SU980615A3 - Способ получени полипептидов - Google Patents
Способ получени полипептидов Download PDFInfo
- Publication number
- SU980615A3 SU980615A3 SU782700902A SU2700902A SU980615A3 SU 980615 A3 SU980615 A3 SU 980615A3 SU 782700902 A SU782700902 A SU 782700902A SU 2700902 A SU2700902 A SU 2700902A SU 980615 A3 SU980615 A3 SU 980615A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- amino
- resin
- acid
- protected
- group
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/1008—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1021—Tetrapeptides with the first amino acid being acidic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
- C07K7/062—Serum thymic factor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
(Б) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ
I
Изобретение относитс к способу получени новых полипептидов - биологическиактивных соединений, которые могут быть применены в медицине.
Известен метод твердофазного сии- j теза, который широко используют в химии пептидов. Сущность метода состоит в присоединении С-концевой аминокислоты , синтезируемой пептидной цепи,- К твердому полимеру ковалентной св - ю зью и последовательном присоединении остальных аминокислот ступенчато (одна за другой ) пока не будет собрана вс необходима аминокислотна последовательность 1 .IS
Известен также метод, при котором синтезированный пептид удал ют с полимерной подложки и отщепл ют оставшиес защитные группы. Метод позвол ет в процессе синтеза удал ть побоч- ао ные продукты, избыток реагентов филь- трованием и отмывкой. В качестве носител используют различные нерастворимые полимеры, содержащие в своей структуре функциональные группы, при- 26
годные дл ковалентного присоединени первой защищенной аминокислоты, такие .как целлюлоза, поливиниловый спирт, полиметилметакрилат, сульфированный полистирол, хлорметилированный сополимер стирола и дивинйлбензола, бензгидриламинна смола и т.п.. Не вступающие в реакцию функциональные группы аминокислот, из которых строитс пептидна цепь, блокируют, использу обычно примен емые в пептидной химии защитные группы, например третбутил оксикарбонильна , бензилоксикарбониль на , бензильна и т. п. Деблокирование защитных групп конечной пептидной цепи осуществл ют обычно с помощью отг носительно м гкой обработки защищенного пептида кислотой (например, трифторуксусной ). Использование известных методов синтеза позвол ет получит ь полипептид, обладэющий своеобразными фармакологическими свойствами С 2 ..Цель изобретени - получение ново-, го полипептида.
Поставленна цель достигаетс способом получени полипептидов общей формулы
R - Х- Lys - у - Gin - R, (1 )
X;
L Ala, OAla;
де
С1Г
Y:
dr, DAla, 2 Me Ala;
ег
R: Н, CHgCO, С„Н
,..
R: ОН, NH
2
заключающийс в том, что замещенный по аминогруппе L-глутамин присоедини- Ю
ют к нерастворимой полимерной смоле ковалентной св зью предпочтительно в среде абсолютного этанола при удал ют oi-аминозащитную груплу от Lглутамина обработкой продукта присо- 15 единени аминокиЪлота-полимерна смола трифторукйусной кислотой, деблокированную аминогруппу L-глутамина подвергают взаимодействию с У-аминокислотой , защищенной по oi-аминогруппе, 20 использу предпочтительно карбодиимидный метод, после удалени о -аминозащитной группы обработкой трифторуксусной кислотой,продукт ввод т во взаимодействие с L-лизином, защищенным по 25 о -аминогоуппе, .предпочтительно использу , карбодиимидный метод, полученную защищенную по oi-аминогруппе трипептидпрлимерную смолу деблокируют обработкой трифторуксусной кислотой и трипептид-полимерную смолу конденсируют с N-R-замещенной с Х-аминокислотой, защищенной по ее об-аминогруппе, предпочтительно использу карбодиимидный метод, обработкой .полученного продукта кислотой, если R-OH, или аммиаком в диметилформамиде, если R-MHg отщепл ют пептидную цепь от смолы и защищенный пептид деблокируют обработкой трифторуксусной кислотой, и в случае использовани бензгидриламиновой смолы (R-NH2) независимо от обработки продукта кислотой или аммиаком. Предпочтительным вариантом способа вл етс использование в качестве полимерной смолы хлорметилированного полистиролдивинилбензола и бензгидрил аминовой смолы. Пример 1. При получении полипептида используют о-нитрофенидовый эфир Fтpeтбyтилoкcикapбoнил-L.-fлутамина , М-третбутилоксикарбонил-М-2-хлорбензилоксикар6онил-1-лизин , N-т рётбутилоксикарбонил-0-бензил-L-ceрин , № третбутилоксикарбонил-1-аланин В этих реагентах третбутилоксикарбонильна группа в дальнейшем будет обозначатьс сокращенно как ВОС-группа . Реагенты дл определени аминокислотной последовательности марки.Секвенал (Sequenal), а именно: дициклогексилкарбодиимид , флуорескамин и смола дл твердофазного синтеза. Смола , использованна дл синтеза, представл ла собой хлорметилированную полистирол-дивинилбензольную смолу в виде гранул размером 200-(00 меш, сохлора на грамм смолы. Дл получени полипептида 2 ммоль ci-BOC-L-глутамина этерифицируют 2 ммоль хлорметилированной смолы в среде абсолютного спирта., содержащего 1 ммоль триэтиламина, в течение 2 ч. при 80 С. Полученную смолу , содержащую остаток ВОС-глутамина, присоединенный к ней сложноэфирной св зью, отдел ют фильтрованием, промывают абсолютным спиртом и сушат до посто нного веса. Затем аналогичным образом присоедин ют другие о -ВОС-аминокислоты1 которые сочетают с деблокированной oi-аминогруппой на конце пептидной цепи, св занной с полимерной подложкой (смолой), в надлежащей последовательности,.использу в качествеконденсирующего (сочетающего ) реагента эквивалентное количестдержащую 1 дивинилбензола-и 0,75 ммоль о дициклогексилкарбодиимида. В результате этой последовательности реакций был получен полипептид формулы (О, причем после каждой реакции сочетани отбирают аликвоту смо.г1ы, которую анализируют с помосцью флуорескамина на полноту протекани реакции и, если при этом обнаруживают положительную флуоресценцию, что свидетельствует о неполном сочетании, то реакцию сочетани повтор ют с ToiJ же о(.-защищенной аминокислотой. 8 результате нескольких таких сочетаний получают промежуточный продукт - смолу, содержащую защищенный тетрапептид. Эту пептидсодержащую смолу расщепл ют с одновременным удалением защитных групп в аппарате Kel-F, использу безводный фтористый водород при 0°С в течение 60 мин,в присутствии 1,2 мл анизола на грамм пептидсодержащей смопы. Реакционную смесь, содержащую пептидный продукт, промывают безводным диэтиловым эфиром и экстрагируют водной кислотой. Полученный экстракт лиофилизируют и высушенный таким образом пептид хроматографируют на Био-Геле Р-6 в 1 N уксусной кислоте. Полученный полипептид имеет степень чистоты , характеризуетс аминокислотной последовательностью
Н - Ala - Lys - Ser - Glu - ОН
Дл идентификации используют тонкослойную хроматографию и электрофо- 5 рез, при которой тонкослойную хроматографию провод т на пластинках с тонким слоем силикагел (силикагель компании Бринкман с флуоресцентным индикато- , ром) толщиной 0,1 мм. Пластинки разме- ром см. Хроматографирование провод т с использованием 30 мкг образца исследуемого пептидного продукта и следующих элементов
Rfн-бутанол: пиридин: уксусна 5 кислота: вода 30:15:3:12
frf этилацетат:пиридин:уксусна ;кислота:вода 5:5:1:3
R этилацетат:н-бутанол:уксусна кислота: вода 1:1:1:1.20
Электроферетическое исследование провод т на образце весом 100 мкг с использованием 3 миллиметровой Ватмановской бумаги (11,,5 см) и пиридин-ацетатного буферного раствора с 5 рН . Электрофорез осуществл ют при Дл идентификации и доказательства гомогенности полученных пептидов использованы тонкослойна хроматографи и электрофорез, которые провод т следующим образом: дл тонкослойной хроматографии использованы образцы продуктов весом 20 мкг, хроматографию провод т на пластинках с тонким слоем силикагел (Кизельгель фирмы Мерк, ФРГ, размер пластинок см), использу в качестве элюента систему растворителей: н-бутанол-уксусна кис лота - этилацетат-вода в объемном отношении 1:1:1:1, а также на пластинках с тонким слоем целлюлозы марки
наг1р жении 1000 В в течение одного часа. Дл опрыскивани тонкослойных хроматографических пластинок и электрофореграмм используют реагент Паули и раствор нингидрина. В итоге получают следующие резульУаты: | Ri вещест52-1
во осталось на старте, R вещество осталось на старте и R О,336.Электрофорез в указанных услови х приводит к перемещению вещества на , см по направлению к катоду.
Примеры II-W.
Использу)Ч способ, аналогичный вышеописанному , дл получени замещен ных полипептидов, синтезирован р д полипептидов общей формулы
R - )С - Lys -Y - Glu - R
Эти пептиды получают твердофазным методом, с использованием в качестве твердой полимерной подложки бензгидриламинной смолы.
Результаты получени этих пептидов представлены в табл. 1. Таблица 1 боб (производства фирмы Истмен Кодак, размером 20jC20 см) и использованием в качестве элюента системы растворителей н-бутанол-пиридин-уксусна кислота-вода в отношении 15:10:3-12 (Rj). Электрофорез провод т на образцах весом 50 мкг, которые нанос т на бумагу Ватман Н 3 (размер листа $5 см), использу пиридин-ацетатный буферный раствор и разность потенциалов между электродами 1000 В; электрофорез в этих услови х продолжают в течение 1 ч. Дл опрыскивани тонкослойных хроматограмм и электрофоретограмм с целью про влени п тен используют реагент Паули и раствор нингидрина .
Результаты получени представлены в таб/1. 2 (величины Rf и пробег вев результате использовани аналогичных методик тонкослойной хроматографии и электрофореза дл исследовани пептидного соединени , полученного в примере IV было показано, что дл него свойственны следующие характеристики: R (0,155J, R| вещество остаетс .на старте, R| 0,2б5; при электрофорезе в указанных выше услови х вещество перемещаетс от старта на рассто ние 13,1 см по направлению к катоду. Примеру. Тетрапептидсодержащие смолы, имеющие защищенные остатки лизина и серина, полученные, какопис но в примерах I и Н,, ацилируют уксусным ангидридом в соответствующих услови х, после чего удал ют защитные группы и отщепл ют полимерную подложку. В итоге получают следующие ацилированные производные . еНчСО - Ala - Lys - Ser - Gin - ОН f .- г . . CH; CO-Sar - Lys-Sar- Gin - OH Приме p VI. Защищенные тетрапептид ные смолы,полученные,как описано в примерах I и I I ,переэтерифицируют сметила том натри а метиловом спирте в услови х обеспечивающих протекание реакции переэтерификации , привод щей к отщеплению пептидных продуктов от полимерной подложки. Последующее удаление защитных групп от полученных продуктов переэтерификации приводит к получению этерифицированных пептидных производных , соответствующих формулам
ществ при электрофорезе приведены от носительно тех же величин дл эталонного пептида H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-ОН ).
Таблица2 Н - Ala - Lys - Ser - GlnOCH Н - Sar - Lys - Sar - GlnOCHj. П p и M e p VI I. Тетрапептидсодержащие смолы, имеющие защищенные остатки лизина и серина, и полученные, как описано в примерах I и 11, подвергают обработке диэтиламином с целью отщеплени защищенных пептидов от твердой полимерной подложки в услови х, обычных дл проведени реакций такого рода. Последующее удаление защитных . групп приводит к получению следующих диэтиламидных производных указанных пептидов Н -Ala- Lys-Ser- G1,n,-H {CjHj) H-Sar-Lys - Sar-Gin -HCCgHj). П p и M e p VI I. Использу методы, описанные в примерах I и f, но замеща Ы-концевые остатки аланина и серина этильными группами, на заключительном этапе пептидного синтеза вместо защищенный аланина и сарколизина в реакцию сочетани ввод т эквивалентные количества соответствующим образом защищенных N-oi-этил-L-aлaнинa или Н-Ы-этил-сарколизина, в результате чего получают следующие N-этилированные пептиды С2Н5-Ala- Lys - Ser- Gin - ОН С. - Lys - Sar - Gin - OH. П p и M e p IX. От1Деплен1ие защищенных тетрапептидов, полученных в примере VIII от смолы с использованием раствора аммиака в диметилформамиде в услови х, обычных дл проведени реакции амидировани , с последующим
998
удалением защитных групп приводит к получению амидов соответствующих N- } этилированных пептидов
CjiHy - Ala - Lys - Ser - Gl n - NH,.
CjHy-Sar-Lys-Sar - Gin - NHj
П p им ер X, Защищенные ацетилированные тетрапептидные смолы, полученные в примере V, подвергают обработке раствором аммиака в диметилфор .мамиде в услови х, обычных дл проведени реакций амидировани , и после удалени защитных групп получают следующие амиды пептидов
CHjCO - Ala - Lys - Ser - - NH,;,.
CH CO-Sar-Lys-Sar- Gin - NH2
Приме p Ы XI-XXVI. использовании совокупности реакций и методов , описанных выше, дл удлинени пептидной цепи, получены следующи е полипептиды, замещенные по , концевым амино- и карбоксильным группам радикалами R и RR-Ala-Lys-Ser-Gin-R , где R и R обозначают заместители при аминокислотных остатках, приведенные в табл. 3 Таблица 3
Использу методики проведени тон ,кослойной хроматографии и электрофореза , описанные в примерах II и III дл соединени примера XXII получены следующие характеристики: ,23 R2 0,25, электрофоретическа миграци (перемещение) по направлению к катоду 0,88.
..10
Продолжение табл. 3
inj-i :::..j..,...
,
р,
H
Gly
H
Gly-Gly
H
Gly-Gly-Sar .
H Gly-Gly-Ser-Asn
Gin Gly
CIn
Gly-Gly
Gin Gly-Gly-Ser
Sar Gly
Sar
.. Gly-Gly
Sv Gly-Gly-Ser
Sar Gly-Gly-Ser-Asn
Gin Gly-Gly-Ser-Asn
Анализиру полученные пептидные прюдукты методами тонкослойной хроматографии и электрофореза, при использовании соответствующих методик, описанных к Т1римере I )л соединений, описанных в примерах XI и Х11.
Полученные результаты представле55 -ны в табл. k.
Таблица
Claims (3)
- Формула изобретени1 Способ-получени полипептидов об .щей формулыR - X - Lys -Y - G1 n - R, где X - Sar, L-Ala,55Y - Ser, Sar, D-Ala, ZMeAla;. R - H, CHjCO, OH, NH2,1198061512отличающийс тем, что за- ногруппе, предпочтительно использу мещенный по аминогруппе {.г утамин карбодиимидный метод; обработкой поприсоедин ют к нерастворимой полимер- лученного продукта кислотой, если Rной смоле ковалентной св зью предпоч- ОН, или аммиаком в диметилформамиде, тительно в среде абсолютного этанола 5 бсли R- Ш, отщепл ют пептидную цепь при , удал ют ot-аминозащитную от смолы и деблокируют защищенный пепгруппу от L-глутамина обработкой про- тид обработкой трифторуксусной кисло .дукта присоединени аминокислота-по- той и в случае использовани бензгидлймерна смола трифторуксусной кисло- риламиновой смолы ( R- NHg) независитой , деблокированную аминогруппу L- Ю мо от обработки продукта кислотой или глутамина подвергают взаимодействию аммиаком.с У-аминокислотой, защищенной по об-
- 2. Способ поп. 1,отличаюаминогруппе , использу предпочтитель- щ и и с тем, что в качестве полимерно карбодиимидный метод, после удале- ной смолы используют хлорметилированни ot-аминозащитной группы обработкой 5 ный полистирол дивинилбензола и бензтрифторуксусной кислотой, продукт вво- гидриламиновую смолу. д т во взаимодействие с L-лизином,Источники информации,защищенным по ot-аминогруппе, предпоч- прин тые во внимание при экспертизе тительно использу карбодиимидный ме- 1. Шредер
- 3., Любке К.Пептиды. Ч. I, тод, полученную защищенную по о -амино-20 М., Мир, 19б7, с. 398. группе трипептид-полимерную смолу де- 2. Horiki К., tgano К,, Inonye К. блокируют обработкой трифторуксусной Synthesis of the Merrifield Resin esКИСЛОТОЙ и трипептид-полимерную смо- ters of N-protected amino acids with ЛУ конденсируют с N-R-замещенной Х- the aid of Hydrogen bouding. Chem. аминокислотой, защищенной по ее о -ами-25 Letters, 1978, с. 165.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US85849677A | 1977-12-08 | 1977-12-08 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU980615A3 true SU980615A3 (ru) | 1982-12-07 |
Family
ID=25328451
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU782700902A SU980615A3 (ru) | 1977-12-08 | 1978-12-08 | Способ получени полипептидов |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
AT (1) | AT371104B (ru) |
AU (1) | AU519815B2 (ru) |
BE (1) | BE872608A (ru) |
SU (1) | SU980615A3 (ru) |
ZA (1) | ZA786870B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2586524C2 (ru) * | 2011-03-10 | 2016-06-10 | Глитек, Инк. | Способ получения гликопептида, имеющего сиалированную сахарную цепь, и способ получения производного сиалилгликоаспарагина |
-
1978
- 1978-12-05 AU AU42208/78A patent/AU519815B2/en not_active Expired
- 1978-12-07 BE BE192202A patent/BE872608A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-12-07 ZA ZA786870A patent/ZA786870B/xx unknown
- 1978-12-07 AT AT0874578A patent/AT371104B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-12-08 SU SU782700902A patent/SU980615A3/ru active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2586524C2 (ru) * | 2011-03-10 | 2016-06-10 | Глитек, Инк. | Способ получения гликопептида, имеющего сиалированную сахарную цепь, и способ получения производного сиалилгликоаспарагина |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ZA786870B (en) | 1980-07-30 |
BE872608A (fr) | 1979-06-07 |
AT371104B (de) | 1983-06-10 |
ATA874578A (de) | 1982-10-15 |
AU519815B2 (en) | 1981-12-24 |
AU4220878A (en) | 1979-06-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU957762A3 (ru) | Способ получени пептидов или их солей | |
Flouret | Synthesis of pyroglutamylhistidylprolineamide by classical and solid phase methods | |
Kalir et al. | (4‐Hydroxy‐3‐nitro) benzylated Polystyrene: An Improved Polymeric Nitrophenol Derivative for Peptide Synthesis | |
NL8020195A (nl) | Werkwijze ter bereiding van thymosine alfa1 en derivaten daarvan. | |
Bayer et al. | Retention of configuration in the solid phase synthesis of peptides | |
CA1141375A (en) | Tripeptides and method | |
Urry et al. | Studies on the conformations and interactions of elastin. Proton magnetic resonance of the repeating tetramer | |
US4215111A (en) | Peptides having ubiquitin-like activity | |
Blake et al. | THE SOLID‐PHASE SYNTHESIS OF ALPHA‐MELANOTROPIN | |
Szókán et al. | Structure determination and synthesis of lysine isopeptides influencing on cell proliferation | |
Stabinsky et al. | SYNTHESIS AND BIOLOGICAL ACTIVITY OF TUFTSIN AND OF [O= CTHR 1]‐TUFTSIN: A Novel Synthetic Route to Peptides Containing N‐Terminal L‐O= CThr and L‐O= CSer Residues | |
SU980615A3 (ru) | Способ получени полипептидов | |
US4176009A (en) | Method of measuring collagenase activity | |
CA1105925A (en) | Pentapeptide compositions and methods | |
Khosla et al. | Solid-Phase Peptide Synthesis of [L-Alanine3-L-isoleucine5]-angiotensin II | |
Pellegrini et al. | Pepsin‐catalyzed peptide synthesis | |
DE2202613A1 (de) | Verfahren zur herstellung von peptiden | |
Rapaka et al. | Synthesis of polypeptide models of collagen | |
Brückner et al. | Synthesis of L‐Prolyl‐leucyl‐α‐aminoisobutyryl‐α‐amino‐isobutyryl‐glutamyl‐valinol and Proof of Identity with the Isolated C‐Terminal Fragment of Trichotoxin A‐40 | |
Shinoda et al. | Bitter Taste of H-Val-Val-Val-Pro-Pro-Phe-Leu-OH Corresponding to the Partial Sequence (Positions 82~ 88) of Bovine ʲ-Casein, and Related Peptides | |
US4474691A (en) | Chromophoric peptides, a process for their preparation, agents containing them and their use for determining DD-carboxypeptidases | |
HU197757B (en) | Process for producing chromogen compounds | |
Eckstein et al. | Synthesis of peptide gels for the investigation of oligopeptide–oligonucleotide interactions | |
EP0505428B1 (en) | Chromogenic substrate | |
Mazurov et al. | Preparation of esters of amino acids and of peptides under mild conditions |