SU876111A1

SU876111A1 - Способ диагностики угрозы прерывани беременности

Info

Publication number: SU876111A1
Application number: SU792828396A
Authority: SU
Inventors: Владимир Степанович Толмачев; Игорь Борисович Беклемищев; Елизавета Ивановна Боровицкая; Владимир Павлович Шабаев
Original assignee: Казахский Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им. Кирова; Научно-Исследовательский Институт Акушерства И Гинекологии Мз Казсср
Priority date: 1979-10-17
Filing date: 1979-10-17
Publication date: 1981-10-30

Description

I

Изобретение относитс к медицине, а именно, к акушерству.

Известен способ диагностики угрозы прерывани беременности путем выделени лимфоцитов крови .с последующей инкубацией их в среде, окраски акридиновым оранжевым и измерени и гтенсивности флуоресценции tlj«

Однако известный способ обеспечивает низкую точность диагностики и не позвол ет проводить раннюю диагностику , что ограничивает область его использовани . .

Цель изобретени - повышение точности способа и ранней диагностики.

Указанна цель достигаетс тем, что при осуществлении способа диагностики угрозы прерывани беременности путем вьщелени лимфоцитов крови с последующей инкубацией их в среде, окраски акридиновым оранжевым (АО) и измерени интенсивности флуоресценции,, в среде предварительно до внесени лимфоцитов инкубируют

.эритроциты обследуемой в течение 5-60 мнн, далее эритроциты удал ют, после инкубации лимфоцитов интенсивность флуоресценции измер ют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубации диагностируют угрозу прерывани беременности.

Способ осущест1вл ют следующим образом .

to

Берут кровь из локтевой вены пациента в количестве 5-10 мл, ос акдаюг эритроциты, надосадочную жидкость с лимфоцитами отдел ют от эритроцитов. Эритроциты трехкратно отмывают от

15 плазмы в 0,85%-ном растворе хлористо го натри в объеме,3-х красно превышак цем объем эритроцитов. Затем из эритроцитарной массы и раствора Рин- гера-Локка в объемном отношении 1:2

20 готов т взвеси и помещают в диффузи- онную камеру, две полукамеры которой разделены мембранным фильтром с диаметром пор 0.,4 мкм. Эритроциты инку3 биру(рт n течение 30 мин при периоди встр хивании дл предотвращени их оседани . В результате инкубации эритроцитарный белок диффузно проникает в полукамеру с раствором Рингера-Локк По истечении срока инкубации раство Рингера-Локка с проникшими туда эри троцитарными белками извлекают и до бавл ют в культуру с лимфоцитами, к торые инкубируют на покровных стеклах в течение 5-60 мин. После инкуб ции покровные стекла с приклеившими лимфоцитами вынимают и фиксируют в смеси спирт-ацетон (1:) в течение 30 мин при 4°С. Препараты с клетками окрашивают следующей последовательности. Этиловый спирт . Видистшширо- . ванна вода Ацетатный буфер (.РН 4,4) Раствор АО на буфере ) Раствор АО на буфере (10 м) Препараты заключают в каплю буфе ного раствора, содержащего красител АО (), и помещают на предметно стекло, кра которого окантовывают рафином или резиновым клеем. Измерение интенсивности св зывани красител АО с клетками провод т на цитофлуоринефелометре. Причем интенсивность флуоресценц измер ют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивност флуоресценции к концу инкубации диагностируют угрозу прерывани беременности . Клинико-лабораторные исследовани с использованием предлагаемого спос 4 ба показали (табл, U, что И1ггенсйьность флюоресценции повышаетс в 2 раза при действии среды, где инкубировали эритроциты больных. Действительно , сравнива столбец 2, где дана интенсивность флуоресценции лимфоцитов донора с собственной сывороткой , со столбцом 4, где дана интенсивность флуоресценции при добавлении сыворотки больной видно, что флуоресценци уменьшаетс в среднем на 7,5% (столбец 5 . В то как добавление в 5-минутную культуру среды, где инкубировали эритроциты этих же больных, показало увеличение интенсивности флуоресценции (столбец 6J в 2 раза и составило 16% ,столбец 8). Следует обратить внимание, что в тех случа х,когда процент отличий интенсивности флуоресценции под действием сыворотки больных был низок (столбец 5, номера по пор дк.у 4,5,6 и з атрудн л постановку диагноза, то под действием среды, где инкубировали эритроциты пациентов, процент отличий достоверно увеличилс (столбец 8) и позвол л поставить точный диагноз угрозы выкидыша. 60 минутное культивирование лимфоцитов донора с сывороткой крови больных показало (табл.2} что интейсивность флуоресценции лимфоцитов (ст олбец 4) увеличиваетс в среднем на 6% (столбец 5), в то врем как добавление в культуру среды, где инкубировали(эритроциты пациентов, вызывало увеличение интенсивности флуоресценции (столбец 6) почти в 3 раза и составило в среднем 18% (столбец 8), что .способствовало установлению более точного диагноза. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает повышение точности диагностики , а также позвол ет проводить более раннюю диагностику угрозы прерывани беременности.

5

-- 0)

ж о. S о

чО

:«

f- Н

л и

§

к X .

(U и 2 -ш оо S а--

§0) 10 S 0) Е

§к и X о (б ж ж

ю л ж

о ffl и

11

ж О) о.

&&г

d в к а о S о п а

л

о

ч

о

-8

о - о

со о

Ю о о г о

vr о

о

то го о

г о

V и V «V I

II V 4J о. а

- а

л сх

(X

«о

SU

(

00

vO

со о

1Л

00

о

k

I

t ГЛ

м

м +1

УЭ

. f

+1 -«I

+(

ю о «м

о

г.

г-о

00

00 г

ON

«п

со

л

ю

«

«ч

и

Claims

1. Riqjer R. Microfluorimetric characterization of intracel lular nucleic acids nucloopratelnsby act idine oranqe.- Acta Physio .Seand. 1966, V 67, стр.267.