SU976354A1 - Способ определени элеутерозидов А,В @ ,В,Д,Е (его варианты) - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к медицине., и Оармакологии, конкретно к физикохимическим методам количественного анализа лекарственных препаратов, по лучаемых в виде экстрактов, из растительных объектов, и может быть использовано дл  определени  качества экстракта элеутерококка при его полу чении и использовании в качестве лекарства , пищевой или кормовой добавки , дл  определени  содержани  биоло гически активных веществ (элеутерози дов) в исходном сырье и в процессе производства, а таюче дл  вы влени  :возмоиной фальсификации этого препарата . Элеутерококк колючий (Eleiiterococ CUS r enticocus Max in.) представл ет собой кустарник из семейства аралиевых и  вл етс  близким родственнико известного восточного лекарственного раствни  женьшен . Вместе °с женыденем , родиолой.розовой, пантакрином и другими лекарственными средствами из группы природных адаптогенов элеутерококк повышает неспециЛическую резистентность, адаптацию организмоо к различного рода неблагопри тным внешним воздействи м. Благодар  широкому спектру действи , этот лекарственный препарат назначаетс  при очень многих заболевани х и предболезненных состо ни х, св занных с повышенной йи-зической нагрузкой, понижением выносливости организма, в послеоперационный период, при общей слабости организма и во многих других случа х. Элеутерококк имеет очень широкое применение в медицине, а также в.пищевой промышленности и сельском хоз йстве и считаетс  массовым , ,, лекарственным средством. Поэтому определение качества выпускаемого экстракта элеутерококка имеет очень aaxtное значение, так как возможна  передозировка его или отсутствие в продукте каких-либо компонентов может не только не принести пользу, а даже оказатьс  болезнетворным.

Среди веществ, составл ющих действующее начало, элеутерококка, выдел - 5 ют 5 индивидуальных химических вещестп , которыев химии природных соединений прин то называть элеутерозидами А, В, В , Д, Е, в сумме по массе составл ющих до 90% всех эле- ю утерозидов. Элеутерозид А - это даукостерин , В - 7-с{ глюкозид изофраксидина , В - 1-|)-глюкозид синаптового спирта, Б и Е - .диглюкозиды сирингарезинола , различающиес  конформацией. Sis экстрактах элеутерококка соотношение между элэутерозидами варьирует . незначительно и почти не зависит от периода вегетации, от органов растенил и составл ет А:В :В:1):Е :5:15:20 :12:.1.

11звестен способ количественного определени  элеутерозидов А, В В, В, Е, основанный на выделении из экстракта элеутерококка отдельно каждо - 2S го элеутерозида в кристаллическом виде , методом многократного последовательного хроматографического разделени  экстракта на колонке с последую .щим гравиметрическим определением ко- зо личества элеутерозидов. Особенностью данного способа  вл етс  возможность раздельного определени  всех элеутерозидов , что позвол ет примен ть этот способ дл  количественного анализа , смесей с произвольным соотношением элеутерозидов 1.

К недостаткам данного способа следует отнести его трудоемкость и длительность (на анализ требуетс  40 дней) , невысокую точность (трудно оценить потери веществ в процессе разделени ), низкую чувствительность (дл  анализа, требуетс  несколько граммов сухого остатка экстракта), а дл  ведени  анализа требуютс  квалифицированные химики-аналитики.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности  вл етс  способ определени  элеутерозидов А, В , В, D, Е путем разбавлени  или упаривани  анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определени  концентраций по оптическим характеристикам .

Анализируема  смесь в известном способе представл ет собой элеутерозидную фракцию, полученную в результате хроматографического разделени  на колонке исходного экстракта с использованием системы растворителей метанол , хлороЛорм в соотношении i:. Анализируемую смесь довод т до оптической плотности 0,1-1,i разбавлением ее метанолом или упариванием. В качесве оптического параметра используют .величину оптической плотности при длине волны 270 нм. Способ определ ет суммарную концентрацию элеутерозидов n,t). В, а их индивидуальные количества и содержание в смеси остальных элеутерозидов .расчитывают пользу сь известным соотношением между ними.

Преимуществами известного способа определени  по сравнению с описанным }ВЬ1ше . вл ютс  больша  точность опре целени , простота и сокращение времени анализа { 2 J.

К недостаткам известного способа отнести то, что данным методо непосредственно определ етс  только сумма элеутерозидов В,Р , Е и об индивидуальных количествах каждого элеутерозида в отдельности можно судить только косвенно, использу  известное соотношение между этими компонентами в природных смес х.

Кроме того, поскольку действиекаждого элеутерозида индивидуально и, по-видимому, механизм действи  каждого из них различен, то дл  оценки качества экстракта совершенно необходимо знать содержание ка хдого элеутерозида в отдельности. Кроме этого, точность метода сни): аетс  в св зи с невозможностью достаточно полно разделить исходную смесь элеутерозидов от примесей гдетодом однократного хроматогроОировани  на колонке (сопутст-. вующие примеси имеют близкие значени  R). Известный способ  вл етс  также достаточно длительным. .с

Целью изобретени   вл етс  расширение функциональных возможностей способа, повышение чувствительности и точности анализа.

Claims (2)

1. Указанна  цель достигаетс  тем, что согласно способу определени  элеутерозидов А, В , B,D , Е путем разбавлени  или упаривани  анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определени  концентраций по оптическим характеристикам, два образца анализируемой смеси разбавл ют или упаривают до оптической плотности 0,08-0,1, .один - дл  определени  элеутерозидов В,D, Е на длине волны в диапазоне 27П.-ЗПП нм, а другой - дл  определени  элеутерозида В на длине волны в диапазоне 360-380 им, возбу чда1от Люминесценцию анализируемых образцов на хе длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определ ют концентрации суммы элеутерозидов В,D , Е по величине интенсивности люминесценции на длине волны им и концентрацию элеутерозйда по величине интенсив ности люминесценции на длине волны 500 нм, а концентрацию элеутерозйда А Ьпредел ют по известному соотношению между элеутерозидами в их природ ной смеси по найденным значени м кон центраций элеутерозйда В и суммы элеутерозидов В,1) , Е. Во втором варианте способа цель I Достигаетс  тем, что согласно спосо , бу определени  элеутерозидов А, В , 1 В,Э , Е, включающем хроматографическое разделение анализируемой смеси, четыре образца анализируемой смеси, полученные хроматографическим путем, содержание в отдельности элеутерозиды А, В, В, и сумму элеутерозидов Д и Е, разбавл ют или упаривают до величины оптической плотности О,080 ,1 при длине оолны в диапазоне 270300 им дл  анализируемых образцов, содержащих элеутерозиды В и сумму Д и Е, и при длине волны в диапазоне 60-386 нм дл  образца, содержащего Ьлеутерозид Bi, провод т качественны реакции в соответствующих образцах на наличие элеутерозидов В и Аи, в случае их присутстви , возбуждают люминесценцию образцов на тех же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определ ют концентрации элеутерозидов В и суммы Д и F. по величине интенсивности люминесцен ции при нм и концентрацию элеутерозида В по величине интенсивнос ти люминесценции при 500 нм, концент рацию элеутерозйда А определ ют расчетным путем, сравнива  найденные соотношени  между элеутерозидами В, |&, Д и Е с их известным соотношением в природных смес х элеутерозидов. Второй вариант способа позвол ет работать с любыми смес ми, содержащи элеутерозиды. Качественную реакцию н элеутерозид А осуществл ют путем рас ворени  соответствующего анализируем го образца в хлороформе и обработки его раствором серной кислоты в уксусном ангидриде. По по влению интенсивного красного окрашивани  суд т о присутствии элеуте0озида А. Причем качественную реакцию на элеутерозид В осуществл ют путем растворени  соответствующего образца в воде и обработки полученного раствора солью Со и наличие элеутерозйда В устанавливают по по влению в спектре поглслцени  раствора новой полосы с максимумом НОО нм (постепенное покраснение раствора). С целью повышени  точности определени  элеутерозйда возбуждение люминесценции и измерение концентрации элеутерозйда В провод т в среде с рН 12-13. В способе анализируемой смесью  вл етс  исходный экстракт элеутеро- , кокка. Из анализируемого экстракта разбавлением водно-спиртовой смесьюили содой-, либо упариванием готов т два образца с оптической плотностью 0,08-0,1 при длинах волн 270-300 нм (образец дл  определени  элеутерозидов B,D , Е и 360-380 нм (образец дл  определени  элеутерозйда В), Регистрируют спектры люминесценции первого и второго образцов при возбуждении УЛ-светом соответственно 270300 нм и 360-380 нм, контролиру  при этом соответствие параметров этих спектров спектрам чистых элеутерозидов В , В,), Ей смеси элеутерозидов В, Т), Г:. Параметры спектров люминесценции элеутерозидоо ( поло чение .максимума и полуширина полосы пред|ставлены в табл. 1. SТ а б л и ц а 1 55 Д, 335 60 Смесь элеутерозидов В, , Е в соотношении 15:12:13 5 60 в качестве контрол  на точность определени  элеутерозида В следует прописать спектр его люминесценции при значении рН раствора в области 2-3 и 12-13 При этом интенсивность люминесценции во втором случае должна быть в ,2 раза больше, чем в кислой среде. Концентрации cyMMfci элеутерозидов Bjb , Е, а таюне элеутерозида В наход т по Лормуле ТПТЖ искома  концентраци  элеутерозида , моль/л; интенсивность люминесценции , измеренна  в максимуме полосы люминесценции; - разбавление измер емого раст вора по сравнению с исходным экстрактом. trid константа, не завис ща tgj от прибора, где tf и tgcfi тангенсы углов наклона линейных участков кривых зависимости интенсивности люминесценции соответствующего элеутерозида или их смеси и эталонного вещества соответственно, сн тые в одно врем , на одном приборе, в одинак вых услови х., В качестве люминесценции эталонны веществ в предлагаемом способе испол зуютс  аминокислота триптоЛан (длина волны возбуждени  290 нм и люминесценции нм) дл  определени .vKOHцентраций элеутерозидов 8, Т), Ей их суммы и 1-анилинонайталин-П-сульфона ( длина волны возбуждени  37П нм и люминесценции 500 нм;) дл  определени концентрации элеутерозида В. Величи ны констант К в случае возбуждени  л минесценции УФ-светом 290 нм и 370 н дл  элеутерозидов В, D, F и В.. соответственно и измерени  люминесценции соответственно при нм и 500 нм при ведены в табл.2. Значение коэффициента К в случае элеутерозида В приведено дл  его люминесценции при рН 12-13. Значение ко эффициента К 0,3 0,09 OJ7 3.5 jt8 В том случае, если отношение интенсивностей люминесценции смеси в област х рН раствора 2-3 и 12-13 при длине волны возбуждающего света 360380 нм значительно отличаетс  от , в исследуемой смеси присутствует примесь , спектр люминесценции которой близок к элеутерозиду П . Предположив , что спектр люминесценции этой примеси не зависит от рН, значение интенсивности люминесценции дл  вычислени  концентрации олеутерозида наход т по соотношению I 4 0. - U), (2) 3 Ч Где I и I - соответственно интен сивности люминесценции образца при значени х рН 12-13 и 2-3. В способе указанные интервалы длин волн возбу : дени  люминесценции и значение оптической плотности об-, разцов  вл ютс  существенными, так как осуществление операций способа вне указанных пределов снижает точность определени  ввиду уменьшени  интенсивности люминесценции элеутерозидов и увеличени  люминесценции примесей, а также по влени  нелинейности в зависимости интенсивности люминесценции от концентрации элеутерозидов . С целью непосредтвенного, более точного определени  элеутерозидов А, В, В, В, Е исходный экстракт хроматограйируют в тонком слое в системе растворителей хлороформ, метанол, вода в соотношении 0:10:1. Местоположение олеутерозидов определ ют по значени м Rj , а также, выреза  полосы шириной 0,5-0,8 см с боков и из середины пластинки (обнаружение при нагревании до. 200-250С по характерной окраске п тен: сине-фиолетовое - элеутерозид В; оранжевое Д, Е; элеутерозидыА и хроматограмме отчетливо не определ ютс  ввиду их низкой концентрации и наличи  близ-ко расположенных примесей. Установлено экспериментальным путем, что область располонени  элеутерозида В непосредственно граничит в областью элеутерозида В, находитс  над ней и имеет ту же ширину, а элеутерозид А аналогичным образом располагаетс  над элеутерозидом В ж . Компоненты смеси раздел ют, выреза  из непро вленной части пластинки полосы, соответствующие обнаруженным элеутерозидам и элюируют их за тем водным этанолок или . Довод  оптические плотности образцов до 0,08-0,1 упариванием или разбавлением бидистилл том, регистрируют их спектры люминесценции при возбуждении в 270-300 нм дл  элеутерозидов В, Д, И и в ЗбО-3 0 нм дл  элеутерозида В, (при. значени х рН 2-3 и 11-12), прокалибровав предварительно спектрофлуориметр эталонными веществами (дл  получени  значений tqof.) . Параметры по лученных спектров люминесценции сравнивают с табличными (табл. V). Затем измер ют интенсивность люминесценции фракций, содер хащих элеутерозиды В, Д, Е при нм и элеутерозид В. при 500 нм. Использование в качестве предварительной операции тонкослойной хроматогрпфии позвол ет быстро и достаточно полно разделить и очистить элеутерозиды . Так как о наличии элеутерозида А в смеси невозможно судить по люминесценции и поглощению, и это вещество трудно различимо на хроматограмме, то его присутствие в экстракте элеутерококка устанавливают по качественной реакции на агликоновую часть молекулы реакци  Либермана-Вурхарда), заключаюцейс  в добавлении к хлороЛормному раствору анализируемого вещества (в данном случае вещество, элюированное . из соответствующей области хроматогра ... фической пластинки) одного миллилитра свежеприготовленного раствора нескольких капель концентрированной сер ной кислоты в 5 мл охлажденного льдом уксусного ангидрида. При этом через несколько секунд долхсно по витьс  постепенное покраснение раствора. Количество элеутерозида А в случае положи тельной качественной реакции можно оценить по количеству элеутерозида Bf при совпадении количественного соотношени  дл  эл1еутерозидов В., В, Д, Е в анализируемом экстракте и в природной смеси. Поскольку концентраци  з31еутерозида А в анализируемом экстракте расчитываетс  из концентрации элеутерозида В , точное и достоверное определение последнего  вл етс  дл  этого необходимым условием. Поэтому, определ   содержание элеутерозида B/f в исходном экстракте и после хромато графического разделени , необходимо проверить зависимость спектра люминесценции при длине волны возбуждени  ЗбО-ЗВО нм от рН раствора (при этом люминесценци  образца при рИ 12 в 3,5-,2 раза интенсивнее, чем при нейтральных и кислых рН), а также по вление новой полосы с максимумом 00 нм Q спектре поглощени  элеутеро. зида В , через несколько минут после добавлени  к нему соли Со ,. В том случае, если соотношение интенсивностей люминесценции при различных значени х рН не попадает в указанную область , дл  .определени  значени  поль- .зуютс  соотношением (2). -. П р и м е р. Проанализирован водноспиртовый экстракт элеутерококка выпуска химико-фармацевтического завода Санитас (г. Каунас), но брь 1980 года . Готовили разбавлени  бидистилл том анализируемого экстракта в 20, 50, 100, 200 и т.д. раз, использу  дл  каждой пробы 0,1 мл исходной смеси. Измер ли оптическую плотность калдого образца при длинах волн 370 и .90 нм при помощи двухлучевого дифференциаль- ного спектрофотометра, отбира  из проб те, оптическа  плотность которых при одной из указанных длин волн была в пределах 0,08-0,1. Такому требованию удовлетворили образцы, полученные от разбавлени  исходного экстракта в 500 раз, - оптическа  плотность 0,097 при 290 нм (образец hf 1), и в 200 раз - оптическа  плотность 0,093 при 370 нм (образец К 2). Прокалибром «ч п/ --414 Г . . . . . вали спектрофлуориметр двум  эталонами: триптофан - при длине волны возбуждени  290 нм и люминесценции. нм и 1-анилинонафтаг.ин-8-сульфонат - при длине волны возбуждени  370 нм и люминесценции 500 нм, полу-. чив значени  (фиг. 1 и 2) , котог рые оказались равными it, и 8.10 соответственно. Регистрировали спектры люминесценции образцов № 1. 2 при возбуждении УО-светом 290 нм и 370 нм соответственно, добавив .-.к образцу Ь° 2 одну каплю 0,1 н раствора сол ной кислоты, а затем после добавлени  к нему трех капель 0,1 н. раствора едкого натра. Параметры полученных спектров совпали с данными табл. 1, а соотношение, между интенсивност ми люминесценции при кислых и щелочных значени х рН среды в случа х возбуждени  УО-светом 370 нм оказалось равным 3,9; Измер ли интенсивность люминесценции (|) 11 дл  образцов И° 1 и К . при 3t5 нм и 500 нм соответственно. Найденные по соотношению (1) концентрации элеутерозидов оказались равными, мг/млГ Элеутерозид В 0,7-0,8 Элеутерозид В 2,3-2,5 Элеутерозид Д 1,9-2,1 Элеутерозид Е 0,15-0,25j а найденна  по содержанию олеутерози да В концентраци  элеутерозида Л в исследуемом экстракте оказалась равной 0,55-0,65 мг/ л. Дл  непосредственного и более точ ного определени  элеутерозидов хроматографировали 0,5 мл анализируемого экстракта в тонком слое, использу пластинки фирмы SlUifol (ЧССР) , в системе растворителей хлороформ, мет нол, вода в соотношении А0:10:1. От хроматографической пластинки с обоих боков и в середине отрезали полоски шириной по 0,5 см.. Каждую из трех по лосок про вл ли нагреванием на элект роплитке в течение 2 мин при . По значени м R|, характерной окраск п тен идентифицировали элеутерозиды: В - сине-фиолетовое п тно, Д и Е оранхевоё п тно. Зона элеутерозида Е располагаетс  непосредственно над В и имеет ту же. ширину. Зона элеутерозида Л находитс  выше элеутерозида ;В. Использу  про вленные полоски в качестве маркера, вырезали из непро вленной основной части пластинки об ;ласти, соответствующие индивидуальным элеутерозидам, элюировали их бидистилл том (f мл на каждую пробу), счища  слой силикагел , и доводили оптическую плотность до 0,08-0,1 при соответствующих длинах волн (37П нм дл  элеутерозида В vi 290 нм дл  эле утерозидов В, Д и Е). Регистрировали спектры люминесценции образцов, содержащих элеутерозиды В, Д и Е при возбуждении УО-светом длины волны 290 нм, которые по параметрам совпа ли с данными табл. 2. По интенсивное ти люминесценции нм, калибровочным дл  элеутерозидов, постро енным по калибровке эталонным вёщест . . BOM и значением коэффициентов К (табл. 2), использу  соотношение (1) , нашли концентрации элеутерозидов В : и суммы Д, Е, которые оказались рав . ными (учитывй  потери вещества при . про влении полосок хроматограммы), мг/мл: Элеутерозид П 2,0-2,2 Элеутерозиды Д,Е 1,8-2,0 5 Образец, содержавший элеутерозид В , после элюировани  разделили на две равные части. К одной из них добавили 0,1 fV 0,1 Н р-ра СоГ.1 в и через 5 мин увидели постепенное покраснение раствора. Через 30 г1ин был прописан спектр поглощени  образца, который соответствовал спектру поглощени  комплекса элеутерозид В - и имел полосу поглощени  с максимумом 00 нм. Ко второй части образце последовательно добавл ли 1 каплю 0,1 н. раствора сол ной кислоты и 3 капли н. раствора едкого натра, регистриру  после обеих операций-спектр люминесценции при возбуждении 370 нм. Параметры .обоих спектров, соотношение их интеисивностей (в щелочной среде интенсивность в А раза больше) полностью соответствовали оптическим характеристикам элеутерозида В (табл. 1). По интенсивности люминесценции этого образца при щелочном значении рИ при длине волны 500 нм, калибровочной зависимости ( фиг. 2) , значению коэффициента К ( табл. 2), использу  соотношение (1), нашли концентрацию элеутерозида В, котора  составила (учитыва  потери вещества при про влении полосок хроматограммы ) 0,7-0,8 Mr/tvi. Пробу, содержащую вещество, элюированное из области , соответствующей расположению элеутерозида А, упарили, перерастворили D хлороформе, добавили 1 мл свежеприготовленного раствора 1 капли концентрированной серной кислоты и 1 мл охлажденного льдом уксусного ангидрида . Через несколько секунд раствор окрасилс  в бледно-розовый цвет, что говорит о присутствии в нем элеутерозида А. Соотношение количествами непосредственно определенных элеутерозидов R , В, Д и Е составл ет 8:21:19 и несущественно отличаетс  от литературных данных. Есть все °| осногаани  полагать, что это касаетс , и элеутерозида А, наличие которого в смеси было установлено качественно. Его количественное содержание в исследуемом ,экстракте, оцененное по ,.- концентрации элеутерозида В, и их соотношению в природных смес х, окаёалось равным 0,6-0,7 мг/мл. Аналогично проводитс  количественное определение элеутерозйдоо при других длинах волн возбуждени  люминесценции в диапазона { 270-300 нм (дл  элеутерозидов В, Д, F.) и ЗбО380 нм (дл  элеутерозида В-). Предлагаемый способ позвол ет определить непосредствонно раздельно содержание основных элеутерозидов в экстракте элеутерококка, П то хе орем  он достаточно прост, не требует вм . сококвалифицированных исполнителей, быстр в осуществлении (2-3 ч). Поэтому , с одной стороны, он удовлетвор ет всем современным требовани м фарма кологии, фармацевтики и медицины, а с другой - дл  внедрени  его в промыш ленность не требуютс  дополнительные технологические разработки. Предложен ный способ повышает точность и чувствительность определени , позвол ет достоверно судить о присутствии 3 экстракте элеутерококка биологически активных веществ. Способ позвол ет более точно использовать сырье и значительно снизить отходы производства . Разработанный способ позволит значительно повысить конкурентоспособ ность отечественного элеутерококка, продаваемого за , продавать его как лекарственное средство | в насто щее врем  элеутерококк продаетс  за рубе)х как пищева  добавка), что принесет дополнительные прибыли государству за счет повышени  рыночной цены В конечном итоге внедрение предлагаe Югo метода в производство позвол ет увеличить объем продаж элеутерококка за границу в 2-2,5 раза. Формула изобретени  1, Способ определени  элеутерозидов Л, В, В, Л, Е путем разбавлени  ИЛИ упаривани  анализируемой смеси д требуемой оптической плотности и определени  концентраций по оптическим характеристикам, о т л и ч а ю щ и й СЯ тем, что, с целью расширени  Фун циональных возмо чностйй, повышени  чувствительности и точности анализа, два образца анализируемой смеси разбавл ют или упаривают до оптической плотности 0,08-0,1, один - дл  определени  элеутерозидов R, Д, F на дли не, волны в диапазоне 27ПП-300 нм, а другой - дл  определени  элеутерозида К на длине волны в диапазоне ЗбО-380 нм, возбуждают люминесценцию образцов анализируемой смеси на этих же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определ ют концентра цию суммы элеутерозидор В, Л, Е по величине интенсивности люминесценции на длине волны нм и концентрацию элеутерозида П по величине интенсивности люминесценции на длине волны 500 нм, а концентрацию элеутерозида А определ ют по известному COOTHOUJCнию между элеутерозидами в их природных смес х по найденным значени м концентраций элеутерозида R и суммы элеутерозидов. В, Д, Е, 2, Способ определени  элеутерозидов Л, В , В, Д, Е путем хроматогра- фического разделени  анализируемой смеси, разбавлени  или упаривани  получаемых образцов до требуемой.оптической плотности и определени  концентраций элеутерозидов по оптическим характеристикам, о т   и ч.а ющ и и с   тем, что, с целью расширени  (Функциональных воз.« жносте 1 способа , повышени  чувствительности и точности анализа. Полученные хроматографическим путем четыре образца анализируемой смеси, содержащие в отдельности элеутерозиды Л, В, В и сумму элеутерозидов Д и Е, разбавл ют или упаривают до величины оптической плотности 0,08-0,1 при длине волны в диапазоне 270-300 нм дл  анализируемых образцов, содержащих олеутерозиды В и сумму Д и Е 5 и при длине волны в диапазоне 3 0-ЗЙО нм дл  образца, содержащего элеутерозид В , провод т качественные реакции в соответствующих образцах на наличие элеутерозидов В и Л и, -в случае их присутстВИЯ , возбукдают люминесценцию образцов на тех же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определ ют концентрации элеутерозидов В и суммы Д и Е по величине интенсивности люминесценции при нм и концентрацию элеутерозида В по величине интенсивности люминесценции при 500 им, кон и2нтрацию элеутерозида А определ ют расчетным путем, сравнива  найденные соотношени  между элеутерозидами В , В, Д и Е с их известным соотношением в природных смес х элеутерозидов . 3, Способ по п. 2, отличающий с   тем, что качественную реацию на элеутерозид А осуществл ют путем растворени  соответствую«цего анализируемого образца в хлороформе и обработки его раствором серной кислоты в уксусном ангидриде, и наличие элеутерозида А устанавливают по по влению интенсивного красного окрашивани . . Способ по п. 2, о т л и ч аю щ и и с   тем, что качественную реакцию на элеутерозид П осуцествл ют путем растворенип соответствукхце го о(}разца в воде и обоаПотки полученного раствора солью Со и наличие элеутерозида В устанавливают по покраснению раствора, 5. Способ по пп. 1 и 2, о т л ичающийс  тем, что, с целью повышени  точности определени  элеутерозида Rj , возбуждение люминесценции .и измерение концентрации эле fL проподпт в среде с утерозида рН 1Р.-13. Источники инЛормации, прин тые во внимание при экспертизе 1.Оводов Ю.С. и др. Гликозиды элеутерококка колючего (EleuterococCUS Santlcocus). Выделение и некоторые свойства элеутерозйдов В и Е. Хими  природных соединений, 19б5, № 1, с. 3-7.
2. 2.Яапчик П.ф., Фролова Г.М., Оводов Ю.С. Количественное определение гликозидов элеутерококка колючего . Методика исследований. - Растительные ресурсы, 1968, т. У, вып.З, с. 55 (прототип).

   V./ ff&(/.