SU636534A1 - Способ определени общего белка в растворе - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к биологической химии и может быть использовано в анализе растворов дл  количест венного определени  общего .белка. Известен способ определени  общег белка в растворе путем воздействи  на испытуемый раствор реагентом с последующим фотометрированием полученного окрашенного комплекса l . Однако на приготовление модифицированного раствора Фолина затрачиваетс  значительна  часть времени (10 ч.) и известный способ не обеспечивает высокой чувствительности. Целью изобретени   вл етс  повышение чувствительности и ускорение способа . Дл  этого на испытуемый раствор воздействуют смесью 0,25%-ного раствора 1,2-динитробензола в метаноле, формалина и 20%-ного едкого натра в соотношении 1:2:2, и перед фотометрированием реакционную смесь нагревают в течение 3-4 мин при бО-бХ С. Способ осуществл ют следующим образом. в каждую из двух пробирок, в одной из которых находитс  1 мл испытуемого водного раствора (опытна  проба), а в другой 1 мл бидистилл та ( контрольна  проба), последовательно добавл ют 1 мл 0,25%-ного раствора 1,2-динитробензола (Ч ТУ-44-68, дважды перекриста; лизованного из этанола) в метаноле СХЧ ГОСТ 6995-67), 2 мл раствора 40%-ного формальдегида и 2 мл 20%-ного раствора едкого натра (ХЧ ГОСТ 4328-66). Опытную и контрольную пробы термостатируют при в течение 4iO,5 мин. Через 3 мин после окончани  термостатировани  измер ют разность оптических плотностей обоих проб дифференциальным способом в кюветах 2 см при 520 нм на фотоколориметре типа ФЭК-М. Концентрацию общего белка в пробе определ ют по заранее построенной калибровочной кривой в координатах разность оптических плотностей - логарифм концентрации белка. Ниже на примере лактальбумина приведены расчетные данные, позвол ющие оценить точность количественного определени  по предлагаемой методике.

Таблица

В табл. представлены экспериментальные данные кинетики распада окраски восстановленной 1,2 динитро бензола (при 520 нм) после окончани  термостатировани ,

Т1редставленные результаты свидетельстйуют о том, что максимальное развитие окраски наблюдаетс  на 3 5 мин после термостатировани  с посл ующим ее ослаблением.

Т а б л и ,ц а 2

-3

1-10

-i 2-10

2-5-10 --(

5-10

1-10

-i

1-310

Примеры количественного определени  общего белка в % в некоторых препаратах даны в табл.З, где также приведены соответствующие результаты определени  известныгли методами.

Таблица 3

Ртуть (II)

Арсенит,арсенат

Сульфиды,сульфиты , бихроматы, 2 перманганаты 1-10 563 Оптимальными средами дл  проведени  реакции  вл ютс  водно-спиртовые. При исследовании бинарных смесей различных спиртов (от метилового до амилового ) с водой существенных отличий не наблюдалось. Допустимое содержание метанола в реакционной среде не более 25%. Более высокое содержание спирта приводит к уменьшению чувствительности определени  белка. Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность и сокращает врем  определени  белка. Формула изобретени  Способ определени  общего белка в растворе путем воздействи  на испытуе мый раствор реагентом с последующим фотометрированием полученного окращенного комплекса 1Готличающийс   тем, что, с целью повьлиени  чувствительности и ускорени  способа, на испытуемый раствор воздействуют смесью 0,25%-ного раствора 1-, 2-динитробензола в метаноле, формалина и 20%-ного едкого натра в соотношении 1:2;2, и перед фотометрированием реакционную смесь нагревают в течение 34 мин при eo-ei c. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе: l.JBioE.Ctiem. 193265, 1951.