SU745943A1 - Штамм N1-продуцент фибринолитических ферментов - Google Patents

Description

(54). ШТАММ Arthrobotrys Lohga Mecht N1 ПРОДУЦЁЙТ ФЙЁРИНОЛИТЙЧЕСКИХ ФЕРМЕН-ГОВ

: ; .1 -

Изобретение относи.тс  к микро- г биологической промышленности, в частности к п роизводству ферментных препаратов, может быть применено з. медицинской промышленности и представл ет собой новый шта мм-проДу- цент протёолйтических ферментов. Известны различные виды мйкроорганиэмов , способные продуцировать протеолитические ферменты с фибринолитическими свсЬйствами.

Все фибринолитйч0скйе ферменты грибного происхождени  обладают:пЬ -. мым фибринолитичёским и тромЬЬлити-; ческим действием. Только фйбринолйтические ферменты из Tri chothec i urn, roseum LK помимо пр мого действи  . обладают способностью активировать плазминоген, что ставит их в рЯд перспективных дл  клиники прШар атбв.

Наиболее бли.зким по технической сущности к предложенному  вл етс  штамм плесневого сапрофитного гри$а Trlchothecium roseum LK - продуцирующий комплекс фибринолитических ферментов-трихолизин 1.

Недостаток штамма состоит в том, что он обладает недостаточно высокой фибринолитической активностью 0 ,5 г сырца с литра куЛьтуральной жйдкостк и невысокой активаторной iaKтивности. Кроме того, штамм необходимо культйви1ровать на средах, содержащих пищевые продукты (пищевой .сахар).

Цель изобретени  - полученйё штамма более актив ного:продуцента фибри; ноЛйтйчёскйх ферментов (0,75 г сырца О с литра культуральной жидкости) с . : :а 1стиваторнЕ4мй свойствами из непато генных сапрофитных грибов Arthrobot: rys Longa Mecht N1.; . . Указанна  цель достигаетс  куль15 тивирова ием Arthrobotrys Longa

Mecht NI на .простой питательной dpeце , имеющей следующий состав, г/л: NaH2P04 2-3; KNOa 0,4-0,8, . 0,1: 0,3; caGOj, 0,1-0,3; Mgce 0,1-0,3;

.молочна  кислогга 0,4-0,8; глицерин 5-15, вода водопроводна .

Полученный штамм Arthrobotrys Longa Mecht N1  вл етс  пл,есневым грибом и относитс  к классу Fungi

25 Imperfect, род Arthrobotrys, выде ,лен авторами из почвы Новосибирской области, .депонирован в ко.гшекции лаборатории антибиотиков биологического факультета МГУ под 1, характеризуетс  следующими свойствами.

Морфологические признаки. При росте на агаризировэнной среде Чапека , включающей, г/л: NaNOg 3,0; КН2Р04 1, КСг 0,5; МдЗОд 0,5, сахарозу 25; агар-агар 20, воду водопроводную , прин той дл  культИвирбвани  плесневых грибов в цел х описани  морфологических свойств и УстанЪвлений систематического положени , в течение 14 дней при 24°С образует широкорастуадую боЛУЮ п тиистую колонию, с возрастом розовеющую. 77На кШИдиеносцах, трудно отличимых от вегетативных гиф, формируютс  ма роконидйи грушевидной форШг::: 20-40 fii двуклеточные, с перегоФодкой ниже середины. Конидии прик | ШпЩн вЖймй йШсками к голоа-Кё .конидиеносца.

,На пептонно-кукуруэной среде, включающей, г/л: пептон 5,OJ глюкозу 10 ; NaCE 5,0; KjCO 0,5) кукурузный экстракт 5,0; агар агар-2б,0, водбпроводную воду, образует ишрокр растущую колонию, ватообразнуго,сйёг ё: 1зозОйей1Цую; макроконидии грушевидной фсзрМы, типичные дл  вида.

На сусло-агаре (5 БЛГ, агар-агар20 ,0 г) развивает широкорастутдие пушистые белые 1;солоний с розоватым б тёйКЬм воздушного мицели . В центре вырЪсТы-столоны, представлен- ные слабо ветв тдимс , плоуным мицёлиемкремоватогр цвета. Обратна 

йтОрона колонии морщиниста , с ради аЛьными складками, коричневата .

Культуральные признаки. При росте в погруженной культуре р колбах на качалке, имеющей 240 об/мин, при 25-2б с в течение 144-168 ч на жидком сусле (4 БЛГ) у синтетической среде, включаюдей, г/л: NaH2PD4 2-3; HNO 0,4-0,8; МНдСЕ 0,1-0,3; СаСОз 0,1-0,3, Мд CPjO,0 ,3; молочную кислоту 0,4-0,8; глицерин 5-15, литр водопроводной воды, наблюдаетс  образование мелкодисперсной густой массы; макроконидии образуютс  чрезвычайно редко.

Мицелий распадаетс  на Отдельные

участкй, наблйДае ёй интенсивное

образование микроконидий, одноклеточfc« j«ifSi%« ;« ,,

ных, величиной в 3-5 fu. Микроконидии образуютс  непосредственно на гифах вегетативного дацели . Культуральна жидкость имеет вид разведенного молока , плохо фильтруетс , пигментов внешнюю среду не выдел етс .

Образование фибринолитических ферментов. Предлагаемый шламм образет фибринолитические ферменты в погруженной культуре в колбах на кача1Лке , имеющей 240 об/мин, при-25-26 е в течение 144-168.4 роста. Биосинте осуществл ют в два этапа: выращивание посевного мицели  и собственнЬ биосинтез. .

Описание культивировани . Споры с сусло-агара- глубинное культивирование на среде, включающей, г/л: {NN4)250,) 0,4-0,8; К2НР04 0,8-1,2; КСе 0,25-0,75; МоОд 0,25-0,7; сахар пищевой 20-40; молочную кислоту 1-2; кукурузный экстракт 5-15, в качалочных.колбах объемом 750 мл с 200 мл питательной среды, в течение 36-48 ч при 24-26°С повтс5рный пересев на синтетическую среду (состав указан выше), услови  культивировани  144-168 ч,

Фр бринолитическую активность определ ют по методу Андреенко на фибриновых пластинах.Активацию плазминогена определ ют по методу Андреенко по разности зоны.лизиса на непрот гретых и прогретых фибриновых пластинах .

На 144-168 ч роста гриба в культуральной жидкости устанавливаетс  фибринолитическа .активность на уровне 300-400 мм, активаторна  активность 200-250 мм.

Культуральную жидко сть отдел ют центрифугированием при 8000- . 20000 об/мин в течение 5 мин при 4С. Фибринолитические ферменты осаждают охлажденным до -20С ацетоном из расчета 2 объема ацетона на 1 объем культурального фильтрата.

Сравнительные данные фибринолитической активности ферментов, выдел е /1ых в среды предлагаемым и известными видами грибов, представлены в таблице.

Аг th robo t гys Longa Mecht N1

Tri chothec i um rose urn

240-200

Синтетическа 

120-80

Claims (1)

1. Того же ct)c тава + сахар пищевой Формула изобретени  Штамм Arthrobotrys Longa Mecht NI - продуцент фибринолитических ферментов. Морфологические признаки. Колони на среде Чапека имеют характерный фенртип-широкорастущие, белые, пушистие с возрастом розовеющие. На конидиеносцах, трудно отличимых от вегетативного мицели , формируютс  двуклеточные грушевидные конид На сусло-агаре морфологи  колонии та же, обратна  сторона колонии складчата , коричневата . Культурально-физиологичес сие при jaKK. На синтетической среде в погруженной культуре рост в виде гу гой мелкодисперсной массы, макроконидии практически не образуютс . На мицелий, распадающемс  на отдель ные участки, наблюдаетс  интенсивное образование одноклеточных иикроконидий, имеющих величину 3-5/U. Фибринолитические ферменты образуют в глубинных услови х при росте на синГетической среде в колбах на качалке, имек цей 240 об/мин при 25-2б С в течение 144-168 ч в количестве 0,75 г сырца с одного литра культуральной жидкости;плазминогена. Штамм обладает специфической способностью к активации плазминогена. Фибринолитическа  активность на 144-168 ч роста гриба в культуральной жидкости составл ет 300400 мм, а активаторна  активность - 200-250 мм. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 469348, кл. С 07 G 7/02, 1973.