SU892871A1 - Циклический аналог брадикинина,обладающий пролонгированным гипотензивным действием - Google Patents

Abstract

ЦИКЛИЧЕСКИЙ АНАЛОГ ВРАДИКИ НИНА ФОРМУЛЫ г Лтд-Рго- Pro-dty-Phe- Йег- Pro - Ptic-Лгд i Обладающий пролонгированиьм гйпотензианмм действием. (Л

Description

Изобретение относитс  к синтезу нового соединени  - циклическому аналогу брадикинина, обладающему пролонгированнш гипотензивным действием , которое может найти применение в биологии и медицине. Брадикинин и другие пептиды, име ющие аминокислотную последовательность бргщикинина, широко распросранены в живой природе и выполн ют важные функции регулировани  биохимических и физиологических процессов в организмах животных и человека . С нарушением динамики образовани  и расщеплени  брадикинина и род ственных ему пептидов св заны различные заболевани  и патологические состо ни  человеческого организма l Однако несмотр  на высокую биоло гическую активность брадикинин не нашел применени  в медицине дл  лечени  этих нарушений вследствие кратковременностиего действи  (период полураспада брадикинина в орга низме 30 с) 2 , а также из-за некоторых нежелательных побочных  вле ний 1,3. Известен циклический аналог брадикинина Щ, обладающий проло«гированным гипотензивным действием (продолжительность эффекта 2ч). Однако при его применении кров ное давление начинает частично восстанавливатьс  уже через 5-10 мин после его введени . Цель изобретени  - расширение ар сенала средств воздействи  на живой организм. Поставленна  цель достигаетс  оп сываемым, циклическим аналогом брадикинина формулы Лгд-Рго-Рго-()1у-РЬе-Йе--Р-о -ГЬг: -Аг облешаищим пролонгированным гипотенэивнцм действием. Способ получени  описываемого сое динени  основан на известных методах пептидной химии, например методе активированных эфиров, с испольэованием блокировани  функциональных групп и последующего деблокировани  известными приемами .,5J . В приведенных примерах дл  синте за использованы производные аминокислот , поставл емые фирмой Reanal (Венгри ). Упаривание растворов провод т в вакуумном испарите/зе при . Температуры плавлени , которые определены в открытых капилл рах , приведены без исправлени . Индивидуальность полученных соединений проверена с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках Silufol или Merck Приведены хрс иатографические подвижности RJ на пластнн.ках Silufol в следующих системах: А - хлороформэтанол-этилацетат-уКСусна  кислотавода (85:5:8:2:0,25); Б - хлороформэтанол-Н .бутанол-этилацетат - вода (10:6:4:3:1); В - хлороформ-метанолвода (40:30:5); Г-Н .бутанол-уксусна  кислота - вода (4:1:1); Е - этилацетат-пиридин-уксусна  кислота вода (5:5:1:3), а также электрофоретическа  подвижность по отношению к гистидину E(.|j5 на бумаге FN -16 в 1 N или 5 N уксусной кислоте. П тна веществ обнаруживают осмотром хроматограмм в ультрафиолето.вом свете, а также опрыскиванием нингидридом, выдерживанием в парах иода, реагентом Сакагучи или при. помощи хлора и реагента бензидина. Дл  идентификации соединений использовали .спектры при 60 -МГц, сн гые на приборе Perkin-Elmer R 12А а также спектры при 90 МГц, получ ные на приборе ..Bruker WH-90. Аминокислотный анализ выполнен на анализаторе Biocal ВС-200 после гидролиза пептид.ов в запа нной ампуле при И0°е в течение 24 ч. Хроматографическа  очистка промежуточных продуктов осуществлена на модифицированном приборе Jobin Yron Chro matospa К с использованием силикагел  Н 60 фирмы Merck. Пример l.n-Нитробензиловый эфир трет-бутоксикарбонилфенилаланилбензилсерилцролина (3). К раствору 10,3 г (22,3 ммоль) пентафторфенилового эфира трет-бутоксикарбонилбензилсерина и 6,7 г (23,4 ммоль) гидрЬхлоридаfi -нитробензилового эфира пролина в 200 мл диметилформамида добавл ют триэтиламин до рН 8. Смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре, упаривают, остаток раствор ют в смеси 100 мл эфира и 100 мл -воды. Органический слой отдел ют,промывают 100 мл 10%ного раствора бикарбоната кали ,затем 100 мл 10%-ного раствора бисульфата кали , сушат над безводным сульфатом магни , фильтруют, упаривают. Получают масло, содержащее и -нитробензи .ловый эфир трет-бутоксикарбонилбензилсерилпролина (1), Rf(A) 0,95, Ri(B) 0,77, R|(B)0,95, Н(Г) и пентафторфенол. Его раствор ют в трифторуксусной кислоте , вьщерживают 20 мин при комнатной температуре, затем упаривают. Остаток, содоржаидий трифторацетат м-нитробензилового эфира бензилсерилпролина (2), нейтрализуют триэтиламином до рН 8, добавл ют 10 г (23f2 ммоль) пентафторфенилового эфира трет-бутоксикарбонилфенилаланина . Вьщерживают 1 ч при комнатноп температуре, затем добавл ют 1 м.п р-диметиламиноэтиламина. Спуст 

10 мин смесь нейтрализуют уксусной , кислотой до рН б, упаривают, остаток раствор ют в смеси 100 мл эфира и 100 мл воды, эфирный слой отдел ют , промывают 100 мл 10%-ного раствора бикарбоната кали , 100 мл 10%-ного бисульфата кали , затем 100 мл воды. Добавл 1от 50 мл бензола , упаривают, полученное темнокоричневое масло очищают хроматографически (700 г силикагел , элюируют сначала смесью гептан-этилацетат (5:1), затем хроматографической системой (А). После упаривани  элюата получают светло-коричневое масло. Выход 9,7 г (64,5%). Дл  аналитических целей небольшую часть масла закристаллизрвывают растиранием с гексаном . (ci) -29,(c 1, диметилформамид ) . Ri(A) 0,94, R/ ()0,77 «(В) 0,96, Rf(Г) 0,81.

Пример. Трифторацетат Ц-нитробензилового эфира фенилаланилбензилсерилпролина (4).

9,0 г (13,3 ммоль) раствор ют в 50 мл трифторуксусной кислоты, выдерживают 20 мин при комнатной температуре , упаривают при , остаток растирают со 100 мл безводного эфира.Получают масло, выход 8,9 г (97%). Дл  аналитических целей небольшую часть масла закристаллизовывают растиранием с гексаном. (Л)д -16,3° (с 1:,диметилформамид) ; Шэ (1 N уксусна  кислота). R/(A)0,12, Кг(Б)0,66, Rf(B)0,88, Rj(r)-0,62.

П р и м е р 3. п-Нитробензиловый эфир трет-бутоксикарбонилипролилглицилфенилаланилбензилсерилпролина (7)

Из (4) аналогично синтезу соединени  (3), использу  пентафторфениловый эфир трет-бутоксикарбонилглицина , получают смесь, состо щую,

изп -нитробензилового эфира третбутоксикарбонилглицилфенилаланилбензилсерилпролина (5)-, Rf(A) 0,71 Rf(B) 0,76, R(B) 0,95, К(Г) 0,80, и пентафторфенола, которую обрабатывают трифторуксусной кислотой в услови х, описанных дл  соединени  (2), с образованием масла, содержащего трифторацетат Ц-нитробензилового эфира глицилфенилаланилбензилсерилпролина (6) (,58) 1 N уксусна  кислота, Rf(A) 0,02, R(B) 0,67, R(r) 0,62. Это маело нейтрализуют и используют дл  реакци1 с пентафторфениловым эфиром третбутоксикарбон ишропилена аналогино получению соединени  (3). Полученное масло очищают хроматографически {700 г силикагел , элюируют сначала хлороформом, затем смесью: хроматографическа  система, А изопропанол (4:1) . После упаривани  элюата получают светло-коричневое масло, которое закристаллизовывают

растиранием смесью эфира с гексаном (1:1). выход 62%. (о) -43,00(01, диметилформамид), К(А)0,58, Rj(B) 0,72, Rf(B)0,94, Rj(r)0,78.

П р и м е р 4.. Трифторацетат пнитробензилового эфира пролилглицилфенилаланилбензилпролина (8).

Получают из (7) аналогично синтезу соединени  (4). выход 2,47 г (98%). (ai) -27,8°(c 1, диметилформамид ), ,57 (1 N уксусна  кислота ); Rf(A)0, R,(B)0,13, RflB) ,81, Rj(r).0,26.

П р и м е р 5. Трет-бутоксикарбонилнитроаргинилпролин (9).

20 г (53,6 ммоль) трет-бутоксикарбрнилнитроаргинина суспендируют в 300 мл безводного этилацетата и при охлаждении (0°С) добавл ют 10,3 г (56 ммоль) пентафторфенола и 11,6 г (56 ммоль) дициклогексилкарбодиимида Перемешивают-10 ч при , фильтруют и при фильтрат экстрагируют 10%-ными растворами бикарбоната кали  и водой (по 100 мл), затем сушат безводным сульфатом магни , отфильтровыва 1Т и упаривают. Полученное масло, содержащее пентафторфениловый эфир трет-бутоксикарбонилнитроаргинина , раствор ют в 300 мл диметилформамида, добавл ют 9,25 г (80 ммоль) пролина, N-метилморфолии до рН 8 и по капл м воду - до растворени  пролина. Выдерживают 2 ч при комнатной, температуре, упаривают, остаток раствор ют в 100 мл хлороформа , полученный раствор про ««ывают 50 мл 10%-ного раствора бисульфата кали , 50 мл виды, а затем 100 мл насыщенного раствора бикарбоната кали . Бикарбонатный экстракт промывают 5QL мл эфцра и нейтрализуют избытком бисульфата кали  до рН 2. Полученную смесь экстагируют 100 мл хлороформа, экстракт промывают 50 мл воды, сушат безвод ным сульфатом магни . Фильтруют, упаривают, полученное масло закристаллизовывают растиранием со смесью этилацетат-гексан (1:1). Выход 10,3 (46,1%). ((,0® (с 1, диметилформамид ). Н(А)0,14, R4(S)0,50, R(В) 0,78, Ri(r)0,67, 64(Д)0,84.

П р и м е р 6. Трифторацетат нитроаргинилпролииа (10).

10,0 г (24,0 ммоль) (9) раство5р ют в 50 мл трифторуксусной кислоты, выдерживают 20 мин при комнатной температуре , упаривают при , остаток растирают со 100 мл безводного эфира. Образовавшийс  осадок отфильтровывают , промывают эфиром и выдерживают над гидроокисью ка и  при , 1 мм рт.ст. Выход 99%. W « -24,4 (с 1, диметилформг1мид) , „,,65 (1 N уксусна  кислота). R|(A)0,08, Ri(B)0,20, R(B)0,22, R(Д)0,40. Приме эр 7. Трет-бутоксикарбонилнитроаргинилнитроаргинилпролин (11). 2,0 г (5,67 ммоль) (10) и масло, содержащее 5,8 ммоль пентафторфениловрго эфира трет-бутоксикарбонил ниtpoapгининa см. синтез соединени  (9)J, раствор ют в 50 мл диметил формамида и добавл ют N-метилморфолин до рН 8. Выдерживают 1 ч при комнатной температуре, затем упаривают , остаток раствор ют в 50 мл хлористого метилена и экстрагируют 50 мл 10%-ного йодного раствора бисульфата кали . Органический слой отдел ют, упаривают и остаток очищают хроматографически (200сг силикагел , элюент - сначала этилацетат , затем хроматографическа  система Б). Фракцию элюата упаривают, остаток растирают с эфиром. Выход 0,75 г (21,4%). , П р и м е р 8«h -НитробензиловыЯ эфир трет-бутоксикарбонилнитроаргинилнитроаргинилпролилпролилглицилфейилаланилбенэилсерилпролина (12) 0,7 г (11) (1,13 ммоль) и 0,56 г (1,13 ммоль) Комплекса F встр хивают с 50 мл хлористого метцлеиа до растворени . Затем добавл ют 1,1 г (1,30 ммоль) (8) и триэтилами до рН 9. Вьщерживают 42 ч при комнатной температуре. Затем добавл ют 0,1 мл уксусного ангидрида, выдержи вают ЗО мин при комнатной температу ре. Упаривают, остаток обрабатывают смесью 20 мл воды и 20 мл этилацетата . Образовавшийс  кристаллически осадок отфильтровывают и на фильтре промывают 5 мл этилацетата. Выход 0,6 г (40,0%). ((01),0 (с 1, диметилформамид). К|(Б)0,57, Rf(B) 0,73, Rf(r)0,42. П р И м е р 9. ТрифторацетатП нитробензилового эфира нитроаргинил нитроаргинилпролилпролилглицилфенил аланилбензилсерилпролина (13). Получгиот из (12) аналогично синтезу соединени  (10). Выход 93%. (об)| ,2 (с 1, диметилформамид) (1 N уксусна  кислота), ,К(Б)0,21, R (В) 0,54, Rf(r)0,43. Примерю. Трет-бутоксикарбонилфенилаланилнитроаргинилнитроар гинилпролилпролилглицилфенилаланилбензилсерилпролин П-нитробензиловый эфир (14). 0,5 г (0,37 ммоль) (13) и 0,4 г (1,03 ммоль)h -нитрофенилового эфира трет-бутоксикарбонилфенилаланйна раствор ют в смеси 5 мл диметилформамида и 50 мл хлористого метилена, затем добавл ют триэтиламин до рН 8 Ввдерживают 20 ч при комнатной температуре , затем упаривают, остаток обрабатывают смесью 20. мл 1%-ного водного бисульфата кали  и 20 мл эфира. Образовавшуюс  смолу растирают с безводным эфиром, затем перемешивают с 20 мл безводного эфира на магнитной мешалке. Отфильтровывают , осадок высушивают,, затем перемешивают с 20 мл воды. Декантируют, высушивают в эксикаторе над п тиокисью фосфора. Выход 0,42 г (77%). (о(),8° (с 1, днметилформамид) , Н|(Б)0,-35, R.{(B)0,60, Н(Г)0,52. П р им ер 11. Трет- бутоксикарбонилфенилаланилнитроаргинилнитроаргинилпролилпролилглицилфенилаланилбензилсерилпролин (15). г (0,203 ммоль) (14) раствор ют в смеси 10 мл метанола и 2 мл воды, затем добавл ют 24 мг гидроокиси натри . Выдерживают 7 дней при комнатной температуре, упаривают, остаток растирают с безводным эфиром , декантируют. Полученный порошок перемешивают с 10 мл воды, к которой добавл ют 0,1 мл насыщенного раствора бисульфата йали . Фильтруют , осадок на фильтре проьвлвают водой , сушат в эксикаторе над п тиокисью фосфора. Выход 0,20 г(73,5%). («),0° (с 1, диметилформамид). R(A)0,06, R{(B)0,30, RI (В)-0,54, Ri(r)0,47. П р и м е р 12. Пентафторфениловый эфир трет-бутоксикарбонилфенилаланилнитроаргинилпролилпролилглицилФенилаланилбензилсерилпролина (16). 170 мг (0,127 ммоль) (15) и 150 мг ( 0,198) комплекса раствор ют в 15 мл безводного хлористого метилена . Выдерживают 20 ч при комнатной температуре, упаривают, остаток растирают с безводным эфиром, фильтруют , осадок на фильтре промывают эфиром. Выход 176 мг (91%), Ri(B) 0,60. Пример 13. Гидрохлорид пентафторфенилового эфира фенилаланилнйтроаргинилнитроаргинилпролилпролилглнцилфенилаланилбензилсерилпролина (17)., 160 мг (0,105 ммоль) (16) раствор ют в 2 мл хлористого метилена, затем добавл ют 0,5 мл насыщенного раствора хлористого водорода в диоксане . Выдерживают 1 ч при комнатной температуре, упаривают, остаток растирают с безводным эфиром, фильтруют . Выход 141 мг (92%), R(Б)0,30 П р и м е р 14. Цикло-(фенилаланилнитроаргинилнитроаргинилпролилпролилглицилфенилаланилбензилсерилпролил ) (18). 135 мг (0,092 ммоль) (17) раствор ют в 2 мл диметилформамида и полученный раствор добавл ют к 500 мл диоксана (кип т т над натрием н перегон ют непосредственно перед употреблением ) . Затем ввод т 0,1 мл диизопропилэтиламина , смесь энергично перемешивают и выдерживают в атмосфере- аргона при комнатной температуре . Упаривают, остаток растирают с безводным эфиром, декантируют, высушивают , затем перемешивают с 10 мл воды, снова декантируют и высушивают Получениое вещество очищают на 150 м силикагел , элюент - хроматографи- ,ческа  система А - изопропанол (4:1) Фракций элюата, содержащую чистый циклопептид, упаривают, остаток растирают с безводным эфиром и декантируют , полученный порошок суспендируют в 5 мл Воды и снова декантируют . Осадок высушивают в вакуумном эксикаторе над п тиокисью Фосфора. ВыхЬп 24.8 мг (21.1%К (Aii; -61.8

-61,8

Выход 24,8 мг (21,1%), (Л)

D ( с 1, метанол). Кг.(Б) 0,487 Rx (Г) 0,45. .

Пример 15. Цикло-брадикинин диацетат.

23 MF (0,019 ммоль) (18) гидрируют при атмосферном давлении в присутствии палладиевой черни в растворе метанола (3 мл) и уксусной кислоты (0,1 мл) в течение 70 ч, три раза мен   катализатор . Отфильтровывают , упаривают, лиофилизируют из воды. Получают пушистый порошок. Выход 15,5 мг (71%). Ен зОбЭ (1 N уксусна  кислота). Rf(r)0,28.

Биологическа  активность цйкло , бращикинина (ЦБ) изучена в опытах in vivo (определено вли ние на кров ное давление наркотизированных крыс) и in vitro (определено вли ние на сократительную способность матки крыс). В качестве стандартного соединени  использован синтетический препарат брашикинина производства фирмы Реанол (БК).

Проведены следующие исследовани 

1.Определение вли ни  на кров ное давление крыс.

Эксперименты проведены на крысах обоих полов массой 200-220 г. Животные наркотизированы 25% уретаном 0,5 мл/100 г. Кров ное давление из сонной артерии регистрировалось с помощью ртутного манометра на закопченой ленте кимографа. ЦБ и БК вводились в виде инъекций в бедренную вену объемом 0,1 мл/200 г в дозах 0,5-500 мкг/кг.

2.Определение миотропного действи .

В экспериментах использованы крысы-сам (си весом 200-220 г. Регистрированы изотонические сокращени  изолированных маток крыс в определенном режиме температуры ().и

аэрации. Использован метод кумул тивных сокращений fj . Проверены концентрации ЦБ и БК в диапазоне 10 моль/л. Регистраци  проведена на модифицированном приборе ВИ 65МА 2,3.

Результаты исследовани .

В опытах in vivo на наркотизированных уретаном крысах установлено, что порогова  концентраци  БК 0 0,5 мкг/кг, ЦБ - 250 мкг/кг. В дозе 0,5 мг/кг ЦБ вызывает эффект понижени  артериального давлени  на 40 мм рт.ст. продолжительностью более 2 ч и при этом тенденци  восстановлени  исходного уровн  кров 5 ного давлени  не наблюдалась(см. фиг.1 ), в то врем  как длительность эффекта природного брадикинина лишь 30 с.

0

В опытах in vitro на изолированной матке крыс установлено, что ЩВ обладает слабой миотропной активностью , не вызыва  полной ответной реакции органа даже при высоких

5 концентраци х ( ot-О, 52±0,03; рД2 7,86+0,12; см. фиг. 2). Миотропна  ответна  реакци  циклобрадикинина составл ет лишь 50% от эффекта Орадикинина , что свидетельствует об

0 избирательности биологического действи . На фиг. 3 представлена схема синтеза циклобрадикина.

Таким образом, ЦБ по сравнению с природным брадикинином обладает

5 чрезвычайно пролонгированным депрес ,сорным эффектом. Миотропный эффект ЦБ значительно слабее эффекта бргщикинина .

0

Сравнение биологических свойств циклобрадикинина и известного ранее циклического аналога брадикинина {4 показывает. Что первый вызывает более выраженное и устойчивое поинжение кров ного давлени . Так, если

5 после применени  известного циклического аналога брадикинина кров ное давление начинает частично восстанавливатьс  уже через 5-10 мин, то при введении новрго ансшога цик0 лобрадикинина кровйное давление Понижаетс  и держитс  на одном уровне в течение нескольких часов. Такой эффект нельз  получить увеличением концентрации известного аналога,

5 так как вследствие чрезмерного понижени  {сров ного давлени  животные погибают. .

f.r/. wo

ек

50

f-b+-+4w

ro-7 Й-6 c, «ом/л

Pile Are Arj

fto

Pro

Phe

Sef

Pro

Claims (1)

1. ЦИКЛИЧЕСКИЙ АНАЛОГ БРАДИКИНИНА ФОРМУЛЫ обладающий пролонгированные гипотензивным действием.

   Q ро