СПЕЦИФИЧЕСКИ ИНГИБИРОВАТЬ ПРЕССОРНЫЙ ЭФФЕКТ И МИОТРОПНОЕ ДЕЙСТВИЕ АНГИОТЕНЗИНА II нацией остова пептидной цепи - наличием дополнительной NH-группы между С и карбонильным углеродным атомом в остатке валина в положении 3. Однако это неожиданно усиливает антагонистическое действие этого аналога гормона и снижает нежелйтельный прессорный эффект. Предлагаемое соединение было синтезировано путем конденсации (согласно схеме) отдельных фрагментов при использовании известныхметодов пептидной химии (например азидного,карбодиимидного и пр.) 3. Трет-бутоксикарбонилгидразид бензилоксикарбонил-аспарагинил-Nr -нитроаргинил валина (4) (см. схему 1) получают карбодиимидным методом, конденсиру бензилоксикарбониласпарагинил-№ -нитроаргинин (2) с трет-бутоксикарбонилгидразидом валина (3) в присутствии двух молей 1-гидроксибензотриазола . Защиту гидразидной фунции - трет-бутоксикарбонильную группу соединени (4) - отщепл ют трифторуксусной кислотой при комнатной температу , ре. Азид (6), полученный по методу Рудингера из гидразида (5), выдерживают в растворе диметилформамида I ч при 50°С. В таких услови х происходит полна перегруппировка азида в изоцианат (7), который без выделени ввод т в реакцию с аминокомпонеЕ1Тной (8). Защитные группы у полученного окт-апептида (9) удал ют каталитическим гидрогенолизом. Диацетат аспарагиниларгинил-аза- -гомовалилтирозил-гистидил- , пролил-фенилаланина (1) чист т, экстрагиру н-бутаНОЛОМ из водного раствора. Получают соединение I хроматографически и электрофоретически однородное, данные аминокислотного анализа продуктов кислотного гидролиза подтверждают наличие аминокислот ,, вход щих в последовательность октапептида (I), в ожидаемых соотношени х. Пример. В работе используют аминокислоты L-р да. Органические растворители чист т согласно общеприн тым методам. Растворители упаривают на ротационном испарителе при остаточном давлении 12- 15 мм рт. ст. и температуре бани 30-40°С. Температуру плавлени (или разложени ) соединений определ ют в открытых капилл рах без исправлени . Удельное оптическое вращение измер ют на цифровом пол риметре «Parkin Elmer (модель 141). Электрофорез провод т , на бумаге FN-16 (ГДР) в 30%-ной уксусной кислоте (рН.1,9) при 18 В/см, электрофоретическую подвижность соединений привод т ро отношению к гистидину (Е«а ). Дл нисход щей хроматографии примен ют бумагу FN-3 (ГДР) и следующие системы: н-бутанол -пиридин-уксусна кислота-вода при соотношении соответственно 30:20:6:24 (А); н-бутанол-уксусна кислота-вода при соотношении 5:1:2 {Б). Хроматографию в тонком слое (ТСХ) провод т на пластинках«Silufol фирмы «KavaИег (Чехословаки ) в системах этилацетатпиридин-уксусна кислота-вода при соотношении 5:5:1:3 (В); хлороформ-метанол- вода при соотношении 40:30:5 (Г); н-бутанол-изо-пропанол-вода-хлоруксусна кислота при соотношении 65-15:20:3 (Д); н-бутанол-уксусна , кислота-вода при соотношении 4:1:1 (Е); и хлороформ-этанол-этилацетат-вода при соотношении 5:5: : 1,5:0,5 (Ж). Вещества на хромато- и электрофореграммах в зависимости от структуры соединени обнаруживают нингидрином и реактивами Паули, Сакагучи, Рейндел -Хоппе и Бартона. Дл элементного анализа вещества высушивают в пистолете Фишера в течение 24 ч над п тиокисью фосфора при 60°С и остаточном давлении 0,1 мм рт. ст. Кислотный гидролиз пептидов провод т в 6 н. сол ной кислоте при 105°С в запа нных ампулах в течение 24 ч. Аминокислотный состав определ ют на автоматическом анализаторе ВС-200 фирмы «BiocaU (ФРГ). Трет-бутоксикарбонилгидразид бензилоксикарбонил-аспарагинил-ЬЯ-нитроаргинилвалина- 3. К охлажденному до 0°С раствору 11,7 г (25 ммоль) бензилоксикарбонил-аспарагинил-Г -нитроаргинина и 6,8 г (50 ммоль) 1-гидроксибензотрйазола в 80 мл диметилформамида приливают раствор 5,2 г (25 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 15 мл диметилформамида и выдерживают 1 ч при 4-2°С. Добавл ют 5,8 г (25 ммоль) трет-бутоксикарбонилгидразида валина и смесь выдерживают 24 ч при +2°С. Отфильтровывают дициклогексилмочевину, к фильтрату приливают воду до помутнени (около 120 МЛ; 60°С) и выдерживают 15 ч при +4°С Юсадок (дициклогексилмочевину и 1-гидроксибензотриазол ) отфильтровывают и фильтрат выливают в смесь, состо щую из 300 мл насыщенного раствора NaCL и 50 мл насыщенного раствора NaHCO. Выпавший мелкий осадок отфильтровывают, промывают водой, затем-суспендируют в 300 мл этилацетата . Отфильтровывают, промывают этанолом (50 мл), водой и высушивают в вакууме над PjOs- КОН. Выход fS,8 г, 92/о, т. пл. 180-185°С (разЛ.). Д/й, а- 22,4/С I, диметилформамид); R 0,88 (А); % 0,85 (Б) RfO,96/(B); Rt 0,78 (Г), EHIS 0,33 (рН 1,9). Найдено: %: С 48,81; Н 6,43; N 20.33. Вычислено, %: С 49,40; Н 6,51; N 20,58. Трифторацетат гидразида бензилоксикарбонил-аспарагинил-М -нитроаргинил-валнна (4). Раствор 13,6 г (20 ммоль) (3) в 50 мл трифторуксусной кислоты выдерживают 30 мин при 20°С , затем в вакууме (12мм, 20°С) отгон ют 35 мл трифторуксусной кислоты , остаток растирают с эфиром, выпавший в осадок продукт отфильтровывают и сушат в вакууме над PjOe/KOH. Выход 13,5 г (98%), т.-пл. 191 -193°С (разл.).. - 10,3(CL, диметилформамид); RiO,75 (А), R 0,67 (Б), Rr 0,73 (Г), foO,93 (В), ЕНВ 0,47 (рН 1,9) Найдено, «/о: С 43,64; Н 5,57; N 20,34. Вычислено, %: С 43,22; . Н 5,37; N 20,02. Ci,H,,,COOH п-Нитробензиловый эфир трет-бутоксикарбонил-0-бензилтирозил-валил-гистидилпролил-изолейцина 02). К раствору 6 г (10ммоль) п-нитробензил вого эфира валил-гистиднл-пролйл-изолейцина в 50 мл (диметилформамида) прибавл ют 6 г (12 ммоль) п-нитробензилового эфира трет-бутоксикарбонил-0-бензилтирозина , 0,5 г 1-гидроксибензотриазола и выдерживают при 20°С 15 ч. К реакционной смеси прибавл ют 0,1 мл (3 ммоль) N, N-диэтилендиамина , перемешивают в течение 15 мин и смесь вливают в 400 мл этилацетата и промывают последовательно 15°/о раствором KHSO водой, 10%МаНСОз, водой и высушивают над NatSO /MgSO. Растворитель упаривают до объема 50 мл и (12) высаживают в виде аморфного вещества смесью эфир-гексан при соотношении (1:1). Выход 8,2 гр (8651), т. пл. 106-109°C/i4)-24 (С 1, диметилформамид); R 0,78 (Г),Я 0,57 (Д). Найдено, %: С 63,24, Н 6,82, N 11,14. Вычислено, %: С 63,01; Н 6,77; N 11,76. CsoHetfl lfOn Дихлоргидрат п-нитробензилового эфира О-бензилтирозил-валил-гистидил-пролилизолейцина (13). 8 гр (8,2 ммоль) (12) раствор ют в 50 мл лед ной уксусной кислоты, прибавл к)т 50 мл 2 Н. раствора HCL в уксусной кислоте, выдерживают при 20°С 15 мин, упаривают (30°), остаток растирают с эфиром, отфильтровывают и высушивают над KOH/F Qy . Выход 7,5 г( 965I&), т. пл. 138-140°С. Mg - 19,9 (С 1, диметилформамид); EifiS 0,66 (рН 2,4), Rf 0,25 (Д). Найдено, %: С 58,49 , Н 6,22; N 12,48. Вычислено, %: С 58,37; Н 6,31; N 12,01. ,О,2НС1 п-Нитррбёнзиловьш эфир бензилоксикарбонил-аспарагинил-1 -нитрраргинил-аЗачЛ-гомовалил-О-бензилтирозиЛ-валил-гистидил -пролил-изолейцина (14). К раствору 2,43 г (3,5 ммоль) (4) в 15 мл диметилформамида прибавл ют 2 мл 7 н раО вора .HCL в диоксане (14 ммоль), реакционную смесь охлаждают до -20°С, прибавл ют 0,55 мл (4 ммоль) третбутилнитрита, вы-держивают 20 мин при -15°С и вливают в 200 мл охлажденного до -5°С раствора KCL. (При дальнейшей обработке температуру раствора азида поддерживают не выше +3 ) Азид (5) экстрагируют этилацетатом (2 раза по 200 мл), промывают последовательно водой, 5% раствором NaHCQj, водой, высушивают над (10 мин) и упаривают досуха в вакууме (5°С, 0,1 мм рт. ст.) Остаток раствор ют в 30 мл диметилформамида , 15 мин встр хивают с размельченными молекул рным ситами А5(2 гр), отфильтровывают и фильтрат выдерживают 1 ч при 50°С (в течение первых 15-20 мин выдел ютс пузырьки азота). Полученный раствор гзоцианата (6) прибавл ют к раствор2 ,23 гр (2 ммоль) трифторацетата п-нитробензи лового эфира о-бензилтирозил-валилгистидил-пролил-фенилаланина (7) и 0,55 мл (4 ммоль) триэтиламина в 12 мл диметилформамида и выдерживают 15 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в 200 мл воды, объемистый осадок отфильтровывают , промывают последовательно 5% раствором NaHCOi, водой, раствором KHSO, водой. Влажный продукт суспендируют в этилацетата, отфильтровывают , промывают этанолом (30 мл), высушивают и переосаждают из диметилформамида - этанол-вода. Высушивают в .вакууме над P«O,/KOH. Выход 1,92 гр (62%), счита на аминокомпоненту , т. пл. 187-190°С (разл.). /«ti,2 2 - 22 (С 1, диметилформамид); %0,93 (А Rf 0,95 (Б), R/0,67 (Г); RiO,54 (Д); Ен 0,48 (рН 1,9) Найдено, %: С 57,94, Н 5,96; N Вычислено, %: С 57,66; Н 6,33; N Сев Нвз Nf7 О/г Аспарагинил-аргиннл-аза- t-гомо-валил-тирозил-валил-1 истидил-пролил-изолейцин (15). К раствору 1,8 г (1,24 ммоль) (6) в 40 мл смеси метанол-уксусна кислота-вода (6: :1:1) прибавл ют 1 гр палладиевой черни и гидрируют 24 ч, катализатор отфильтровывают , фильтрат упаривают до объема 5 мл приливают 50 мл абсолютного этанола и сно-. ва упаривают до объема 5 мл. Упаривание этанола повтор ют еше 2 раза, образовавшийс осадок отфильтровывают, промывают этанолрм и эфиром. Полученный продукт раствор ют в 100 мл воды и после насышени н-бутанолом промывают 2 раза по 5 мл н-бутанола ij н-бутанрлом экстрагируют октапептид (9) (3 раза по 150 мл). Объединенные экстракты упаривают в вакууме (30°С, 12 мм рте. ст) (до объема 15 мл, остаток растирают с этанолом, осадок отфильтровывают и высушивают, в вакууме над РгОу (КОН при 60°С. Выход 1,1 г (80%), т. пл. 195-197°С (разл.). ,9 (С I, 1 н. CHjCOOH), RiO,24 (А).Rf 0,12 (Б). RrO,12 (Г); Rr 0,08 (Д); ЕНЙ 0,75 (рН 2,4). Найдено: %: С 50,76; Н 6,99; N 18,64. Вычислено,% С 51,19; Н 7,43; N 18,65. С4 Нгз N««O« CHjCOOH ЗНгО . Аминокислотный состав: 0,9; Aggrg 0,9, Val 1,0; Туг 0,9; His 1,1; Pro 0,9; lie 1.0. Полученные соединени октапептид-(Г-аспарагин , 3-аза-({-гомовалин, 5-валин, 8-изолейцин ) ангиотензин II испытывают на ингибирование специфической миотропной активности ангиотензина II в опытах in vitro и понижение его эффекта на кров ное давление крыс в опытах in vivo. Методика исследовани . Миотропные свойства (1-аспарагин, 3-аза-с (-гомовалин, 5-валин, 8-изолейцин) ан гиотензина И в опытах in vitro изучали согласно методике, регистрирующей изотонические сокращени восход щей ободощной кишки (colon ascendens) крыс, вл ющейс наиболее чувствительным тест-органом дл исследовани миотропнойактивности ангио: тензина II. Использован прибор ВИ6-5МА в нашей модификации. Антагонистические свойства изучены в диапазоне концентраций - 10 ммол /л, врем предварительной экспозиции кишки с исследуемым соединением составило 3 мин. При вычислении кумул тивных кривых концентраци -эффект (КККЭ) применена машинна обработка экспериментальных данных (кажда точка определ лась как средн из 6-10 опытов) .с определением доверительных интервалов при Р 0,05. Дл количественной-характеристики кон курентного антагонизма (1-аспарагин, 3-аза Х -гомовалин, 5-валин, 8-изолейцин)- ангиотензина II вычислены параметры pAj. В опытах in vivo регистрируют кров ное давление у наркотизированных уретаном крыс. После предварительной (1 мин) инъекции исследуемого соединени в дозах 10,50, 100, 250 и 500 мгк/кг животным ввод т ангиотензинамид в стандартных дозах 0,05, 0,5 и 5,0 и 25 мкг/кг. Антагонизм соединени исследован также при инфузионном .его введении 10 и 100 мгк/кг/мйн в течение 20 мин. Вычислены кривые доза-эффект дл ангиотензина в присутствии и в отсутствии антагониста . Результаты В опытах на изолированной восход щей ободошной кишке крыс (1-аспарагчн, 3-аза- -гомовалин , 5-валин, 8-изолейцин) ангиотензин ,II в концентраци х - не про вл ет миотропное действие, но в концентраци х пор дка - моль вызывает прогрессивное параллельное перемещение кумул тивных кривых концентраци -эффект ангиотензина II в сторону высших концентраций , т. е. про вл ет типичный конкурентный антагонизм с ангиотензином. Вычисленные параметры pAj составл ют 9,70±0,20. В опытах in vivo соединение I значительно антагонизирует прессорное действие ангиотензина II. При инъекционном введении (З-аза-оС-гомовалин, 8-изолейцин) -ангиотензина в доз 50 мкг/кг требуетс 10кратное увеличение дозы ангиотензина и 100-кратное при дозе 100 мкг/кг. Инфузи антагониста со скоростью 10 мйг/кг/мин перемещает кривую доза-эффект ангиотензина на 1 .пор док (10-кратно), ЮОмкг/ /кг/мин - на 2 пор дка (100-кратно). Формула изобретени Октапептид формулы L-Asn-L- Ar -ага-ct-homo- L -Val-Туг-L-Уаэ;-L-His-L-Pro-С-He обладающий способностью специфически ингибировать прессорный эффект и миотропное действие ангиотензина И. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Regoli D., Park W. К., Rioux F,Phar nacology of angiotensin, Pharmacol. Rev., 1974. 26, c. 69.