TH10745C3 - กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน - Google Patents

Abstract

DC60 (14/09/58) กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกโดยอาศัยเทคนิคการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยภายใต้ สภาวะควบคุมที่เหมาะสมที่มีขั้นตอนประกอบด้วย การเตรียมเนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อ การชักนำให้ เนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อเกิดยอดและพัฒนาเป็นต้น การชักนำให้ชิ้นส่วนของบุกปลอดเชื่้อเกิดแคลลัส การ สร้างไฟรเอเบิลแคลลัส และการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกไฟรเอเบิลแคลลัส เพื่อให้ได้เซลล์บุกที่ มีความคงตัวในการเก็บรักษาและการปลูกถ่าย สำหรับนำไปใช้เป็นเซลล์เริ่มต้นที่เหมาะสมในการผลิต กลูโคแมนแนนในถังปฏิกรณ์ชีวภาพ แก้ไข บทสรุป 06/03/2558 กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกโดยอาศัยเทคนิคการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยภายใต้ สภาวะควบคุมที่เหมาะสมที่มีขั้นตอนประกอบด้วย การเตรียมเนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อ การชักนำให้ เนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อเกิดยอดและพัฒนาเป็นต้น การชักนำให้ชิ้นส่วนของบุกลปลอดเชื้อเกิดแคลลัส การ สร้างไฟรเอเบิลแคลลัส และการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกไฟรเอเบิลแคลลัส เพื่อให้ได้เซลล์บุกที่ มีความคงตัวในการเก็บรักษาและการปลูกถ่าย สำหรับนำไปใช้เป็นเซลล์เริ่มต้นที่เหมาะสมในการผลิต กลูโคนแมนแนนในถังปฏิกรณ์ชีวภาพ ------------------------------------------------ แก้ไข 14/09/2558 กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกโดยอาศัยเทคนิคการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยภายใต้ สภาวะควบคุมที่เหมาะสมที่มีขั้นตอนประกอบด้วย การเตรียมเนื้อเยื่อบุกปลอดภัย การชักนำให้ เนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อเกิดยอดและพัฒนาเป็นต้น การชักนำให้ชิ้นส่วนของบุกปลอดเชื่อเกิดแคลลัส การ สร้างไฟรเอเบิลแคลลัส และการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกไฟรเอเบิลแคลลัส เพื่อให้ได้เซลล์บุกที่ มีความคงตัวในการเก็บรักษาและการปลูกถ่าย สำหรับนำไปใช้เผ็นเซลล์เริ่มต้นที่เหมาะสมในการผลิต กลูโคนแมนแนนในถังปฏิกรณ์ชีวภาพ ------------------------------------------------------------------------------ กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกโดยอาศัยเทคนิคการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยภายใต้ สภาวะควบคุมที่เหมาะสมที่มีขั้นตอนประกอบด้วย การเตรียมเนื้อเยื่อบุกปลอดภัย การชักนำให้ เนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อเกิดยอดและพัฒนาเป็นต้น การชักนำให้ชิ้นส่วนของบุกลปลอดเชื่้อเกิดแคลลัส การ สร้างไฟรเอเบิลแคลลัส และการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกไฟรเอเบิลแคลลัส เพื่อให้ได้เซลล์บุกที่ มีความคงตัวในการเก็บรักษาและการปลูกถ่าย สำหรับนำไปใช้เผ็นเซลล์เริ่มต้นที่เหมาะสมในการผลิต กลูโคนแมนแนนในถังปฏิกรณ์ชีวภาพ

Claims (5)

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :แก้ไข 6/3/2558 1. กรรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน มีขั้นตอนดังนี้ ก. การเตรียมเนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อจากหน่อและส่วนหัวบนใบจำนวน 20 - 50 กรัมต่อ สารละลายสำหรับฟอก 100 มิลลิเมตร โดยการแช่ในสารละลายแอลกอฮอล์ที่มีความเข็มข้น 70 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาตร/ปริมาตร) และฟอกฆ่าเชื้อด้วยสารละลายโซเดียมไฮเพอร์คลอไรต์ (NaOCl) ที่มี ความเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาตร/ปริมาตร) เป็นเวลา 20 และ25นาที ตามลำดับ จากนั้น เพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน และอุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 7 วัน ดังตัวอย่างที่ 1 ข. การชักนำให้เนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อเกิดยอดและเพิ่มยอดทวีคูณของชิ้นส่วนหัวบนใบและ หน่อของบุก โดยการนำเนื้อเยื่อบุกที่ผ่านการฟอกฆ่าเชื้อแล้ว จำนวน 2 - 10 กรัม มาเพาะเลี้ยงบน อาหารแข็งสูตร MS มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 6-เบนซิลอะดีนีน (6- Benzyladenine; BA) ความเข้มข้น 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน และอุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30-45 วัน นำหน่อสมบูรณ์ปลอดเชื้อของ บุกที่ได้ ตัดแบ่งจำนวน 2 - 10 กรัม (การตัดแบ่งสามารถบอกเป็นปริมาณได้หรือไม่คะ ว่ามีปริมาตร เท่าไหร่) เพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการ เจริญเติบโต BA ความเข้มข้น 0.5 - 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร บ่มที่อุณหภูมิ 25?2 องศาเซลเซียส ภายใต้ สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน เป็นเวลา 60 วัน เพื่อเพิ่มยอดทวีคูณ ดังตัวอย่างที่ 2 รูปที่ 2ค ค. การชักนำให้ชิ้นส่วนต่างๆ ของต้นบุกปลอดเชื้อเกิดแคลลัสและการเพิ่มจำนวนแคลลัสจาก ชิ้นส่วนของใบ ลำต้น และโคนต้น โดยเพาะเลี้ยงชิ้นส่วนต่างๆ บนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มี ความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด (2,4- Dichlorophenoxy acetic acid; 2,4-D) โดยการบ่นภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน หรือ สภาวะที่ไม่มีแสง อุณหภูมิ 25?2 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน และนำไปใช้ในการชักนำให้เกิด ไฟรเอเบิลแคลลัส ดังตัวอย่างที่ 3 ง. การเพิ่มปริมาณแคลลัสจากแคลลัสที่เตรียมได้จากชิ้นส่วนของใบ ขำต้น และโคนต้น โดยตัด แบ่งชิ้นส่วนดังกล่าวมาเพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสาร ควบคุมการเจริญเติบโต2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีอะซีติก เอซิด โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน อุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน ดังตัวอย่างที่ 4 จ. การชักนำให้แคลลัสกลายเป็นไฟรเอเบิลแคลลัสโดยแบ่งแคลลัสที่เตรียมได้จากช้นส่วน และสูตรอาหารที่เหมาะสมข้างต้น ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 10 มิลลิเมตร เพาะเลี้ยงต่อบน อาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีอะซีติก เอซิด โดย การบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน อุณหภูมิ 25 ? 2 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน ดัง ตัวอย่างที่ 5 นอกจากนี้ ยังอาจมีการชักนำให้เกิดแคลลัสจากชิ้นส่วนของใบ ลำต้น และโคนต้นของบุกที่ปลอดเชื้อ โดยเพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการ เจริญเติบโต แนฟทาลีนแอซีติก แอซิด (Napthalene Acetic Acid; NAA) โดยการบ่มภายใต้สภาวะ ที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน เป็นเวลา 30 วัน เพื่อชักนำให้เกิดแคลลัสและการเพิ่มจำนวนแคลลัสที่จะใช้ ในการชักนำให้เกิดไฟรเอเบิลแคลลัส ดังตัวอย่างที่ 6 ฉ. ทำการเพิ่มปริมาณไฟรเอเบิลแคลลัสโดยตัดแบ่งไฟรเอเบิลแคลลัสจำนวน 1 - 2 กรัม ที่ เตรียมได้จากข้อ ง. มาเพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งสูตร MS ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต2,4-ไดคลอ โรฟีนอกซีอะซีติก เอซิด โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง ที่อุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียส เป็น เวลา 60 วัน ดังตัวอย่างที่ 7 ช. การเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยของบุกจากไฟรเอเบิลแคลลัสในฟลาสก์ขนาด 250 มิลลิลิตร โดยเพาะเลี้ยงในอาหารเหลวพื้นฐานสูตร MS ที่มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการ เจริญเติบโต 2,4-D และน้ำตาลซูโครส ปริมาตรทำงาน 50 มิลลิลิตร โดยการบ่มบนเครื่องเขย่าที่มี ความเร็วรอบ 120 รอบต่อนาที อุณหภูมิ 25 ? 2 องศาเซลเซียส เปลี่ยนอาหารทุก 7 วัน เป็นเวลา 60 วัน ดังตัวอย่างที่ 8 2. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง สภาวะที่เหมาะสม คือ สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน อุณหภูมิ 25?2 องศาเซลเซียส 3. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-2 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการชักนำให้ชิ้นส่วนต่างๆ ของต้นบุกปลอดเชื้อเกิดแคลลัสนั้น สารควบคุมการเจริญเติบโตที่ใช้เลือกได้จาก 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด และ/หรือ แนฟทา ลีน อะซีติก เอซิด (Napthalene Acetic Acid; NAA) อย่างใดอย่าง 4. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกนั้น อาหารเหลวสูตร MS ที่ใช้ อาจมีสาร 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด ในปริมาณ 0.5 และ/ หรือ 0.75 มิลลิกรัมต่อลิตร 5. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกนั้น สามารถเพาะเลี้ยงในสภาวะที่มี หรือไม่มีแสงก็ได้ -------------------------------------------------------- แก้ไข 14/09/2558 1. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน มีขั้นตอนดังนี้ ก. การเตรียมเนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อจากหน่อและส่วนหัวบนใบจำนวน 20-50 กรัมต่อ สารละลายสำหรับฟอก 100 มิลลิลิตร โดยการแช่ในสารสะลายแอลกฮอล์ที่มีความเข้มข้น 70 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาตร/ปริมาตร) และฟอกฆ่าเชื่อด้วยสารละลายโซเดียมไฮเพอร์คลอไรต์ (NaOCL)ที่มี ความเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาตร/ปริมาตร) เป็นเวลา 20 และ 25นาที ตามลำดับ จากนั้น เพาะเลี้ยงยนอาหารแข็งขั้นพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน และอุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 7 วัน ข. การชักนำให้เนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อเกิดยอดและเพิ่มยอดทวีคูณของชิ้นส่วนหัวบนใบและ หน่อของบุก โดยการนำเยื่อบุกที่ผ่านการฟอกฆ่าเชื้อแลเว จำนวน 2 - 10 กรัม มาเพาะเลี้ยงบน อาหารแข็งสูตร MS มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 6-เบนซิลอะดีนีน (6- Benzyladenine; BA) ความเข้มข้น 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร โดนการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน และอุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียล เป็นเวลา 30-45 วัน นำหน่อสมบูรณ์ปลอดเชื้อของ บุกที่ได้ ตัดแบ่งจำนวน 2-10 กรัม เพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต BA บ่มที่อุณหภูมิ 25?2 องศาเซลเซียส ภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน เป็นเวลา 60 วัน เพื่อเพิ่มยอดทวีคูณ ค. การชักนำให้ชิ้นส่วนต่างๆ ของต้นบุกปลอดเชื้อเกิดแคลลัสและการเพิ่มจำนวนแคลลัสจาก ชิ้นส่วนของใบ ลำต้น และโคนต้น โดยเฉพาะเลี้ยงชิ้นส่วนต่างๆ บนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มี ความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด (2,4- Dichlorophenoxy acetic acid; 2,4-D) โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน หรือ สภาวะที่ไม่มีแสง อุณหภูมิ 25+2 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน และนำไปใช้ในการชักนำให้เกิด ไฟนเอเบิลแคลลัส ดังตัวอย่างที่ 3 ง. การเพิ่มปริมาณแคลลัสจากแคลลัสที่เตรียได้จากชิ้นส่วนของใบ ฃำต้น และโคนต้น โดย ตัดแบ่งชิ้นส่วนดังกล่าวมาเพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มี สารควบคุมการเจริญเติบโต2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีอะซีติก เอซิด โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน อุณหภูมิ 25-27องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน จ. การชักนำให้แคลลัสกลายเป็นไฟรเอเบิลแคลลัสโดยแบ่งแคลลัสที่เตรียมได้จากชิ้นส่วน และสูตรอาหารแข็งที่เหมาะสมข้างต้น ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 10 มิลลิเมตร เพาะเลี้ยงต่อบนอาหาร แข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีอะซิก เอซิด โดยการบ่ม ภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน อุณหภูมิ 25?2 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน นอกจากนี้ ยังอาจมีการชักนำให้เกิดแคลลัสจากชิ้นส่วนของใบ ลำต้น และโคนต้นของบุกที่ปลอดเชื้อ โดย เพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการ เจริญเติบโต แนฟทาลีนแอซีติก (Napthalene Acetic Acid; NAA) โดยการบ่มภายใต้สภาวะ ที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน เป็นเวลา 30 วัน เพื่อชักนำให้เกิดแคลลัสและการเพิ่มจำนวนแคลลัสที่จะใช้ ในการชักนำให้เกิดไฟรเอเบิลแคลลัส ฉ. ทำการเพิ่มปริมาณไฟรเอเบิลแคลลัสโดยตัดแบ่งไฟรเอเบิลแคลลัสจำนวน 1-2 กรัม ที่ เตรียมได้จากข้อ ง. มาเพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งสูตร MS ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 2,4-ไดคลอ โรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง ที่อุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียส เป็น เวลา 60 วัน ช. การเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยของบุกจากไฟรเอเบิลแคลลัสในฟลาสก์ขนาด 250 มิลลิลิตร โดยเพาะเลี้ยงในอาหารเหลวพื้นฐานสูตร MS ที่มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการ เจริญเติบโต 2,4-D และน้ำตาลซูโครส ปริมาตรทำงาน 50 มิลลิลิตร โดยการบ่นบนเครื่อเขย่าที่มี ความเร็วรอบ 120 รอบต่อนาที อุณหภูมิ 25?2 องศาเซลเซียส เปลี่ยนอาหารทุก 7 วัน เป็นเวลา 60 วัน 2. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง สภาวะที่เหมาะสม คือ สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวน อุณหภูมิ 25?2 องศาเซลเซียส 3. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-2 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการชักนำให้ชิ้นส่วนต่างๆ ของต้นบุกปลอดเชื้อเกิดแคลลัสนั้น สารควบคุมการเจริญเติบโตที่ใช้เลือกได้จาก 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด และ/หรือ แนฟทา ลีน อะซีติก เอซิด (Napthalene Acetic Acid; NAA) อย่างใดอย่างหนึ่ง 4. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกนั้น อาหารเหลวสูตร MS ที่ใช้ อาจมีสาร 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด ในปริมาณ 0.5และ/ หรือ 0.75 มิลลิกรัมต่อลิตร 5. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกนั้น สามารถเพาะเลี้ยงในสภาวะที่มี หรือไม่มีแสงก็ได้ -------------------------------------------------

1. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน มีขั้นตอนดังนี้ ก. การเตรียมเนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อจากหน่อและส่วนหัวบนใบจำนวน 20-50 กรัมต่อ สารละลายสำหรับฟอก 100 มิลลิลิตร โดยการแช่ในสารสะลายแอลกฮอล์ที่มีความเข้มข้น 70 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาตร/ปริมาตร) และฟอกฆ่าเชื่อด้วยสารละลายโซเดียมไฮเพอร์คลอไรต์ (NaOCL)ที่มี ความเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาตร/ปริมาตร) เป็นเวลา 20 และ 25นาที ตามลำดับ จากนั้น เพาะเลี้ยงยนอาหารแข็งขั้นพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน และอุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 7 วัน ดังตัวอย่างที่ 1 ข. การชักนำให้เนื้อเยื่อบุกปลอดเชื้อเกิดยอดและเพิ่มยอดทวีคูณของชิ้นส่วนหัวบนใบและ หน่อของบุก โดยการนำเยื่อบุกที่ผ่านการฟอกฆ่าเชื้อแลเว จำนวน 2 - 10 กรัม มาเพาะเลี้ยงบน อาหารแข็งสูตร MS มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 6-เบนซิลอะดีนีน (6- Benzyladenine; BA) ความเข้มข้น 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร โดนการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน และอุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียล เป็นเวลา 30-45 วัน นำหน่อสมบูรณ์ปลิดเชื้อของ บุกที่ได้ ตัดแบ่งจำนวน 2-10 กรัม (การตัดแบ่งสามารถบอกเป็นปริมานได้หรือไม่คะ ว่ามีปริมาตร เท่าไหร่) เพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการ เจริญเติบโต BA ความเข้มข้น 0.5-2.5 มิลลิลิตรต่อกรัม บ่มที่อุณหภูมิ 25+2 องศาเซลเซียส ภายใต้ สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน เป็นเวลา 60 วัน เพื่อเพิ่มยอกทวีคูณ ดังตัวอย่างที่2 รูปที่ 2ค ค. การชักนำให้ชิ้นส่วนต่างๆ ของต้นบุกปลอดเชื้อเกิดแคลลัสและการเพิ่มจำนวนแคลลัสจาก ชิ้นส่วนของใบ ลำต้น และโคนต้น โดยเฉพาะเลี้ยงชิ้นส่วนต่างๆ บนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มี ความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด (2,4- Dichlorophenoxy acetic acid; 2,4-D) โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน หรือ สภาวะที่ไม่มีแสง อุณหภูมิ 25+2 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน และนำไปใช้ในการชักนำให้เกิด ไฟนเอเบิลแคลลัส ดังตัวอย่างที่ 3 ง. การเพิ่มปริมาณแคลลัสจากแคลลัสที่เตรียได้จากชิ้นส่วนของใบ ฃำต้น และโคนต้น โดยตัด แบ่งชิ้นส่วนดังกล่าวมาเพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสาร ควบคุมการเจริญเติบโต2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีอะซีติก เอซิด โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน อุณหภูมิ 25-27องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน และนำไปใช้การชักนำให้เกิด ไฟรเอเบิลแคลลัส ดังตัวอย่างที่ 3 จ. การชักนำให้แคลลัสกลายเป็นไฟรเอเบิลแคลลัสโดยแบ่งแคลลัสที่เตรียมได้จากช้นส่วน และสูตรอาหารแข็งที่เหมาะสมข้างต้น ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 10 มิลลิเมตร เพาะเลี้ยงต่อบน อาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีสารควบคุมการเจริญเติบโต 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีอะซิก เอซิด โดย การบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน อุณหภูมิ 25+2 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 วัน ดัง ตัวอย่างที่ 5 นอกจากนี้ ยังอาจมีการชักนำให้เกิดแคลลัสจากชิ้นส่วนของใบ ลำต้น และโคนต้นของบุกที่ปลอดเชื้อ โดยเฉพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งพื้นฐานสูตร MS ที่มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการ จริญเติบโต แนฟทาลีนแอซีติก (Napthalene Acetic Acid; NAA) โดยการบ่มภายใต้สภาวะ ที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อัน เป็นเวลา 30 วัน เพื่อชักนำให้เกิดแคลลัสและการเพิ่มจำนวนแคลลสัสที่จพใช้ ในการชักนำให้เกิดไฟรเอเบิลแคลลัส ดังตัวอย่างที่ 6 ฉ. ทำการเพิ่มปริมาณไฟรเอเบิลแคลลัสโดยตัดแบ่งไฟรเอเบิลแคลลัสจำนวน 1-2 กรัม ที่ เตรียมได้จากข้อ ง. มาเพาะเลี้ยงบนอาหารแข็งสูตร MS ที่มีสารควบคุมการเจริ?เตฺบโต 2,4-ไดคลอ โรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด โดยการบ่มภายใต้สภาวะที่มีแสง ที่อุณหภูมิ 25-27 องศาเซลเซียส เป็น เวลา 60 วัน ดังตัวอย่างที่ 7 ช. การเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยของบุกจาไฟรเอเบิลแคลลัสในฟลาสก์ขนาด 2501 มิลลิลิตร โดยเพาะเลี้ยงในอาหารเหลวพื้นฐานสูตร MS ที่มีค่าความเป็นกรด-ด่าง 5.8 ที่มีสารควบคุมการ เจริญเติบโต 2,4-D และน้ำตาลซูโครส ปริมาตรทำงาน 50 มิลลิลิตร โดยการบ่นบนเครื่อเขย่าที่มี ความเร็วรอบ 120 รอบต่อนาที อุณหภูมิ 25+2 องศาเซลเซียส เปลี่ยนอาหารทุก 7 วัน เป็นเวลา 60 วัน ดังตัวอย่างที่ 8

2. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง สภาวะที่เหมาะสม คือ สภาวะที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวน อุณหภูมิ 25+2 องศาเซลเซียส

3. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-2 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการชักนำให้ชิ้นส่วนต่างๆ ของต้นบุกปลอดเชื้อเกิดแคลลัสนั้น สารควบคุมการเจริญเติบโตที่ใช้เลือกได้จาก 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด และ/หรือ แนฟทา ลีน อะซีติก เอซิด (Napthalene Acetic Acid; NAA) อย่างใดอย่างหนึ่ง

4. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกนั้น อาหารเหลวสูตร MS ที่ใช้ อาจมีสาร 2,4-ไดคลอโรฟีนอกซีแอซีติก แอซิด ในปริมาณ 0.5และ/ หรือ 0.75 มิลลิกรัมต่อลิตร

5. กรรมวิธีการเตรียมเซลล์แขวนลอยบุกเพื่อผลิตกลูโคแมนแนน ตามข้อถือสิทธิ 1-4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยบุกนั้น สามารถเพาะเลี้ยงในสภาวะที่มี หรือไม่มีแสงก็ได้