TH23646U - ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus สายพันธุ์ก่อโรคตับวายเฉียบพลัน และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าว - Google Patents
ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus สายพันธุ์ก่อโรคตับวายเฉียบพลัน และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าวInfo
- Publication number
- TH23646U TH23646U TH2103002081U TH2103002081U TH23646U TH 23646 U TH23646 U TH 23646U TH 2103002081 U TH2103002081 U TH 2103002081U TH 2103002081 U TH2103002081 U TH 2103002081U TH 23646 U TH23646 U TH 23646U
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- primer
- ahpnd
- vibrio parahaemolyticus
- toxb
- lamp
- Prior art date
Links
Abstract
การประดิษฐ์นี้เป็นการออกแบบและพัฒนาชุดไพรเมอร์สําหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยปฏิกิริยาแลมป์ โดยใช้ไพรเมอร์ ดังกล่าว โดยชุดไพรเมอร์ตามการประดิษฐ์นี้ได้ออกแบบให้มีความจําเพาะต่อลําดับเบสบนยีนท็อกเอและท็อก 5 ปี (tox4 และ toxB) ของเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND นอกจากนี้ ยังได้พัฒนากรรมวิธีในการ ตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND ด้วยปฏิกิริยาแลมป์ร่วมกับเทคนิคอื่นๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การตรวจสอบผลการทดสอบด้วยแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ด้วยหลักการอิมมูโนโครมาโทกราฟี ซึ่งจะใช้เวลา ในการทําปฏิกิริยาและตรวจผลการติดเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND ทั้งสิ้นเพียง 70 นาที ทําให้ กรรมวิธีตามการประดิษฐ์นี้มีความสะดวก รวดเร็วและง่ายต่อการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus AHPND ในตัวอย่างสัตว์น้ำที่ต้องการทดสอบ นอกจากนี้ กรรมวิธีดังกล่าวยังมีความไวและความจําเพาะสูง ง่ายต่อการวิเคราะห์ผล ไม่เป็นอันตรายต่อผู้ใช้ และมีราคาถูก ไม่ต้องใช้เครื่องมืออุปกรณ์ที่ยุ่งยากซับซ้อน
Claims (8)
1. ชุดไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อยืน toxA และยืน toxB สําหรับตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus AHPND ไพรเมอร์ เลือกได้อย่างน้อยหนึ่งเส้นจาก ไพรเมอร์ที่ 1 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5 - GGA TTC TGT CAC GTA ATT GTTCCC TTT TCT TTT GGC CAA ATA CGC C-3' ไพรเมอร์ที่ 2 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5 ไบโอทิน TGC CAT CAA TGGAAT ATT GGA TAG CTT TTC CGA AGT TTT CGA TAG TCT CAT-3’ ไพรเมอร์ที่ 3 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5) - CMG GTG GTTTTT TAT CAA CG-3’ ไพรเมอร์ที่ 4 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5 - TCTTTT GCC GCA GCA TAA-3 ‘ ไพรเมอร์ที่ 5 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5' - GATTTA GTA GAT GAA TCG ATTATA-3” และ ไพรเมอร์ที่ 6 ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5) – GTC TTG AAT TTT ATC GCG TGT CTC T-3’
2. ชุดตรวจสําหรับตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND ด้วยปฏิกิริยาแลมป์โดยใช้ไพรเมอร์ที่ จําเพาะต่อยีน toxA และยีน toxB ชุดตรวจ ประกอบด้วย ก. ไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อยีน tox4 และยีน toxB สําหรับทําปฏิกิริยาแลมป์ ที่ประกอบด้วย อินเนอร์ไพรเมอร์ถูกติดฉลากด้วยสารไบโอทิน (AP4-BIP-Biotin) มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5'- ไบโอทิน - TGC CAT CAA TGG AAT ATT GGA TAG CTT TTC CGA AGT TTT CGA TAG TCT CAT-3' อินเนอร์ไพรเมอร์ (AP4-FIP): 5 - GGA TTCTGT CAC GTAATT GTT CCC TTTTCTTTT GGC CAA ATA CGC C-3’ เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (AP4-F3): 5 - CGGGTGGTTTTTTAT CAA CG-3’ เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (AP4-B3): 5” - TCTTTTGCC GCA GCA TAA-3’ ลูปไพรเมอร์ (AP4HLF) : 5' - GAT TAGTA GAT GAA TCG ATTATA-3’ และ ลูปไพรเมอร์ (AP4ALB) : 5) - GTC TTG AATTITATC GCG TGT CTC T-3’ และ ข. แผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ที่ประกอบด้วย แผ่นรองรับสารละลายผลิตภัณฑ์แลมป์ แถบทดสอบ แถบ ควบคุม และแผ่นดูดซับที่ทําให้สารละลายผลิตภัณฑ์แลมป์เคลื่อนที่จากแผ่นรองรับ ไปยังแถบทดสอบ และแถบควบคุมตามลําดับ มีลักษณะเฉพาะคือแถบทดสอบถูกทําปฏิริยาด้วยอินเนอร์ไพรเมอร์ที่ติด ฉลากด้วยสารไบโอทิน ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5' ไบโอทิน TGC CAT CAA TGG AAT ATT GGA TAG CTT TTC CGA AGT TTT CGA TAG TCT CAT-3' ค. ตัวตรวจจับดีเอ็นเอสําหรับตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND ที่มีการติดฉลาดด้วย ฟลูออเรสซีน ไอโซไทโอซายาเนส (AP4-FITC) ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5' - ATG AGC CAG ATA TG -3 '
3. กรรมวิธีตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อ ยืน tox4 และยีน toxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) มีขั้นตอนดังนี้ ก. การทําปฏิกิริยาแลมป์ โดยนําสารละลายดีเอ็นเอจากตัวอย่างชีวภาพมาผสมกับสารละลายแลมป์ โดย อาศัยชุดไพรเมอร์ที่จําเพาะยืน tox4 และยีน toxB เพื่อให้ได้ผลิตภัณฑ์แลมป์ ข. การเติมตัวตรวจจับดีเอ็นเอที่มีการติดฉลากด้วยฟลูออเรสซีน ไอโซไทโอซายาเนส (AP4-FITC) ลงใน ผลิตภัณฑ์แลมป์ที่ได้ก่อนนําไปทดสอบกับแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ที่มีแถบทดสอบที่ทําปฏิกิริยา กับอินเนอร์ไพรเมอร์ที่ติดฉลากด้วยสารไบโอทิน) ที่มีลําดับนิวคลีโอไทด์: 5 ไบโอทิน TGC CAT CAA TGG AAT ATT GGA TAG CTT TTC CGA AGT TIT CGA TAG TCT CAT-3' เเละ ค. การวิเคราะห์การมีอยู่ของยีน toxA และยืน toxB โดยการเกิดสีที่แถบทดสอบ
4. กรรมวิธีตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อ ยืน toxA และยืน toxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่ง สารละลายดีเอ็นเอ ถูกเตรียมโดยนําตัวอย่างชีวภาพ มาบดในสารละลายกัวนิดีนไธโอไซยาเนต ที่ความ เข้มข้น 0.1 โมลาร์ จากนั้นให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 95 - 100 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 - 10 นาที แล้ว นําไปแช่ในน้ำแข็ง เป็นเวลา 5 - 10 นาที และนํามาปั่นเหวี่ยงที่ความเร็ว 10,000 - 12,000 เท่าของแรง โน้มถ่วงโลก เป็นเวลา 1 - 5 นาที เก็บเฉพาะส่วนใส
5. กรรมวิธีตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อ ยีน toxA และยืนtoxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่ง ปฏิกิริยาแลมป์ถูกทําที่อุณหภูมิ 63 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 นาที
6. กรรมวิธีตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะต่อ ยีน toxA และยืนtoxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่ง สารละลายแลมป์ ประกอบด้วย ก. อินเนอร์ไพรเมอร์ (AP4-FIP) 2 ไมโครโมลาร์ ข. อินเนอร์ไพรเมอร์ (AP4-BIP-Biotin) 2ไมโครโมลาร์ ค. เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (AP4-F3) 0.2 ไมโครโมลาร์ ง. เอาท์เตอร์ไพรเมอร์ (AP4-B3) 0.2 ไมโครโมลาร์ จ. ลูปไพรเมอร์ (AP4-LF) 2 ไมโครโมลาร์ ฉ. ลูปไพรเมอร์ (AP4LB) 2 ไมโครโมลาร์ ช. สารดีเอ็นทีพี (dNTPs) 1.8 มิลลิโมลาร์ ซ. สารเบตาอื่น (betaine) 0.8 โมลาร์ ฌ. สารแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSO4) 8 มิลลิโมลาร์ ญ. เอนไซม์บีเอสที่ 3.0 ดีเอ็นเอ โพลีเมอร์เรส (Bst 3.0 DNA polymerase) 8 หน่วย และ ฎ. บัฟเฟอร์ที่ความเข้มข้น 1 เท่า
7. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะ ต่อยีน toxA และยืนtoxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ ซึ่ง ตัวตรวจจับดีเอ็นเอที่มีการติดฉลากด้วยฟลูออเรสซีน ไอโซไทโอซายาเนส (APM-FITC) ที่มีลําดับนิวคลี โอไทด์ : FITC-5'- ATG AGC CAG ATA TTG -3'
8. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus-AHPND จากตัวอย่างชีวภาพด้วยไพรเมอร์ที่จําเพาะ ต่อยืน toxA และยืนtoxB โดยอาศัยปฏิกิริยาแลมป์และแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LFD) ตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ ซึ่ง การทดสอบผลิตภัณฑ์แลมป์ที่ได้ด้วยแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ทําได้โดย การเติมตัวตรวจจับดีเอ็นเอ ที่ติดฉลากด้วยสารเรืองแสงฟลูออเรสซีน ไอโซไทโอซายาเนส (AP4-FITC) 0.5 ไมโครโมลาร์ ลงผลิตภัณฑ์ แลมป์ที่ได้จากขั้นตอนการทดสอบตัวอย่างสารละลายดีเอ็นเอด้วยปฏิกิริยาแลมป์ ที่อุณหภูมิ 60 - 65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 นาที จากนั้นนําส่วนผสมที่ได้เติมลงในบัพเฟอร์ ในสัดส่วน 1:10 ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและจุ่มแผ่นทดสอบแบบจุ่ม (LED) ในส่วนผสมดังกล่าวเป็นเวลา 5 นาที
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH23646A3 TH23646A3 (th) | 2024-05-08 |
| TH23646Y TH23646Y (th) | 2024-05-08 |
| TH23646U true TH23646U (th) | 2024-05-08 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Xiao et al. | Rapid and sensitive detection of Vibrio vulnificus using CRISPR/Cas12a combined with a recombinase-aided amplification assay | |
| Zhou et al. | Development and evaluation of a real-time fluorogenic loop-mediated isothermal amplification assay integrated on a microfluidic disc chip (on-chip LAMP) for rapid and simultaneous detection of ten pathogenic bacteria in aquatic animals | |
| James et al. | Rapid and sensitive detection of high pathogenicity Eurasian clade 2.3. 4.4 b avian influenza viruses in wild birds and poultry | |
| Doi et al. | On‐site environmental DNA detection of species using ultrarapid mobile PCR | |
| BRPI0412545A (pt) | analisador de múltiplas detecções automatizado | |
| BRPI0815857A2 (pt) | "método para testar a eficácia biocida de agentes biocidas contra anaeróbios" | |
| Sakai et al. | Evaluation of a high-speed but low-throughput RT-qPCR system for detection of SARS-CoV-2 | |
| ATE130045T1 (de) | Quantitative dns-polymerasebestimmung und testkit dafür. | |
| TH23646Y (th) | ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus สายพันธุ์ก่อโรคตับวายเฉียบพลัน และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าว | |
| TH23646A3 (th) | ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio parahaemolyticus สายพันธุ์ก่อโรคตับวายเฉียบพลัน และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าว | |
| Xu et al. | A versatile integrated tube for rapid and visual SARS-CoV-2 detection | |
| Nak-On et al. | Application of electrochemical LAMP-MB signal evaluation using screen-printed graphene electrodes for quantitative detection of paramphistome egg DNA in faeces sample | |
| Deng et al. | Polymorphism of the glucosyltransferase gene (ycjM) in Escherichia coli and its use for tracking human fecal pollution in water | |
| Erlichster et al. | Rapid, Loop-mediated isothermal amplification detection of celiac disease risk alleles | |
| EP2119797A4 (en) | METHOD FOR DETECTING AMPLIFICATION OR DELETION IN A GENOMIC DNA FRAGMENT | |
| CN104404132A (zh) | 一种猪链球菌2型的ss2-lamp检测试剂盒及应用 | |
| TH22063U (th) | ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Enterocytozoon hepatopenaei และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าว | |
| TH22063Y (th) | ชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Enterocytozoon hepatopenaei และกรรมวิธีการตรวจหาเชื้อดังกล่าวด้วยเทคนิคแลมป์ด้วยชุดไพรเมอร์ดังกล่าว | |
| GB2443133A (en) | Analytical method and kit | |
| RU2782316C2 (ru) | Способ исследования микробиоты толстого кишечника методом полимеразной цепной реакции с флуорисцентной детекцией в режиме реального времени и набор реагентов для его осуществления | |
| Amalfitano et al. | Water and microbial monitoring technologies towards the near future space exploration | |
| Lim et al. | Performance evaluation of EuDx™ ufPCR Flu & RSV detection kit for detection of influenza A/B and respiratory syncytial virus | |
| RU2012141287A (ru) | Зонд пептидно-нуклеиновой кислоты, набор и способ обнаружения и/или количественного определения salmonella spp. и их применения | |
| Gorbenko et al. | Visual detection of bacterial and viral pathogens with peroxidase-like deoxyribozymes | |
| ATE275208T1 (de) | Methoden für exogene, interne kontrollen während der amplifizierung von nukleinsäuren |