SU920053A1

SU920053A1 - Способ получени пептидов, содержащих сульфат тирозина

Info

Publication number: SU920053A1
Application number: SU777770038A
Authority: SU
Inventors: Хартмут Нидрих; Бригитте Хертель; Михаель Бинерт; Манфред Кейлерт
Original assignee: Академие Дер Виссеншафтен Дер (Инопредприятие)
Priority date: 1976-11-29
Filing date: 1977-12-12
Publication date: 1982-04-15
Also published as: DD128973A1; GB1584669A; DD128973B1; FR2372146A1; JPS5394541A; DE2751026A1

Description

ние за цищенного дипептида с {-/--декапе .пгмдом. содержащим сульфат тирозина . Введение остатка серной кислоты D тирозине в незащищеи1 ый октапептид происходит посредством .концентрированной серной кислоты, причем вследствие образовани большого количества побочных продуктов, выход после, очистки 20% до - 25 Таким же способом получают р д аналогов PZ-октапептида , из которых ге в которых N-конечна аспарагинова кислота за - енена другими аминокислотными остат нами, малеиновой и фурмаровой кисло/raMi-iJ вл ютс также биологически высокоактивными,

Получаемые при использовании центрированной сарной кислоты сульфонированные по ароматическому кольцу тирозина в положении ЗР2-окта-, дека- 20 И додекапептиды, показывают высокую биологическую активность. Други( побочные продукты при полу чении С-конечных последовательностей PZ вл ютс исходными продуктами, т.е. идентичный несульфатированный р д, который может быть поручен такж отщеплением .при переработке вследствие кратковременной кислой реакции, ..производные с замещением у кольца триптофана, которые могут об разоватьс во врем ступенчатого син теза при повтор ющихс отщеплени х защитных групп-Вое посредством трифторуксусной кислоты. Полученный в процессе синтеза простейший-PZ-nen тид высокой биологической активности вл етс Boc-Tyr(SO j-} Met-Gl3/-Trp-Met-Asp-PheNlIj Остаток серной кислоты ввод т в Бос-гептапептид на последней стадии . Дл большинства активных пептидных веществ удаление N-конечной аминогруппы усиливает био логическую активность,и что введение N-конечных ацильных групп, кроме того, преп тстви расщеплению посредством аминопептидаз, вл етс выгодным дл биологической активности. Целью изобретени вл етс получение кратчайшим путем Бос-Туг(50Г)-№t-Gly-Tip-r .fet-Asi:)-P ieMi2 с высоким процентом выхода, избега неэкономичную операцию очистки, исход из промышленного продукта Trp-Met Asp-PIieMi использование его в качеств исходного продукта дл получени сле дующих, в особенности Л-ацилированны РЕ-пептидов и, исход из этого, полу

чение действующих на желчный пузырь PZ-пептидов по, возможности с простой структурой.

Поставленна цель достигаетс тем,

что этерифицированный серной кислотой по тирозину Защищенный пептид, содержащий 2-6 остатков аминокислоты, используют в качестве промежуточного продукта.

Способ получени X-TyrfSOjJ-Met-Gly-Tn -Met-AsD-PhcMl , где-.Х HsO OOC-CHi -СН., -СО ;HO-Cg, СО ; HOOC--CH,,Qig.CO, и другие ацильные остатки заключаетс в том, что заи;и

щенный трип.ептидный эфир Y-Tyr MetGly-0-алкил сульфируют, алкилэфирную группу отщепл ют омылением, защищенный сульфированный трипептид конденсируют с Tr{:i rvfet-Asp-PheMl2, преимущественно методом смешанных ангидридов , и .полученный после отщеплени защитной.группы гептапептид ацилируют . при добавлении с.лабой органической щелочи, преимущественно Nэтилморфолина . При переработке продукта после сульфировани используют воднощелоч- ной буферный, раствор, преимущественно . Дл выделени защитного трипептида используют смеси высших спиртов с уксуснокислым эфиром, преимущественно н-бутанолэтилацетат. В качестве защитной группы используют третичный бутилоксикарбонил и ее отщепление от гeптaпeпtидa осуществл ют трифторуксусной кислотой при добавлении в избытке метоксибензолмеркаптоэтанола при комнатной температуре. Получаемые при кислотной обработке фракции десуфатированного пептида такой же аминокислотной последовательности отдел ют после ацилировани ам.иногрупп. Существует способ, используемый дл синтеза высших тирозинсульфатпептидов на примере нескольких N-аци-. лированных С-конечных гептапептидов панкреоцимина (PZ}. X-Tyr(OS05)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-PheNH где:X HOOG-aLСН СО; H.G - СН OGO-GH.r -ГЛг-СО -, У-НО-СаНц-СН СО. В предлагаемом способе защищенный пептидный фрагмент, который может

5 9200536

состо ть из 2-6 остатков аминокисло-образовании побочных продуктов посты и содержать остаток тирозина, этерифицируетс посредством воздействи избытка комплекса пиридин-SOj или

смесь из пиридина, хлорсерной кислоты 5дл отщеплени бутилоксикарбонильной

в диметилформамид/хлороформе и сер-защитной группы установлено использоной кислоты. При сульфатированиивание трифторуксусной кисBoc-Tyr-Met-Gly-OAt 30-кратным избыт-лоты в присутствии -избытка меркаптоком Cl-SOjH в смеси достигаетс 100%этанола и метоксибензола. При этом

превращени . Рас1депление св зи эфир- Юполностью исключаютс побочные реаксерна кислота из-за кратковременной кислой реакции при обработке реакционной смеси предотвращаетс помещением в щелочную буферную систему. например NHj/Mli,Cl. Продукт реакции 15 может быть легко извлечен из буферНОИ смеси смесью высших спиртов, например л-бутанолом или эфиром уксусной кислоты с выходом 70. преимущество способа заключаетс в том, что могут быть использованы также и загр зненные продуктами О- ацилтирозина производные защищенного тирозина, например NO-Di-Boc-Tyr очистка которых обходитс очень дорого . При обработке выделением полу ченный 0-ацилтирозиновый пептид коли чественно удал етс из тирозинсульфатного пептида. Бос-Туг(SOp-Met-Gly-OXt посредством щелочного омылени переводитс известным образом в трипептидную кислоту и выдел етс посредством н-бутанол/уксусного эфира (выход 75%) N-защищенна пептидна кислота, содержаща сульфат тирозина, может быть обычным методом сконденсирована в пептид со свободной -аминогруппой . Дл св зывани Бос-Туг(S0)-Mst Gly с Тгр-Ме1-Л5р-РЬеМ12.используетс преимущественно синтез смешанных ангидридов (88% выхода)..Получение Вос-защищенного С-конечного панкреоцимингептапептида Бос-Туг(50)-MetGly-Trp-Met-Asp-Phe№-I происходит таким способом с более высоким общим выходом и более высокой частотой, чем известными способами синтеза, в которых сульфатирование предпринимаетс как последн стади реакции. За счет предложенного способа обе печиваетс полное расщепление азотно защитной группы при одновременном минимальном кислотном гидролизе св зи эфир-серна кислота, т.е. при мин мальном отщеплении остатка 80 от гидрокислотной группы тирозина, а также при одновременном минимальном

редством циклического защемлени у остатка триптофана..

В качестве благопри тного услови

ции на триптофане. Гидролиз эфира серной кислоты остаетс ниже 20. Очень выгодным вл етс использование бутилоксикарбонильной защитной группы по сравнению с известными защитными груп ,пами, которые могут отщепл тьс в слабокислой, нейтральной или щелочной средах. , Получаемый идентичный в последоВательности пептид со свободной гидроксильной группой на тиразоле очень легко отдел етс последующим азотным ацилированием, если это необходимо дл предусмотренной цели использовани . Ацилирование полученного таким способом С-конечного панкреоцимингептапептида 1)1 (050)-Met-Gly-Trp Met-Asp-PheNIi;j . осуществл ют реакцией с активированными эфирами соответствующих карбоновых кислот, например с эфиром 2,,5-трихлорфенил-П-гидроксифенил-уксусной и этиловым эфиром нтарной кислот или с ангидридом нтарной кислоты. Дл этого гепапептид освобождают от трифторацетата слабым органическим оснойанием , преимущественно М-этилморфо , ,, , . лином ( . Ацилирование провод т при добавлении N/Vt, Ион переработке остаетс на сульфиров анных гептапептидах. Из полученных таким образом aцил-PZ-гeптaпeптидoвсукцинил-PZ-гeптaпeптид , обозначаемый еще как дезамино-р7.-октапептид, (X НООС-Шг СНг-СО) показывает высокую активность при воздействии на желчный пузырь, котора почти равносильна активности церулеина. Производные П-гидроксифенилацетила и этоксисукцйнила достигают только 1% активности иГерулеина. Отделение десульфатирова.нных побочных продуктов, может осуществл тьс противоточным разделением посредством хромотографии на декстрановом геле- Так как молекул рные вес; са обоих соединений различаютс нез-i. начительно, эффект разделени поразителен . П р м ер 1, Аммонийна соль Н-трет6ути.поксикарбйнол о-сульфаттирозмл-Ь-метионил-глицин-этилового эфира. 2j8 г 0,03б моль) пиридина в 10 мл хлороформа охлаждают до -10 С. При перемешивании мин в этот раствор -добавл ют по капл м 2,1 мл 0,037 моль) хлорсерной кислоты при чем следует поддерживать температуру 4-1 . По окончании добавлени реакционную массу перемешивают еще 30 мин при С, и добавлением затем 10 мл дилатилформамида смесь комлекса пиридин--80з и пиридингидрохлорида перевод т в раствор. 0,600 г (1,21 моль) Boc-Tyr-tet-Gly-OAt, раствор ют в 10 мл диметилформамида и 10 мл пиридина и при перемешивании добавл ют к раствору комплекса пиридин 30з . Затем 5 ч смесь перемешивают , гре на вод ной бане при +35 С растворитель удал ют в вакууме с помощью масл ного насоса прм , и масл )-(истый остаток при (-5)0°С при сильном перемешивании очень быст ро смешивают с 200 мл 0,1 N-NH,, С1/ /0,1N-MIj буферного раствора (рН10,5 Затем значение рН этим буферным раст вором быстро устанавливают на 7,0. Выпавшее в осадок из водной фазы твердое вещество перевод т в раствор добавлением 70 мл смеси н-бутанол/ /уксусный эфир (2:1). Водную фазу отдел ют, насыщают NaCl и трехкратно экстрагируют 70 мл указанной смеси. Органические экстракты объедин ют , промывают насыщенным раствором NaCl до тех пор, пока не исчезнут ионь SOjj и органическую фазу сушат над . Раствор упаривают на половину. Раствор, содержащий н-бутанол отделени Вос-ТугГВос -Met-Gly-OAt медленно при перемешивании вливают в 2,5 кратное количество холодного эфира. Выпавший в осадок продукт отсасывают, тщател но промывают эфиром и петролейным эфиром и сушат в вакууме над .i. Выход;0,50 г (). Т.пл. 139-1 1°С Wyr (-9,8)(C-1,0 в диметилформамиде ) .Аминокислотный анализ после щелочнрго гидролиза: ТугЗОч 0,87; Туг 0,05; Met 0,89; Gly 1,0. Чистоту продукта провер ют тонкослойной хроматографией на cилyфoлoвы пластинках фирмы Кавалер ЧССР в системе (А)ВиОН (лед на уксусна кислота/вода (4:1:1) и (В) пиридин/ /и бутанол/лед на уксусна кислота/вода (20:30:6:24). 0,66 ; 0,, Пример 2 . Натриева соль V-третбутилоксикарбойил-О-сульфатЬ тирозил-Ь-метионил-глицин . 0,5рО г (0,84 оль) Вос-Туг (SO,Mi||)-Met-Gly-OAt раствор ют в 5 мл смеси вода - этанол в соот ношении 1:1 и при комнатной температуре , f5 мин перемешивают с 3 мл 1 н. NaOH. Раствор упаривают в ротационном с-спарителе при +40°С до половины его объема и оатем разбавл ют - 5 мл воды. Устанавливают 1 н. НС1 при рН раствора 3,0. Водную фазу экстрагируют 50 мл смеси н-бутанол/уксусный эфир (2:1), затем насыщают NaCl и тщательно взбалтывают с двум порци ми указанной смеси растворител до 50 мл кажда . Органические фазы объедин ют, промывают насыщенным раствором NaCl и сушат над Naj,SOi. Растворитель удал ют в вакууме при +kO°C, остаток сушат многократ IM выпариванием при добавлении хлороформа . Стекловидный остаток расти- - - -рают со смесью эфир - петролейный эфир,твердое вещество тщательно промывают эфиром и петролейным эфиром и высушивают в вакууме над РцО|0- Выход; 0,360 г (75); т.пл. ige-igS c. k,p 6,8 (С-0,5 в диметилформамиде ) ,д 0,64; R 0,57. Пример 3- Натриева соль N-третбутилоксикарбонил-О-сульфат-L-тиpoзил-L-мeтиoнил-глицин-Ь-триптофил-Ь-метионил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланимамида . 0,360 г (0,631 -моль) Вос-Туг (SO 3 Na)-Met Gly-OH раствор ют в 20 мл диметилформамида, добавл ют 0,079 мл (0,631 .моль) N-этилфорфолина и .реакционный раствор охлаждают до -25°С. Добавл ют к нему 0,086 мл (0,631 моль) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты и затем выдерживают дл активировани 10 мин при -25°С. 0,00 г (0,631 моль) Тгр-Met-Asp PheN i2 ,pacтвop ют отдельно в 20 мл диметилфор/иамида, смешивают с 0,079 мл (0,631 моль) N-этилморфолина и реакционный раствор охлаждают до . Полученную смесь добав л ют к раствору смешанного ангиддид Бос-Туг SOjNai-Met-Gly-OH. Затем смесь перемешивают 30 мин при и 4 ч при комнатной температуре. Вы павший в осадок амингидрохлорид отсасывают, растворитель удал ют в вакууме с помощью масл ного насоса и в зкотекучий остаток растирают на холоде со смесью н-бутанол - эфир (1:1) . Твердое вещество отсасывают , тщательно промывают хлороформом и высушивают в вакууме над Р/,0,5,. выход: 0,650 г (881).- Т.пл. iS t186°С . tcClp Г-7,1)(,25 в диметилформамиде ) 14Ло 3,7 (,25 в ) Аминокислотный |анализ после щелочно го гидролиза: TyrSOA,0,88; Туг 0,0 Phe 0,9; Asp 1,0. Rf 0,64; Rp 0,67. Пример k. О-сульфат-Ь-тиро зил-Ь-метионил-глицин-Ь-триптофил-Ь-метионил-Ь-аспартил-Ь-фенилалани амид-трифторацетат. 0,650 г (56 мoль) Бос-Туг(SaNa vfet-Gly-Trp-f.fet-Asii-PheNH j смешивают с 0,5 мл метоксибензола и 0,1 мл 1-меркаптоэтанола и затем 20 мин перемешивают с 125 мл трифт уксусной кислоты при 18-20 С. Реакционный раствор добавл ют в двукрат ное количество смеси эфир - петроле ный эфир (1:1) и отсасывают от рыхлого осадка. Тщательно промывают ос док петролейным эфиром и высушивают в вакууме над РцО,о/КОН. Выход:0,550 ( 85). Rf. 0,32 и 0,62 (около 20°); Щ 0,57 и 0,77 (около 20°) Аминокислотный анализ после щелочного гидролиза: (305Н) 0,68; Туг 0,23; Asp 0,74; Gly 1,0; Met 1,6; Phe 0,9; Trp 1,1. Пример 5. N-сукциноил-О- сульфат 1,-тирозил-Ь-метионил-глицин-L-трип ТОФИЛ-L-мет ион и Л-L-a cna pтил-Ь-фенилаланинамид . 0,550 г (0, моль) продукта полученного в примере k, раствор ют в 10 мл диметилформамида, при перемешивании смешивают с 181 мл (0, -моль) N-этилморфолина (никакое другое основание не примен ть ) и охлаждают реакционный раствор .до . Затем в течение tO мин добавл ют при перемешивании 0,062 г 0,00062 1 .моль) нтарного ангидрида и одновременно добавл ют по капл м 0,079 мл N-этилморфолина, Реакционный раствор перемешивают еще в течение 3 ч и оставл ют на но.мь при +Ц°С. Растворитель удал ют в вакууме на масл ном насосе при +kOC., и в зкий остаток растирают с холодной смесью н-бутанол - эфир, твердое вещество отсасывают, тщательно промывают тетрахлорметаном, эфиром и петролейным эфиром и высушивают в вакууме над Pj, Ощ. Выход: 0,588 г (91%). Т.пл, 172-175°С. Аминокислотный анализ после щелочного гидролиза: ТугЗОц 0,72, Тут 0,18; Asp 1,0; Gly 1,1; Met 1,6; Phe 0,93; Тг-р 0,75; Rf. 0,53 и 0,70 (); Lp .. 064; и 0,68. (- 20%). Очистка гель-фильтрацией на сефадексе G-25. Набухший в течение нескольких часов сефадекс G-25 в 0,1 н.растворе ацетата аммони (прибавлением аммиака к 1н. уксусной кислоте до рН 6,5) ввод т в колонку длиной 120 см и диаметром k см. Загружают раствор 200 мг неочищенного дезаминоктапептида в 8 мл О,1 н. раствора ацетата аммони и 2 мл диметилформамида и элюируют 0,1 н. раствором ацетата аммони . При скорости прохождени 15 мл/ч определ ют концентрацию пептида измерением экстинкции при 280 им (Uvicord), элюат собирают фракци ми по 8 мл. Фрации содёржат дeзaминo-PZ-oктaпeптид, фракции 323 - десульфатированный побочный продукт. Выход 0,116 г (60) и 0,055 г () десульфатированного гептапептида М 3, ± 0, 0,25 в воде tcL 9,А ± 0,25 в диметилформамиде Аминокислотный анализ после щелочного гидролиза ( Tyr(OSOn Тут Asp Gly Met Phe Trp 0,80 0,08 1,0 1,0 1,64 0,90 1,8 Пример 6. N-этоксисукцинил-0-сульфат-L-тирозил-Ь-метионил-глицин-Ь-триптофил-Ь-метионил-Ь-аспар- . тил-Ьфенилаланин-амид. 0,190 г (0,167 ;моль) Tyr(6sOj)- fet-Gly-Tтp- fet-Asp-Phe Шг. (пример ) раствор ют в 10 мл диметил- . формамида и добавл ют 0,0182 мл (О , Й6 -1моль) N-этилморфолина. Реакционную смесь охлаждают до Ос и

лсбаол ют 0.059 г (0,182 ;- Моль} эфира 2 . , 5 трихлорфеиил--этокси нтарно кис,/|от:1, иереА-.ещцЕзают 30 мин при О и остаз,п ют на 2 дн при комнатной ,уре. Растворитель удал ют в вакууме при , масл нистый остаток днгерируют эфиром/петролейным эфиром, твердое вещество отсасывают и промьшсзьот хлороформом, эфиром и петролейным эфиром. Выход: 0, г ,(751) ; Rfp, - 0,61 12 в; Rf 0,705 с десульфатированного, ацилированного гептапептида,

Очистка разделением противотоком

В качестве разделительной систем используют хлороформ/метанол/о,1 н, ацетат аммони (11,1:8:10). После 32 разделительных стадий и лиофилизации выход продукта составл ет 8-t% (фракции 24-31) нар ду с 153 десульфированного, ацилированного гептапетида (фракции 20-22}-Кислотно-щелочное титрование и определе: ние сульфата (ВаЗО) дают 90% или вычислительных значений.

Пример 7- п-гидроксифенилацетил 0-сульфат-Ь-тирозил-Ь-метионил-Ь-триптофил-Ь-метилнил-Ь-аспартил-L-фенилаланинамид .

0,190 г (0,167 моль) сульфата гептапептида (по примеру ) раствор ют в 10 мл диметилформамида, добавл ют 0,0182 мл 0,1)6 ,моль) М--этилморфолина и реакционную смесь охлаждают до . Добавл ют 5б мг (0,182 1моль) эфира 2 ,( ,5 трихлорфенил-п .-гидроксифенилуксусной кислоты , перемешивают 30 мин при О С и два дн при комнатной температуре. Растворитель удал ют в вакууме при +45°С, и масл нистый-остаток дигерируют эфиром/петролейным эфиром (1:1). Твердое вещество отсасывают и промывают хлороформом, эфиром петролейным эфиром. Выход: 0,150 г (80); Rpb 0,59 при R 0,69- десульфированного, ацилированного гептапептида. Очистку провод т методом противоточного/разделени . Выход (фракции 24-31) нар ду с 15 десульфированного гептапептида (фракции 11-23). Кислотно-щелочное титрование и определение сульфата (BaSO) дают 95% или 93 вычисленных значений: „

Ьос-Туг -Met -Сгу -OAt

0, комплекс пиридин-ЗОг

Boc-Tur-CSOj-Nl-Ll-Mjt-GPyOAtffS 5,,t4DH

(SD3-Na)-Met-&2y-OH(2)- Trp-Met- .5р-PheMHj 80

Гинтез метЪдом смешанных ...ангидридов

bDC TyrCSOsN5)-MEt -Щ -Тгр-Ме -Scip-PheWH (5) -в5%

. 51 TFE/Cg HsOPHj/HSA.T Tyr(S03)M8t-G y-Tpp - Met -Xsp-PHeNHsL TFE

(Ч) .-CO ,

С Иг- со

Q07oсесрадекс .

tli% Туг Met- fiBi/ -Trp -Asp -PheMHa (5)

Ho6c-DH --eHj -co-Tyr(so;)-Met-Gey

-Met-/ sp -PheWHi 75% -CO-HHi-CO-D-CfiHj.Cei H5CtO-CO-CH2.-CHa CO-Tyr(SDg)-Het Щ Trp-Met AspPheNH a (6)

so% -HO-CsHM-CHa-CO-O-CbHaCtib HO-Cs -Нч-СНг-СО-Т4г(50з)-Ме1-&еу Тгр -Met- sp-pheMH2 « ( 1 .

формула изобретени

1,Способ,получени пептидов,содержащих сульфат тирозина 6-20 остатков аминокислоты с этерифицированным серной кислотой тирозином,путем сульфировани защищенного пептидного остатка, содержащего тирозин, конденсации его

обычными методами пептидной химии с аминогруппой другого пептида, содержащего 2-14 остатков аминокислоты, и последующего замещени по .J -аминогруппе после отщеплени защитной группы, отличающийс тем, что этерифицированный серной кислотой по тирозину N-защищенный пептид содержащий 2-6 остатков аминокислоты , используют в качестве промежуточного продукта.

2,Способ получени Х-Т7г(50)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe//H , где:

X %о,оос-снг-снг-со-, HO-CgHgai -cq

HOOC-HCp-QIc-CO и другие ацильные

. с.J

остатки по п,1, отличающий с тем, что защищенный трипептидный эфир Y-TyT-Met-Gly-0-алкил сульфируют, алкилэфирную группу отщепл ют омылением, защищенный сульфированный трипептид конденсируют с Trp-Met-Asp-PheMlg преимущественно методом смешанных ангидридов, и полученный после отщеплени защитной группы гептапептид ацилируют при добавлении слабой органической щелочи, преимущественно М-этилморф.олина.

1

3. Способ по пп. 1 и 2, о т л и Мающийс тем, что при переработке продукта после сульфировани используют воднощелочной буферный раствор, преимущественно- NH5/NH(,C1.

k. Способ по п.2, от л и ч а ю щ и и с тем, что дл выделени защитного сульфированного трипептида используют смеси высших спиртов с

уксуснокислым эфиром, преимущественно Н-бутанолэтилацетат.

5. Способ -по П.2, о J ли чающий с тем, что, в качестве |щитной группы используют TpetH4HbiH бутилоксикарбонил и ее отщепление JOT сульфированного гептапептида осуществл ют 75-85%-ной трифторуксусной кислотой при добавлении и избытке метоксибензолмеркаптоэтанола при комнатной температуре.

6. Способ по ПП.1, 2 и 5 о т .лГй чающийс тем, что получаемые при кислотной.обработке фракции де- сульфатированного пептида такой же аминокислотной послёдовательности. отдел ют после ацилировани аминогруппы .

Claims

формула изобретения

1. Способ.получения пептидов ,содер. жащих сульфат тирозина 6-20 остатков аминокислоты с этерифицированным серной кислотой тирозином,путем сульфирования защищенного пептидного остатка , содержащего тирозин , конденсации его _,₀ обычными методами пептидной химии с аминогруппой другого пептида, содержащего 2-14 остатков аминокислоты, и последующего замещения no Д, -аминогруппе после отщепления защитной группы, отличающийся тем, что этерифицированный серной кислотой по тирозину N-защищенный пептид содержащий 2-6 остатков аминокислоты, используют в качестве ₅₀ промежуточного продукта.
2. Способ получения X-Tyr(SO^)-Met -Gly-Trp-Met-Asp-Pheift-l_e, где:

X = Н^.О_гООС-СН_£-СНг-СО-, IIO-C₆HgC1I_r СО„ НООС-НС_г-СН₅-С0 и другие ацильные ⁵⁵ остатки по п.1, отличающийся тем, что защищенный трипептидный эфир Y-Tyr-Met-Gly-O-алкил сульфируют, алкилэфирную группу от13 920С щепляют омылением, защищенный сульфированный трипептид конденсируют с Trp-Met-Asp-PheNHg преимущественно методом смешанных ангидридов, и полученный после отщепления защитной ' 5 группы гептапептид ацилируют при добавлении слабой органической щелочи, преимущественно N-этилморфолина.
3. Способ по пп. 1 и 2, о т л и ‘чающийся тем, что при перера- ¹⁰'ботке продукта после сульфирования используют воднощелочной буферный раствор, преимущественно- NH₃/NHj,Cl.
4. Способ по п.2, отличающий с я тем, что для выделения за щитного сульфированного .трипептида используют смеси высших спиртов с

53 14- уксуснокислым,эфиром, преимущественно /н-бутанолэтилацетат.
5· Способ по п.2, обличающий с я тем, что, в качестве щитной группы используют третичный' бутилоксикарбонил и ее отщепление ίοτ сульфированного гептапептида осуществляют 75-85%-ной трифторуксусной кислотой при добавлении и избытке метоксибензолмеркаптоэтанола при комнатной температуре.
6. Способ по пп.1, 2 и 5, о т лГ и чающийся тем, что получаемый при кислотной обработке фракции де-? сульфатированного пептида такой же аминокислотной послёдовательности. отделяют после ацилирования аминогруппы.