SU643085A3

SU643085A3 - Способ получени антибиотика -11743/а

Info

Publication number: SU643085A3
Application number: SU762391602A
Authority: SU
Inventors: Кун Макс (Швейцария); Делисл Кинг Гамильтон (Сша); Херри Ойген (Швейцария)
Original assignee: Сандос Аг (Фирма)
Priority date: 1975-09-02
Filing date: 1976-08-31
Publication date: 1979-01-15
Also published as: ATA646276A; ZA765281B; FR2322596A1; IL50388A0; NZ181899A; FR2322596B1; NL7609615A; BE845708A; AU1737176A; PT65539B; PT65539A; SE7609493L; FI55051C; JPS5231886A; DK380076A; NO762923L; ES451091A1; FI762420A; FI55051B; DE2638400A1

Description

I

Изобретение относитс к микробйо1логической промьа ленности и касаетс получени антибиотиков.

Предложенный антибиотик вл етс нов1.1 и способ егополучени не-описан.

Целью изобретени вл етс способ получени антибиотика S 11743/А формулы

Споры гладкие, овальной формы от элиптической до цилиндрической, ширина 0,7-0,9 мкм, длина 1,33-1,50 мкм.

На среде с солодовым экстрактом рост отличный, золотисто-коричневого цвета, воздушный мицелий свинцовосерого цвета, форма мицели - открытые спирали и загибы, растворимых пигментов нет.

Крахмал-агар-рост очень хороший, бежевого цвета, воздушный мицелий серый, открытые спирали и загибы, растворимых пигментов нет,

Овс на мука с агаром - рост хороший , от желто-коричневого до бежевого , воздушный мицелий серебрис то-серого цвета, растворимых пигментов нет.

Среда Чапека - рост средний, от кремового до коричневого, Воздушный мицелий от белого до серого, растворимые пигменты коричневого цвета.

Глицерин-аспарагиновый агар рост средний, золотисто-коричневого цвета, воздушный мицелий светло-серый , растворимый пигмент желтый.

Глюкозо-глицериновый агар - рост хороший, золотисто-коричневый, воздушный мицелий серый, открытые спирали , 2-3 витка, растворимый пигмент коричневый.

Хорошо растет и усваивает глюкозу арабинозу, ксилозу, маннит, фруктозу рамнозу, крахмалы, галактозу, глицерин , целлобиозу, декстрин, маннозу.

Рост средний на инозите. Плохо растет и усваивает сахарозу, сорбит, блочную кислоту, не усваивает рафинозу , целлюлозу, салицин, инулин, дульцит.

Физиологические свойства.

Восстанавливает нитраты, гидролизует крахмал, целлюлозу не разлагает тйрозинова реакци отрицательна , молоко не коагулирует, слабо пептониэирует молоко, плохо разжижает желатину , меланин не образует.

Выращивание штамма Streptomijce 9 тиIat )i6i4 8088 осуществл ют аэробным и иммерсионным способом.

Дл получени антибиотика S.-11743/А предпочтительно примен ют вегетативную форму штамма дл инокул ции продуцирующей среды.

Дл этого сначала получают вегетативный инокул т микроорганизма путем инокул ции небольшого колич ества куль уральной среды суспензией спор шталала Streptom ces wotabiCis NRRl/ 8088. Часть мицели в культуральном бульоне перевод т в р.астворимую -форму , разлагают и соединение Получают известным образе с помощью экстракционных или абсхзрбционных методов, но также можно сначала отцентрифугировать лшцелий от культурального бульона, фильтрат культуры и мицелий .после расйределени экстрагируют раз643085

дельно и экстракты обрабатывают далее по отдельности или объединив их. Антибиотик 5 -11743/А выдел ют предпочтительно в форме соли, причем солей щелочных металлов, щелочноземельных металлов или аммони , Антибиотик S-11743/А в форме его аморфной и содержащей ацетон, кристаллической натриевой соли и кристаллической калие1вой соли обладает следующими свойствами.

- Элементарный состав аморфной натриевой соли.

Вычислено, %: С 63,4; Н 9,0; N2,9 О 24,7. С Hg, Na

Найдено,: С 63,5; Н 9,1; N3,2; о 24,1.

Т.пл. аморфной Na-соли 166-169°С, кристаллизованной с. ацетоном Ма-соли т.п 159-163°С| удельное врамение в метаноле +83,5 (С 1,0) в хлороформе + 106,2° (С «1,0) Ма-соли хорошо растворимы .в органических растворител х, таких как толуол- , бензол, хлористый метилен, этилацетат, изопропилацетат, этанол, метанол, в воде соли плохо растворимы .

Калиева соль антибиотика ё 11743/А имеет элементарный состав

4 69iz Вычислено,: С 62,1; И 8,8;

О 24,2.

Найдено,: С 61,9; Н 8,9; К О - не определ ли.

Т.пл. 3:58-1бОс.

Удельное вращение метаноле + 89,1° ,98) .

хлороформе +102,0°(С 1,10) .

Антибиотик S -11743/А можно использовать в качестве лечебного с редства , он обладает, антибиотической активностью против таких шкроорганизмов , как грамположительные бактерии и грибы.

. Антибиотик- И743/А и его физиологически cosMQCTHNsae соли могут ть использованы при острой сердечной недостаточност , дл шоковой терапий, а также дл лечени коронар нх заболеваний .

Антибиотик S 11743/й в киолоты или ее солей можбт примен тьс

.в медицине в качестве лекарственного средства в чистой фориё или s соответствующей лекарственной фор«е дл внутривенного, энтерального ил парентерального ,

Пример 1. Культурайы/увв bjpe дУ следун цего состава г/Я1

Церелоза, ((глюкоза) 4,0 Соподо Й экстракт 10,0

2оо°

Дистиллированна

1 л

Claims

вода инфицируют приготовленной суспензие спор первоначально выделенного штам Streptomvces mutafeiRls i«iRRl 8088. среде перед стерилизащиёй с пом щью МаОН устанавливают рН 8,3-8,6. После стерилизации (20 мин при темп ратуре 120С) устанавливают рН 6,97 ,3. Хорошо спорулирующую агаровую ку туру штамма смешивают с Ь мл стерил ного, 0,9%-ного раствора поваренной соли, что дает густую суспензию спо Из этой суспензии спор 1 мл примен ют дл инфицировани колбы Эрле мейера емкостью 500 мл, котора содержит 100 мл следующей среды предй рительной культуры, г/л; Pfrarmamediq 25,0 Церелоза (глюкоза)25,0 ( среда Дистиллированна вода1л рН 6,5-6,8 Среду предварительной культуры стер лизуют в автоклаве при температуре 120С в течение 20 мин, рН 6,7-7,2. После этого предварительную куль туру аэробно инкуб.ируют в течение . трех дней при температуре и затем примен ют дл инфицировани основной культуры. Дл этого 5 мл предварительной культуры помещают в колбу Эрленмейера емкостью 500 мл со 100 мл следующей среды, г/л: Сахароза Пептон Солодовый экстракт Дрожжевой экстракт 2,0 (среда I КН РО 2,0 MaSO./HjO 2,0 Дистиллированна рН 6,8-7,2 устанавливают с помо щью NaOH. Основную культуру инкубируют в течение 6 дне,й при на круговой качалке при 200 об/мин. Пример 2. Культуру штамма Streptom ces motabieis WRKL 8088 получают путем выращивани в течени 10 дней при температуре 27с н.а сре де III. Споры и мицелий этой культур обрабатывгиот в физиологическом раст воре поваренной соли. С помощью это суспензии заражают 1 л следующей среды, г/л: Растворимый крахмал30,0 Глюкоза20,0 Мука соевых бобов10,0 Corn Steep10,0 Полипептон5,0 Косе3,0 ,0 Д отилл рованна вода1л рН 7,О устанавливают с помощью NaOH. Эту предварительную культуру и кубируют в течение 3 дней при температуре 27°С на круговой качалке при 180 об/мин. .1.0 Л питательной среды П заражают предварительной культурой и инкубируют в стекл 21нрм, ферментере при перемешиваний npif 2Оо об/мин и аэрации воздуха 1 л/мин в течение 5 дней при температуре 27с. Пример 3. Выделение натриевой соли антибиотика 100 л культурального бульона, полученного по примеру 1 и 2, центрифугируют,, причем выдел етс примерно 90 л фильтрата культуры и примерно 6 кг мицели . В культуральном фильтрате устанавливают рН 9 с помощью 1 н.раствора гидроокиси натри и фильтруют до прозрачности через вспомогательные фильтры i Фильтрат при температуре трижды экстрагируют этилацётатом и экстракты промывают 15 л воды. После выпаривани органической фазы в вакууме при температуре 2040С выпадает примерно 16 г сырого экстракта. Мицелий экстрагируют сначала 12 л метанола, затем дважды по 12 л смеси метанол: вода - 9:1, в течение 1 ч при 20-25°С при одновременной гомогенизации. Материал клеток затем отфильтровывают. К фильтрату добавл ют 5 л воды, выпаривают в вакууме при температуре 2О-4О с до объема Зле помощью Iн.раствора гидроокиси натри устанавливают рН 9. Трижды экстрагируют по 3 л этилацётатом, экстракты промывают 1,5 л воды и органические фазы выпаривают в вакууме при температуре 20-40 0. Выдел етс 9,4 г экстракта. Оба экстракта объедин ют, обрабатывают 500 мл воды и экстрагируют трижды по 250 мл толуола. Толуольную фазу промывают один раз 100 мл воды, высушивают над сульфатом натри и выпаривают в вакууме при температуре 40с. Выдел етс IIг желтого, масл нистого остатка. Этот остаток хроматографируют на силикагеле 60 Merle с величиной зерен 0,06-0,2 мм. Используют смесь толуол-ацетон 98:2 +1% триэтиламина. Элюирование смесью толуол:ацетон 98:2 +1% триэтиламина и смесью толуол:ацетон 9:1 +1% триэтиламина дает преимущественно неактивные примеси (сопутствующие вещества). С помощью смеси толуол:ацетон - 4:1 и толуолацетон 1:1 при добавке 1% триэтиламина элюируетс антибиотик в обогащенной форме. Фракции выпаривают в вакууме при температуре 20-40 с и остаток хроматографируют на содержани е антибиотика S 11743/А. Активные фракции объедин ют и снова хроматографируют на 40-кратном количестве силика-гел , причем примен ют хлороформ с увелйченнь1м содержакйем метанола дл элюйровани . Смесью хлороформ:метано 9В:2- элюируют антибиотик .5 11743/А D сильно обогавденнсй форме. После выпаривани активных фракций в вакууме при температуре 20-4ос светло жёлтый остаток раствор ют в хлороформе , один раз твс-гр хиваюг с 1 н.ра створом едкого натра/ органические фазы промывают водой, вьтаривают в вакууме и остаток кристаллизуют из 1,5-кратного количэства ацетона. Выдел етс натриева соль антибиотика 11743/А в виде бесцветных ji-одержащих auetpH кристаллов с т.пл. 159-1бЗ С. Дл удалени кристаллизационного ацетона многократно обрабатывают в вакууме бензолом и затем метанолом. Аморфную, Чистую натриевую соль антибиотика S 11741/л высудавают в вакууме при температуре и затем плав т при 166- 1б9с. Пример 4, Кал11ева соль антибиотика S 11743/А. 280 мг натриевой соли антибиотика $ 11743/А раствор ют и 40 мл хлороформа й встр хивают отличающийс тем, что штамм Streptomsces motatiKis N4Tl 8088 в фацивают на питательной среде,соде жАцей источикки азота/углерода и минеральные соли с последующим выделением целевого продукта в виде кислот или соли. дважды по 40 мл с 2 н.сол ной кислотой и промывают 40 мл воды. Органическую фазу со свободной кислотой антибиотика в И743/А встр хивают (дважды по 40 мл) с 2 н. КОН и один раз промывают 40 мл воды. Хлороформную фазу высушивают над твердым карбонатомкали и после фильтровани выпаривают в вакууме. Остаток раствор ют в 2 мл метанола и фильтруют через тальк. Через 4 ч кристаллизат отфильтровывают и перекристаллиэовывают из 2 мЛ кип щего метанола. После сто ни в течение ночи отфильтровывают и остаток высушивают в вакууме при температуре 4ОС в течение 1 ч. Получают бесцветные кристаллы калиевой соли с т.пл. iSS-ieo C, Предлагаемый антибиоти облгадает антибиотической активностью против таких микроорганизмов, как грамположительные бактерии и грибы. Формула изобретени 1. Способ получени антибиотика формулы . ««.f«fi
2. Способ по п.1, о т л и ч а юQt и и с тем/ что вьфащивание штамма осуществл ют на питатвльнМ cipefli&f содержшцей дополнительно микроэлементы; .