TH13933Y - กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิต (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอชเอ (inhA) ด้วยอนุภาคทองคำ - Google Patents
กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิต (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอชเอ (inhA) ด้วยอนุภาคทองคำInfo
- Publication number
- TH13933Y TH13933Y TH1503001079U TH1503001079U TH13933Y TH 13933 Y TH13933 Y TH 13933Y TH 1503001079 U TH1503001079 U TH 1503001079U TH 1503001079 U TH1503001079 U TH 1503001079U TH 13933 Y TH13933 Y TH 13933Y
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- isoniazid
- base
- gold particles
- detecting
- resistant tuberculosis
- Prior art date
Links
Abstract
แก้ไข 1 ก.ย. 2560 กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอช เอ (inhA) ด้วยอนุภาคทองคำโดยเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์ 4 เส้น ที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ของเชื้อ วัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ซึ่งในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 45 - 60 นาที ด้วยปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) หลังจากนั้นเติมตัวตรวจจับที่ติดฉลากไทอัล (thiol)ที่ปลายด้าน 5’ลงไป แล้วปล่อยไว้ที่อุณหภูมิเดิมเป็นเวลาอีก 5 นาที เมื่อนำไปตรวจสอบกับผลผลิตแลมป์ (LAMP) ตัวตรวจสอบดีเอ็นเอจะเข้าไปจับบริเวณที่จำเพาะเจาะจงต่อผลผลิตของแลมป์ (LAMP) ที่เกิดขึ้น เมื่อมี การเติมเกลือโซเดียมคลอไรด์ (NaCl) หรือแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSO4) ลงไปในปริมาณที่เหมาะสม จะทำให้ ผลผลิตของแลมป์ (LAMP) ดังกล่าวทำให้เชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ที่มีเบสกลายพันธุ์ตำแหน่ง ที่ 15 ซึ่งเบส ซี เปลี่ยนเป็นเบส ที (C-15-T) ของยีนไอเอ็นเอชเอ (inhA) จะเห็นอนุภาคทองคำเป็นสีชมพูแดงอยู่ใน สารละลาย ในขณะที่ถ้าไม่มีลำดับเบสกลายพันธุ์ จะทำให้เห็นอนุภาคทองคำเปลี่ยนจากสีแดงเป็นสีม่วง ---------------------------------------------------------------------------------------------------- แก้ไขบทสรุปการประดิษฐ์ 7/03/2559 กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอช เอ (inhA) ด้วยอนุภาคทองคำโดยเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ของเชื้อ วัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ซึ่งในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ด้วยปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) หลังจากนั้นเติมตัวตรวจจับที่ติดฉลากไทอัล (thiol)ที่ปลายด้าน 5’ลงไป แล้วปล่อยไว้ที่อุณหภูมิทเป็นเวลาอีก 5 นาที เมื่อนำไปตรวจสอบกับผลผลิตแลมป์ (LAMP) ตัวตรวจสอบดีเอ็นเอจะเข้าไปจับบริเวณที่จำเพาะเจาะจงต่อผลผลิตของแลมป์ (LAMP) ที่เกิดขึ้น เมื่อมี การเติมเกลือโซเดียมคลอไรด์ (NaCl) หรือแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSO4) ลงไปในปริมาณที่เหมาะสม จะทำให้ ผลผลิตของแลมป์ (LAMP) ดังกล่าวทำให้เชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ที่มีเบสกลายพันธุ์ตำแหน่ง ที่ 15 ซึ่งเบส ซี เปลี่ยนเป็นเบส ที (C-15-T) ของยีนไอเอ็นเอเอช (inhA) จะเห็นอนุภาคทองคำเป็นสีชมพูแดงอยู่ใน สารละลาย ในขณะที่ถ้าไม่มีลำดับเบสกลายพันธุ์ จะทำให้เห็นอนุภาคทองคำเปลี่ยนจากสีแดงเป็นสีม่วง ------------------------------------------------------------ คำขอใหม่ปรับปรุง การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการป้องกันการกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ที่เป็นปัญหาสำคัญของประเทศ โดยเริ่มจากการออกแบบ primers 4 ตัว ที่ออกแบบจากลำดับเบส ในส่วนยีนเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีน inhA ในระบบนี้ DNA เป้าหมายจะถูกเพิ่ม ปริมาณภายใต้อุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 45 – 60 นาที ผลการตรวจพบว่าเทคนิค LAMP มี ความจำเพาะในการตรวจสอบเชื้อวัณโรคกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิค PCR แบบ real time ต่อจากนั้นทำการออกแบบตัวตรวจจับ (probe) ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของผลผลิต LAMP ที่ได้ แล้วทดสอบสภาวะที่เหมาะสม ในการตรวจสอบผลผลิตของ LAMP ด้วยการเปลี่ยนแปลงสีของอนุภาคทองคำแล้วอ่านผลการตรวจ เมื่อมีเบสคู่สมกับดีเอ็นเอเป้าหมายจะทำให้ มีการเปลี่ยนจากสีแดงเป็นสีชมพูม่วง แทนการตรวจสอบด้วยวิธี gel eletrophoresis ซึ่งจะใช้เวลาอีกเพียง 5- 15 นาทีเท่านั้น
Claims (8)
1. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีน inhA ด้วยอนุภาคทองคำ เป็นเทคนิคใหม่ที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยา Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) ร่วมกับการประยุกต์ใช้อนุภาคทองคำ
2. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ในยีน ด้วยอนุภาคทองคำ ด้วยเทคนิคใหม่ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจาก LAMP ผนวก กับอนุภาคทองคำ มีลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยา LAMP ที่อุณหภูมิประมาณ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา ประมาณ 45 – 60 นาที แล้วเติมตัวตรวจจับที่ติดด้วยอนุภาคทองคำ ที่อุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา ประมาณ 5 นาที หลังจากนั้นทำการเติมเกลือ แล้วอ่านผล
3. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีน inhA ด้วยอนุภาคทองคำ ด้วยเทคนิคใหม่ ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งกรรมวิธีการออกแบบตัวตรวจจับ (probe) ใน การตรวจสอบเบสกลายพันธุ์เชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ในยีน inhA ด้วยสีอนุภาคทองคำที่ เปลี่ยนแปลง มีลักษณะเฉพาะคือ ตัวตรวจจับติดฉลาก thiol (-SH) ที่ปลายด้าน 5’ เพื่อการตรวจผลผลิตจาก LAMP ด้วยสีอนุภาคทองคำที่เปลี่ยนแปลง มีลำดับเบสดังนี้ 5’-SH-TGGACATACCGATTTCGGCCC-3’
4. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ในยีน inhA ด้วยสีอนุภาคทองคำที่เปลี่ยนแปลง ด้วยเทคนิคใหม่ ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง ปฏิกิริยา Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) มีขั้นตอนดังนี้ การเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซ ไนอะซิด (isoniazid) ในยีน inhA เป็นเวลาประมาณ 45 – 60 นาที ที่อุณหภูมิประมาณ 61 องศาเซลเซียส
5. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ในยีน inhA ด้วยสีอนุภาคทองคำที่เปลี่ยนแปลง ด้วยเทคนิคใหม่ ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง ปฏิกิริยา Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) จะต้องใช้เวลาในการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซ ไนอะซิด (isoniazid) ในยีน inhA ที่มีเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง promoter C (-15) T ของยีน inhA เป็นเวลา ประมาณ 45 – 60 นาที ที่อุณหภูมิประมาณ 61 องศาเซลเซียส และ ภายในปฏิกิริยา LAMP 25 ไมโครลิตร ประกอบด้วย inner primers FIP-INHA และ BIP-INHA อย่างละ 2 ?M, outer primers F3-INHA และ B3- INHA อย่างละ 0.2 ?M, dNTPs 1.6 mM ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.6 M, สารแมกนีเซียมซัลเฟส (MgSO4) 4 mM, 2.5U Bst 2.0 warm start DNA polymerase และ supplied buffer 1x
6. ไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยา LAMP ในข้อถือสิทธิที่ 5 การออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิค LAMP ในการ ตรวจเชื้อ ที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบส ไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยา LAMP ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะ ต่อลำดับเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสที่ตำแหน่ง promoter C (-15) T ของยีน inhA ของเชื้อวัณโรคไอโซไนอะซิด (isoniazid) ดังนี้ ไพรเมอร์ F3-INHA ลำดับเบส (5’-3’) GCTGAGTCACACCGACAAAC ไพรเมอร์ B3-INHA ลำดับเบส (5’-3’) CCGGTTTCCTCCGGTAACC ไพรเมอร์ FIP-INHA ลำดับเบส (5’-3’) CCACGAGCGTAACGTGGCTGCTTTTGTCACGAGCGTAACCCCA ไพรเมอร์ BIP-INHA ลำดับเบส (5’-3’) AGATAGGTTGTCGGGGTGACTTTTAGGACTGAACGGGATACGAA
7. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ในยีน inhA ด้วยสีอนุภาคทองคำที่เปลี่ยนแปลงในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ ไม่ต้องใช้เครื่อง PCR และเครื่อง แยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า
8. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ในยีน inhA ด้วยสีอนุภาคทองคำที่เปลี่ยนแปลงด้วยเทคนิคใหม่ สำหรับการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อ ต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ในยีน inhA ด้วยสีอนุภาคทองคำที่เปลี่ยนแปลงในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อนี้ เพื่อ การตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid)
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH13933C3 TH13933C3 (th) | 2018-06-07 |
| TH13933U TH13933U (th) | 2018-06-07 |
| TH13933Y true TH13933Y (th) | 2018-06-07 |
| TH13933A3 TH13933A3 (th) | 2018-06-07 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104093856B (zh) | 检测核酸合成和/或扩增的方法 | |
| CN105473737B (zh) | 用于检测细菌污染的方法和组合物 | |
| CN108138209A (zh) | 通过原位扩增制备细胞游离核酸分子的方法 | |
| ES2698964T3 (es) | Método y kit de detección de la ausencia de microorganismos | |
| AU2014268510A1 (en) | Measures of short telomere abundance | |
| JP6388540B2 (ja) | 改良したｄｎａポリメラーゼ活性アッセイおよび生菌の検出を可能にする方法 | |
| Zhang et al. | Ultrasensitive biosensing of low abundance BRAF V600E mutation in real samples by coupling dual padlock-gap-ligase chain reaction with hyperbranched rolling circle amplification | |
| JoonáLee | Label/quencher-free detection of single-nucleotide changes in DNA using isothermal amplification and G-quadruplexes | |
| TH13933U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิต (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอชเอ (inhA) ด้วยอนุภาคทองคำ | |
| WO2021236964A1 (en) | Methods for measuring total cell-free dna using alu fragments | |
| US9863009B2 (en) | Sequence specific primer pool for multiplex PCR and method of detecting microbial infections in thalassemia patients | |
| US20160083776A1 (en) | Methods for Measuring Polymerase Activity Useful for Sensitive, Quantitative Measurements of Any Polymerase Extension Activity and for Determining the Presence of Viable Cells | |
| TH13931U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยอนุภาคทองคำ | |
| TH13931Y (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยอนุภาคทองคำ | |
| TH13932Y (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน (Rifampicin) ด้วยอนุภาคทองคำ | |
| TH13932U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน (Rifampicin) ด้วยอนุภาคทองคำ | |
| Leelatian et al. | Highly sensitive EGFR mutation detection by specific amplification of mutant alleles | |
| Nielsen et al. | Bacteraemia with Campylobacter jejuni: no association with the virulence genes iam, cdtB, capA or virB | |
| US10093984B2 (en) | Probe for detecting and/or quantifying methylation of the promoter of the IGFBP-3 gene | |
| JP6155750B2 (ja) | ＳＮＰ（ｒｓ１１８８１２２２）を検出するためのプローブ | |
| TH13929Y (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอชเอ (inhA) ด้วยแถบสี | |
| TH13929U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอชเอ (inhA) ด้วยแถบสี | |
| US20230313303A1 (en) | Compositions and methods for reducing cell-free dna | |
| TH14021Y (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน (Rifampicin) ด้วยแถบสี | |
| TH14021U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน (Rifampicin) ด้วยแถบสี |