonra, beyaz katEürün ültrelenmistir ve gece boyu vakumda kurutulduktan sonra 0.395 9 (%82) tris(2-kl0roetil)amin hidroklorür vermesi için diklorometan ( ile yllZlanmlstE Ardüldan, Tris (2-kloroetil)amin hidroklorür (0.198 9, 0.82 mmol) ve sodyum azit ( eklenmistir ve sonuç karlîlîniEEZ saat 92°C'de karlSIIEIBîlStlEl Sogutulduktan sonra, karlglm distile suya ( dökülmüstür ve çözelti pH=10'a Na2C03 (%10 sulu) ile alkali hale getirilmistir ve diklorometan ( ile ekstrakte edilmistir. Organik faz, su ( ylEbnmlStE ve ardian NaZSO.. üzerinde kurutulmustur. Diklorometan 1 mL'ye konsantre edilmistir ve sonra 15.0 mL THF eklenmistir, tekrar 1.0 mL'ye konsantre edilmistir, sonra 15.0 mL THF eklenmistir ve 1.8 mL'ye konsantre hale getirilmistir. 0.8 mmol tris(2-azidoetil)amin içeren bu THF çözeltisi, sonraki adIida kullanllâbilmektedir. (Not: 13, yüksek oranda patlay-E bu yüzden, onu karanlltha ve 1H NMR (.

Ref. M. Sun, C-Y. Hong, C-Y. Pan, Journal of the American Chemical society 2012, 134(51), Tris ((4-(2-O-(meti/(5-N-asetam/'d0-.Sj5-a'i'de0ksilD-g/ISer0-a-D-ga/a/(to-Z-nonÜ/opi'ranosiv- 0nat))-Z-0ksomet//-1 H-1,2,3-tri'azo/-J -i/)et/'/)am/n (14a) Su (amin (0.075 mL, 0.033 mmol) çözeltisine metil 2-(prop-2-iniloksi(5-N-asetamid0-3,5-dideoksi-D-gIisero-a-D-galakto- °C'ye ve ilaveten 18 saat oda lelakllg'l- Elflßilgtü AzaltllIhE baleç aItIa THF'nin buharlastlEllEhasIan sonra, kallEtEldistile su ile 2.6 mL'ye seyreltilmistir ve ardIan dondurularak kurutulduktan sonra %76 yerimde beyaz katüvermesi için hazlîllllîl HPLC 1H NMR (, Tr/'s ((4-(2-0-(met//(5-N-a$etam/d0-3, 5 -d/deoks/-D-g//sero-a -D-ga/akto-Z-nonÜ/p/ranosiv- 0nat))-2-0ksaet7'/-JH-J,Z,3-tri`azo/-1-iUetivam/n (14b) Su (amin (0.113 mL, 0.05 mmol) çözeltisine metil 2-(but-2-iniloksi(5-N-asetamid0-3,5-dideoksi-D-glisero-a-D-galakto-Z- °C'ye ve ilaveten 18 saat oda sEhkllg- _ilgtlü Azaltllüilgl basliîg aItIa THF'nin buharlastlEllßîasIan sonra, kallEtEldistiIe su ile 3.0 mL'ye seyreltilmistir ve ard-an dondurularak kurutulduktan sonra 35.9 mg (%532) beyaz katIZi/ermesi için hazEIJUZI HPLC 1H NMR (, için hesaplanan ESI-MS m/z, 1351.70 olarak bulunmustur. 0ksometiY-JH-J,2,3-tr/azo/-J -IUet/Uami'n (M E0462) Yukari elde edilen metil ester (14a) MeOH ( çözeltilerinde çözünmüstür. KarlSIL-Ili 44 saat boyunca oda lelakllg1lEUa karlgtlillîhlgtlü ardIan LCMS yürütülmüstür, pH=7.0'ye amberlit IR120 ile nötr hale getirilmistir, konsantre hale getirilmistir ve 20.2 mg beyaz ürün vermesi Için dondurularak kurutulmustur. [amo -11.7 (c 1H NMR (, Tr/'s ((4-(2-0-(5-N-asetami'a'0-jg5-d/'de0ksi-D-g//ser0-a-D-ga/akto-Z-nonü/opi'ranosiY/k asiw-Z- Metil ester (25.8 mg, 14b) MeOH ( çözeltilerinde çözünmüstür. Karisimi 72 saat boyunca oda slîlaklEgllEUa karßtßlßilgtlîl ardlEtlan LCMS yürütülmüstür, amberlit IR120 ile nötr hale getirilmistir, konsantre hale getirilmistir ve 22.0 mg/mL, MeOH). 1H NMR (, 3.66- Biyolojik degerlendirme Hucre-bag/anma denez/ HCE hücrelerine HAdV-37 viryonlarII baglanmasIEbnlemek amacMa yeni sentezlenmis bilesiklerin (ME verimliliklerini incelemek için, 35S-etiketli viryonlara baglEl olarak hücre baglanma deneyleri gerçeklestirilmistir. Önceki çallginalar MEO322'ye baglEblarak, siyalik asit ve GDla glikanEI gerçeklestirildi (baska detaylar için asaglîlbakllî) (Arnberg ve ark. J. Virol. 2000, 74, 42 ve Özetle, 35S-etiketli HAdV-37 viryonlarlZl çesitli konsantrasyonlarda üç degerlikli siyalik asit türevleri, GDla glikan ve siyalik asit ile veya bu türevler olmadan önceden inkübe edilmistir.

Karmlar HCE hücreleri ile inkübe edilmistir ve baglanmamlglviryonlar daha sonra yllZlanü temizlenmistir. Son olarak, hücre ile iliskili radyoaktivite, bir sintilasyon sayacEkullanllârak sayllüîlgtliîl Sekil la ve 2a'da gösterilen sonuçlar yüksek oranda süphelidir ve dolaylgîla, HCE hücrelerine HAdV-37 viryonlarII baglanmasüyeni tasarlanmlîl üç degerlikli siyalik asitlerin varl[glIa çarplEElbir biçimde engellenmistir. AslIa, yeni bilesik tak lidegerlendirilmistir ve dört sßlü büyüklük üzerinden tek degerlikli siyalik asitten (ICso = daha fazla potansiyele sahip oldugu bulunmustur. Ayrlîla, yeni üç degerlikli bilesikler, iki degerlikli GD1a glikanlEtlan (ICSO = 91 uM) büyük oranda daha fazla potansiyele sahip idi. degerleri ile HCE hücreleri baglanmasIan HAdV-37 viryonlarII önlenmesinde etkilidir.

Baslangg öncü bilesigin (ME0322, IC50 : DÜSÜK POTANSIYELE SAHIP OLDUGU KANITLANMISTIR. Dolaylîlsîla, mevcut bulusun bilesiklerinin teknikte bilinen öncekilere üstün ve ME0461'den bile daha fazla potansiyele sahip oldugu ayrü bulunmustur (bakIlîl Sekil Sonuç olarak, 23.4 M ve 4.5 uM IC50 degerlerine sahip N-asil modifiye edilmis türevler (ME0407 ve ME0408) seriyi tamamlamlgtlü Maalesef, ili-asil klginia IigandlarI lipofilisitesinin artmasÇlönceki arastlünalar taraflEklan desteklenmeyen süsüa ME0385 ve ME386 ile klýiaslandigiia potansiyeli artmamEtlElOohansson ve ark. J. Med. Chem. 2009, 52, 3666).

Dene yse/ defa y/ar - Hücre-baglanma deneyi mikroplakada çesitli konsantrasyonlarda (bakIiîl Sekil 1a) siyalik asit ya da GD1a glikanÇlüç degerlikli siyalik asit türevleri ile veya bu türevler olmadan baglanma tamponunda (pH 7.5'te uL; BB: Dulbecco'nun modifiye edilmis eagle ortam [Ilönceden inkübe edilmistir. Bu karlglmlar ardIan 96-kuyucuklu bir mikroplakada önceden pelet haline getirilmis (1x105/kuyucuk) HCE hücrelerine eklenmistir. Yeniden askiya aliEtIlthan sonra, karlglmlar 1 saat boyunca +4 °C'de inkübe edilmistir. Son olarak, baglanmamlglviryonlar BB ile ylKbnlIil temizlenmistir ve hücre iliskili radyoaktivite bir Wallac 1409 sintilasyon sayacEkullanUârak sayllmlglîl Enfeksiyon deneyi Hücre baglanma deneylerinden elde edilen sonuçlarülogrulamak ve bilesiklerin kendi takIiIEl degerlendirmek için, enfeksiyon deneyleri gerçeklestirildi (Sekil 1b, 3a ve 3b). Deneyler daha önce tarif edildigi gibi gerçeklestirildi (baska detaylar için asagEbaklEllZ) (Arnberg ve ark. J.

Kiîlaca, etiketlenmemis viryonlar çesitli konsantrasyonlarda üç degerlikli siyalik asit türevleri, GD1a glikanüveya siyalik asit ile veya bunlar olmadan önceden inkübe edilmistir. Bu karlglEilar daha sonra HCE hücrelerine eklenmistir ve +4 °C'de inkübe edilmistir.

Baglanmamlgiviryonlar ylKanarak temizlenmistir, sonuç karlglülilarl337 °C'de inkübe edilmistir ve bir senkronize edilen enfeksiyon - eszamanllîblarak hücrelere giren tüm viryonlar - elde edilmistir. 44 saatlik enfeksiyondan sonra, hücreler temizlenmistir, katEhale getirilmistir, yllZlanmadan ve boyanmadan önce tavsan poliklonal anti-HAdV-37 antikorlarEIile inkübe edilmistir. Sonuç olarak, hücreler yilZlanmEtiElve immunofloresan mikroskopu ile incelenmistir.

Daha sonra, hücre baglanma deneylerinden trendler (Sekil 1a, 2a ve 2b) enfeksiyon tarafIan HCE hücrelerinin enfeksiyonunu önlemistir. 380 nM olarak önceden tahmin edilmis olan ME0322'nin yarümaksimum inhibe edici konsantrasyonu, 228 nM olarak burada enfeksiyonunun ME0322'den daha verimli bir sekilde Önlemistir. AyrlEh, enfeksiyon deneyinde (bakIlîl Sekil 3b), analog ME en çok potansiyeli olan idi.

Deneysel detay/ar- Enfeksiyon deneyi 48-kuyucuklu plakalarda 7x107 isaretsiz viryonlar/kuyucuk, (bakIlZ Sekil 28) +4 °C'de üç degerlikli siyalik asit türevleri, GDla glikanüieya çesitli konsantrasyonlarda siyalik asit ile birlikte veya bunlar olmadan serumsuz büyüme ortamIa (ZOOuE), önceden inkübe edilmistir. 1 saat sonra, kargîilar, 1x105 yapISkan HCE hücre/kuyucuk içeren yeni 48- kuyucuklu plakaya transfer edilmistir ve +4 °C'de inkübe edilmistir. 1 saat boyunca, baglanmamE viryonlar serumsuz büyüme ortamEIile y[lZhnarak temizlenmistir ve sonuç karEJEhlarüi-37 °C'de %1 fetal s[g]lîlserumu (FBS) içeren büyüme ortamEile inkübe edilmistir. 44 saatlik enfeksiyondan sonra, hücreler PBS'de temizlenmistir, 10 dakika soguk (-20°C) tavsan poliklonal anti-HAdV-37 antikorlarlîile inkübe edilmistir. 1 saat sonra, hücreler PBS'de ylElanmlStlElve oda leiakllglia 1 saat boyunca PBS'de 1:100 seyreltilmis FITC-etiketli domuz anti-tavsan lgG antikorlarüDako-cytomation, Glostrup, Danimarka) ile boyanmlgtlB Sonuç olarak, hücreler PBS'de ylKlanmlStlEl ve imünofluoresanda incelenmistir (Axiovert 25, Carl Zeiss, Almanya; 10x büyütme).

Yüzey Plazma/7 RezonansÜSPR) Sonuç olarak, ME deneylerinde incelenmistir ve immobilize HAdV-37 fiber bogumlarEIçin ilgili baglanma afiniteleri (Kds) belirlenmistir (baska ayrßtilâr için asagEbakIü: SPR verisi hem hücre baglanmasEhem de hücre enfeksiyonundan trendleri bir araya getirmistir ve üç bilesigin, bire bir baglanma modunda HadV-37 fiber bogum ile etkilesime geçtigini kanEIhmlStlE Dolaylîlsîla, ME0386'nlEI edilen HAdV-37 fiber bogum ile en iyi sekilde etkilesime geçtigi dogrulanmlgtlEl Kd degerleri üzerinde HAdV-37 fiber bogum yap-I etkisi belirtilmeye degerdir. Baglanma ve enfeksiyon deneyine benzer olarak, ME0462 en yüksek baglanma afinitesine sahip idi (Kd = .

Deneysel detay/ar - Yüzey P/azmon RezanansÜ Kinetik ölçümler bir yüzey plazmon rezonans BIAcore T100 cihazlZl kullanilarak gerçeklestirilmistir. HAdV-37 bogum proteinleri, konsantrasyonuna amin kenetleme kiti (GE Healthcare) kullanllârak bir CMS sensör çipine konjugatlarII immobilize boguma baglanmasEbH 7.4'te 10 mM HEPES, 0.15 M NaCI ve hesaplanmlStlB virüs tarafIan bulasacak hücrenin hücre yüzeyi üzerinde bulunan terminal siyalik kallEtllâr. baglanan HAdV-37 gibi söz konusu bir virüs kaynakllîgözle ilgili bir enfeksiyonun önlenmesinde ME0322 gibi teknigin bilesikleri ile karsllâst-mgla daha üstün bir potansiyel gösterdigi bulunmustur. Mevcut bulusun bilesiklerinin, dolayElýla epidemik keratokonjonktivit tedavisinde yüksek oranda faydallîbldugu düsünülmektedir.

Claims (14)

ISTEMLER

1. Bir üç veya dört degerlik siyalik asit türevi olup, söz konusu türev, formül A veya B'ye göre 3 veya 4 grubun bagland @Emir çekirdek kEtnEIbermektedir R H 0 X/(CH2)n1"-N' "N R1 N 0 XA ”MÜ/:Ni 10 R1, C1-3 alkildir; tamsaylîinl”, 2 ila 8'dir; tamsaylîinZ”, 1 ila 8'dir; ve dalgalEçizgi, çekirdek klginlEb baglanma noktasllîgöstermektedir; burada söz konusu çekirdek klgtnlîüormüller II ve V'den herhangi birine göre bir k-idlîl .

ILL/ (CH2)m1\N / (CH2)m1\gs E\(CH2)ri12+(CH2)m2\rés ”JK @Hana-F(CHgmÄý,` "lk (CH2)ri-2+CH2)n12\ge k- II'ye baglanmlggruplarl Formül A'ya göre gruplar oldugu durumda, Formül II'deki tamsaylîiml” 1 ila 8'dir; k- II'ye baglanmlglgruplarl Formül B'ye göre gruplar oldugu durumda, Formül II'deki tamsaylîlml" 2 ila 8'dir; tamsayElmZ” 1 ila 8'dir; ve dalgallgizgi, formül A veya B'ye göre gruplara baglanma noktasIÜgiöstermektedir; bir serbest baz, yüksüz protonlanmgformdaki bir asit, bir ikiz iyon, bir farmasötik olarak uygun ilave tuz, solvat veya bunlari bir tuzunun solvatlîcblarak. . “X"in O (oksijen), R1'în metil, ve/veya tamsayD`n1”in 2 ila 3; ve tamsayÜnZ'hin 1, 2, veya 3 oldugu, istem 1'e göre siyalik asit türevi. .

Söz konusu gruplarI formül A'ya göre gruplar oldugu, istemler 1 ila Z'den herhangi birine göre siyalik asit türevi. .

Söz konusu gruplar. formül B'ye göre gruplar oldugu, istemler 1 ila Z'den herhangi birine göre siyalik asit türevi. .

Kendi serbest formunda söz konusu türevin moleküler aglElllglII 1,500 Da veya daha az oldugu, istemler 1 ila 4'ten herhangi birine göre siyalik asit türevi. .

Söz konusu çekirdek klgnII formül (II)'ye göre bir k-i oldugu; tercihen tamsayü .

Istemler 1 ila 6'dan herhangi birine göre siyalik asit türevi olup, burada söz konusu siyalik asit türevi asaglâlakilerden olusan gruptan seçilmektedir: Tris ((2-0-(5-N-asetamid0-3,5-dideoksi-D-glisero-a-D-galakto-2-nonülopiranosilik asit)-2-oksoetiI-1H-1,2,3-triazoI-4-il)metil)amin; Tris ((3-O-(5-N-asetamido-3,5-dide0ksi-D-glisero-oi-D-galakto-Z-nonüIopiranosilik asit)- 3-0ksopropiI-1H-1,2,3-triazoI-4-il)metil)amin; Tris ((2-0-(5-N-propanoilamid0-3,5-dide0ksi-D-gIisero-or-D-galakto-Z-nonülopiranosilik asit)-2-oksoetil-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amin; Tris ((3-O-(5-N-propan0ilamido-3,5-dideoksi-D-gIisero-a-D-galakto-2-n0nülopiranosilik asit)-3-oksopropil-1H-1,2,3-triazoI-4-il)metil)amin; Tris ((4-(2-0-(5-N-asetamido-B,5-dideoksi-D-glisero-oi-D-galakto-Z-nonülopiranosilik asit))-2-0ksometiI-1H-1,2,3-triazol-1-il)etil)amin; ve Tris ((4-(2-0-(5-N-asetamido-3,5-dideoksi-D-glisero-ci-D-galakto-2-nonül0piranosilik asit))-2-oksoetil-1H-1,2,3-triazol-1-il)etil)amin.

8. Söz konusu siyalik asit türevinin, anomerik karisimi ci-anomerin yerine geçtigi söz konusu bilesigi içeren bir anomerik karlgßida veya saf bir stereoizomer olarak mevcut oldugu, istemler 1 ila 7'den herhangi birine göre siyalik asit türevi.

9. En az bir farmasötik olarak uygun yard Iiclînadde ve istemler 1 ila 8'den herhangi birine göre bir siyalik asit türevi içeren göze uygulanmaya yönelik bir farmasötik bilesim.

10. Söz konusu bilesimin istemler 1 ila 7'den herhangi birine göre bir siyalik asit türevinin konusu sulu bilesimin tercihen en az aglElilKÇa %90 su içerigine sahip oldugu ve opsiyonel olarak bir izotonik çözelti saglamak için gliserol veya NaCl gibi bir madde içerdigi, istem 9'a göre farmasötik bilesim.

11. Söz konusu sulu bilesimin bir izotonik çözelti saglamak için NaCl içerdigi, istem 10'a göre farmasötik bilesim.

12. Söz konusu sulu bilesimin yaklasllZl tamponlandlglü/e 6.5 ila 8 pH'a sahip oldugu, istem 10 veya 11'e göre farmasötik bilesim.

13. Terapide kullanma yönelik olarak, istemler 1 ila 8'den herhangi birine göre bir siyalik asit türevi veya istemler 9 ila 12'den herhangi birine göre farmasötik bir bilesim.

14. Bir virüs tarafian enfekte edilecek hücrenin hücre yüzeyi üzerinde bulunan terminal siyalik kallEtllârI baglanan söz konusu virüs kaynaklügözle ilgili bir enfeksiyonun önlenmesi ve/veya tedavi edilmesinde kullanilîhak üzere istemler 1 ila 8'den herhangi birine göre bir siyalik asit türevi veya istemler 9 ila 12'den herhangi birine göre bir farmasötik bilesim. 56'dan olusan gruptan seçilen bir virüs kaynaklllldugu ve/veya söz konusu enfeksiyonun epidemik keratokonjonktivit oldugu, istem 14'e göre kullanIl için, bir siyalik asit türevi veya bir farmasötik bilesim.