SU411867A1 - - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к способам получени  белковых препаратов.

Известен способ получени  леггемоглобина из клубеньков люпина, при котором из экстракта клубеньков желтого люпина получают осадок, содержащий леггемоглобин, путем высаливани  сульфатом аммони  от 55 до 80% насыщени . Затем осадок, выпавший в пределах указанных концентраций, раствор ют в т/зас-буфере и диализуют. Очистку провод т на биогеле Р-10 и целлюлозе ДЕ-52.

Однако этот способ характеризуетс  сложностью процесса очистки леггемоглобина - фракционирование на биогеле Р-10 и последующа  хроматографи  на целлюлозе ДЕ-52, плоха  воснроизводимость процесса требуют больших затрат времени.

Целью изобретени   вл етс  упрощение и удешевление процесса.

Это достигаетс  тем, что клубеньки желтого люпина экстрагируют фосфатным буфером при рН 7. Операцию высаливани  провод т дробными этапами, ступенчато повыша  концентрацию сульфата аммони :

фракци  I до 55%-осаждают примеси нерастворимых белков;

фракци  II от 55 до 65%-осаждают и удал ют соединени  с небольшим молекул рным весом;

фракци  III от 65 до 75%

осаждают гелесодержащие белки;

фракци  IV от 75 до 90% -осаждают леггемоглобин и удал ют из него примеси путем диализа и хроматографии.

Осадки, содержащие примеси фракции , отбрасывают, а осадок, выпадающий в интервале 75-90% насыщени  сульфатом аммони , раствор ют в фосфатном буфере,

подвергают диализу и хроматографируют на ДЕЛЕ целлюлозе отечественного производства .

(При М е р. 200 г клубеньков желтого люпина растирают на холоду в фарфоровой

ступке с двойным (по весу) количеством калий-фосфатного буфера в объеме 0,05 М. (Полученную кашицу отжимают через полотно или четыре сло  марли и центрифугируют при BOOOg 10 мин при О-4° С. Супернатант

подвергают фракционному высаливанию сульфатом аммони  следующими этапами: до 55%; от 55 до 65%, от 65 до 75% и от 75 до 90%. Осадок фракции, выпавщий от 75% насыщени  до 90%), собирают методом центрифугировани  и раствор ют в минимальном объеме 0,01 М калий-фосфатного буфера рН7. Полученный раствор диализуют в течение 24 час с трехкратной сменой буфера. Дальнейшую очистку провод т на колонке с ДЕЛЕ

целлюлозой. 34

Высота колонки 40 см, диа.метр 1,5 см.том аммони  ировод т ступенчато: до 55% наЭлюцию провод т 0,05М буфером.сыщени , при котором осаждают примеси неПредмет изобретени ни  осаждают и удал ют соединени  с неСпособ получени  леггемоглобина из клу-насыщени  - осаждают гелесодержащие белбеньков люпина путем высаливани  сульфа-ки, от 75 до 90% насыщени  осаждают леггетом аммони , отличающийс  тем, что, с цельюмоглобин и удал ют из него примеси путем

удешевлени  процесса, высаливание сульфа-диализа и хроматографии.

411867растворимых белков, от 55 до 65% насыще5большим молекул рным весом, от 65 до 75%