SU860718A1 - Реактив дл определени формиата или соединений, переход щих в формиат - Google Patents

Реактив дл определени формиата или соединений, переход щих в формиат Download PDF

Info

Publication number
SU860718A1
SU860718A1 SU782563049A SU2563049A SU860718A1 SU 860718 A1 SU860718 A1 SU 860718A1 SU 782563049 A SU782563049 A SU 782563049A SU 2563049 A SU2563049 A SU 2563049A SU 860718 A1 SU860718 A1 SU 860718A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
formate
reagent
water
mol
solution
Prior art date
Application number
SU782563049A
Other languages
English (en)
Inventor
Михаль Герхард
Лаубе Рольф
Редер Альберт
Шнайдер Вальтер
Original Assignee
Берингер Маннхайм Гмбх (Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Берингер Маннхайм Гмбх (Фирма) filed Critical Берингер Маннхайм Гмбх (Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU860718A1 publication Critical patent/SU860718A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0008—Oxidoreductases (1.) acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y102/00—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
    • C12Y102/01—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.2.1)
    • C12Y102/01002—Formate dehydrogenase (1.2.1.2)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Изобретение относитс  к аналитической химии, а именно к составам дл  определени  формиата или соединений , переход щих в формиат. Известен реактив дл  определени  формиата или соединений, переход щих в формиат, на водной основе, содержащий аденозинтрифосфат и тетрагидрофолиевую кислоту l . Недостатком указанного реактива  вл етс  его низка  эффективность. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемо му результату  вл етс  реактив дл  определени  формиата или соединений переход щих в формиат, на водной ос нове, включающий аденозинтрифосфат, триэтаноламин, хлорид магни , ацета натри , гидроокись кали  И тетрагид рофолиевую кислоту L JНедостатком известного реактива дл  определени  формиата или соединений , переход щих в формиат,  вл етс  также его низка  эффективность Цель изобретени  - повьпаение эффективности реактива. Поставленна  цель достигаетс  тем, что реактив дл  определени  фо миата или соединений, переход щих в формиат, на водной основе, дополнительно содержит формиатдегидрогеназу из Candida bo id i nil никoти lдeн-.индинуклеитид лити , динатрийфосфа т -й мононатрийфосфат при следующем соотношении компонентов, вес.%: Формиатдегдцрогеназа из Candida 0,001-0,1 boidini 1 Никотинаденин0 ,007-0,7 динуклеотид лити  0,153-3,1 Динатрийфосфат 0,01-0,20 Мононатрийфосфат Остальное Вода Пример 1. А . Получение фермента . 400 г Candida boidIпii , культивируемого на метаноле, в глубокозамороженном состо нии размораживают в 1200 мл 50п М раствора аммонсульфата и держат в нем 1 ч при 37 С. Потом рН суспензии устанавливают с помощью 10%-ного раствора полиэтиленамина на значении 7,5. Осадок центрифугируют , выдерживают в 9%-ном по объемурастворе фосфатгел  с рН 7,5 и спуст  ЗО мин центрифугируют . После промывани  0,5 М раствором Nad гель экстрагируют с помощью 0,2 М фосфатного буфеоа с
рН 7,5. Экстракт помещают в 3,2 М раствор аммонсульфата, причем рН поддерживаетс  равным 7,5. Образованный осадок отдел ют и после растворени  в фосфатном буфере (рН 7,5) хроматографируют через ДЕАЕ-целлюлоэу (целлюлоза, модифицированна  соединением диэтиламиноэтанола), причем , элюирование осуществл ют с увеличением концентрации буфера фосфата с рН 7,5. Содержание ФДГ фракции объедин ют, вновь внос т на 3,2 М раствор аммонийсульфата, оставл   рН посто нным. Осадок отдел ют, раствор ют в фосфатном буфере с рН 7,5 и после диализа обрабатывают гидроксилапатитом. После отделени  гидроксилапатита раствор лиофилизируетс .
Выход 0,7 г лиофилизата со специфической активностью около 3,мг протеина. Общий выход составл ет 43%
Б. Определение формиата.
0,02 мл 0,100 М водного НАД-раствора , 0,02 мл 2,5/JM раствора формиата натри  и 0,8 мл 0,05 М фосфатбуфера с рН 7,5 перемешивают между собой и доливают до 1,0 мл воды.
В пробе, вз той дл  сравнени , раствор формиата замен етс  равным количеством воды. Дл  обеих проб при 366 нм измер етс  начальна  экстракци  . После этого реакци  продолжа етс  за счет добавлени  0,2 и ФДГ. Спуст  30 мин определ етс  конец экстинции.
Результат вычисл ют .с величиной дл  НАДН 3,4 cм -/fJ|K по литературным данным. В 6-ти параллельно проводимых опытах получаетс  значение при коэффициенте вариации 1,28%. Таким образом,- результат статически не должен отличатьс  от теоретически определенной величины.
Определени  в этих случа х провод т следующим образом.
Пример 2. Определение оксалата .
А. Оксалатадекарбоксилазу из Collybialutipes раствор ют в 1 мл 0,2 моль/л и цитратнсрго буферного раствора с рН 4,О«К 0,07 мл этого раствора смешивают Q 0,1 мл раствора пробы оксалата 0,5 1 оль/л и 30 мин выдерживают при комнатной температуре. Затем к пробе оксалата прибавл ют 0,8 мл реактива из примера 1. После смещени  замер ют экстинкцию при 366 нм и прибавл ют формиатдегидрогеназу . После 30 мин выдерживани  при комнатной температуре снова измер ют экстИнкцию.
Результаты рассчитывают по лите .ратурным данным дл  НАДН -3,4 см /ммоль 99,4% вз той величины ) .
В трех параллельных опытах получают 0,0497 ммоль (99,4% вз той величины ) .
0,01 мл 0,010 м/л водного НАДраствора , 0,02 мл 2,5 ммоль/л раствора натрийформиата и 0,1 мл 0,05 моль/л фосфатного буферного раствора с рН 7,5 смешивают и доливают до 1,0 мл воды.
В сравнительной пробе раствор формиата замен етс  одинаковым количеством воды. ,Цл  обеих проб измер етс  затем начальна  экстинкци  при (366 нм. В результате добавки 0,04 ед ФДК начинаетс  реакци . Через 50 мин считьшаетс  конечна  экстинкци , ;
Результат рассчитывают с литератур ной величиной дл  НАДН 3,4 см / моль. При 6 параллельных опытах получаетс  0,0502 мол ,3% введенной величиньГ при вариационном коэффициенте 1,29% .
Б, Верхний предел
мг%
12HJ3 30,593,059
. Hg.O 2,020,202 .
НАД-Li 2Й20 7,050,705
адг. 1,430,143
«2°
Остальное Остальное
0,01 мл 0,01 моль/л водного НАДраствора , 0,02 мл 2,5 моль/л раствора на г-рнйформиата и 0,8 мл 0,125 моль/л фосфатного буферного . раствора с рН 7,5 смешивают и доливают до IjO мл воды,
В сравнительной пробе раствор формиата замен етс  одинаковым количеством воды. Дл  обеих проб измер етс  затем начальна  экстинкци  при 366. нм. Потом начинаетс  реакци  в результате добавки 5,0 ед« ФДГ. Через 10 мин считываетс  конечна  экстинкци .
Результат рассчитывают с литерату рной величиной дл  НАДН 3,4 см /моль. При 6 параллельных опытах получаетс  0,0504 ммоль (100,7% введённой величины при вариационнбм коэффициенте 1,28%).
в. . мг %
Na2.HP04 12Н„0 6,12
0,612 МаНоРОл- 0,40 0,040 НАД-Li-ZH O 0,07 0,007 ФДГ- 1,43 0,143
Hg O991,98 99,198
0,01 мл 0,01 моль/л водного НАДраствора , 0,02 мл 2,5 моль/л раствора натрийформиата и 0,4 мл О,05 моль/л фосфатного буферного раствора смешивают и доливают до О, 2 мл воды,
В сравнительной пробе раствор фомиата замен етс  одинаковым количеством воды. Дл  обеих проб измер етс  затем началь.на  экстинкци  при 366 нм, В результате добавки 5,0 ед ФДГ начинаетс  реакци . Через 10 ми считываетс  конечна  экстинкци .
Результат рассчитывают с литературной величиной дл  НАДН 3,4 сМ //моль. При 6-ти параллельно проводимых опытах получаетс  0,0492 моль (98,3% введенной величи ны при вариационном коэффициент те 1,31%) . Na HP04-12Hj,D 24,48 2,448 М.аНлРОлН О 1,611 0,161 НАД-112Н20 7,05 0,705 ФДГ 0,056 0,006 Пример 3. Определение эфирамуравьиной кислоты. 1 ммоль эфирамуравьиной кислоты нагревают в водном растворе с 1,3 моль NaOH до тех пор, пока не перестанет измен тьс  величина рН. Затем рН реакционного-раствора уста навливают на 7,5 фосфорной кислотой добавкой воДы снижают концентрацюо образовавшегос  формиата до 2,0 ммоль/л, а затем, как и в преды дущем примере, провод т определение добавкой реактива из примера 1. П р и м е р 4. СЦ. Нижний предел , 1.0,1 мл 0,10 моль/л водного НАДраствора , 0,02 мл 2,5 моль/л раств ра натрийформиата и 0,8 мл 0,10 моль/л фосфатного буферного раствора с рН 7,5 смешивают и доли вают до 1,0 мл воды.
Формиатдегидрогеназа из Candida
0,001-0,1 bo I d i п i i
0 Никотинаденин0 ,007-0,7 динуклеотид лити  0,153-3,1 Динатрийфосфат

Claims (3)

  1. 0,01-0,20 Мононатрийфосфат Остальное Вода в сравни: ельной пробе растрор формиата замен етс  одинаковым количеством воды. Дл  обеих проб измер етс  затем начальна  экстинкци  при 366 нм. В результате добавки 0,2 ед. ФДГ начинаетс  реакци . Через 30 мин считываетс  конечна  экстинкци . Результат рассчитывают с литературной величиной дл  НАДН 3,4 см / моль. При 6 параллельных опытах получаетс  0,0494 моль (98,7% введенной величины при вариационном коэффициенте .2,3%). Формула изобретени  Реактив дл  опред глени  формиата или соединени , переход щих в формиат , на водной основе, о т л и чающийс  тем , что, с целью повьшени  эффективности реактива, он-лополнительно содержит формиатдегидрогеназу 13 Candida boidiпfi никот1инадениндинуклеотид лити , динатрийфосфат имононатрийфосфат при следующем соотношении компонентов, вес.%: Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1.Bergmeyer H.U. Methoden der enzymat i schen Analyse, 3- An-flage, Band il, 1974,, s 1591-1596,
  2. 2.Bergmeyer H.U. Methoden der enzymatIschen Analyse,
  3. 3. Anflage, Band M, 1974,s 1591-1596 (прототип ) .
SU782563049A 1977-03-18 1978-01-12 Реактив дл определени формиата или соединений, переход щих в формиат SU860718A1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2712004A DE2712004C2 (de) 1977-03-18 1977-03-18 Verfahren zur Bestimmung von Formiat oder in Formiat überführbaren Verbindungen und hierfür geeignetes Reagens

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU860718A1 true SU860718A1 (ru) 1981-08-30

Family

ID=6004042

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU782563049A SU860718A1 (ru) 1977-03-18 1978-01-12 Реактив дл определени формиата или соединений, переход щих в формиат

Country Status (13)

Country Link
US (1) US4229529A (ru)
JP (1) JPS584917B2 (ru)
AT (1) AT357980B (ru)
BE (1) BE864256A (ru)
CH (1) CH640271A5 (ru)
DE (1) DE2712004C2 (ru)
FR (1) FR2384258A1 (ru)
GB (1) GB1556393A (ru)
IT (1) IT1089238B (ru)
NL (1) NL179221C (ru)
SE (1) SE429558B (ru)
SU (1) SU860718A1 (ru)
ZA (1) ZA781569B (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2833723A1 (de) * 1978-08-01 1980-02-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagens zur bestimmung eines oxidierten pyridincoenzyms
DE2930087A1 (de) * 1979-07-25 1981-02-26 Biotechnolog Forschung Gmbh Verfahren zur kontinuierlichen enzymatischen umwandlung von wasserloeslichen alpha -ketocarbonsaeuren in die entsprechenden alpha -hydroxycarbonsaeuren
DE3527268A1 (de) * 1985-07-30 1987-02-05 Biotechnolog Forschung Gmbh Verfahren zur reinigung und gegebenenfalls gewinnung von formiat-dehydrogenase (fdh) aus candida boidinii und fdh-haltiges produkt
JP3485182B1 (ja) 2002-06-28 2004-01-13 東京応化工業株式会社 パターン微細化用被覆形成剤およびそれを用いた微細パターンの形成方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE42152B1 (en) * 1975-08-15 1980-06-18 Irish Stone Foundation Method for determination of oxalic acid

Also Published As

Publication number Publication date
FR2384258A1 (fr) 1978-10-13
FR2384258B1 (ru) 1982-09-03
CH640271A5 (de) 1983-12-30
JPS53116895A (en) 1978-10-12
DE2712004C2 (de) 1979-05-23
SE7801693L (sv) 1978-09-19
AT357980B (de) 1980-08-11
IT1089238B (it) 1985-06-18
NL179221B (nl) 1986-03-03
NL179221C (nl) 1986-08-01
US4229529A (en) 1980-10-21
BE864256A (fr) 1978-08-23
JPS584917B2 (ja) 1983-01-28
ATA869777A (de) 1980-01-15
GB1556393A (en) 1979-11-21
SE429558B (sv) 1983-09-12
NL7800028A (nl) 1978-09-20
ZA781569B (en) 1979-04-25
DE2712004B1 (de) 1978-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Datta et al. Mechanism of Action of Transketolase: I. Properties of the crystalline yeast enzyme
Darrow et al. [25] Hexokinase from Baker's yeast: ATP+ Hexose→ ADP+ Hexose-6-phosphate+ H+
Poulter et al. Prenyltransferase: the mechanism of the reaction
Shepherd et al. [2] Citrate synthase from rat liver:[EC 4.1. 3.7 Citrate oxaloacetage-lyase (CoA-acetylating)]
Utter et al. 4 Formation of Oxalacetate by CO2 Fixation on Phosphoenolpyruvate
Ciotti et al. [128] Procedures for determination of pyridine nucleotides
Lindberg et al. A new immobilized NAD+ analogue, its application in affinity chromatography and as a functioning coenzyme
Takayama et al. A new enzymatic method for determination of serum choline-containing phospholipids
Penefsky Differential effects of adenylyl imidodiphosphate on adenosine triphosphate synthesis and the partial reactions of oxidative phosphorylation
US3907644A (en) Creatinine amidohydrolase composition and process for the determination of creatinine
Hansen et al. Glycolate metabolism in Escherichia coli
US4273874A (en) Acidic uricase and process for production thereof
Scrimgeour et al. [113] Serine hydroxymethylase: L-Serine⇄ Glycine+ HCH0
SU860718A1 (ru) Реактив дл определени формиата или соединений, переход щих в формиат
Hatfield et al. Threonine Deaminase from Bacillus subtilis: I. PURIFICATION OF THE ENZYME
Williams-Ashman et al. Oxidative phosphorylation catalyzed by cytoplasmic particles isolated from malignant tissues
Bañuelos et al. In situ study of the glycolytic pathway in Saccharomyces cerevisiae
Shimamoto et al. Taurine catabolism: II. Biochemical and genetic evidence for sulfoacetaldehyde sulfo-lyase involvement
Simpson [81] d-Xylulokinase
Schräder et al. Purification and characterization of protein PC, a component of glycine reductase from Eubacterium acidaminophilum
Yamada et al. Glycerol dehydrogenase from Cellulomonas sp. NT3060: purification and characterization
Outlaw Jr et al. Measurement of 10− 7 to 10− 12 mol of potassium by stimulation of pyruvate kinase
KAZIRO Quantitative determination of thiamine pyrophosphate using apocarboxylase and alcohol dehydrogenase
Wolfe et al. Glucosamine degradation by Escherichia coli. I. Observations with resting cells and dry-cell preparations
Korzenovsky et al. Stoicheiometry of the citrulline phosphorylase reaction of Streptococcus lactis