TH115319A

TH115319A - การผลิต TNFR-Ig

Info

Publication number: TH115319A
Application number: TH501004021A
Authority: TH
Inventors: ดราโป นายเดนนิส; ล่วน นายเหยิน-ตุง; อาร์. เมอร์เซอร์ นายเจมส์; หวัง นายเวินกี; ลาสโก นายแดเนียล
Original assignee: นางดารานีย์ วัจนะวุฒิวงศ์; นางสาวสนธยา สังขพงศ์
Filing date: 2005-08-26
Publication date: 2012-07-31

Abstract

DC60 ระบบการผลิตโปรตีน และ/หรือ a-เบต้า ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในปริมาณมากที่ ได้รับการปรับปรุงให้ดีขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีลักษณะเฉพาะหนึ่งหรือ มากกว่าต่อไปนี้ i) ความเข้มข้นกรดอะมิโนสะสมที่สูงกว่า 70 mM โดยประมาณ, ii) อัตราส่วน โมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อแอสพาราจีนสะสมที่น้อยกว่า 2 โดยประมาณ, iii) อัตราส่วนโมลาร์ ของกลูตามีนสะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสมที่น้อยกว่า 0.2 โดยประมาณ; iv) อัตราส่วนโมลาร์ ของไอออนอนินทรีย์สะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสม ระหว่าง 0.4 ถึง 1 โดยประมาณ หรือ v) ความเข้มข้นรวมของกลูตามีนสะสม และแอสพาราจีนสะสมระหว่าง 16 และ 36 mM โดยประมาณถูกจัดไว้ การใช้ระบบดังกล่าวอำนวยให้เกิดระดับการผลิตเบต้าที่สูง และลดการ สะสมของปัจจัยที่ไม่ต้องการบางประการ เช่น แอมโมเนียม และ/หรือ แลกเตท นอกจากนี้ วิธีการ เพาะเลี้ยงซึ่งรวมถึงการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิครึ่งโดยปกติรวมถึงการลดอุณหภูมิ เมื่อได้ เพาะเลี้ยงถึง 20-80% โดยประมาณของความหนาแน่นของเซลล์สูงสุดถูกจัดไว้อีกทางเลือกหนึ่ง หรือนอกเหนือจากนี้ การประดิษฐ์ปัจจุบันจัดให้มีวิธีการลักษณะที่หลังจากบรรลุถึงระดับสูงสุด จะมีระดับแลกเตท และ/หรือ แอมโมเนียมในการเพาะเลี้ยงที่ลดลงอยู่ตลอดเวลา

Claims

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :------22/03/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 14 หน้า ข้อถือสิทธิ 1. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบปริมาณมากซึ่งประกอบรวม ด้วยขั้นตอนของ การจัดเตริยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซึ่งประกอบรวมด้วย เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสเป็น TNFR-Ig, ซึ่งยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลี้ยงเชลล์ และ อาหารเลี้ยงเชื้อที่ประกอบด้วยกลูตามีน และมีลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อที่ คัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (0 ปริมาณกรดอะมิโนสะสมต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 70 mM, (ii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อแอสพาราจีนสะสมที่น้อยกว่า 2, (iii) อัตราส่วนโมลาร์ ของกลูตามีนสะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสมที่น้อยกว่า 0.2, (iv) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออน อนินทริย์สะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสมระหว่าง 0.4 ถึง 1, (v) ปริมาณรวมสะสมของ กลูตามีน และแอสพาราจีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 16 mM และการรวมกันของพวกมัน การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มด้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนงเป็นคาบเวลาที่หนํ่งที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุจนถึงความหนาแน่นของเซลล์ที่ มีชีวิตในช่วง 20% - 80% ของความหนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุดที่เป็นไปได้หากการเพาะเลี้ยง ดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่หนํ่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนํ่งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 2. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบ\'ปริมาณมากซึ่งประกอบด้วย รวมขั้นตอนของ การจัดเตริยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซึ่งประกอบรวมด้วย เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสเป็น TNFR-Ig, ซึ่งยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลี้ยงเซลล์ และ อาหารเลี้ยงเชื้อที่ประกอบด้วยปริมาณกรดอะมิโนสะสมต่อหน่วยปริมาตรมากกว่า 70 mM และ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวซึ่งประกอบด้วยกลูตามีน และอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวซึ่งมีสอง ลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อที่อัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (0 อัตราส่วนโมลาร์ ของกลูตามีนสะสมต่อแอสพาราจีนสะสมที่น้อยกว่า 2, (ii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อ กรดอะมิโนรวมสะสมที่น้อยกว่า 0.2, (iii) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทริย์สะสมต่อกรด หน้า 2 ของจำนวน 14 หน้า อะมิโนรวมสะสมระหว่าง 0.4 ถึง 1, (iv) ปริมาณรวมสะสมของกลูตามีนและแอสพาราจีนต่อหน่วย ปริมาตรที่มากกว่า 16 mM และการรวมกันของพวกมัน การเก็บรักษาการเพาะเลียงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มต้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนึ๋งเป็นคาบเวลาที่หนํ่งที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุจนถึงความหนาแน่นของเชลล์ที่ มีชีวิตในช่วง 20% - 80% ของความหนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุคที่เป็นไปไต้หากการเพาะเลี้ยง ดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่หนึ๋ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนํ่งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 3. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบปริมาณมากซํ่งประกอบรวม ด้วยขั้นตอนของ การจัดเตรยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซื่งประกอบรวมด้วย เซลล์สัตว์เลี้ยงถูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เช้ารหัสเป็น TNFR-Ig ซํ่งยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลี้ยงเซลล์ และ อาหารเลี้ยงเชื้อที่ประกอบด้วยอัตราส่วนโมลาร์ของกถูตามีนสะสมต่อแอสพาราจีนสะสมที่ น้อยกว่า 2 และ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวชํ่งประกอบด้วยกลูตามีน และอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวชึ๋งมีสอง ลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (0 อาหารเลี้ยงเชื้อซํ่ง ประกอบด้วยปริมาณกรดอะมิโนสะสมต่อหน่วยปริมาตรมากกว่า 70 mM, (ii) อัตราส่วนโมลาร์ของ กลูตามีนสะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสมที่น้อยกว่า 0.2, (iii) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทรย์ สะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสมระหว่าง 0.4 ถึง 1, (iv) ปริมาณรวมสะสมของกลูตามีน และแอสพารา จีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 16 mM และการรวมกันของพวกมัน การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มด้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ ห\'นงเป็นคาบเวลาที่หนงที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุจนถึงความหนาแน่นของเซลล์ที่ มีชีวิตในช่วง 20% - 80% ของความหนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสูคที่เป็นไปได้หากการเพาะเลี้ยง ดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่หนํ่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนํ่งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 4. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบ\'ปริมาณมากซํ่งประกอบรวม ด้วยขั้นตอนของ หน้า 3 ของจำนวน 14 หน้า การจัดเตริยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซํ่งประกอบรวมด้วย เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสเป็น TNFR-Ig, ซึ๋งยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลียงเซลล์ และ อาหารเลี้ยงเชื้อที่ประกอบด้วยอัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสม ที่น้อยกว่า 0.2 และ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวซํ่งประกอบด้วยกลูตามีน และอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวซํ่งมีสอง ลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกได้จาก.กลุ่มที่ประกอบด้วย: (i) อาหารเลี้ยงเชื้อซํ่ง ประกอบด้วยปริมาณกรดอะมิโนสะสมต่อหน่วยปริมาตรมากกว่า 70 mM, (ii) อัตราส่วนโมลาร์ของ กถูตามีนสะสมต่อแอสพาราจีนสะสมที่น้อยกว่า 2, (iii) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทริย์สะสม ต่อกรดอะมิโนรวมสะสมระหว่าง 0.4 ถึง 1, (iv) ปริมาณรวมสะสมของกลูตามีน และ แอสพาราจีน ต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 16 mM และการรวมกันของพวกมัน การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มด้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนื่งเป็นคาบเวลาที่หนงที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุจนถึงความหนาแน่นของเซลล์ที่ มีชีวิตในช่วง 20% - 80% ของความหนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่ลูงสุดที่เป็นไปได้หากการเพาะเลี้ยง ดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่หนํ่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนํ่งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 5. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบปริมาณมากซํ่งประกอบรวม ด้วยขั้นตอนของ การจัดเตริยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซํ่งประกอบรวมด้วย เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสเป็น TNFR-Ig, ซงยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลี้ยงเซลล์ และ อาหารเลี้ยงเชื้อที่ประกอบด้วยอัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทริย์สะสมต่อกรดอะมิโน รวมสะสมระหว่าง 0.4 ถึง 1 และ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวชํ่งประกอบด้วยกลูตามีน และอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวซํ่งมีสอง ลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (0 อาหารเลียงเชือซึ๋ง ประกอบด้วยปริมาณกรดอะมิโนสะสมต่อหน่วยปริมาตรมากกว่า 70 mM, (ii) อัตราส่วนโมลาร์ของ กลูตามีนสะสมต่อแอสพาราจีนสะสมที่น้อยกว่า 2, (iii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อ กรดอะมิโนรวมสะสมที่น้อยกว่า 0.2, (iv) ปริมาณรวมสะสมของกลูตามีนและแอสพาราจีนต่อหน่วย ปริมาตรที่มากกว่า 16 mM และการรวมคันของพวกมัน หน้า 4 ของจำนวน 14 หน้า การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มต้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนี่งเป็นคาบเวลาที่หนี่งที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุจนถึงความหนาแน่นของเซลล์ที่ มีชีวิตในช่วง 20% - 80% ของความหนาแน่นเชลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุดที่เป็นไปไต้หากการเพาะเลี้ยง ดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่หนี่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนงสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 6. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบ\'ปริมาณมากซํ่งประกอบรวม ด้วยขั้นตอนของ การจัดเตรยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซึ่งประกอบรวมด้วย เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสเป็น TNFR-Ig, ซึ่งยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลี้ยงเซลล์ และ อาหารเลี้ยงเชื้อที่ประกอบด้วยปริมาณรวมสะสมของกลูตามีน และแอสพาราจีนต่อหน่วย ปริมาตรที่มากกว่า 16 mM และ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวซึ่งประกอบด้วยกลูตามีน และอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวซึ่งมีสอง ลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกไต้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (0 อาหารเลี้ยงเชื้อซึ่ง ประกอบด้วยปริมาณกรดอะมิโนสะสมต่อหน่วยปริมาตรมากกว่า 70 mM, (ii) อัตราส่วนโมลาร์ของก ลูตามีนสะสมต่อแอสพาราจีนสะสมที่น้อยกว่า 2, (iii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อกรดอะ มิโนรวมสะสมที่น้อยกว่า 0.2, (iv) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทรีย์สะสมต่อกรดอะมิโนรวม สะสมระหว่าง 0.4 ถึง นเละการรวมกันของพวกมัน การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มด้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนี่งเป็นคาบเวลาที่หนี่งที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุจนถึงความหนาแน่นของเชลล์ที่ มีชีวิตในช่วง 20% - 80% ของความหนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุดที่เป็นไปได้หากการเพาะเลี้ยง ดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่หนํ่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนี่งสภาพการเพาะเลี้ยง เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพการเพาะเลี้ยงเชลล์ดังกล่าวในขั้นตอนการ เปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนํ่งสภาพการเพาะเลี้ยงดังกล่าวคัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (i) อุณหภูมิ, (ii) pH, (iii) ออสโมลาร์ริตี้, (iv) ระดับการเหนี่ยวนำทางเคมี และการรวมกันของ พวกมัน หน้า5ของจำนวน14หน้า 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความเข้มข้นกลูตามีนเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมี ค่าน้อยกว่า หรือ เท่ากับ 13 mM 9. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความเข้มข้นกลูตามีนเริ่มต้นของอาหารเลียงเชื้อดังกล่าวมี ค่าน้อยกว่า หรือ เท่ากับ 10 mM 51 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความเข้มข้นกลูตามีนเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว มีค่าน้อยกว่า หรือ เท่ากับ 7 mM 1 1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความเข้มข้นกลูตามีนเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว มีค่าน้อยกว่า หรือ เท่ากับ 4 mM 1 2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมต่อหน่วยปริมาตรของกลูตามีนของ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวน้อยกว่า หรือ เท่ากับ 13 mM 1 3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมต่อหน่วยปริมาตรของกลูตามีนของ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวน้อยกว่า หรือ เท่ากับ 10 mM 1 4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมต่อหน่วยปริมาตรของกลูตามีนของ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวน้อยกว่า หรือ เท่ากับ 7 mM 1 5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมต่อหน่วยปริมาตรของกลูตามีนของ อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวน้อยกว่า หรือ เท่ากับ 4 mM 1 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่กลูตามีนถูกจัดให้เพียงแค"ในอาหารเลี้ยงเชื้อเริ่มต้นที่ จุดเริ่มต้นของการเพาะเลี้ยงเซลล์ 1 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความเข้มข้นของเหล็กที่ละลายไต้ในอาหารเลี้ยงเชื้อมีค่า มากกว่า 5 เบฬ 1 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความหนาแน่นของเซลล์ที่มีชีวิตของการเพาะเลี้ยง ดังกล่าวถูกวัดบนพื้นฐานของคาบเวลา 1 9. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความมีชีวิตของการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกวัดเป็นระยะ 2 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ระดับแลกเตทดังกล่าวของการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกวัด บนพื้นฐานของคาบเวลา 2 1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ระดับแอมโมเนียมดังกล่าวของการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูก วัดบนพื้นฐานของคาบเวลา 2 2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ไตเตอร์ดังกล่าวของการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกวัดบน พื้นฐานของคาบเวลา 2 3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ออสโมลาร์ริตี้ของการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกวัดบน พื้นฐานของคาบเวลา 2 4. วิธีการของข้อใดข้อหนํ่งของข้อถือสิทธิที่ 18-23 โดยที่การวัดดังกล่าวถูกทำทุกวัน หน้า 6 ของจำนวน 14 หน้า 2 5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ดังกล่าวเป็นอย่างน้อย 2x1 อ2 เชลล์/มิลลิลิตร 2 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของเซลล์สัตว์เลียงลูกด้วยนม ดังกล่าวเป็นอย่างน้อย 2X103 เซลล์/มิลลิลิตร 52 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ดังกล่าวเป็นอย่างน้อย 2x104 เซลล์/มิลลิลิตร 2 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ดังกล่าวเป็นอย่างน้อย 2x105 เซลล์/มิลลิลิตร 2 9. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ดังกล่าวเป็นอย่างน้อย 2x106 เซลล์/มิลลิลิตร 3 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ดังกล่าวเป็นอย่างน้อย 5x106 เซลล์/มิลลิลิตร 3 1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ดังกล่าวเป็นอย่างน้อย 1 Oxl 06 เชลล์/มิลลิลิตร 3 2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ขั้นตอนการจัดเตรียมประกอบรวมด้วยการจัดเตรียมอย่าง น้อย 1000 ลิตรของการเพาะเลี้ยง 3 3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ขั้นตอนการจัดเตรียมประกอบรวมด้วยการจัดเตรียมอย่าง น้อย 2500 ลิตรของการเพาะเลี้ยง 3 4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ขั้นตอนการจัดเตรียมประกอบรวมด้วยการจัดเตรียมอย่าง น้อย 5000 ลิตรของการเพาะเลี้ยง 3 5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ขั้นตอนการจัดเตรียมประกอบรวมด้วยการจัดเตรียมอย่าง น้อย 8000 ลิตรของการเพาะเลี้ยง 3 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ขั้นตอนการจัดเตรียมประกอบรวมด้วยการจัดเตรียมอย่าง น้อย 10000 ลิตรของการเพาะเลี้ยง 3 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ขั้นตอนการจัดเตรียมประกอบรวมด้วยการจัดเตรียมอย่าง น้อย 12000 ลิตรของการเพาะเลี้ยง 3 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่หนํ่งดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ หนึ่งซํ่งโดยอยู่ที่ 30 ถึง 42 องศาเซลเซียส 3 9. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่หนึ่งดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ หนึ่งซึ๋งโดยอยู่ที่ 32 ถึง 40 องศาเซลเซียส 4 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่หนึ่งดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ หนึ่งซื่งโดยอยู่ที่ 34 ถึง 38 องศาเซลเซียส หน้า7ของจำนวน14หน้า 4 1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่หนงดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ หนี่งซํ่งโดยอยู่ที่ 36 ถึง 37 องศาเซลเซียส 4 2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่หนี่งดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ หนํ่งซื่งโดยอยู่ที่ 37 องศาเซลเซียส 4 3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่สองดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ สองซํ่งโดยอยู่ที่ 25 ถึง 41 องศาเซลเซียส 4 4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่สองดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ สองซํ่งโดยอยู่ที่ 27 ถึง 38 องศาเซลเซียส 4 5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่สองดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ สองซํ่งโดยอยู่ที่ 29 ถึง 35 องศาเซลเซียส 4 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่สองดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ สองซํ่งโดยอยู่ที่ 29 ถึง 33 องศาเซลเซียส 4 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่สองดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ สองซงโดยอยู่ที่ 30 ถึง 32 องศาเซลเซียส 4 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่สภาพเซตที่สองดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิที่ สองซํ่งโดยอยู่ที่ 31 องศาเซลเซียส 4 9. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 ซํ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยขั้นตอนการเปลี่ยนแปลงที่สองต่อ จากการเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนี่งสภาพการเพาะเลี้ยงดังกล่าวครั้งแรกซํ่งประกอบรวมด้วยการ เปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนี่งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพเซตที่สามถูกประยุกต์ใช้กับการ เพาะเลี้ยง 5 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 49 โดยที่ขั้นตอนการเปลี่ยนแปลงที่สองประกอบรวมด้วยการ เปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนี่งสภาพการเพาะเลี้ยงที่คัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (0 อุณหภูมิ, (ii) pH, (iii) ออสโมลาร์ริตี้, (iv) ระดับการเหนี่ยวนำทางเคมี และการรวมกันของพวกมัน 5 1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 49 โดยที่สภาพเซตที่สามดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิ ที่สามซํ่งโดยอยู่ที่ 25 ถึง 40 องศาเซลเซียส 5 2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 49 โดยที่สภาพเซตที่สามดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิ ที่สามซํ่งโดยอยู่ที่ 27 ถึง 37 องศาเซลเซียส 5 3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 49 โดยที่สภาพเซตที่สามดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิ ที่สามซํ่งโดยอยู่ที่ 29 ถึง 34 องศาเซลเซียส 5 4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 49 โดยที่สภาพเซตที่สามดังกล่าวประกอบรวมด้วยช่วงอุณหภูมิ ที่สามซึ๋งโดยอยู่ที่ 30 ถึง 32 องศาเซลเซียส 5 5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่คาบเวลาที่หนี่งอยู่ที่ระหว่าง 0-8 วัน 5 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1โดยที่คาบเวลาหนี่งอยู่ที่ระหว่าง 1-7วัน หน้า8ของจำนวน14หน้า 5 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่คาบเวลาหนํ่งอยู่ที่ระหว่าง 2-6 วัน 5 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่คาบเวลาหนํ่งอยู่ที่ระหว่าง 3-5วัน 5 9. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่คาบเวลาหนํ่งอยู่ที่ 4 วัน 6 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่คาบเวลาหนํ่งอยู่ที่ 5 วัน 6 1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่คาบเวลาหนงอยู่ที่ 6 วัน 6 2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่เวลารวมของคาบเวลาที่หนึ๋งดังกล่าว และคาบเวลาที่สอง ดังกล่าวเป็นอย่างน้อย 5 วัน 6 3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ในขั้นตอนการเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็น คาบเวลาที่สอง, ระดับแลกเตทลดลงต่อจากระดับแลกเตทในการเพาะเลี้ยงที่ถึงระดับสูงสุด 6 4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ในขั้นตอนการเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็น คาบเวลาที่สอง, ระดับแอมโมเนียมลดลงต่อจากระดับแอมโมเนียมในการเพาะเลี้ยงที่ถึงระดับสูงสุด 6 5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมดังกล่าวของ TNFR-Ig ที่ผลิตขึ้นดังกล่าวเป็น อย่างน้อย 1.5 เท่าสูงกว่าปริมาณ TNFR-Ig ที่ผลิตขึ้นภายใต้สภาพที่เหมือนกัน หรือในอาหารเลี้ยงเชื้อ ที่เหมือนกันที่ปราศจากลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว 6 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมดังกล่าวของ TNFR-Ig ที่ผลิตขึ้นดังกล่าวเป็น อย่างน้อย 2 เท่าสูงกว่าปริมาณ TNFR-Ig ที่ผลิตขึ้นภายใต้สภาพที่เหมือนกัน หรือในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ เหมือนกันที่ปราศจากลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว 6 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่การเพาะเลี้ยงเซลล์ดังกล่าวถูกจัดให้เพิ่มเติมด้วย ส่วนประกอบเสริม 6 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 67 โดยที่ส่วนประกอบเสริมดังกล่าวคัดเลือกไต้จากกลุ่มที่ ประกอบด้วยฮอร์โมน และ/หรือ โกรตแฟกเตอร์, ไอออนเฉพาะ (เช่น โซเดียม, คลอไรด์, แคลเซียม, แมกนีเซียม และฟอสเฟต), บัฟเฟอร์, วิตามิน, นิวคลิโอไซด์ หรือ นิวคลิโอไทด์, สารอาหารรอง (สารประกอบอนินทรีย์โดยปกติมีอยู่ที่ความเข้มข้นสุดท้ายตามาก), กรดอะมิโน, ลิปีด หรือกลูโคส 6 9. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบ\'ปริมาณมากซํ่งประกอบรวม ด้วยขั้นตอนของ การจัดเตรยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซึ๋งประกอบรวมด้วย เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสเป็น TNFR-Ig, ซํ่งยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลี้ยงเชลล์ และ อาหารเลี้ยงเชื้อที่กำหนดซํ่งประกอบด้วยกลูตามีน และมีอย่างน้อยสองลักษณะเฉพาะพิเศษ ของอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: i) ความเข้มข้นกรดอะมิโนเริ่มด้นที่มากกว่า 70 mM, ii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนต่อแอสพาราจีนที่น้อยกว่า 2, iii) อัตราส่วนโมลาร์ของ กลูตามีนต่อกรดอะมิโนรวมที่น้อยกว่า 0.2, iv) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทรีย์ต่อกรดอะมิโน รวมระหว่าง 0.4 ถึง 1 และ v) ความเข้มข้นรวมของกลูตามีนและแอสพาราจีนที่มากกว่า 16 mM หน้า 9 ของจำนวน 14 หน้า การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มต้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนํ่งเป็นคาบเวลาที่หนํ่งที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุในช่วง 20% - 80% ของความ หนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุดที่เป็นไปไต้หากการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการ เพาะเลี้ยงเซตที่หนํ่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนงสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 7 1.ความเข้มข้นกรดอะมิโนเริ่มต้นที่มากกว่า 70 mM, ii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนต่อแอสพาราจีนที่น้อยกว่า 2, iii) อัตราส่วนโมลาร์ของ กลูตามีนต่อกรดอะมิโนรวมที่น้อยกว่า 0.2, iv) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทริย์ต่อกรดอะมิโน รวมระหว่าง0.4ถึง 1 และ v) ความเข้มข้นรวมของกลูตามีนและแอสพาราจีนที่มากกว่า 16 mM การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มต้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนํ่งเป็นคาบเวลาที่หนํ่งที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุในช่วง 20% - 80% ของความ หนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุดที่เป็นไปไต้หากการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการ เพาะเลี้ยงเซตที่หนง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนึ๋งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเชลล์ 7 1. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบปริมาณมากซํ่งประกอบรวม ด้วยขั้นตอนของ การจัดเตรยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซํ่งประกอบรวมด้วย เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสเป็น TNFR-Ig ซํ่งยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลี้ยงเซลล์ และ อาหารเลี้ยงเชื้อที่กำหนดซํ่งประกอบด้วยกถูตามีน และมีอย่างน้อยสี่ลักษณะเฉพาะพิเศษของ อาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกไต้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: i) ความเข้มข้นกรดอะมิโนเริ่มต้นที่มากกว่า 70 หน้า 10 ของจำนวน 14 หน้า mM, ii) อัตราส่วนโมลาร์ฃองกลูตามีนต่อแอสพาราจีนที่น้อยกว่า 2, iii) อัตราส่วนโมลาร์ของ กลูตามีนต่อกรดอะมิโนรวมที่น้อยกว่า 0.2, iv) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทริยํต\'อกรดอะมิโน รวมระหว่าง 0.4 ถึง 1 และ v) ความเข้มข้นรวมของกลูตามีนและแอสพาราจีนที่มากกว่า 16 mM การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มต้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนํ่งเปีนคาบเวลาที่หนํ่งที่พอเพียงต่อการให้เชลล์ดังกล่าวขยายพันธุในช่วง 20% - 80% ของความ หนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุดที่เปีนไปไต้หากการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการ เพาะเลี้ยงเซตที่หนํ่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนํ่งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเปีนคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเปีน คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 7 1.ความเข้มข้น กรดอะมิโนเริ่มต้นที่มากกว่า 70 mM, ii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนต่อแอสพาราจีนที่น้อยกว่า 2, iii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนต่อกรดอะมิโนรวมที่น้อยกว่า 0.2, iv) อัตราส่วนโมลาร์ของ ไอออนอนินทรย์ต่อกรดอะมิโนรวมระหว่าง 0.4 ถึง 1 และ v) ความเข้มข้นรวมของกลูตามีนและ แอสพาราจีนที่มากกว่า 16 mM การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มต้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนํ่งเป็นคาบเวลาที่หนํ่งที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุในช่วง 20% - 80% ของความ หนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุดที่เป็นไปไต้หากการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพการ เพาะเลี้ยงเซตที่หนํ่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนํ่งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ 7 3. วิธีการผลิต TNFR-Ig ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในการผลิตแบบปริมาณมากซึ๋งประกอบรวม ด้วยขั้นตอนของ การจัดเตรยมการเพาะเลี้ยงเซลล์ซํ่งประกอบรวมด้วย หน้า 11ของจำนวน 14หน้า เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสเป็น TNFR-Ig, ซื่งยีนถูกแสดงออก ภายใต้สภาพของการเพาะเลี้ยงเซลล์ และ อาหารเลียงเชื้อซํ่งประกอบด้วยกลูตามีน และมีปริมาณรวมสะสมของกลูตามีน และ แอสพาราจีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 16 mM การเก็บรักษาการเพาะเลียงดังกล่าวในเฟสการเติบโตเริ่มด้นภายใต้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ หนึ่งเป็นคาบเวลาที่หนึ่งที่พอเพียงต่อการให้เซลล์ดังกล่าวขยายพันธุในช่วง 20% - 80% ของความ หนาแน่นเซลล์ที่มีชีวิตอยู่สูงสุดที่เป็นไปได้หากการเพาะเลี้ยงดังกล่าวถูกเก็บรักษาไข้กายใต้สภาพการ เพาะเลี้ยงเซตที่หนึ่ง การเปลี่ยนแปลงอย่างน้อยหนึ่งสภาพการเพาะเลี้ยง, เพื่อให้สภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองถูก ประยุกต์ใช้ การเก็บรักษาการเพาะเลี้ยงดังกล่าวเป็นคาบเวลาที่สองภายใต้สภาพเซตที่สอง และเป็น คาบเวลาที่สองเพื่อให้ TNFR-Ig เกิดการสะสมในการเพาะเลี้ยงเชลล์ 7 4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวประกอบรวมด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ ชื่งประกอบด้วยกลูตามีน และมีลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกได้จากกลุ่มที่ ประกอบด้วย: (0 ความเข้มข้นกรดอะมิโนเริ่มด้นที่มากกว่า 70 mM, (ii) อัตราส่วนโมลาร์\'ของกลูตามีน เริ่มด้นต่อแอสพาราจีนเริ่มด้นที่น้อยกว่า 2, (iii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนเริ่มด้นต่อกรดอะมิโน รวมเริ่มด้นที่น้อยกว่า 0.2, (iv) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทรย์เริ่มด้นต่อกรดอะมิโนรวม เริ่มต้นระหว่าง 0.4 ถึง 1, (v) ความเข้มข้นรวมของกลูตามีนเริ่มด้น และแอสพาราจีนเริ่มด้นที่มากกว่า 16 mM และการรวมกันของพวกมัน 7 5. วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ 1-6 หรือ 69-74 โดยที่ ระดับแลกเตทตากว่าระดับที่สังเกตได้ภายใต้สภาพที่เหมือนกันในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ เหมือนกันที่ปราศจากลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว ระดับแอมโมเนียตรกว่าระดับที่สังเกตได้ภายใต้สภาพที่เหมือนกันในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ เหมือนกันที่ปราศจากลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว และ ปริมาณรวมของ TNFR-Ig ที่ผลิตขึ้นอย่างน้อยสูงเท่ากับปริมาณที่สังเกตได้ภายใต้สภาพที่ เหมือนกันในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมือนกันที่ปราศจากลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว 7 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่การเพาะเลี้ยงดังกล่าวไม่ได้เสริมด้วยส่วนประกอบ เพิ่มเติมตลอดช่วงการผลิต TNFR-Ig ดังกล่าว 7 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่การเพาะเลี้ยงดังกล่าวไม่ได้เสริมด้วยกลูตามีนเพิ่มเติม ตลอดช่วงการผลิต TNFR-Ig ดังกล่าว 7 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความเข้มข้นของกลูตามีนในการเพาะเลี้ยงดังกล่าวลด น้อยลงไปอย่างเด่นชัด ก่อนขั้นตอนการเปลี่ยนแปลงไปเป็นสภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่สองดังกล่าว หน้า 12 ของจำนวน 14 หน้า 7 9. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ความเข้มข้นของกลูตามีนในการเพาะเลี้ยงดังกล่าวลด น้อยลงไปอย่างเด่นชัด ที่เวลาเดียวกันกับขั้นตอนการเปลี่ยนแปลงไปเป็นสภาพการเพาะเลี้ยงเซตที่ สองกังกล่าว 8 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ไกลซิลกสูตามีนถูกนำมาแทนที่กลูตามีนในการเพาะเลี้ยง กังกล่าว 8 1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่อาหารเลี้ยงเชื้อกังกล่าวประกอบด้วย (0 ปริมาณกรด อะมิโนสะสมต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 70 mM, (ii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อ แอสพาราจีนสะสมที่น้อยกว่า 2, (พ) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสมที่ น้อยกว่า 0.2, (iv) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทริย์สะสมต่อกรดอะมิโนรวมสะสมระหว่าง 0.4 ถึง l,(v) ปริมาณรวมสะสมของกสูตามีนและแอสพาราจีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 16 mM 8 2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่อาหารเลี้ยงเชื้อกังกล่าวที่ประกอบด้วย (i) ปริมาณกรด อะมิโนสะสมต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 70 mM, (ii) อัตราส่วนโมลาร์ของกลูตามีนสะสมต่อกรด อะมิโนรวมสะสมที่น้อยกว่า 0.2, (iii) อัตราส่วนโมลาร์ของไอออนอนินทรย์สะสมต่อกรดอะมิโน รวมสะสมระหว่าง 0.4 ถึง นเละ (iv) ปริมาณรวมสะสมของกลูตามีนและแอสพาราจีนต่อหน่วย ปริมาตรที่มากกว่า 16 mM 8 3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของฮีสติดีน, ไอโซลูซีน, ลูซีน, เมทไธโอโอนีน, ที!นิลอะลานีน, ทริปโตฟาน, ไธโรซีน และโพรลีนต่อหน่วยปริมาตรในอาหารเลี้ยง เชื้อกังกล่าวมีค่ามากกว่า 25 mM 8 4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของฮีสติดีน, ไอโซลูซีน, รุ)ซีน, เมทไธโอโอนีน, ที!นิลอะลานีน, ทริปโตฟาน, ไธโรซีน และโพรลีนต่อหน่วยปริมาตรในอาหารเลี้ยง เชื้อกังกล่าวมีค่ามากกว่า 35 mM 8 5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมเริ่มด้นของฮีสติดีน, ไอโซลูซีน, ลูซีน, เมทไธโอโอนีน, ที!นิลอะลานีน, ทริปโตฟาน, ไธโรซีน และโพรลีนต่อหน่วยปริมาตรในอาหารเลี้ยง เชื้อกังกล่าวมีค่ามากกว่า 25 mM 8 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมเริ่มด้นของฮีสติดีน, ไอโซลูซีน, ลูซีน, เมทไธโอโอนีน, ที!นิลอะลานีน, ทริปโตฟาน, ไธโรซีน และโพรลีนต่อหน่วยปริมาตรในอาหารเลี้ยง เชื้อกังกล่าวมีค่ามากกว่า 35 mM 8 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่อาหารเลี้ยงเชื้อกังกล่าวมีลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหาร เลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (0ปริมาณรวมสะสมของฮีสติดีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 1.7 mM (ii) ปริมาณรวมสะสมของไอโซลูชีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 3.5 mM (iii) ปริมาณรวมสะสมของถูซีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 5.5 mM (iv) ปริมาณรวมสะสมของไมไธโอนีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.0 mM หน้า 13 ของจำนวน 14 หน้า (v) ปริมาณรวมสะสมของฟนิลอะลานีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.5 rnM (vi) ปริมาณรวมสะสมของโพรลีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.5 mM (vii) ปริมาณรวมสะสมของทริปโตฟานต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 1.0 mM (viii) ปริมาณรวมสะสมของไธโรซีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.0 mM และ (ix) ปริมาณรวมสะสมของโพรลีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.5 mM 8 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีลักษณะเฉพาะพิเศษของอาหาร เลี้ยงเชื้อที่ดัดเลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย: (0 ปริมาณเริ่มด้นของอิสติดีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 1.7 mM (ii) ปริมาณเริ่มด้นของไอโซลูซีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 3.5 mM (iii) ปริมาณเริ่มด้นของลูซีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 5.5 mM (iv) ปริมาณเริ่มด้นของเมไธโอนีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.0 mM (v) ปริมาณเริ่มด้นของพินิลอะลานีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.5 mM (vi) ปริมาณเริ่มด้นของโพรลีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.5 mM (vii) ปริมาณเริ่มด้นของทริปโตฟานต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 1.0 mM (viii) ปริมาณเริ่มด้นของไธโรซีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.0 mM (ix) ปริมาณเริ่มด้นของโพรลีนต่อหน่วยปริมาตรที่มากกว่า 2.5 mM 8 9. วิธีการของข้อลือสิทธิที่ 1 โดยที่\'ปริมาณรวมสะสมของซรนต่อหน่วยปริมาตรในอาหาร เลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 7 mM 9 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของซรนต่อหน่วยปริมาตรในอาหาร เลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 10 mM 9 1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่\'ปริมาณรวมสะสมของแอสพาราจีนต่อหน่วยปริมาตรใน อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 8 mM 9 2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของแอสพาราจีนต่อหน่วยปริมาตรใน อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 12 mM 9 3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมเริ่มด้นของแอสพาราจีนต่อหน่วยปริมาตรใน อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 8 mM 9 4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่\'ปริมาณรวมเริ่มด้นของแอสพาราจีนต่อหน่วยปริมาตรใน อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 12 mM 9 5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของฟอสฟอรัสต่อหน่วยปริมาตรใน อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 2.5 mM 9 6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของฟอสฟอรัสต่อหน่วยปริมาตรใน อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 5 mM หน้า 14 ของจำนวน 14 หน้า 9 7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของกลตาเมตต่อหน่วยปริมาตรใน / J " อาหารเลียงเชอดังกล่าวมีค่านอยกว่า 1 mM 9 8. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่\'ปริมาณรวมสะสมของแคลเซียมแพนโธทีเนตต่อหน่วย ปริมาตรในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 8 mg/L 59 9. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของแคลเซียมแพนโธทีเนตต่อหน่วย ปริมาตรในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 20 mg/L 10 0. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่\'ปริมาณรวมสะสมของนิโคตินาไมด์ต่อหน่วยปริมาตร ในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 7 mg/L 10

1. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของนิโคตินาไมด์ต่อหน่วยปริมาตร ในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 25 mg/L 10

2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่\'ปริมาณรวมสะสมของไพริดอกซีน และไพริดอกซอล ต่อหน่วยปริมาตรในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 5 mg/L 10

3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่\'ปริมาณรวมสะสมของไพริดอกซีน และไพริดอกซอล ต่อหน่วยปริมาตรในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 35 mg/L 10

4. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของไรโบเฟลวินต่อหน่วยปริมาตร ในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 1.0 mg/L 10

5. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่\'ปริมาณรวมสะสมของไรโบเฟลวินต่อหน่วย\'ปริมาตร ในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 2.0 mg/L 10

6. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของไธอะมีนไฮโดรคลอไรด์ต่อ หน่วยปริมาตรในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 7 mg/L 10

7. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ปริมาณรวมสะสมของไธอะมีนไฮโดรคลอไรด์ต่อ หน่วยปริมาตรในอาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าวมีค่ามากกว่า 35 mg/L ------------