TH13930Y - กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยแถบสี - Google Patents
กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยแถบสีInfo
- Publication number
- TH13930Y TH13930Y TH1503001075U TH1503001075U TH13930Y TH 13930 Y TH13930 Y TH 13930Y TH 1503001075 U TH1503001075 U TH 1503001075U TH 1503001075 U TH1503001075 U TH 1503001075U TH 13930 Y TH13930 Y TH 13930Y
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- isoniazid
- primers
- base
- primer
- detecting
- Prior art date
Links
Abstract
แก้ไข 1 ก.ย. 2560 กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยแถบสี เริ่ม จากการออกแบบไพรเมอร์ 4 เส้น ที่ออกแบบให้จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 315 (G(สัญลักษณ์) C) ของยีน แคทจี (KatG) ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ที่ออกแบบจำนวน 2 ชุด ด้วยการทำปฏิกิริยา ครั้งเดียวโดยมีการกำหนดให้เบสตัวที่ 2 ที่ปลาย 5’ ของไพรเมอร์ 4 เปลี่ยนเป็นเบสที (T) หรือเบสเอ (A) และไพร เมอร์ 6 ไม่มีการเปลี่ยนเบส ที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ดังกล่าวของเชื้อวัณโรค ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง แล้วใช้ตัวตรวจจับติดสารเรืองแสง (FlTC) ด้วยการอ่าน ผลบนแผ่นดิพสติค (dipstick) เมื่อให้ผลบวก จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู บริเวณแถบทดสอบ (T) และแถบ ควบคุม (C) แสดงว่า ในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 315 (G(สัญลักษณ์) C) ของยีนแคทจี (KatG) แต่ถ้าผลลบ จะ ปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู เฉพาะแถบควบคุม (C) เท่านั้น วิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) แบบเรียลไทม์ (real time) อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR) และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วย กระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา ---------------------------------------------------------------------------------------------------- แก้ไขบทสรุปการประดิษฐ์ 10/03/2559 กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยแถบสี เริ่ม จากการออกแบบไพรเมอร์ 4 ตัว ที่ออกแบบให้จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 315 (G?C) ของยีน แคทจี (KatG) ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ที่ออกแบบจำนวน 2 ชุด ด้วยการทำปฏิกิริยา ครั้งเดียวโดยมีการกำหนดให้เบสตัวที่ 2 ที่ปลาย 5’ ของไพรเมอร์ 4 เปลี่ยนเป็นเบส T หรือ A และไพรเมอร์ 6 ไม่ มีการเปลี่ยนเบส ที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ดังกล่าวของเชื้อวัณโรค ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่ อุณหภูมิ 61 องซาเซลเซียส เป็นเวลา 45-60 นาที แล้วใช้ตรวจจับติดสารเรืองแสง (FITC) ด้วยการอ่านผลบน แผ่นดิพสติค (dipstick) เมื่อให้ผลบวก จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู บริเวณแถบทดสอบ (T) และแถบควบคุม (C) แสดงว่า ในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 315 (G?C) ของยีนแคทจี (KatG) แต่ถ้าผลลบ จะปรากฏเส้น ทดสอบสีชมพู เฉพาะแถบควบคุม (C) เท่านั้น วิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) แบบ เรียลไทม์ (real time) อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR) และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าใน การติดตามผลของปฏิกิริยา ----------------------------------------------------------- คำของใหม่ปรับปรุง การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการป้องกันการกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ที่ เป็นปัญหาสำคัญของประเทศ โดยเริ่มจากการออกแบบ primers 4 ตัว ที่ออกแบบจากลำดับเบสในส่วนยีนเชื้อวัณ โรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ที่ออกแบบจำนวน 2 ชุด โดยมีการกำหนดให้เบสตัวที่ 2 ที่ปลาย 5’ ของ สาย BIP-KatG1 เปลี่ยนเป็นเบส T หรือ A และ BIP-KatG2 ไม่มีการเปลี่ยนเบส ที่ในระบบนี้ DNA เป้าหมายจะ ถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ผลการตรวจพบว่าเทคนิค LAMP มี ความจำเพาะในการตรวจสอบเชื้อวัณโรคกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) เทียบเท่า กับการตรวจสอบด้วยเทคนิค PCR แบบ real time ต่อจากนั้นทำการออกแบบตัวตรวจจับ (probe) ที่จำเพาะต่อ ลำดับเบสของผลผลิต LAMP ที่ได้ แล้วทดสอบสภาวะที่เหมาะสม ในการตรวจสอบผลผลิตของ LAMP ที่ได้บน แผ่น dipstick แทนการตรวจสอบด้วยวิธี gel eletrophiresis ซึ่งจะใช้เวลาอีกเพียง 5-15 นาทีเท่านั้น
Claims (8)
1. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วย แถบสีเป็นเทคนิคใหม่ที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยา Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) ร่วมกับการประยุกต์ใช้เทคนิค dipstick
2. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วย แถบสีด้วยเทคนิคใหม่ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจาก LAMP บนแผ่น dipstick มีลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยา LAMP ที่อุณหภูมิประมาณ 61 องศาเซลซียส เป็นเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง แล้ว เติมตัวตรวจจับ ที่อุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลาประมาณ 5 นาที ดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน 1 ไมโครลิตร ใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์ 100 ไมโครลิตร ที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นจุ่มแผ่น dipstick ลงใน สารละลายประมาณ 5 นาที แล้วอ่านผล
3. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วย แถบสีด้วยเทคนิคใหม่ ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งกรรมวิธีการออกแบบตัวตรวจจับ (probe) ในการตรวจสอบเบส กลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยแถบสีบนแผ่น dipstick มีลักษณะเฉพาะคือ ตัว ตรวจจับติดฉลาก FITC ที่ปลายด้าน 5’ เพื่อการตรวจผลผลิตจาก LAMP บนแผ่น dipstick มีลำดับเบสดังนี้ ชุดที่ 1 FITC 5’ –CGACCTCGATGCCGG -3’ สำหรับคู่ FIP-KatG1 และ BIP-KatG1 ชุดที่ 2 FITC 5’ –TGGCACCGGAACCGGTAAGGACGCG-3’ สำหรับคู่ FIP-KatG2 และ BIP-KatG2
4. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วย แถบสี ด้วยเทคนิคใหม่ ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งปฏิกิริยา Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) มี ขั้นตอนดังนี้ การเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) เป็นเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิประมาณ 61 องศาเซลเซียส
5. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วย แถบสี ด้วยเทคนิคใหม่ ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งปฏิกิริยา Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) จะต้องใช้เวลาในการเพิ่มประมาณสารพันธุกรรมของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ที่มีเบสกลาย พันธุ์ที่ตำแหน่ง 315 (GC) ของยีน KatG เป็นเวลาประมาณ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิประมาณ 61 องศาเซลเซียส และ ภายในปฏิกิริยา LAMP 25 ไมโครลิตร มีการใช้ ไพรเมอร์ 2 ชุดด้วยกัน ชุดที่ 1 ประกอบด้วย inner primers FIP-KatG1 และ BIP-KatG1 อย่างละ 2 ?M, outer primer F3-KatG และ B3-KatG อย่างละ 0.2 ?M, dNTPs 1.6 mM ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.6 M, สารแมกนีเซียมซัลเฟส (MgSO4) 4 mM, 2.5U Bst 2.0 warm start DNA polymerase และ supplied buffer 1x ชุดที่ 2 ประกอบด้วย inner primers FIP-KatG2 และ BIP-KatG2 อย่างละ 2 ?M, outer primers F3- KatG และ B3-KatG อย่างละ 0.2 ?M, dNTPs 1.6 mM ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.6 M, สาร แมกนีเซียมซัลเฟส (MgSO4) 4.8 mM, 3.5-5.0 U Bst 2.0 warm start DNA polymerase และ supplied buffer 1x
6. ไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยา LAMP ในข้อถือสิทธิที่ 5 การออกแบบไพรเมอรืสำหรับเทคนิค LAMP ในการ ตรวจเชื้อ ที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบส ไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยา LAMP ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะ ต่อลำดับเบสกลายพะนธุ์ที่ตำแหน่งของยีน โดยกำหนดให้เบสตัวที่ 2 ของปลาย 5 ‘ BIP-KatG1 เปลี่ยนเป็นเบส T หรือ A และ BIP-KatG2 ไม่มีการเปลี่ยนเบส ดังนี้ ไพรเมอร์ F3-KatG ลำดับเบส (5’-3’) GAAACAGCGGCGCTGATC ไพรเมอร์ B3-KatG ลำดับเบส (5’-3’) CGAGGAAACTGTTGTCCCAT ไพรเมอร์ FIP-KatG1 ลำดับเบส (5’-3’) GTGGTGATCGCGTCCTTACCTTTTAGAGCTCGTATGGCACCGGAA ไพรเมอร์ BIP-KatG1 ลำดับเบส (5’-3’) CTGGCATCGAGGTCGTATTTTTTCGTCGGGGTGTTCGTCC ไพรเมอร์ FIP-KatG2 ลำดับเบส (5’-3’) CAAGCCCATCTGCTCCAGCGGTTTTTTCGGTAAGACCCATGGCG ไพรเมอร์ BIP-KatG2 ลำดับเบส (5’-3’) CCGGCATCGAGGTCGTATTTTTTCGTCGGGGTGTTCGTCC
7. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วย แถบสี ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะคือไม่ต้องใช้เครื่อง PCR และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า
8. กรรมวิธีใหม่ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วย แถบสี ด้วยเทคนิคใหม่ สำหรับการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วย แถบสีในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อนี้ เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรค
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH13930A3 TH13930A3 (th) | 2018-06-07 |
| TH13930C3 TH13930C3 (th) | 2018-06-07 |
| TH13930Y true TH13930Y (th) | 2018-06-07 |
| TH13930U TH13930U (th) | 2018-06-07 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhang et al. | Selective endpoint visualized detection of Vibrio parahaemolyticus with CRISPR/Cas12a assisted PCR using thermal cycler for on-site application | |
| EP2430188B1 (en) | A method and kit for detecting antibiotic resistant bacteria | |
| CN104937108B (zh) | 利用pH敏感染料的扩增反应产物的检测 | |
| Mashooq et al. | Development and evaluation of probe based real time loop mediated isothermal amplification for Salmonella: A new tool for DNA quantification | |
| Kim et al. | Loop-mediated isothermal amplification of vanA gene enables a rapid and naked-eye detection of vancomycin-resistant enterococci infection | |
| CN104293954A (zh) | 一种金黄色葡萄球菌的lamp引物及其应用方法 | |
| Khan et al. | Detection of aacA-aphD, qacEδ1, marA, floR, and tetA genes from multidrug-resistant bacteria: Comparative analysis of real-time multiplex PCR assays using EvaGreen® and SYBR® Green I dyes | |
| CN105695584B (zh) | 检测实验动物金黄色葡萄球菌的gyrB引物组合 | |
| WO2012058303A2 (en) | Rapid salmonella serotyping assay | |
| TH13930U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยแถบสี | |
| ITMI20101132A1 (it) | Metodo ad elevata sensibilita' per rilevare un acido nucleico target in un campione | |
| Qiu et al. | A novel isothermal amplification-based method for detection of Corynebacterium striatum | |
| TH13929Y (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอชเอ (inhA) ด้วยแถบสี | |
| TH13929U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) บนยีนไอเอ็นเอชเอ (inhA) ด้วยแถบสี | |
| Brey et al. | Design and development of an internal control plasmid for the detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis using real-time PCR | |
| US7749696B2 (en) | Method and kit for the specific detection of M. tuberculosis | |
| TH14021U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน (Rifampicin) ด้วยแถบสี | |
| TH14021Y (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน (Rifampicin) ด้วยแถบสี | |
| Hasanpour et al. | Development of a multiplex real-time PCR assay for phylogenetic analysis of uropathogenic Escherichia coli | |
| JP5595612B1 (ja) | 肌分析用プライマーセット及び肌の検査方法 | |
| CN107110864B (zh) | 用于检测高毒力艰难梭菌菌株的存在的方法 | |
| TH13931Y (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยอนุภาคทองคำ | |
| TH13931U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด (isoniazid) ด้วยอนุภาคทองคำ | |
| Rice et al. | Design and construction of a single tube, quantitative endpoint, LATE‐PCR multiplex assay for ventilator‐associated pneumonia | |
| TH17935U (th) | กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน (Rifampicin) ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียว |