SU722242A1

SU722242A1 - Способ дифференциации холерных вибрио-HOB OT НЕгАзООбРАзующиХ АэРОМОНАд

Info

Publication number: SU722242A1
Application number: SU782658740A
Authority: SU
Inventors: Э.А. Яговкин; В.Н. Таранова
Original assignee: Ростовский-На-Дону Государственныйнаучно-Исследовательский Противочумныйинститут
Priority date: 1978-09-04
Filing date: 1978-09-04
Publication date: 1981-03-15

Description

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно, дифференциации холерных вибрионов от близкородственных микроорганизмов.

Известен способ дифференциации холерных вибрионов от негазообразующих аэромонад путем выращивания микробов на плотной питательной среде с последующей обработкой полученной суспензии микроорганизмов химическими реагентами [1] .

Однако известный способ не всегда позволяет отдифференцировать холерные вибрионы от негазообраэных аэромонад и сроки микробиологического анализа длительны (до 4-5 суток ) .

Целью изобретения является повышение чувствительности и ускорение способа.

Эта цель достигается тем, что микробы выращивают на плотной питательной среде с последующей обработкой полученной суспензии микроорганизмов химическими реагентами, суспензию микроорганизмов обрабатывают 1%-ным раствором формалина, доводят концентрацию микробных клеток до 400 млрд клеток/мл, добавляют 0,15 М фосфатный буфер, содержащий 0,3-

0,5 мг глюкозооксидазы, затем выделяют О-антиген и при наличиии в нем фруктозы дифференцируют холерные вибрионы.

Пример . Берут штамм холерного вибриона 2913 и штамм не образующий газ аэромонады № 6021 засевают на обычные твердые питательные среды. Через 18 ч выращенные· при 37°С культуры смывают физиологическим раствором и обезвреживают путем добавления в суспензию клеток формалина до 1%-ной концентрации и клетки трижды отмывают физиологическим раствором. В суспензиях определяют концентрацию клеток. В опыт берут по 400 млрд клеток, которые еще раз отмывают физиологическим раствором при центрифугировании. Осадки клеток суспендируют в 3 мл 0,15 М фосфатном буфере рН-7,4, содержащем фермент глюкозооксидазу (0,3-0,5 мг на ngoбу). Смесь инкубируют 5 ч при 37 °C.

После инкубирования из клеток экстрагируют специфический О-антиген путем добавления 3 мл 70%-ного водного раствора фенола. Экстракцию ведут в течение 1 ч при комнатной температуре, встряхивая через 10-15 мин. После экстракции пробы центрифуги722242 руют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Образующийся верхний слой декантируют и используют в реакции. К каждой пробе добавляют по 2 мл 0,1%-ного раствора резорцина в 95%-ном этаноле и б мд концентрированной соляной кислоты. Пробы выдерживают на водяной бане при 80°C до положительной реакции в контрольных пробах с фруктозой и с типичным контрольным штаммом холерного вибриона. Положительные пробы, содержащие фруктозу и относящиеся к виду холерных вибрионов, окрашиваются в красный цвет в отличие от негаэообраэующих аэромонад, которые не окрашиваются по сравнению с контролями. Опыт сопровождают следующими контролями: одна проба с Фруктозой 25 мкг , одна проба с заведомо типичным штаммом холерного вибриона и проба, не содержащая клеток микроорганизмов и фруктозы.

Предлагаемый способ повышает чувствительность .и достоверность дифференциации холерных вибрионов от негазообразующих аэромонад, сокращает время дифференциального анализа на

3-3,5 суток, однотоновое изменение окраски улучшает регистрацию результатов.

Claims

руют при 5000 об/мин в течение 20 ми Образующийс верхний слой декантируют и используют в реакции. К каждой пробе добавл ют по 2 мл 0,1%-ног раствора (уеэорцина в 95%-ном этаноле и б мд концентрированной сол ной кис лоты. Пробы вьвдерживают на вод ной бане при до положительной реакции в контрольных пробах с фруктозой и с типичным контрольным штаммом холерного вибриона. Положительные пробы , содержащие фруктозу и относ щиес к виду холерных вибрионов, окраши ваютс в красный цвет в отличие от негаэообраэующих аэромонад, которые ие окрашиваютс по сравнению с контрол ми . Опыт сопровождают следую1пими контрол ми: одна проба с Лруктозой 25 мкг , одна проба с заведомо типичным штаммом холерного вибриона и проба, не содержаща клеток микроppraHH3iv« B и фруктозы. ПредлагаемзИй способ повышает чувствительность и достоверность дифференциации холерных вибрионов от негазообразующих аэромонад, сокращает врем дифференциального анализа на 3-3,5 суток, однотоновое изменение окраски улучшает регистрацию результатов . Формула изобретени Способ дифференциации Х9лерных вибрионов от негазообразующих аэромонад путем выращивани микробов на плотной питательной среде с последующей обработкой полученной суспензии микроорганизмов химическими реагентами , отличающийс тем, что, с целью повышени чувствительности и ускорени способа, суспензию микроорганизмов обрабатывают 1%-ным раствором формалина, довод т концентрацию микробных клеток до 400 млрд клеток/МП, добавл ют 0,15 м фосфатный буфер, содержащий 0,3-0,5 мг глюкозооксидазы , затем выдел ют О-антиген и при наличии в нем фруктозы дифференцируют холерные вибрионы. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Либинзон А.Е. и др. О возможных ошибках при бактериологической диагностике холерыл Лабораторное дело; 1977, № 6, с. 356-358.