SU368240A1 - СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ N"- -Вос-АМИНОКИСЛОТ - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к способу выделени  хроматографических чистых Ы -Вос-аминокислот из смесей, образующихс  при неполном присоединении грег-бутилоксикарбонильных (-Вое-)-групп к аминогруппам в процессе получени  N -защищенных аминокис- лот, который может быть использован в синтезе инсулина и других полипептидов на полимерных носител х.

Известен способ выделени  хроматографически чистых № -Вос-аминокислот из их смесей с соответствующими незащищенными аминокислотами путем превращени  сырого продукта в дициклогексиламмониевые соли с лоследующей кристаллизацией и выделением свободных N -Вос-аминокислот. Выход 71-83%.

С целью упрощени  процесса и повышени  выхода целевого продукта предлагаетс  спиртовой раствор неочищенных № -Вос-аминокислот (№ -Boc-L-Thr, № -Boc-O-BzI-L-Thr, № Boc-NQ-Tos-L-Arg , № -Boc-№-NO.,-L-Arg, №-Boc-L-Asn, N -Boc-L-Gln, №-Boc-L-Phe, № -Boc-L-Val, № -Boc-y-OBzl-L-Gln, № -BocO-Bzl-L-Ser , № -Boc-№ -L-Qys, № -Boc-OBzlL-Tyr , № -Boc-GIn, № -Boc-S-Bzl-L-Cys, метиловый эфир № -Boc-L-HIs, № -Boc-L-His, № -Boc-N-Dnp-L-His, № -Bos-L-Zeu, № -BocL-AIa ) обрабатывать сульфированным сополимером полистирола с дивинилбензолом

ЬН+-форме (КУ-2, Дayэкc-50WX 2, Дауэкс50WX 4, Дауэкс-50ШХ 8, амберлит IR-120), вз тым в 0,001-50-кратном, предпочтительно 1,5-3-кратном избытке по отношению к общему количеству смеси, и процесс проводить при 1-40С, предпочтительно при 20-25°С, и рН среды 2-5, предпочтительно

л О-ti5}O,

при непрерывном получении хроматографически чистых N -Вос-аминокислот из смесей процесс целесообразно проводить на пр моточных сорбционных колоннах рециркул цией катионита в каждой колонне либо в одной противоточной многосекционной колонне с псевдоожиженным слоем катионита.

Предложенный способ проще известного, поскольку исключаютс  операции перекристаллизации и получени  дициклогексиламмониевых солей. Выход 98-100% (на количество N -Вос-аминокислоты, содержащейс  в смеси). Получаемые в виде сиропа хроматографически чистые продукты могут быть использованы в синтезе инсулина. При регенерировании смолы, кроме того, получают гидрохлориды соответствующих аминокислот с незащищенными аминогруппами с выходом 80-90% (на количество аминокислоты с незащищенной аминогруппой, содержащейс  в

смеси).

Ионообменна  реакци  происходит в условн х, исключающих возможность уменьшени  оптической активности препаратов. Способ прост, поскольку реакци  происходит при атмосферном давлении, умеренной температуре , и не требует специального оборудовани .

Во всех примерах используют смолу КУ-2 в Н+-форме, с величиной сшивки 8-10% и обменной емкостью 4,9-5,1 мг-экв/г или смолу flay3Kc-50WX в Н+-форме с величиной частиц 100-200 меш.

Дл  анализа полученных соединений используют тонкослойную хроматографию на силикагеле.

Пример 1. Выделение №-Boc-L-Thr из смеси с iL-треонином.

Claims (2)

1,06 г смеси, состо щей из 0,43 г (40,5%) L-треонина и 0,63 г (59,5%) N-Boc-L-Thr, раствор ют в 300 мл метилового спирта, прибавл ют 4,0 г ионообменной смолы КУ-2 или 6,0 г Дауэкс-50 УХ 8, перемешивают 4 час при 20-25°С, в конце реакции рН раствора равен 3. Смесь фильтруют, смолу промывают на фильтре 3X10 мл метиловым спиртом. Объединенные фильтраты упаривают при 40°С на вакуумном роторном испарителе и высушивают в вакуум-эксикаторе над фосфорным ангидридом до посто нного веса. Выход № -Boc-L-Thr, получаемой в виде медленно кристаллизующегос  сиропа, 0,625 г (99%). Rr 0,4 (хлороформ-метиловый спирт-уксусна  кислота, 85 : 10:5). По литературным данным т. нл. 76-80°С, а D ,52° (с--0,98, метиловый спирт).

к отработанной ионообменной смоле прибавл ют 120 мл раствора 0,05 н. сол ной кислоты в метиловом спирте (1 : 1), перемешивают 3 час, фильтруют, промывают смолу на фильтре 3X10 мл 0,05 н. метанольным раствором сол ной кислоты. Объединенные фильтраты упаривают при 40°С в вакууме и высушивают в вакуум-эксикаторе над гранулированным КОН до посто нного веса. Выход гидрохлорида L-треонина 0,51 г (91%).

Пример 2. Выделение N-Boc-L-Phe нз смеси с L-фенилаланином.

0,62 г N-Boc-L-Phe, содержащего 3% L-фенилаланина , раствор ют в 100 мл метилового спирта, прпбавл ют 2,0 г попообменной смолы КУ-2 или 2,0 г Дауэкс-50 УХ 4, перемешивают 3 час при 20-25°С (рН равен 3 в конце процесса ) и обрабатывают затем, как в примере 1. Выход N--Boc-L-Phe 0,60 г (100%). Продукт имеет вид сиропа, медленно кристаллизующегос  при хранении. Rf 0,75 (хлороформметиловый спирт-уксусна  кислота, 85:10:5), по литературным данным т. пл. 79-80°С.

К отработанной ионнообменной смоле прибавл ют 30 мл 0,05 н. сол ной кислоты, перемещивают 2 час, фильтруют,.промывают ионообменную смолу на фильтре ЗХЮ мл 0,05 н. сол ной кислотой и выдел ют 0,022 г (99%),

гидрохлорида L-фенилаланина, как указано в примере 1.

Пример 3. Выделение Boc-L-Pro из смеси с -нролином.

0,6 г Boc-L-Pro, содержащего 17% L-пролина , раствор ют в 250 мл метилового спирта, прибавл ют 4,0 г смолы КУ-2 или 4,0 г Дауэкс-50 Х 8, перемешивают 2 час при 20-25°С (в конце процесса рН 3,5) н обрабатывают реакционную смесь, как в примере 1. Выход Boc-L-Pro 0,49 г (99%). Rf 0,32 (хлор|Эформ-уксусна  кислота, 95:5). Rf 0,72 (ацетон-уксусна  кислота, 98: 2). К отработанной ионообменной смоле прибавл ют 120 мл 0,05 н. метанольного раствора сол ной кислоты (1 : 1), перемешивают 3 час, фильтруют, промывают ионообменную смолу на фильтре ЗХЮ мл метанольным раствором 0,05 н. сол ной кислоты и выдел ют 0,12 г

(91%) L-пролина, как указано в примере 1.

Пример 4. Выделение N -Boc-L-Val из смеси с L-валином.

0,590 г N -Boc-L-Val, содержащего 9% L-валина , раствор ют в 75 мл метилового спирта,

прибавл ют 2,0 г смолы КУ-2 или 2,0 г Дауэкс-50 УХ 2, перемешивают 2 час при 20-25°С (в конце процесса рН 3) и обрабатывают смесь, как в примере 1. Выход N -Boc-L-Val, имеющего вид густого

сиропа, 0,52 г (96%); (Rf 0,76 (хлороформ-метиловый спирт - уксусна  кислота, 85:10:5); по литературным данным т. нл. 77-79°С.

К отработанной ионообменной смоле прибавл ют 40 мл 0,05 н. сол ной кислоты, перемешивают 2 час и поступают дальше, как указано в примере 2. Выход гндрохлорида L-валина 0,06 г (92%).

Пример 5. Общий способ выделени  № -Boc-L-аминокислот из смесей с L-аминокислотами , содержащими незащищенные аминогруппы .

10,0 г смеси №-Boc-L-аминокислоты с L-аминокислотой раствор ют в метиловом спирте, прибавл ют 30,0 г ионообменной смолы КУ-2 или 30,0 г Дауэкс-50ШХ 4, перемешивают 4 час при 20-25°С и в процессе перемешивани  отбирают пробы дл  хроматографии . Перемешивание прекращают, когда на хроматограмме обнаруживают единственное

п тно, соответствующее N -Boc-L-аминокислоте . В конце процесса рН раствора 2,5-5,0. Смесь фильтруют, промывают смолу на фильтре 3X100 мл метиловом спиртом. Объединенные фильтры унаривают при 40°С в вакууме и высущнвают в вакуум-эксикаторе над фосфорным ангидридом до посто нного веса. Выход №-Boc-L-аминокислоты 100%.

Общий способ выделени  гидрохлорида L-аминокислоты.

К отработанной ионообменной смоле прибавл ют метанольный раствор 0,05 н. сол ной кислоты (1 : 1), пере.мешнвают 3 час, фильтруют , три раза промывают смолу на фильтре метанольпым раствором 0-,05 н. сол ной кислоты , объединенные фильтраты упаривают

при 40°С в вакууме и высушивают в вакуумэксикаторе над гранулированным КОН до посто нного веса. Выход гидрохлорнда L-аминокислоты 95%.

Предмет изобретени  1. Способ выделени  N-Вос-аминокислот из реакционных смесей, отличающийс  тем, что, с целью упрощени  процесса и повышени  выхода целевого продукта, спиртовой раствор реакционной смеси обрабатывают сульфированным сополимером полистирола с дивинилбензолом в Н+-форме, вз тым в 0,001 - 50,0-кратном избытке по отношению к количеству смеси, и процесс провод т при 1-40°С и рН среды 2-5.

2. Способ по п. 1, отличающийс  тем, что процесс провод т в присутствии 1,5-3-кратного избытка ионообменной смолы при 20- 25°С и рН 2,5-3,5.