SU664468A1 - Способ получени активированных носителей - Google Patents
Способ получени активированных носителей Download PDFInfo
- Publication number
- SU664468A1 SU664468A1 SU772491073A SU2491073A SU664468A1 SU 664468 A1 SU664468 A1 SU 664468A1 SU 772491073 A SU772491073 A SU 772491073A SU 2491073 A SU2491073 A SU 2491073A SU 664468 A1 SU664468 A1 SU 664468A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- carrier
- immobilization
- epoxy resin
- operational stability
- preparation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВИРОВАННЫХ НОСИТЕЛЕЙ
Изобретение относитс к.способу получени активированных йодонерастворимых носителей дл иммобилизации белков. Иммобилизованные на таких сорбентах ферменты могут быть применены как химические реактивы и йро- мьшшенные катализаторы дл т прОВёде- ни ферментативных реакций в химической , фармацевтической и пищевой отрасл х промышленности. Иммобилизаци ферментов путем их присоединени к нерастворимым НО Сйтел м . вл етс одним из наиболее известных способ улучшени технологических показателей этих биокатализаторов . Метод иммобилизации ферментов заключаетс в-присоединении их к активированным нрсите;п м, причем сво ства получаемых катализаторов во мно гом завис т от способа получени и активации носител . В качестве, носителей часто используют органомине- ральные материалы, в частности, покрытые полимерами пористые кремне- земные материалы. Носители такого типа характеризуютс Хбреминй гидродинамическими свойствами и достаточной стабильностью получаемых препа- ратов,. свойства которых во многом- завис т от метода внесени и активаций полимерного сло на носителе. Известен способ получени модифицированных твердых носителей путем покрыти поверхности носител полимером , в качестве которого исполь-ззтот полиакроттейн р. Слой полимера образуетс на поверхности носител в результате пропитывани носител мономером, содержащим свободные альдегидные группировки. Полимеризаци происходит на поверхности носител . Иммобилизаци фермента производитс по реатсцйи между альдегидными группами носител и,аминогруппами фермента. Такой способ позвол ет получить иммобилизованные на органоминеральных носител х ферменты, однако он
Ограничивает модификацию носител только альде идсодёржгащидаГ полимерами . Св эьшание ферментов через альде .гиды не всегда позвол ет получить активнь1е препараты. Кроме того, получаемые лин ейные полимеры обладают значительной раствортимостью и не скрепл ют неорганическую структуру носител .
Известен также способ получени активиройанного твердого носител , пригодного дл приготовлени водонерастворимых ферментных перпаратов. На поверхности носител в результате полимеризации образуетс слой полимера 2, в качестве которого используют полиакролеин. Носитель (фарфор, измельченное стекло) пропитывают мономером, содержаашм свободные альдегидные группировки. Полимеризаци происходит на поверхности носител .
В результате модификйции носител таким способом получают носитель со свободными альдегидными группами. Иммобилизаци фермента (трипсина, папаина) производитс чер1ез реакцию альдегидных групп носител е аминогруппами фермента.
Недостатком этого способа вл етс мала операционна стабильнбс ь получаемых активированных йосйтелей . Покрытие неорганического материала линейными полимерами, образуюпщмйс при полимеризации виниЛыйпс полимеров, не обеспечивает доСтаточйую нерастворимость и, ёйёдовательно , стабильность получаеиъкферментнь1х препаратов. Такой способ Oihpaнигчива ет модификацию носител только альдегидсодержащими полимерами, а св зывание ферментов через альдегидные группы не всегда Дает возможност получить активные препараты. Кроме того, способ не обеспечивает высокого содержани белка на едииицу носител . При иммобилизации трипсина достигаетс св зыванием 0,2 мг белка на 1 мл носител .
Цель изобретени - повышение операционной етабильности носителей дл иммобилизации биоактивных веществ .Это достига1етс известщ.1м способо пдлучёнйй актйвйрО ваннь1Х носителей дл иммобилизации белков путем покрыти пористого неорганического gaтериала с диаметром пор 200-2000 А
пленкообразующим веществом, в ка-чёстве которого используют эпоксидную смолу И отверждают ее на носителе полиэтиленполиамином или 1,6-гексаметилендиамином в соотношении эквивалентов эпоксидной смолы и амина 1:0,25 при 100-120°С в течение не менее 1ч.
Способ осутцествл ют следующим образом . 5 вес. ч. силохрома или силикагел смачивают 9 вес. ч. 1,7% эпоксидной смолы в ацетоне. После выпаривани растворител при 100С провод т затвердение полиэтиленполиамином или 1,6-гексаметиллендиамином посредством кип чени в их водных растворах ВТ течение I ч (соотношение, эквивалентов эпоксидной смолы и амина 1:0,25). Носитель фильтруют, промывают водой и высушивают в термостате при . Получают носитель, содержащий на поверхности пор пленку С активными эпоксидными группами, способными к непосредственному присоединению биоактивных и еще с тв.
При таком способе можно провести
полимеризацию при повышенной температуре , :способству этим образованию поперечных св зей между молекулами полимера, а также св зей между полимером и йОверхностью носител . Образование в порах носител полимерной пленки закрепл ет структуру носител: , уменьшает нежелательное адсорбционное воздействие молекул фермента с носителем, и предотвращает вымывание фермента с носител из-за растворимости кремнезема при рН 7 и выше. .
Пример 1, Получение носител , активированного эпоксидной смолой с последующим затвердением полиэтиленполиамином.
Дл получени носител провод т пропитывание кремнеземного материала раствором ЭПОКСИДНОЙ смолы и затем затвердение водным раствором полиэтиленполиамина , который беретс в количестве 25% от эквивалентного количества эпоксидной смолы.
5 г силохрома или силикагел смачивают 9 мл раствора 1,7% эпоксидной смолы в ацетоне. После вьтаривани растворител при 100°С провод т затвердение 15 мл водным раствором прл1{этиленполиамина кип чением при lOO-c в течение 1 ч. Затем
носитель фильтруют, промьшают водой и высушивают в терйЬстатё при 100° С..
Способность используемой эпоксидной смолы к прив зыванию амина составл ет 2500 мк экв./г (определена кип чением смеси смолы с избытком амина при в течение 1ч и обратным титрованием непрореагировавшего амина кислотой). 5 г носител покрываетс 0,153 г (90,017) смолы, способность к прив зыванию амина которой составл ет 383мкэкв/г. (о,1532500), и необходимое количество полиэтиленполиамина, содержащеес в 15 мл раствора, составл ет 7,2 мл (0,25383-75).
Получают активированный носитель, содержащий на поверхности эпоксидные группы в количестве 65 мк экв на i г носител (определено по способу, описанному в данном примере).
Пример 2. Получение носител , активированного эпоксидной смолой с последуницим затверденией 1,6-гексаметилендиамином .
Дл получени носител провод т пропитывание кремнезёййого материала раствором эпоксидной смолы и зачтем затвердение водным раствором 1,6-гексаметллендиамина , который беретс в количестве 25% от эквивалентното количества эпоксидной смолы.
5 г силохрома Или силикагёл смачивают 9 мл раствора 1,7% эпоксидной смолы в ацетоне. После вьтаривани растворител при провод т затвердение 15 мл водным раствором I,6-гексаметилендиамина кип чением при в течение 1 ч. Затем носитель фильтруют, промывают водой и высушивают в термостате при 100 С.
При использовании эпоксидной смолы со способностью к прив зьтанию амина 2500 мк экв/г необходимое количество 1,6-гексаметилендиамина, содержащеес в 15 мл раствора, составл ет 5,6 мг (0,25-383 58).
Получают активированный носитель, содержащий на поверхности эпкосидные группы в количестве 50 мк экв на 1 г носител .
Пример 3. Получение нерастворимого ферментного препарата с использованием носител , акФивированного эпоксидной смолой с последующим затвердением полиэтиленполиамИном.
5 г активированного эпоксидной смолой носител (пример О смачивают 8 мл боратным буфером с рН 8,0. Смесь педемешивают и вакуумируют 15 мин дл удалени воздуха из пор. Затем добавл ют 5 мл раствора химотрипсина с концентрацией 40 мг/мл в боратном буфере с рН 8,0, перемешивают и выдерживают при в течение 2 ч. После инкубации препарат промывают в воронке Бюхнера боратным буфером рН 8,0, 1 М раствором хлористого и затем еще боратным буфером, добавл эти растворы порци ми. Объем промывных вод состал ет 100 мл. Полученный иммобилизованный препарат хран т в боратном буфере в холодильнике.
Ферментативную активность пре-. парата определ ли на 2% раствора казеина. Активность равн лась 39,7 Е/г. Стабильность препарата оценивали по остаточной активности после проведени промьшки препарата 100 мл 2%-ным раствором казеина рН 8,О в колонке с диаметром 6 мм и высотой столба препарата 70 мм в течение 24 ч. После такой промывки сохран лось 29% от исходной активности .
Пример 4. Получение нерастворимого ферментного препарата с использованием йосител , активированного эпоксйдной смолой с последующим затвердением 1,6-гексамет,иледиамином .
5 г активированного эпоксидной смолой носител (пример 2) смачивают 8 МП боратным буфером с рН 8,0. Смесь перемешивают и вакуумируют 15 мин дл удалени воздуха из пор. Иммобилизацию фермента провод т как описано в прийерё 3. Получают препа химотрипсина с активностью на 2% каина 36,7 Е/г. После промывки препарата 2%-ным раствором Казеина сохран лось 20% исходной активности.
Claims (2)
- Йредлагаемый способ позвол ет получать носители дл иммобилизации биоактивных веществ с повышенной операционной стабильностью, в которых внутренн поверхность пор покрыта слоем нерастворимого полимера содержащего эпоксидные группы, дающие возможность иммобилизации ферментов в укрупненнолабораторном масштабе, в том числе и ферментов, нуждающихс в высоких значени х рН. . 7 Такой способ дает возможность получить препараты XHMOtpHnaHHa, сохран ющие активность при 4С в течение 1-2 мес цев, что вл етс предпосьшкой дл достижени высокой операционной стабильности препара овТ Данный способ позвол ет по срав .нетшю с известным способом св зыва ть в Т0-2б раз больше белка на единицу носител , Формула изобретени . Способ получени активированных нЬсителей дл иммобилизации белков путем пропитки пористого неорганического материала органическим пленкообразующим вёществом, содёржащим реакционноспособные группы, . . . - -- : 8 отличаю; щийс тем, что, с целью повышени оп ерационной стабильности получаемых материалов, при покрытии пористого неорганического материала с диаметром пор 200-2000 А в качестве пленкообразующего вещества используют эпоксидную смолу и отверждают ее на носителе по иэтиленполиамином или 1,6-гекс .аметилендиамином в соотношении эквивалентов эпоксидной смолы и амина 1:0,25 при 100-120 0 в течение не менее 1ч. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1, Патент № 2229298, кл. С 07 G 7/02, опублик. 1974.
- 2. Патент Великобритании № 1342186, кл. С 08 Н 1/02, опублик. 1973 (прототип).
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU772491073A SU664468A1 (ru) | 1977-05-27 | 1977-05-27 | Способ получени активированных носителей |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU772491073A SU664468A1 (ru) | 1977-05-27 | 1977-05-27 | Способ получени активированных носителей |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU664468A1 true SU664468A1 (ru) | 1981-06-30 |
Family
ID=20711119
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU772491073A SU664468A1 (ru) | 1977-05-27 | 1977-05-27 | Способ получени активированных носителей |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU664468A1 (ru) |
-
1977
- 1977-05-27 SU SU772491073A patent/SU664468A1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4141857A (en) | Support matrices for immobilized enzymes | |
US4229536A (en) | Process for preparing immobilized enzymes | |
US5092992A (en) | Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography | |
US4560504A (en) | Carboxyl anchored immobilized antibodies | |
JPS6029474B2 (ja) | 固定された蛋白質及びその製造法 | |
FI93124C (fi) | Menetelmä liuenneen valkuaisaineen immobilisoimiseksi | |
JPS59112260A (ja) | クロマトグラフイ−の担体材料 | |
KR940005581B1 (ko) | 효소의 고정화방법 및 고정화 효소 | |
US5085779A (en) | Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography | |
JP3151331B2 (ja) | 生化学物質の固定化方法 | |
US3849253A (en) | Process of immobilizing enzymes | |
US4268419A (en) | Support matrices for immobilized enzymes | |
JPS6255084A (ja) | 生体の固定化方法及びそれから得られた不溶化生体複合体 | |
US4206259A (en) | Support matrices for immobilized enzymes | |
SU664468A1 (ru) | Способ получени активированных носителей | |
EP0186523A2 (en) | Insolubilized biological material composites | |
RU2135582C1 (ru) | Фиксированный на носителе фермент и способ его получения | |
US4193910A (en) | Preparation of support matrices for immobilized enzymes | |
US4218363A (en) | Preparation of support matrices for immobilized enzymes | |
FI101400B (fi) | Menetelmä kantajaan sidottujen entsyymien valmistamiseksi | |
US4337172A (en) | Enhanced immobilization of a glucose isomerase | |
US4775714A (en) | Method for producing highly-active biologically active compounds immobilized on a carrier | |
SU859372A1 (ru) | Способ получени активированных носителей | |
CS209424B2 (en) | Method of making the anorganic-organic base for immobilization of enzymes | |
US4250080A (en) | Preparation of support matrices for immobilized enzymes |