RU2123009C1 - Method of alpha-fetoprotein preparation preparing - Google Patents
Method of alpha-fetoprotein preparation preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2123009C1 RU2123009C1 RU98105411A RU98105411A RU2123009C1 RU 2123009 C1 RU2123009 C1 RU 2123009C1 RU 98105411 A RU98105411 A RU 98105411A RU 98105411 A RU98105411 A RU 98105411A RU 2123009 C1 RU2123009 C1 RU 2123009C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- afp
- fetoprotein
- alpha
- polysaccharide
- sorbent
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, конкретно к получению препарата фетального белка - альфа-фетопротеина (АФП). The invention relates to the pharmaceutical industry, specifically to the preparation of a fetal protein - alpha-fetoprotein (AFP).
АФП - представляет собой фетальный гликопротеид с молекулярной массой около 70 кД, который состоит из 590 аминокислотных остатков и содержит углеводный гликозидный компонент, составляющий до 4,3 % молекулы. AFP - is a fetal glycoprotein with a molecular weight of about 70 kD, which consists of 590 amino acid residues and contains a carbohydrate glycosidic component, up to 4.3% of the molecule.
В эмбриогенезе АФП в большом количестве продуцируется клетками печени, желточного мешка и брюшной стенки плода. In embryogenesis, AFP is produced in large quantities by cells of the liver, yolk sac and abdominal wall of the fetus.
На уровне организма АФП проявляет активность иммуномодулятора, он также играет важную роль в регуляции пролиферации и дифференцировки клеток. Ряд его свойств очевидно опосредован его способностью присоединять и транспортировать через мембрану клеток, имеющий рецепторы к АФП, различные биологически активные лиганды. Пул эмбрионального АФП неоднороден, он представляет собой смесь молекул АФП с разными гликозидными остатками, причем эти молекулы АФП находятся в смеси в определенном количественном соотношении. Пул АФП при онкологических заболеваниях резко отличается от эмбрионального пула АФП по количественному составу гликозидных остатков. At the body level, AFP exhibits the activity of an immunomodulator, it also plays an important role in the regulation of cell proliferation and differentiation. A number of its properties are obviously mediated by its ability to attach and transport various biologically active ligands through the cell membrane, which has receptors for AFP. The pool of embryonic AFP is heterogeneous, it is a mixture of AFP molecules with different glycosidic residues, and these AFP molecules are in a mixture in a certain quantitative ratio. The AFP pool for oncological diseases differs sharply from the embryonic AFP pool in the quantitative composition of glycosidic residues.
Препараты АФП широко используются в медицине для диагностики аномалий развития плода и патологий беременности, а также для скрининга и дифференциальной диагностики злокачественных опухолей и некоторых других заболеваний. В последнее время препараты, содержащие АФП, были предложены в качестве ключевых препаратов для лечения ряда онкологических заболеваний и заболеваний, связанных с аутоиммунными нарушениями. AFP drugs are widely used in medicine for the diagnosis of fetal abnormalities and pregnancy pathologies, as well as for screening and differential diagnosis of malignant tumors and some other diseases. Recently, drugs containing AFP have been proposed as key drugs for the treatment of a number of oncological diseases and diseases associated with autoimmune disorders.
Поскольку молекулы АФП с разными гликозидными остатками обладают различным сродством к определенным лигандам, терапевтическая активность препаратов АФП, а также их ценность как диагностических стандартов должна в весьма значительной степени зависеть от источника и способа получения препарата. Поэтому задача оптимизации известных способов получения препаратов АФП является актуальной. Since AFP molecules with different glycosidic residues have different affinities for certain ligands, the therapeutic activity of AFP preparations, as well as their value as diagnostic standards, should very much depend on the source and method of preparation. Therefore, the task of optimizing known methods for producing AFP preparations is relevant.
Известен способ получения АФП из эмбриональной ткани человека (AC N 583536, кл. A 61 K 37/02, опубл. 05.10.1979, Бюл. N 37), включающий обработку исходной ткани бутиловым спиртом, центрифугирование при 6000 об/мин в течение 30 минут, диализ водно-белковой фазы против 0.9% раствора хлористого натрия, аффинную хроматографию отдиализованной водно-белковой фазы на иммобилизованных эстрогенах с последующим элюированием АФП бутиловым спиртом или смесью бутилового спирта с буферным раствором. A known method of producing AFP from human embryonic tissue (AC N 583536, class A 61 K 37/02, publ. 05/10/1979, Bull. N 37), including processing the original tissue with butyl alcohol, centrifugation at 6000 rpm for 30 minutes, dialysis of the aqueous protein phase against a 0.9% sodium chloride solution, affinity chromatography of the dialyzed aqueous protein phase on immobilized estrogens, followed by elution of the AFP with butyl alcohol or a mixture of butyl alcohol with a buffer solution.
Выход целевого продукта составляет 60 - 70%, а чистота - 90 - 95%. The yield of the target product is 60 - 70%, and the purity is 90 - 95%.
Недостатками способа являются недостаточный выход и чистота целевого продукта, высокое содержание примесных белков (альбумина, гемоглобина), обогащение препарата фракциями пула АФП, способными связывать эстрогены и обедненные по другим фракциям, а также высокая трудоемкость способа и необходимость работы с легковоспламеняющимся резко пахнущим органическим реактивом - бутиловым спиртом. The disadvantages of the method are the insufficient yield and purity of the target product, the high content of impurity proteins (albumin, hemoglobin), the preparation is enriched with fractions of the AFP pool that can bind estrogens and depleted in other fractions, as well as the high complexity of the method and the need to work with a flammable sharply smelling organic reagent - butyl alcohol.
Наиболее близким к заявляемому способу - прототипом, является способ получения АФП (K. Hause et al. Clinica Chemica Acta, 133, 1983, 335-340), включающий следующие последовательные стадии:
1. Измельчение и гомогенизация эмбриональной ткани зародышей человека 8-12, недель, полученных при медицинских абортах;
2. Центрифугирование гомогената при 5000 об/мин, сбор супернатанта;
3. Осветление супернатанта центрифугированием при 12000 об/мин;
4. Очистка целевого продукта хроматографией на DE-целлюлозе;
5. Очистка целевого продукта хроматографией на сефадексе G-100 с иммобилизованным на нем красителем Цибакрон-голубой F 36 A;
6. Очистка целевого продукта рехроматографией на сефадексе G-100 с иммобилизованным на нем красителем Цибакрон-голубой F 36 A;
7. Доочистка целевого продукта хроматографией на DE-целлюлозе.Closest to the claimed method, the prototype, is a method for producing AFP (K. Hause et al. Clinica Chemica Acta, 133, 1983, 335-340), comprising the following successive stages:
1. Grinding and homogenization of the embryonic tissue of human embryos 8-12, weeks obtained with medical abortion;
2. Centrifugation of the homogenate at 5000 rpm, collecting the supernatant;
3. Clarification of the supernatant by centrifugation at 12,000 rpm;
4. Purification of the target product by chromatography on DE-cellulose;
5. Purification of the target product by chromatography on Sephadex G-100 with immobilized dye Cibacron blue F 36 A;
6. Purification of the target product by rechromatography on Sephadex G-100 with Cybacron blue dye F 36 A immobilized on it;
7. Post-treatment of the target product by chromatography on DE-cellulose.
Недостатками прототипа являются длительность и трудоемкость процесса выделения АФП, значительные изменения состава пула АФП и денатурация части молекул, приводящие к низкому выходу конечного продукта (25-30%) и к снижению его качества (чистота препарата 85-90%, низкая стабильность при хранении). The disadvantages of the prototype are the duration and complexity of the process of isolating AFP, significant changes in the composition of the AFP pool and the denaturation of some molecules, leading to a low yield of the final product (25-30%) and to a decrease in its quality (drug purity 85-90%, low storage stability) .
Технической задачей изобретения является упрощение известного способа, повышение выхода, качества и стабильности целевого продукта. An object of the invention is to simplify the known method, increase the yield, quality and stability of the target product.
Поставленная задача достигается предлагаемым способом, заключающимся в следующем:
1. К исходному сырью (абортивная кровь) добавляют хлористый натрий до конечной концентрации 0,5 М и смесь осветляют центрифугированием.The problem is achieved by the proposed method, which consists in the following:
1. Sodium chloride is added to the feedstock (abortive blood) to a final concentration of 0.5 M and the mixture is clarified by centrifugation.
2. Полученный супернатант подвергают хроматографической очистке на сорбенте с иммобилизованными поликлональными антителами к АФП, истощенными против белков сыворотки крови человека, причем элюцию АФП с иммуноаффинной колонки проводят 4 М раствором хлорида магния. В качестве сорбента преимущественно используют BrCN - сефарозу или BrCN - агарозу с содержанием 5-10 мг/мл антител к АФП. 2. The obtained supernatant is subjected to chromatographic purification on a sorbent with immobilized polyclonal anti-AFP antibodies depleted against human serum proteins, moreover, the AFP is eluted from the immunoaffinity column with a 4 M solution of magnesium chloride. BrCN - Sepharose or BrCN - agarose with the content of 5-10 mg / ml antibodies to AFP are mainly used as sorbent.
3. Полученную фракцию АФП концентрируют ультрафильтрацией и очищают гельфильтрацией на ультрогеле AcA-44. 3. The resulting AFP fraction was concentrated by ultrafiltration and purified by gel filtration on an AcA-44 ultra gel.
4. Полученный элюат подвергают дополнительной очистке на колонке с сорбентом на основе поликлональных антител против белков сыворотки крови человека и против иммуноглобулинов сыворотки крови животного, использованного для получения антител к АФП. В качестве сорбента используют Br-CN активированную сефарозу или агарозу с содержанием 5-10 мг/мл комплекса антител (против белков сыворотки крови человека и против иммуноглобулинов сыворотки крови животного). 4. The resulting eluate is subjected to further purification on a column with a sorbent based on polyclonal antibodies against human serum proteins and against immunoglobulins of the animal blood serum used to produce antibodies to AFP. As a sorbent, Br-CN activated sepharose or agarose with a content of 5-10 mg / ml of an antibody complex (against human serum proteins and against animal serum immunoglobulins) is used.
5. Выделенный АФП доводят до необходимой концентрации, добавляют NaCl до концентрации 0,9-5,0% и полисахарид до концентрации 1,0-5,0% (10-50 мг/мл), полученный раствор стерилизуют фильтрацией, фасуют в ампулы или флаконы. Раствор стабилен при температуре +2 - 6oC не менее 1 года. Для увеличения сроков хранения препарат может быть лиофильно высушен. Для этого к раствору АФП добавляют NaCl до концентрации 0,5-5,0%, полисахарид до концентрации 0,2-3,0% (2-30 мг/мл), полученный раствор стерилизуют фильтрацией, фасуют в ампулы и лиофильно высушивают. Лиофилизованный препарат стабилен не менее 4 лет при температуре -20oC, не менее 3 лет при температуре +2 - 6oC и не менее 2 лет при температуре +20oC. В качестве полисахарида преимущественно используют полиглюкин, реополиглюкин, реомакродекс или любой другой полисахарид, разрешенный к применению в составе инъекционных препаратов. Выход целевого продукта составляет 76-80%, а чистота препарата - 95-96%.5. The isolated AFP is adjusted to the required concentration, NaCl is added to a concentration of 0.9-5.0% and the polysaccharide to a concentration of 1.0-5.0% (10-50 mg / ml), the resulting solution is sterilized by filtration, Packed in ampoules or vials. The solution is stable at a temperature of +2 - 6 o C for at least 1 year. To increase the shelf life, the drug can be freeze-dried. For this, NaCl is added to the AFP solution to a concentration of 0.5-5.0%, the polysaccharide to a concentration of 0.2-3.0% (2-30 mg / ml), the resulting solution is sterilized by filtration, Packed in ampoules and freeze-dried. The lyophilized preparation is stable for at least 4 years at a temperature of -20 o C, at least 3 years at a temperature of +2 - 6 o C and at least 2 years at a temperature of +20 o C. As a polysaccharide, polyglucin, reopoliglukin, rheomacrodex or any another polysaccharide approved for injection. The yield of the target product is 76-80%, and the purity of the drug is 95-96%.
Определяющими отличиями предлагаемого способа от прототипа являются:
- Перед осветлением исходного сырья центрифугированием в последнее добавляют NaCl до конечной концентрации 0,5 М, что обеспечивает лучшее отделение супернатанта от осадка при центрифугировании и снижение неспецифической сорбции на иммуносорбенте (первая аффинная хроматография).The defining differences of the proposed method from the prototype are:
- Before clarification of the feedstock by centrifugation, NaCl is added to the final concentration of 0.5 M to the final concentration, which ensures better separation of the supernatant from the precipitate during centrifugation and reduction of non-specific sorption on the immunosorbent (first affinity chromatography).
- Хроматографическую очистку целевого продукта проводят в три стадии: стадия первой иммуноаффинной хроматографии, стадия концентрирования и гельфильтрации на ультрогеле, и стадия второй иммуноаффинной хроматографии. При этом первую иммуноаффинную хроматографию проводят на сорбенте с иммобилизованными на нем антителами к АФП, истощенными против белков сыворотки крови человека, а вторую на сорбенте с иммобилизованным комплексом антител против белков сыворотки крови человека и против иммуноглобулинов сыворотки крови животного, использованного для получения антител к АФП, что позволяет резко повысить чистоту и качество целевого продукта, так как первый сорбент обладает высокой удельной емкостью к АФП и способен взаимодействовать с полным набором антигенных детерминант эмбрионального пула АФП, а второй сорбент максимально сорбирует на себя весь спектр примесных белков, присутствующих во фракции АФП. При этом элюцию АФП с первой иммуноаффинной колонки проводят 4 М раствором хлорида магния, что позволяет снизить объем элюата, ускорить элюцию и исключить денатурацию АФП. - Chromatographic purification of the target product is carried out in three stages: the stage of the first immunoaffinity chromatography, the stage of concentration and gel filtration on ultra-gel, and the second immunoaffinity chromatography stage. In this case, the first immunoaffinity chromatography is performed on a sorbent with antibodies to AFP immobilized on it, depleted against human serum proteins, and the second on a sorbent with immobilized complex of antibodies against human serum proteins and against animal serum immunoglobulins used to produce antibodies to AFP, which allows you to drastically increase the purity and quality of the target product, since the first sorbent has a high specific capacity for AFP and is able to interact with a complete set of tigene determinants of the AFP embryonic pool, and the second sorbent absorbs as much as possible the entire spectrum of impurity proteins present in the AFP fraction. In this case, the elution of AFP from the first immunoaffinity column is carried out with a 4 M solution of magnesium chloride, which allows to reduce the volume of the eluate, accelerate the elution and exclude the denaturation of AFP.
- Дополнительную очистку от балластных белков (белки и пигменты крови, денатурированные и деградированные молекулы и фрагменты молекул АФП, а также комплексы молекул АФП с другими белками) осуществляют на стадии концентрирования и гельфильтрации на ультрогеле AcA-44, что позволяет повысить чистоту целевого продукта и обогатить его функционально активными молекулами АФП. - Additional purification from ballast proteins (proteins and blood pigments, denatured and degraded molecules and fragments of AFP molecules, as well as complexes of AFP molecules with other proteins) is carried out at the stage of concentration and gel filtration on AcA-44 ultra gel, which allows to increase the purity of the target product and enrich its functionally active AFP molecules.
- Для увеличения срока хранения препарата выделенный АФП переводят в раствор, содержащий целевые добавки, конкретно хлористый натрий и полисахарид и стерилизуют фильтрацией. Для более длительного хранения препарат лиофилизуют. Взятые в оптимальном диапазоне концентраций целевые добавки позволяют увеличить стабильность препаратов АФП как в лиофилизованном виде, так и в виде раствора, увеличивают повторную растворимость лиофилизованного препарата. - To increase the shelf life of the drug, the isolated AFP is transferred to a solution containing the desired additives, specifically sodium chloride and polysaccharide and sterilized by filtration. For longer storage, the drug is lyophilized. Taken in the optimal concentration range, target additives can increase the stability of AFP preparations both in lyophilized form and in solution form, and increase the re-solubility of the lyophilized preparation.
Заявляемый способ позволяет создать промышленную технологию получения препарата АФП высокой степени чистоты, пригодного для использования в лечебной практике. The inventive method allows you to create an industrial technology for the preparation of AFP high purity, suitable for use in medical practice.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения. The invention is illustrated by the following examples of specific performance.
Пример 1. Все операции проводят при 4oC. К 10 л абортивной крови (общее количество АФП приблизительно 1,3 г) добавляют NaCl конечной концентрации 0,5 М и центрифугируют при 8000-10000 об/мин в течение 30 мин, осадок балластных белков отбрасывают, а супернатант смешивают с 1 л иммуносорбента на основе BrCN - сефарозы 4B, с иммобилизованными поликлональными антителами к АФП. Концентрация антител на сорбенте составляет 10 мг/мл. Смесь перемешивают в течение 18 часов, отстаивают 4-5 часов, супернатант сливают и наполняют данным сорбентом хроматографическую колонку. Колонку промывают 0,5 М NaCl до тех пор, пока оптическая плотность выходящего из колонки раствора не выйдет на плато. Затем АФП снимают, пропуская через колонку 400 мл 4 М раствора MgCl2 с последующей промывкой колонки 10 mM NaCl.Example 1. All operations are carried out at 4 o C. To 10 l of abortive blood (total amount of AFP approximately 1.3 g) add NaCl final concentration of 0.5 M and centrifuged at 8000-10000 rpm for 30 min, the ballast precipitate proteins are discarded, and the supernatant is mixed with 1 l of BrCN-based immunosorbent - Sepharose 4B, with immobilized polyclonal antibodies to AFP. The concentration of antibodies on the sorbent is 10 mg / ml. The mixture is stirred for 18 hours, sedimented for 4-5 hours, the supernatant is drained and the chromatographic column is filled with this sorbent. The column is washed with 0.5 M NaCl until the optical density of the solution exiting the column reaches a plateau. Then the AFP is removed by passing through a column of 400 ml of a 4 M solution of MgCl 2 , followed by washing the column with 10 mM NaCl.
Скорость элюции 200-250 мл/час. Объем снятой с аффинной колонки фракции АФП составляет 500-600 мл. The elution rate of 200-250 ml / hour. The volume of the AFP fraction removed from the affinity column is 500-600 ml.
Полученную фракцию, содержащую АФП, концентрируют на ячейке для ультрафильтрации с мембраной YM-30 (Amicon) до объема 30-40 мл. Концентрат центрифугируют при 25000-35000 об/мин в течение 10 мин. The obtained fraction containing AFP was concentrated on an ultrafiltration cell with a YM-30 membrane (Amicon) to a volume of 30-40 ml. The concentrate is centrifuged at 25000-35000 rpm for 10 minutes
Для того, чтобы очистить выделенный АФП от возможных следов количеств балластных белков, супернатант, полученный после концентрирования, наносят на гельхроматографическую колонку с ультрогелем AcA-44, уравновешенную 10 mM раствором NaCl со скоростью 150-200 мл/час, собирая первый пик белка по оптической плотности. In order to clear the isolated AFP of possible traces of the amounts of ballast proteins, the supernatant obtained after concentration was applied to an AcA-44 gel gel chromatography column equilibrated with 10 mM NaCl solution at a rate of 150-200 ml / hour, collecting the first peak of the protein optically density.
Полученный элюат объемом 300-350 мл наносят на иммуноаффинную колонку размером 5х20 см с ковалентно связанными с BrCN-активированной сефарозой поликлональными антителами против белков сыворотки крови человека и против иммуноглобулинов сыворотки крови животного, использованного для получения поликлональных антител и АФП. Концентрация антител - 10 мг/мл. Скорость нанесения составляет 200 мл/час. Элюируют АФП с той же скоростью, собирая выходящий пик белка по оптической плотности. Объем снятой с колонки фракции АФП составил 400 мл с концентрацией 2,5 мг/мл. Общее количество выделенного АФП составило 998 мг (выход продукта - 76,8%, препарат иммунохимически чистый, электрофоретическая чистота препарата - 96%). The resulting 300-350 ml eluate was applied to a 5x20 cm immunoaffinity column with polyclonal antibodies covalently coupled to BrCN-activated Sepharose against human blood serum proteins and against animal serum immunoglobulins used to produce polyclonal antibodies and AFP. The concentration of antibodies is 10 mg / ml. The application rate is 200 ml / hour. The AFP is eluted at the same rate, collecting the outgoing peak of the protein by optical density. The volume of the AFP fraction removed from the column was 400 ml with a concentration of 2.5 mg / ml. The total amount of isolated AFP was 998 mg (the product yield was 76.8%, the preparation was immunochemically pure, and the electrophoretic purity of the preparation was 96%).
Выделенный АФП доводят до концентрации 0,05 мг/мл, добавляют NaCl до концентрации 5 мг/мл полиглюкин до концентрации 10 мг/мл. The isolated AFP was adjusted to a concentration of 0.05 mg / ml, NaCl was added to a concentration of 5 mg / ml polyglucin to a concentration of 10 mg / ml.
Полученный раствор АФП стерилизуют фильтрацией, фасуют в ампулы (или флаконы) объем 1 мл и лиофильно высушивают. Одна ампула (флакон) лиофилизированного препарата содержит 0,05 мг АФП, 5 мг NaCl, 10 мг полиглюкина. The resulting AFP solution is sterilized by filtration, Packed in ampoules (or bottles) with a volume of 1 ml and freeze-dried. One ampoule (vial) of the lyophilized preparation contains 0.05 mg of AFP, 5 mg of NaCl, 10 mg of polyglucin.
Пример 2. Все процедуры проводят при 4oC аналогично примеру 1, за исключением того, что полученную заявляемым способом фракцию АФП концентрируют до конечной концентрации АФП - 30 мг/мл, вносят NaCl до концентрации 50 мг/мл (5,0%), затем-реополиглюкин до концентрации 2 мг/мл (0,2%), смесь стерилизуют фильтрацией, фасуют в ампулы (объемом 1 мл) и лиофильно высушивают.Example 2. All procedures are carried out at 4 o C analogously to example 1, except that the obtained AFP fraction is concentrated to a final AFP concentration of 30 mg / ml, NaCl is added to a concentration of 50 mg / ml (5.0%), then reopoliglyukin to a concentration of 2 mg / ml (0.2%), the mixture is sterilized by filtration, Packed in ampoules (1 ml) and freeze-dried.
Пример 3. Все процедуры проводят при 4oC аналогично примеру 1, за исключением того, что полученную заявляемым способом фракцию АФП концентрируют до конечной концентрации АФП - 10 мг/мл ультрафильтрацией на мембране UF 30 (Costar), вносят NaCl до концентрации 20 мг/мл (2,0%) и реомакродекс до концентрации 50 мг/мл (5,0%). Смесь стерилизуют фильтрацией, фасуют в ампулы объемом 1 мл и запаивают. Препарат хранят в темном месте при температуре 2 - 6oC.Example 3. All procedures are carried out at 4 o C analogously to example 1, except that the AFP fraction obtained by the claimed method is concentrated to a final AFP concentration of 10 mg / ml by ultrafiltration on a UF 30 membrane (Costar), NaCl is added to a concentration of 20 mg / ml (2.0%) and reomacrodex to a concentration of 50 mg / ml (5.0%). The mixture is sterilized by filtration, Packed in 1 ml ampoules and sealed. The drug is stored in a dark place at a temperature of 2 - 6 o C.
Использование предлагаемого способа позволит по сравнению с прототипом:
- повысить выход целевого продукта с 25-30% до 76-80%;
- повысить чистоту препарата с 85-90% до 95-96%;
- повысить качество препарата АФП за счет максимального сохранения в составе препарата функционально активных молекул АФП, а также за счет увеличения сроков хранения до четырех лет в лиофильно высушенном виде и до 1 года в жидком виде, повышения стабильности и улучшения повторной растворимости лиофилизованного препарата;
- обеспечить возможность использования препарата в медицине в качестве самостоятельной лекарственной формы, а не только в качестве компонента диагностических систем;
- обеспечить возможность промышленного производства препаратов АФП для медицины.Using the proposed method will allow, in comparison with the prototype:
- increase the yield of the target product from 25-30% to 76-80%;
- increase the purity of the drug from 85-90% to 95-96%;
- to improve the quality of the AFP preparation due to the maximum preservation of functionally active AFP molecules in the preparation, as well as by increasing the shelf life of up to four years in freeze-dried form and up to 1 year in liquid form, increasing stability and improving the re-solubility of the lyophilized preparation;
- to provide the possibility of using the drug in medicine as an independent dosage form, and not just as a component of diagnostic systems;
- to provide the possibility of industrial production of AFP drugs for medicine.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98105411A RU2123009C1 (en) | 1998-04-02 | 1998-04-02 | Method of alpha-fetoprotein preparation preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98105411A RU2123009C1 (en) | 1998-04-02 | 1998-04-02 | Method of alpha-fetoprotein preparation preparing |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2123009C1 true RU2123009C1 (en) | 1998-12-10 |
| RU98105411A RU98105411A (en) | 1999-02-27 |
Family
ID=20203828
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98105411A RU2123009C1 (en) | 1998-04-02 | 1998-04-02 | Method of alpha-fetoprotein preparation preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2123009C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2489440C1 (en) * | 2012-06-26 | 2013-08-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук (ТИБОХ ДВО РАН) | Method to produce estrogen-binding protein associated with malignant tumors |
-
1998
- 1998-04-02 RU RU98105411A patent/RU2123009C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| K. Hause et al. Clinica Chimica Acta, v.133, p.335 - 340, 1983. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2489440C1 (en) * | 2012-06-26 | 2013-08-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук (ТИБОХ ДВО РАН) | Method to produce estrogen-binding protein associated with malignant tumors |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU1837880C (en) | Method for separation of blood proteins | |
| US3869436A (en) | Method for fractionating plasma proteins using peg and ion-exchangers | |
| US4341764A (en) | Method of preparing fibronectin and antihemophilic factor | |
| CN105153297B (en) | Method for separating and purifying α 2-macroglobulin from Cohn component IV precipitate | |
| US4022758A (en) | Isolation of coagulation factors I and VIII from biological material | |
| NO742216L (en) | ||
| JPH10508841A (en) | (VIII) Factor purification method | |
| RU2123009C1 (en) | Method of alpha-fetoprotein preparation preparing | |
| JP3030312B2 (en) | Mature hepatocyte growth factor (I) | |
| AU600230B2 (en) | Tissue-derived tumor growth inhibitors, methods of preparation and uses thereof | |
| JPH02115196A (en) | Purification of erythropoetin | |
| RU2799637C1 (en) | Method of producing biologically active peptide-amino acid preparation based on human blood plasma | |
| RU2283131C1 (en) | Method for preparing preparation dry alpha-fetoprotein | |
| RU2178309C2 (en) | Antithymocytic globulin for intravenous injection and method for its obtaining | |
| RU2302424C1 (en) | Alpha-fetoprotein isolation and purification method | |
| FI62103C (en) | REQUIREMENTS FOR THE REQUIREMENT OF HEPARIN MED HOEG SPECIFIC ACTIVITIES | |
| CN110563833A (en) | Preparation method of human serum albumin standard substance raw material, product and application thereof | |
| RU2100031C1 (en) | Method of alpha-fetoprotein preparing | |
| RU2308286C1 (en) | Method for production of alpha-fetoprotein | |
| RU2286350C1 (en) | Method for production of veterinary albumin | |
| RU2319479C2 (en) | Method for preparing alpha-fetoprotein preparation tablet | |
| RU2326689C1 (en) | Method of human blood coagulation viii factor concentrate production and related product | |
| Griswold et al. | Glomerular localization of antigen and antibody in rabbits following intravenous administration of serum cryoproteins from homologous animals with acute serum sickness | |
| JPS6364407B2 (en) | ||
| CN116410295A (en) | Purification method of escherichia coli expression |