TH25792Y - ชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย รวมถึงกรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่าย - Google Patents
ชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย รวมถึงกรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่ายInfo
- Publication number
- TH25792Y TH25792Y TH2003002242U TH2003002242U TH25792Y TH 25792 Y TH25792 Y TH 25792Y TH 2003002242 U TH2003002242 U TH 2003002242U TH 2003002242 U TH2003002242 U TH 2003002242U TH 25792 Y TH25792 Y TH 25792Y
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- primer
- lamp
- target dna
- tuberculosis
- base sequence
- Prior art date
Links
Abstract
------07/10/2563------(OCR) การประดิษฐ์นี้มุ่งเน้นในการพัฒนาชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย รวมถึงต่อยอด กรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบแบบใหม่ให้มีความไวขึ้นและง่ายขึ้นต่อการใช้งานจริงในภาคสนาม โดยได้ทำการออกแบบชุดไพรเมอร์จากลำดับเบสของยีน IS6110 ของเชื้อวัณโรค และออกแบบตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมายขึ้นใหม่ รวมถึงกรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่ายขึ้น ซึ่งเทคนิคที่ได้พัฒนาขึ้นนี้มีความจำเพาะสูงมากคิดเป็นร้อยละ 100 โดย สามารถตรวจได้ทั้งเชื้อ Mycobacterium tuberculosis และ Mycobacterium bovis ซึ่งก่อวัณโรคในคน ได้ กรรมวิธีดังกล่าวสามารถตรวจดีเอ็นเอของเชื้อวัณโรคได้น้อยที่สุด คือ 10 เฟมโตกรัม ซึ่งมีความไวกว่าเทคนิคแลมป์ร่วมกับการใช้แผ่นจุ่มแบบดั้งเดิมและเทคนิคพีซีอาร์ถึง 100 เท่า และ 1000 เท่า ตามลำดับรวมถึงใช้เวลาในกระบวนการท่าปฏิกิริยาเพียง 45 นาที และช่วยลดระยะเวลาในขั้นตอนการอ่านผลผลิตแลมป์ให้สั้นลงจาก 5 - 10 นาที เหลือเพียงแค่ 1 - 2 นาที เท่านั้น โดยกรรมวิธีตามการประดิษฐ์นี้สามารถใช้งานได้ง่าย รวดเร็ว ไม่ต้องพึ่งพาเครื่องมือที่มีราคาแพง สามารถใช้ได้เป็นอย่างดีในห้องปฏิบัติการขนาดเล็กอาทิ ศูนย์อนามัยชุมขน โรงพยาบาลส่งเสริมสุขภาพระดับตำบล หรือในภาคสนามในพื้นที่ห่างไกลที่ยังมีการระบาดของวัณโรคสูงอยู่ อันจะเป็นการเพิ่มโอกาสให้ผู้ป่วยเข้าสู่ระบบการรักษาได้ทันท่วงทีและช่วยเพิ่มอัตราการค้นพบผู้ป่วยรายใหม่ ซึ่งนำไปสู่การควบคุมการระบาดของเชื้อวัณโรคได้อย่างมีประสิทธิภาพมากขึ้นนอกจากนี้ กรรมวิธีดังกล่าวยังมีศักยภาพในการพัฒนาต่อยอดให้อยู่ในรูปของชุดตรวจเชิงพาณิชย์ได้ ------------ การประดิษฐ์นี้มุ่งเน้นในการพัฒนาชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมายระบบใหม่ รวมถึงต่อ ยอดกรรมตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบแบบใหม่ให้มีความไวขึ้นและง่ายขึ้นต่อการ ใช้งานจริงในภาคสนาม โดยได้ทำการออกแบบชุดไพรเมอร์จากลำดับเบสของยีน 1S6110 ของเชื้อวัณโรค และ ออกแบบตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมายระบบใหม่ รวมถึงกรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับ แผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่ายขึ้น ซึ่งเทคนิคที่ได้พัฒนาขึ้นนี้มีความจำเพาะสูงมากคิดเป็นร้อยละ 100 โดยสามารถ ตรวจได้ทั้งเชื้อ Mycobacterium tuberculosis และ Mycobacterium bovis ซึ่งก่อวัณโรคในคนได้ กรรมวิธีดังกล่าวสามารถตรวจดีเอ็นเอของเชื้อวัณโรคได้น้อยที่สุด คือ 10 เฟมโตกรัม ซึ่งมีความไวกว่าเทคนิค แลมป์ร่วมกับการใช้แผ่นจุ่มแบบดั้งเดิมและเทคนิคพีซีอาร์ถึง 100 เท่า และ 1000 เท่า ตามลำดับ รวมถึงใช้ เวลาในกระบวนการท่าปฏิกิริยาเพียง 45 นาที และช่วยลดระยะเวลาในขั้นตอนการอ่านผลผลิตแลมป์ให้สั้นลง จาก 5 - 10 นาที เหลือเพียงแค่ 1 - 2 นาที เท่านั้น โดยกรรมวิธีตามการประดิษฐ์นี้สามารถใช้งานได้ง่าย รวดเร็ว ไม่ต้องพึ่งพาเครื่องมือที่มีราคาแพง สามารถใช้ได้เป็นอย่างดีในห้องปฏิบัติการขนาดเล็ก อาทิ ศูนย์ อนามัยชุมชน โรงพยาบาลส่งเสริมสุขภาพระดับตำบล หรือในภาคสนามในพื้นที่ห่างไกลที่ยังมีการระบาดของ วัณโรคสูงอยู่ อันจะเป็นการเพิ่มโอกาสให้ผู้ป่วยเช้าสู่ระบบการรักษาได้ทันท่วงทีและช่วยเพิ่มอัตราการค้นพบ ผู้ป่วยรายใหม่ ซึ่งนำไปสู่การควบคุมการระบาดของเชื้อวัณโรคได้อย่างมีประสิทธิภาพมากขึ้น นอกจากนี้ กรรมวิธีดังกล่าวยังมีศักยภาพในการพัฒนาต่อยอดให้อยู่ในรูปของชุดตรวจเชิงพาณิชย์ได้
Claims (10)
1. ชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย เลือกได้อย่างน้อยหนึ่งจาก ชุดไพรเมอร์ มีลำดับเบสที่ประกอบด้วย ก. ฟอร์เวิร์ด เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (F3) ลำดับเบส 5’ GATCGAGCAAGCCATCTG 3’ ข. แบ็คเวิร์ด เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (B3) ลำดับเบส 5’ TGATCAGCTCGGTCTTGTA 3’ ค. ฟอร์เวิร์ด อินเนอร์ ไพรเมอร์ (FIP) ลำดับเบส 5’ ACCGGATCGATGTGTACTGAGA /TTTT/CC AACAAGAAGGCGTACTC 3’ ง. แบ็คเวิร์ด อินเนอร์ ไพรเมอร์ (BIP) ลำดับเบส 5’ ATCCAACCGTCGGTCGGA/TTTT/TTGATCGTCTCGGCTAGT 3’ จ. ฟอร์เวิร์ด ลูป ไพรเมอร์ ลำดับเบส (LF) 5’ CCTATCCGTATGGTGGATAACG 3’ ฉ. แบ็คเวิร์ด ลูป ไพรเมอร์ ลำดับเบส (LB) 5’ GTCGGAAGCTCCTATGACAAT 3’ ตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย มีลำดับเบส 5’ GGCTCGCCGAGGCAGG 3’
2. ชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง ฟอร์เวิร์ด อินเนอร์ ไพรเมอร์ (FIP) ติดฉลากด้วยสารไบโอตินที่ปลาย 5’
3. ชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง ตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมายติด ฉลากด้วยสารฟลูโอเรสซีนไอโซไธโอไซยาแนทที่ปลาย 5’
4. ชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย ตามข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 3 ที่ซึ่ง ตัวตรวจจับดีเอ็นเอ เป้าหมายติดฉลากด้วยสารดีสเปซเซอร์ที่ปลาย 3’
5. กรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่ายโดยใช้ชุดไพรเมอร์และตัว ตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย ตามข้อถือสิทธิที่ 1 - 4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ทำได้โดย ก. การเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอเป้าหมายด้วยปฏิกิริยาแลมป์ที่ประกอบด้วยชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับ ดีเอ็นเอเป้าหมาย และการทำปฏิกิริยาไฮบริไดซันระหว่างผลผลิตแลมป์กับตัวตรวจจับในขั้นตอน เดียว สภาวะในการทำปฏิกิริยาแลมป์ คือ ที่อุณหภูมิ 60 - 65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 45 - 60 นาที ข. อ่านผลด้วยแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่าย โดยจุ่มแผ่นทดสอบลงในสารผสมแล้วทิ้งไว้เป็นเวลา 1 - 2 นาที แล้วอ่านผลที่เกิดขึ้น
6. กรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่าย ตามข้อถือสิทธิที่ 5 ที่ซึ่ง ชุดไพรเมอร์ มีลำดับเบสที่ประกอบด้วย ก. ฟอร์เวิร์ด เอาท์เตอร์ ไพรเมอร์ (F3) ลำดับเบส 5’ GATCGAGCAAGCCATCTG 3’ ข. แบ็คเวิร์ด เอาท์เตอร์ ไพรเมอร์ (B3) ลำดับเบส 5' TGATCAGCTCGGTCTTGTA 3’ ค. ฟอร์เวิร์ด อินเนอร์ ไพรเมอร์ (FIP) ลำดับเบดัส 5’ ACCGGATCGATGTGTACTGAGA /TTTT/CC AACAAGAAGGCGTACTC 3’ ง. แบ็คเวิร์ด อินเนอร์ ไพรเมอร์ (BIP) ลำดับเบส 5’ ATCCAACCGTCGGTCGGA/TTTT/TTGATCGTCTCGGCTAGT 3’ จ. ฟอร์เวิร์ด ลูป ไพรเมอร์ ลำดับเบส (LF) 5’ CCTATCCGTATGGTGGATAACG 3’ ฉ. แบ็คเวิร์ด ลูป ไพรเมอร์ ลำดับเบส (LB) 5’ GTCGGAAGCTCCTATGACAAT 3’
7. กรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่าย ตามข้อถือสิทธิที่ 5 ที่ซึ่ง ตัวตรวจจับดีเอ็นเอ มีลำดับเบส 5’ GGCTCGCCGAGGCAGG 3’
8. กรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่าย ตามข้อถือสิทธิที่ 6 หรือ 7 ที่ซึ่ง ฟอร์เวิร์ด อินเนอร์ ไพรเมอร์ (FIP) ติดฉลากด้วยสารโบโอตินที่ปลาย 5’ ขณะที่ ตัวตรวจจับดีเอ็นเอ เป้าหมายติดฉลากด้วยสารฟลูโอเรสซีนไอโซไธโอไซยาแนทที่ปลาย 5’ และ/หรือ ตัวตรวจจับดีเอ็นเอ เป้าหมายติดฉลากด้วยสารดีสเปซเซอร์ที่ปลาย 3’
9. กรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่าย ตามข้อถือสิทธิที่ 5 ที่ซึ่ง นํ้ายาทดสอบแลมป์สำหรับปฏิกิริยาแลมป์ ประกอบด้วย ก. เอาท์เทอร์ไพรเมอร์ อย่างละ 0.2 ไมโครโมลาร์ ข. อินเนอร์ไพรเมอร์อย่างละ 1.6 ถึง 2 ไมโครโมลาร์ ค. ลูปไพร์เมอร์ อย่างละ 0.4 ถึง 2 ไมโครโมลาร์ ง. ตัวตรวจจับดีเอ็นเอ 20 พิโกโมล จ. บีเอสที เอนไซม์ดีเอ็นเอพอสิเมอร์เรส ความเข้มข้น 4 ถึง 16 หน่วย ฉ. บัฟเฟอร์ที่ความเข้มข้น 1 เท่า ช. สารดีออกซีนิวคลีโอไทด์ไตรฟอสเฟต ความเข้มข้น 1 ถึง 2 มิลลิโมลาร์ ซ. สารเบตาอีน ความเข้มข้น 0.2 ถึง 0.8 โมลาร์ ฌ. สารละลายแมกนีเซียมซัลเฟส ความเข้มข้น 4 ถึง 10 มิลลิโมลาร์ ญ. ดีเอ็นเอที่สกัดได้จากตัวอย่างที่ต้องการทดสอบ ฎ. นํ้ากลั่น
10. กรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแสมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่าย ตามข้อถือสิทธิที่ 5 ที่ซึ่ง สภาวะในการทำปฏิกิริยาแลมป์ที่เหมาะสม คือ ที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 นาที
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH25792U TH25792U (th) | 2025-06-09 |
| TH25792Y true TH25792Y (th) | 2025-06-09 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Neonakis et al. | Molecular diagnostic tools in mycobacteriology | |
| CN101928773B (zh) | 采用荧光定量pcr技术检测致病菌的寡核苷酸引物组合及其检测致病菌的方法和用途 | |
| JP2016019495A (ja) | 核酸増幅法 | |
| Vilanova-Cuevas et al. | Design and validation of a PCR protocol to specifically detect the clade of Philaster sp. associated with Diadema antillarum scuticociliatosis | |
| CN101792794B (zh) | 检测志贺菌的实时荧光pcr试剂盒及检测方法 | |
| CN120485406B (zh) | 一种同时检测单增李斯特菌及耐药基因fosX的试剂盒 | |
| Zhang et al. | Rapid detection of plant viruses and viroids | |
| CN105695584B (zh) | 检测实验动物金黄色葡萄球菌的gyrB引物组合 | |
| TH25792U (th) | ชุดไพรเมอร์และตัวตรวจจับดีเอ็นเอเป้าหมาย รวมถึงกรรมวิธีการตรวจเชื้อวัณโรคด้วยเทคนิคแลมป์ร่วมกับแผ่นจุ่มทดสอบอย่างง่าย | |
| Kawase et al. | Rapid detection and discrimination of potentially toxigenic Corynebacterium ulcerans and Corynebacterium pseudotuberculosis by multiplex real-time PCR and amplicon melting curve analysis | |
| de Waal et al. | Development of a cytokine gene expression assay for the relative quantification of the African elephant (Loxodonta africana) cell-mediated immune responses | |
| JP5279051B2 (ja) | ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍを検出するためのオリゴヌクレオチドとそれらを用いた血清型迅速同定法 | |
| Liu et al. | DNA detection of Clostridium difficile infection based on real-time resistance measurement | |
| CN107058517A (zh) | 一种用于结核分枝杆菌感染检测的试剂盒及检测方法 | |
| JP5224541B2 (ja) | ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＨａｄａｒを検出するためのオリゴヌクレオチドとそれらを用いた血清型迅速同定法 | |
| Koyuncu et al. | DNA microarray for tracing Salmonella in the feed chain | |
| RU2848038C1 (ru) | Способ выявления ДНК бактерий Bordetella holmesii, Bordetella bronchiseptica, Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis с помощью изотермической петлевой амплификации | |
| PT1516067E (pt) | Detecção de algas tóxicas | |
| KR102857094B1 (ko) | 질 유산균 검출을 위한 고리매개 등온증폭용 프라이머 세트 및 이를 이용한 질 유산균 검출방법 | |
| RU2855133C1 (ru) | Способ одновременного выявления и дифференциации ДНК бактерий рода Salmonella spp., Shigella spp. и Vibrio cholerae O1 серогруппы методом мультиплексной ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией | |
| JP6996075B2 (ja) | 食中毒原因菌の迅速検出方法 | |
| Munir et al. | Advanced diagnostic techniques for listeriosis | |
| Lin et al. | B-230 Analytical performance of a new investigational use only (IUO) Panther Fusion® Gastrointestinal (GI) Expanded Bacterial Assay | |
| WO2023027604A1 (en) | Set of primers for amplifying the nucleotide sequence of the reca gene of salmonella enterica sp. bacteria, method for detecting salmonella enterica sp. bacteria, method for detecting an infection caused by salmonella enterica sp. bacteria, and kit for detecting an infection caused by salmonella enterica sp. bacteria | |
| CN107227343A (zh) | 一种检测包含潜伏期结核感染的试剂盒及其引物对和探针 |