SU811530A1

SU811530A1 - Method of producing the substances possessing antitumoral activity

Info

Publication number: SU811530A1
Application number: SU792818310A
Authority: SU
Inventors: О.К. Гаврилов; Н.С. Мурашова; А.В. Сиротенко; М.А. Козлова; Э.Н. Луковкина; В.М. Русанов; Н.Н. Клемпарская; Т.Д. Кузьмина; А.М. Уланова; Г.А. Шальнова; И.П. Терещенко; З.М. Сараева; Ю.Я. Грицман; Э.К. Возный
Original assignee: Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови; Институт биофизики; Московский научно-исследовательский онкологический институт им.П.А.Герцена
Priority date: 1979-08-23
Filing date: 1979-08-23
Publication date: 1987-08-23

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАКЯЦЕГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ, путем предварительной ауто- г.емостимул ции доноров последующим забором крови, плазмофореза ее, вьоде- лени из полученной плазмы глобулино- вой фракции и осаждени их нее целевого продукта; отличающий- с тем, что, с целью повышени активности целевого продукта, осаждение его ведут последовательной обработкой глобулиновой фракции этанолом, вз тым в концентрации 26,53 и 96%, охлажденным до (-10)-(+15)"С.Iсл§00сл&9A METHOD FOR OBTAINING A SUBSTANCE, POSSESSING ANTI-TUMOR ACTIVITY, by preliminary auto stimulation of donors by subsequent blood collection, plasmaphoresis, separation from the obtained plasma globulin fraction and sedimentation of it with its target product; characterized in that, in order to increase the activity of the target product, its precipitation is carried out by sequential processing of the globulin fraction with ethanol, taken at a concentration of 26.53 and 96%, cooled to (-10) - (+ 15) "C.Islo 00s & 9

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения лечебных препаратов на основе белков плазмы крови человека. ,The invention relates to medicine, namely to methods for producing therapeutic preparations based on human plasma proteins. ,

Известен способ получения вещества, обладающего противоопухолевой активностью путем предварительной аутогемос,тимуляции доноров последующим забором крови, плазмофореза ее, вы- ц деления их полученной плазмы глобулиновой фракции и осаждения из нее целевого продукта.A known method for producing a substance having antitumor activity by preliminary autohemosemia, stimulation of donors by subsequent blood sampling, plasmophoresis of it, selection of their obtained plasma of globulin fraction and precipitation of the target product from it.

Однако получаемое известным способом вещество обладает низкой актив- -1 ностыо, что снижает эффективность лечения.However, the substance obtained in a known manner has a low activity -1, which reduces the effectiveness of treatment.

Целью изобретения является повышение активности целевого продукта.The aim of the invention is to increase the activity of the target product.

Цель достигается тем, что при осу- 2 ществлении способа получения вещества, обладающего противоопухолевой активностью путем предварительной аутогемостимуляции доноров последующим забором крови, плазмофореза ее, вы- ί деления из полученной плазмы глобулиновой фракции и осаждения из нее целевого продукта, осаждение его ведут последовательной обработкой глобулиновой фракции этанолом, взятым в < концентрации 26,^ и 96%, охлажденным до -10 - 15°С.The goal is achieved by the fact that, when implementing the method of obtaining a substance with antitumor activity by preliminary auto-hemostatization of donors by subsequent blood sampling, plasmophoresis of it, separation of the globulin fraction from the obtained plasma and deposition of the target product from it, its deposition is carried out by sequential processing of globulin fractions with ethanol taken in <concentration of 26, ^ and 96%, cooled to -10 - 15 ° С.

Способ осуществляют следующим образом. ·,The method is as follows. ·,

Предварительно при отсутствии противопоказаний донорам крови проводят аутогемостимуляцию с последующим . плазмофорезом. Аутогёмостимуляцию проводят не более 2-х раз во избежании ₍снижения выхода антител. С этой целью из вены Донора стерильным шприцем извлекают 8-8,5 мл крови и немедленно вводят внутримышечно. Через 2-4 ч после аутогемостимуляции проводят ₍плазмофорез известным методом.Previously, in the absence of contraindications to blood donors, auto-haemostimulation is performed followed by. plasmophoresis. Auto-haemostimulation is carried out no more than 2 times in order to avoid ₍ decrease in antibody output. To this end, 8-8.5 ml of blood is removed from a donor vein with a sterile syringe and immediately administered intramuscularly. 2-4 hours after auto-haemostimulation is performed ₍ plasmophoresis by a known method.

Полученную плазму титруют при помощи реакции Уанье с антигеном почки человека на наличие аутоантител, хранят при температуре -20°С до' 10 мес, затем подвергают фракционированию с помощью этанола. Для фракционирования подбирают только плазму, содержащую аутоантитела. Наличие аутоантитела оценивают на основании реакции Уанье с плазмой крови донора и с антигенами гомологичной почки. Для фракционирования наиболее пригодными являются пробы с резко положительными реакциями. Из отобранной плазмы получают осадок фракции* П+Ш. Затем из осадка готовят суспензию с 0,9%-ным раствором натрия хлорида и дистиллированной водой и добавляют равный объему суспензии объем 26%-ного этанола. Температура осаждения при этом составляет —3°С. pH смеси.корригируют ацетатным буфером до 5,0-5,1. В этих условиях выпадают липоиды и глобулины. Затем центрифугированием удаляют липоиды и 96%-ным этанолом осаждают глобулины. При этом конечная температура осаж-г дения -5 -8°С, pH смеси корригируют 1 М NaHCO, до 6,9-7,0. Затем осадок глобулина отделяют на центрифуге и из него' готовят белковый раствор с гликоколом, фильтруют через мезгу и подвергают лиофильной сушке. Сухой порошок растворяют в дистиллированной воде до концентрации 5% и подвергают стерилизующей фильтрации на фильтре Millipor и стерильный раствор глобулинов оставляют для выхлопковывания на 2 мес. По истечении этого срока производят стерильный розлив в ампулы, подвергают бактериоло-)’· гическому, физико-химическому, биологическому контролю, титруют на содержание противотканевых антител.The resulting plasma is titrated using the Wannier reaction with a human kidney antigen for the presence of autoantibodies, stored at -20 ° C for up to 10 months, then subjected to fractionation with ethanol. For fractionation, only plasma containing autoantibodies is selected. The presence of autoantibodies is assessed based on the Wannier reaction with donor blood plasma and homologous kidney antigens. Samples with sharply positive reactions are most suitable for fractionation. From the selected plasma, a precipitate of the * P + III fraction is obtained. Then a suspension is prepared from the precipitate with 0.9% sodium chloride solution and distilled water, and an equal volume of the suspension is added with a volume of 26% ethanol. In this case, the deposition temperature is –3 ° С. pH of the mixture. Correct with acetate buffer to 5.0-5.1. Under these conditions, lipoids and globulins fall out. Then, lipoids are removed by centrifugation and globulins are precipitated with 96% ethanol. At the same time, the final temperature of precipitation is -5 -8 ° С, the pH of the mixture is corrected with 1 M NaHCO, to 6.9-7.0. Then the globulin precipitate is separated in a centrifuge and a protein solution with a glycol is prepared from it, filtered through a pulp and subjected to freeze drying. The dry powder is dissolved in distilled water to a concentration of 5% and subjected to sterilizing filtration on a Millipor filter, and the sterile globulin solution is left to be blanked for 2 months. After this period, sterile filling into ampoules is performed, subjected to bacteriological -) ’· biological, physico-chemical, biological control, titrated for the content of anti-tissue antibodies.

Таким образом, настоящий способ позволяет получить непирогенные, нетоксичные препараты глобулина с высоким содержанием нормальных противотканевых аутоантител, способствующих активизации неспецифической и противоопухолевой сопротивляемости организма онкологических больных.Thus, the present method allows to obtain non-pyrogenic, non-toxic globulin preparations with a high content of normal anti-tissue autoantibodies, which contribute to the activation of nonspecific and antitumor resistance of the body of cancer patients.

Так как противотканевые аутоантитела связывают продукты распада тканей и активируют функцию иммунокомпетентных клеток, то их применение может быть полезным не только при опухолевом росте, но и при других патологических состояниях, связанных с деструкцией, тканей и иммунодепрессией.Since anti-tissue autoantibodies bind tissue breakdown products and activate the function of immunocompetent cells, their use can be useful not only for tumor growth, but also for other pathological conditions associated with destruction, tissue and immunosuppression.

ВНИИПИ Заказ 3985/1 Тираж 594_________ПодписноеVNIIIPI Order 3985/1 Circulation 594 _________ Subscription

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Custom polygr. ave, city of Uzhhorod, st. Project, 4

Claims

METHOD FOR PRODUCING AN ANTITUM ANALOGUE SUBSTANCE, by preliminary auto-stimulation of donors by subsequent blood sampling, plasmophoresis of it, isolation of the globulin fraction from the obtained plasma, and deposition of the target product from it; characterized in that, in order to increase the activity of the target product, it is precipitated by sequential treatment of the globulin fraction with ethanol taken in a concentration of 26.53 and 96%, cooled to (-10) - (+ 15) C.