SU236365A1

SU236365A1 -

Info

Publication number: SU236365A1
Application number: SU1152461A
Authority: SU
Inventors: Танака Иностранец; рма Кийова Ханко Когио Лтд Иностранна

Description

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТИАЛ1ИНАДЕНИНДИНУКЛЕОТИДОВ

Получениетиаминадениндинуклеотндов

микробиологическим способом было неизвестно .

Предлагаемый способ заключаетс в том, что тиаминадениндинуклеотид получают путем культивировани в аэробных услови х микроорганизмов , HanpHiMep Brevibacterium ammoniagenes и Corynebacterium glatamicus, в водной питательной среде, содержащей источник углерода, например глюкозу, фруктозу, мальтозу , сахарозу, крахмал, гидролизат крахмала , мелассу, глицерин, сорбит, органнческие кислоты, источник азота, например мочевину, аммониевые соли, гидролизат казеина, жидкость от замочки кукурузы, дрожжевой экстракт , .м сной экстракт, нептон, рыбную муку в присутствии неорганических вегцеств, необходимых дл роста нродуцентоБ, например сульфата магни , фосфата натри .

К культуральной среде добавл ют тиамин или его фосфорнокислый эфир и аденин или соответствующее его производное. Их ввод т сразу или периодически в культуральную среду в процессе ферментации, которую провод т при температуре 20-40 С и рН среды 5,5-9,0.

жидкости одним из известных способов, напридгер путем обработки ионообменной смолой .

В качестве микроорганизма, продуцирующего тиаминадениндин}Ччлеотнд, нснользуют штамм Bre ibactcrium ainnioniagenes ATCl 6872. Его выращивают при температуре 30°С в течеиие 24 час на питательной среде, содержащей 2% глюкозы, 1% пептона, 1% дрожжевого экстракта, 0,3% хлористого натри и 30 Л биотина.

Выращенную посевную кхльтуру (материал ) в количестве 10% внос т в ферментационную культуральную среду, содержащую 100 г глюкозы, 10 г дикалийфосфата, 10 г семиводного сульфата магни , 0,1 г двухосновного хлорида кальци , 10 г дрожжевого экстракта, 30 у/л биотина и 6 г мочевины. Всю среду, за исключением мочевины, стерилизуют под давлением 1 кг/см-2 в течение 10 мин. Мочевину стерилизуют отдельно в виде 12%-ного водного раствора и добавл ют в среду в таком количестве , чтобы концентраци ее достигла 6 г/л.

течение 72 час с добавлением по 2 мг1л тиамина и аденина и продолжают выращивать еще 24 час.

Через 96 час от начала выращивани вырабатываетс 0,92 мг/мл тиаминадениндинуклеотида .

Затем ферментационную жидкость освобождают от бактериальных клеток путем фильтрации, рН довод т до 7,0 и пропускают через колонку, зацолненную 2 л анионообменной смолы дайайон SA2TB (в хлоридной форме ) дл адсорбции тиаминадениндинуклеотида . Ионообменную смолу элюируют водным paiTBopOM милинормальной сол ной кислоты ц 0,02 п. раствором хлорида лити , в результате чего получают 500 мл элюата.

Последний концентрируют в вакууме, осаждают ацетонметанолом, получа таким образом 0,71 г литиевой соли тиаминадениндинуклеотида . Соль очищают повторным раствореннел , высаливают и получают продукт, по физическим н химическим свойствам сходный с тиаминадениндинуклеотидом.

Предмет изобретени

Способ получени тиаминадеиппдинуклеотидов биосиитезом, отличающийс тем, что его производ т путем аэробного культивировани микроорганизмов Brevibacterium ammoniagenes и Corynebacterium glatamicus в водной литательно среде, содержащей источник углерода , например глюкозу, фруктозу, сахарозу,

крахмал, гидролизат крахмала, мелассу, глиперии , сорбит, органические кислоты, источник азота, например мочевину, аммониевые соли; гидролизат казеина, жидкость от замочки кукурузы, дрожжевой экстракт, м сной

экстракт, пептон, рыбную муку и др. в присутствпи неорганических веществ, необходимых дл роста продуцентов, например сульфата магни , фосфата натри ; к культуральной среде добавл ют тпамин или фосфорнокислый

эфир и аденин или соответствующее его производное , причем их ввод т сразу или периодически в культуральную жидкость в процессе фермептации, которую провод т прн температуре от 20 до 40°С и рН около 5,5-9,0.