TH23646A3 - ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus สายพันธุ์ก่อโรคตับวายเฉียบพลัน และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าว - Google Patents
ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus สายพันธุ์ก่อโรคตับวายเฉียบพลัน และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าวInfo
- Publication number
- TH23646A3 TH23646A3 TH2103002081U TH2103002081U TH23646A3 TH 23646 A3 TH23646 A3 TH 23646A3 TH 2103002081 U TH2103002081 U TH 2103002081U TH 2103002081 U TH2103002081 U TH 2103002081U TH 23646 A3 TH23646 A3 TH 23646A3
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- primer
- toxb
- lamp
- nucleotide sequence
- led
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract 14
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 title claims abstract 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title abstract 3
- 208000007788 Acute Liver Failure Diseases 0.000 title 1
- 206010000804 Acute hepatic failure Diseases 0.000 title 1
- 231100000836 acute liver failure Toxicity 0.000 title 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract 22
- 101100113494 Vibrio cholerae serotype O1 (strain ATCC 39315 / El Tor Inaba N16961) ctxB gene Proteins 0.000 claims abstract 12
- 101150089436 tcdB gene Proteins 0.000 claims abstract 12
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims abstract 9
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 claims abstract 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 10
- 101100172179 Escherichia coli O78:H11 (strain H10407 / ETEC) eltA gene Proteins 0.000 claims 8
- 101100481893 Pasteurella multocida toxA gene Proteins 0.000 claims 8
- 101100006379 Vibrio cholerae chxA gene Proteins 0.000 claims 8
- 101100113493 Vibrio cholerae serotype O1 (strain ATCC 39315 / El Tor Inaba N16961) ctxA gene Proteins 0.000 claims 8
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims 8
- 101150032575 tcdA gene Proteins 0.000 claims 8
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims 7
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims 7
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims 7
- 102100021391 Cationic amino acid transporter 3 Human genes 0.000 claims 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 4
- 108091006230 SLC7A3 Proteins 0.000 claims 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 2
- OSBSFAARYOCBHB-UHFFFAOYSA-N tetrapropylammonium Chemical compound CCC[N+](CCC)(CCC)CCC OSBSFAARYOCBHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 claims 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 claims 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 239000012805 animal sample Substances 0.000 abstract 1
- 238000013461 design Methods 0.000 abstract 1
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 abstract 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract 1
Abstract
การประดิษฐ์นี้เป็นการออกแบบและพัฒนาชุดไพรเมอร์สําหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยปฏิกิริยาแลมป์ โดยใช้ไพรเมอร์ ดังกล่าว โดยชุดไพรเมอร์ตามการประดิษฐ์นี้ได้ออกแบบให้มีความจําเพาะต่อลําดับเบสบนยีนท็อกเอและท็อก 5 ปี (tox4 และ toxB) ของเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND นอกจากนี้ ยังได้พัฒนากรรมวิธีในการ ตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND ด้วยปฏิกิริยาแลมป์ร่วมกับเทคนิคอื่นๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การตรวจสอบผลการทดสอบด้วยแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ด้วยหลักการอิมมูโนโครมาโทกราฟี ซึ่งจะใช้เวลา ในการทําปฏิกิริยาและตรวจผลการติดเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND ทั้งสิ้นเพียง 70 นาที ทําให้ กรรมวิธีตามการประดิษฐ์นี้มีความสะดวก รวดเร็วและง่ายต่อการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus AHPND ในตัวอย่างสัตว์น้ำที่ต้องการทดสอบ นอกจากนี้ กรรมวิธีดังกล่าวยังมีความไวและความจําเพาะสูง ง่ายต่อการวิเคราะห์ผล ไม่เป็นอันตรายต่อผู้ใช้ และมีราคาถูก ไม่ต้องใช้เครื่องมืออุปกรณ์ที่ยุ่งยากซับซ้อน
Claims (8)
1. ชุดไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อยืน toxA และยืน toxB สําหรับตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus AHPND ไพรเมอร์ เลือกได้อย่างน้อยหนึ่งเส้นจาก ไพรเมอร์ที่ 1 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5 GGA TTC TGT CAC GTA ATT GTTCCC TTT TCT TTT GGC CAA ATA CGC C3' ไพรเมอร์ที่ 2 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5 ไบโอทิน TGC CAT CAA TGGAAT ATT GGA TAG CTT TTC CGA AGT TTT CGA TAG TCT CAT3’ ไพรเมอร์ที่ 3 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5) CMG GTG GTTTTT TAT CAA CG3’ ไพรเมอร์ที่ 4 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5 TCTTTT GCC GCA GCA TAA3 ‘ ไพรเมอร์ที่ 5 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5' GATTTA GTA GAT GAA TCG ATTATA3” และ ไพรเมอร์ที่ 6 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5) – GTC TTG AAT TTT ATC GCG TGT CTC T3’
2. ชุดตรวจสําหรับตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND ด้วยปฏิกิริยาแลมป์โดยใช้ไพรเมอร์ที่ จําเพาะต่อยีน toxA และยีน toxB ชุดตรวจ ประกอบด้วย ก. ไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อยีน tox4 และยีน toxB สําหรับทําปฏิกิริยาแลมป์ ที่ประกอบด้วย อินเนอร์ไพรเมอร์ถูกติดฉลากด้วยสารไบโอทิน (AP4BIPBiotin) มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5' ไบโอทิน TGC CAT CAA TGG AAT ATT GGA TAG CTT TTC CGA AGT TTT CGA TAG TCT CAT3' อินเนอร์ไพรเมอร์ (AP4FIP): 5 GGA TTCTGT CAC GTAATT GTT CCC TTTTCTTTT GGC CAA ATA CGC C3’ เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (AP4F3): 5 CGGGTGGTTTTTTAT CAA CG3’ เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (AP4B3): 5” TCTTTTGCC GCA GCA TAA3’ ลูปไพรเมอร์ (AP4HLF) : 5' GAT TAGTA GAT GAA TCG ATTATA3’ และ ลูปไพรเมอร์ (AP4ALB) : 5) GTC TTG AATTITATC GCG TGT CTC T3’ และ ข. แผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ที่ประกอบด้วย แผ่นรองรับสารละลายผลิตภัณฑ์แลมป์ แถบทดสอบ แถบ ควบคุม และแผ่นดูดซับที่ทําให้สารละลายผลิตภัณฑ์แลมป์เคลื่อนที่จากแผ่นรองรับ ไปยังแถบทดสอบ และแถบควบคุมตามลําดับ มีลักษณะเฉพาะคือแถบทดสอบถูกทําปฏิริยาด้วยอินเนอร์ไพรเมอร์ที่ติด ฉลากด้วยสารไบโอทิน ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5' ไบโอทิน TGC CAT CAA TGG AAT ATT GGA TAG CTT TTC CGA AGT TTT CGA TAG TCT CAT3' ค. ตัวตรวจจับดีเอ็นเอสําหรับตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND ที่มีการติดฉลาดด้วย ฟลูออเรสซีน ไอโซไทโอซายาเนส (AP4FITC) ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5' ATG AGC CAG ATA TG 3 '
3. กรรมวิธีตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อ ยืน tox4 และยีน toxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) มีขั้นตอนดังนี้ ก. การทําปฏิกิริยาแลมป์ โดยนําสารละลายดีเอ็นเอจากตัวอย่างชีวภาพมาผสมกับสารละลายแลมป์ โดย อาศัยชุดไพรเมอร์ที่จําเพาะยืน tox4 และยีน toxB เพื่อให้ได้ผลิตภัณฑ์แลมป์ ข. การเติมตัวตรวจจับดีเอ็นเอที่มีการติดฉลากด้วยฟลูออเรสซีน ไอโซไทโอซายาเนส (AP4FITC) ลงใน ผลิตภัณฑ์แลมป์ที่ได้ก่อนนําไปทดสอบกับแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ที่มีแถบทดสอบที่ทําปฏิกิริยา กับอินเนอร์ไพรเมอร์ที่ติดฉลากด้วยสารไบโอทิน) ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5 ไบโอทิน TGC CAT CAA TGG AAT ATT GGA TAG CTT TTC CGA AGT TIT CGA TAG TCT CAT3' เเละ ค. การวิเคราะห์การมีอยู่ของยีน toxA และยืน toxB โดยการเกิดสีที่แถบทดสอบ
4. กรรมวิธีตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อ ยืน toxA และยืน toxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่ง สารละลายดีเอ็นเอ ถูกเตรียมโดยนําตัวอย่างชีวภาพ มาบดในสารละลายกัวนิดีนไธโอไซยาเนต ที่ความ เข้มข้น 0.1 โมลาร์ จากนั้นให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 95 100 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 10 นาที แล้ว นําไปแช่ในน้ำแข็ง เป็นเวลา 5 10 นาที และนํามาปั่นเหวี่ยงที่ความเร็ว 10,000 12,000 เท่าของแรง โน้มถ่วงโลก เป็นเวลา 1 5 นาที เก็บเฉพาะส่วนใส
5. กรรมวิธีตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อ ยีน toxA และยืนtoxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่ง ปฏิกิริยาแลมป์ถูกทําที่อุณหภูมิ 63 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 นาที
6. กรรมวิธีตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อ ยีน toxA และยืนtoxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่ง สารละลายแลมป์ ประกอบด้วย ก. อินเนอร์ไพรเมอร์ (AP4FIP) 2 ไมโครโมลาร์ ข. อินเนอร์ไพรเมอร์ (AP4BIPBiotin) 2ไมโครโมลาร์ ค. เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (AP4F3) 0.2 ไมโครโมลาร์ ง. เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (AP4B3) 0.2 ไมโครโมลาร์ จ. ลูปไพรเมอร์ (AP4LF) 2 ไมโครโมลาร์ ฉ. ลูปไพรเมอร์ (AP4LB) 2 ไมโครโมลาร์ ช. สารดีเอ็นทีพี (dNTPs) 1.8 มิลลิโมลาร์ ซ. สารเบตาอื่น (betaine) 0.8 โมลาร์ ฌ. สารแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSO4) 8 มิลลิโมลาร์ ญ. เอนไซม์บีเอสที่ 3.0 ดีเอ็นเอ โพลีเมอร์เรส (Bst 3.0 DNA polymerase) 8 หน่วย และ ฎ. บัฟเฟอร์ที่ความเข้มข้น 1 เท่า
7. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะ ต่อยีน toxA และยืนtoxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ ซึ่ง ตัวตรวจจับดีเอ็นเอที่มีการติดฉลากด้วยฟลูออเรสซีน ไอโซไทโอซายาเนส (APMFITC) ที่มีลําดับนิวคลี โอไทด์ : FITC5' ATG AGC CAG ATA TTG 3'
8. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticusAHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะ ต่อยืน toxA และยืนtoxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LFD) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ ซึ่ง การทดสอบผลิตภัณฑ์แลมป์ที่ได้ด้วยแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ทําได้โดย การเติมตัวตรวจจับดีเอ็นเอ ที่ติดฉลากด้วยสารเรืองแสงฟลูออเรสซีน ไอโซไทโอซายาเนส (AP4FITC) 0.5 ไมโครโมลาร์ ลงผลิตภัณฑ์ แลมป์ที่ได้จากขั้นตอนการทดสอบตัวอย่างสารละลายดีเอ็นเอด้วยปฏิกิริยาแลมป์ ที่อุณหภูมิ 60 65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 นาที จากนั้นนําส่วนผสมที่ได้เติมลงในบัพเฟอร์ ในสัดส่วน 1:10 ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและจุ่มแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ในส่วนผสมดังกล่าวเป็นเวลา 5 นาที
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH23646A3 true TH23646A3 (th) | 2024-05-08 |
| TH23646Y TH23646Y (th) | 2024-05-08 |
| TH23646U TH23646U (th) | 2024-05-08 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR950032641A (ko) | 형광 염료를 사용한 이본쇄 핵산의 동질 분석법 및 이에 유용한 키트 | |
| KR101184566B1 (ko) | 실시간 중합효소 연쇄반응과 ｄｎａ 칩이 통합된 검사 시스템 및 이를 이용한 통합 분석방법 | |
| US8921040B2 (en) | Method and apparatus for conducting an assay | |
| DE69938894D1 (de) | Verfahren zum nachweis von ziel-nukleinsäuren mittels pcr | |
| ATE447624T1 (de) | Fluorimetrisches system zum nachweis von nukleinsäuren | |
| WO2001016367A8 (en) | Methods for exogenous, internal controls during nucleic acid amplification | |
| Wang et al. | Visual and multiplex detection of nucleic acid sequence by multiple cross displacement amplification coupled with gold nanoparticle-based lateral flow biosensor | |
| Xu et al. | One-pot isothermal amplification permits recycled activation of CRISPR/Cas12a for sensing terminal deoxynucleotidyl transferase activity | |
| US20160186265A1 (en) | Methods for Typing HLA Alleles | |
| ES2052607T3 (es) | Metodos y kits para detectar secuencias de acidos nucleicos. | |
| CN103911447B (zh) | 检测疟原虫的引物、探针及方法 | |
| CN113088557A (zh) | 一种同时检测多种dna糖基化酶的荧光化学传感器及其检测方法和应用 | |
| CN103911462B (zh) | 黄热、乙型脑炎、基孔肯雅、西尼罗的鉴别检测方法及引物和探针 | |
| Kostyu et al. | Rapid HLA-DR oligotyping by an enzyme-linked immunosorbent assay performed in microtiter trays | |
| CN112961908A (zh) | 细胞外囊泡内环状rna的可视化检测方法 | |
| CA2549059A1 (en) | Oligonucleotides for the detection of hepatitis b virus | |
| EP2686445A2 (en) | Method of identifying nucleic acid-containing object | |
| TH23646Y (th) | ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus สายพันธุ์ก่อโรคตับวายเฉียบพลัน และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าว | |
| TH23646U (th) | ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus สายพันธุ์ก่อโรคตับวายเฉียบพลัน และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าว | |
| ATE553221T1 (de) | Verfahren zum nachweis von amplifikation oder deletion in einem genomischen dna-fragment | |
| ATE287969T1 (de) | Amplifizierungsverfahen zum nachweis von zielnukleinsäuren unter verwendung von fluoreszenzenergieübertragung | |
| WO2012069484A3 (de) | Verfahren zum qualitativen und quantitativen nachweis von spezifischen nukleinsäuresequenzen in echtzeit | |
| Granberg et al. | Molecular approaches to recognize relevant and emerging infectious diseases in animals | |
| PT1516067E (pt) | Detecção de algas tóxicas | |
| ATE275208T1 (de) | Methoden für exogene, interne kontrollen während der amplifizierung von nukleinsäuren |