SU1701194A1

SU1701194A1 - Способ отбора эндоспермовых мутантов кукурузы

Info

Publication number: SU1701194A1
Application number: SU894773778A
Authority: SU
Inventors: Владимир Савельевич Феденко; Виктор Степанович Стружко; Тамара Сергеевна Родина
Original assignee: Днепропетровский государственный университет им.300-летия воссоединения Украины с Россией
Priority date: 1989-12-26
Filing date: 1989-12-26
Publication date: 1991-12-30

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии , к генетическим исследовани м зерновых культур и может быть использовано в селекционной практике дл отбора эндос- пермовых мутантов дл создани перспективных форм кукурузы с хоз йственно ценными признаками. Целью изобретени вл етс ускорение отбора и повышение его достоверности. Способ состоит в том, что из образца кукурузы исходной и мутантной форм экстрагируют зеины, получают cneKtp экстракта в ультрафиолетовой области, по которому наход т значение оптической плотности в максимумах при 285-295 и 310- 315 нм, и рассчитывают соотношение оптических плотностей, по уменьшению которого идентифицируют мутанты. 1 табл.

Description

Изобретение относитс к биотехнологии , к генетическим исследовани м зерновых культур и может быть использовано в селекционной практике дл отбора эндос- пермовых мутантов с целью создани перспективных форм кукурузы с хоз йственно ценными признаками.

Одним из перспек1члвных направлений улучшени биологической ценности зерна кукурузы вл етс создание новых мутант- ных форм с применением генетических при- емов.Селекционно-генетические

исследовани , включающие использование целого набора генов, которые улучшают отдельные показатели биологической ценности зерна, создают проблему разработки эффективных способов отбора эндоспермовых мутантов с комплексом хоз йственно ценных признаков.

Целью изобретени вл етс ускорение отбора и повышение его достоверности.

Способ осуществл етс следующим образом .

Размалывают зерно кукурузы с различным генотипом и экстракцией 70% эталоном выдел ют зеины. Провод т очистку раствора от примесей центрифугированием и фильтрованием. Раствор белкового препарата анализируют путем получени спектра в ультрафиолетовой области. По полученному спектру наход т значение оптической плотности в максимумах при 285-295 и 310- 315 нм и рассчитывают соотношение оптических плотностей. По полученным данным провод т отбор эндоспепмовых мутантов,

О

чО

ь.

которые характеризуютс меньшими значени ми показател по сравнению с исходны- ми аналогами.

Определение провод т параллельно, использу спектры поглощени ззинов исходных и мутантных форм кукурузы (лини А 619).

П р и м е р 1. Зеины экстрагируют п тикратным объемом 70% эталона из обезжиренной эфиром муки кукурузы после отделени вода- и солерзетворимых белков. Экстракцию провод т параллельно дл исходного и исследуемого образца в течение 1 ч при комнатной температуре.. Раствор белка очищают от примесей центрифугированием в течение 55 мин при 3500 об/глин и фильтруют. Измер ю УФ-спектр в области 220-350 им на спектрофотометра Спекорд М-40 в 0,2 см кварцевой кювете. По полученному спектру наход т значени оптической плотности в максимумах при 285-295 и 310-315 нм и рассчитывают соотношение оптических плотностей дл сравнени .

Примеры 2, 3 провод т аналогично примеру 1, при этом исследование провод т на других генотипах кукурузы.

Результаты определени сравмительно- го показател дл зерна кукурузы с различным генотипом приведены в таблице (данные статистически достоверны).

Полученные результаты свидетельствуют о тон, что способ позвол ет провести отбор эндоспермозых мутаций wx/wx, su2/su2, а также двойных мутантов типа о2/о2, su2/su2, o2/o2, wx/wx по достоверно меньшему значению отношени в УФ-спектрах зеинов в сравнении с обычными аналогами.

Интервал значений двух максимумов (285-295 и 310-315 нм) установлен при исследовании препаратов, выделенных из зерна кукурузы с различным генотипом. После установлени положени максимумов анализ можно проводить путем определени значений оптической плотности при фиксированных длинах аолн без получени спектра в УФ-области.

Использование насто щего способа в сравнении с известным позвол ет упростить и ускорить проведение отбора путем исключени длительных и трудоемких операций , дорогосто щих реактивен. Дл проведени отбора требуетс не более 0,5 г муки. При этом исчерпывающа экстракци зеинов (не менее трех раз) не вл етс об зательной и дл анализа достаточно прове5 сти одну экстракцию 70% эталоном. Исключаютс операции по лиофилизации белкового препарата и определению концентрации белка, так как полученный раствор зеииа непосредственно после

0 проведени экстракции сразу анализируетс путем получени спектра поглощени , ха- рактер которого не зависит от концентрации препарата, В св зи с тем, что количество образцов не ограничиваетс ап5 паратурными возможност ми метода, резко возрастает производительность при массовых анализах селекционного материала. При этом растаор белкового препарата после анализа остаетс в неизменном виде и поэтому может быть использован дл пол0 учени других биохимических характеристик , что важно при исследовании селекционных образцов с ограниченным выходом зерна.

Повышение достоверности анализа до5 стигаетс за счет использовани сравнительного критери , позвол ющего однозначно установить различи дл эндос- лермоеых мутантов.

Применение насто щего способа дает 0 возможность проводить отбор не только по отдельным показател м улучшени качества зерна кукурузы в результате эндоспермо- вых мутаций, но и по комплексу хоз йственно ценных признаков.

5 Форму л а изобретени

Способ отбора эндоспермовых мутантов кукурузы, включающий экстракцию зеи- нов.у исходных и мутантных форм и идентификацию эндоспермовых мутантов,

0 отличающийс тем, что, с целью ускорени отбора и повышени его достоверности , у полученного экстракта вы вл ют спектр поглощени в ультрафиолетовой области, определ ют по.нему значени оп5 тической плотности в максимумах, сравнивают отношени значений оптической плотности в максимуме при 285-295 нм к значени м при 310-315 нм и идентификацию провод т по уменьшению данного от50 ношени у мутантов по сравнению с исходными формами.

Характеристика УФ-спектров зеинов. выделенных из зерна кукурузы

Claims

Формула изобретения

Способ отбора эндоспермовых мутантов кукурузы, включающий экстракцию зеинов, у исходных и мутантных форм и идентификацию эндоспермовых мутантов, отличающийся тем, что, с целью ускорения отбора и повышения его достоверности, у полученного экстракта выявляют спектр поглощения в ультрафиолетовой области, определяют по.нему значения оптической плотности в максимумах, сравнивают отношения значений оптической плотности в максимуме при 285-295 нм к значениям при 310-315 нм и идентификацию проводят по уменьшению данного отношения у мутантов по сравнению'с исходными формами.

Характеристика УФ-спектров зеинов, выделенных из зерна кукурузы

Гепотип кукурузы Амакс, НМ Di Амакс, НМ D2 D1/D2 Сг2+/+ 285 0,82 312 0.72 1,14 С г 2wx/wx 295 1,20 315 1,22 0,99 Cr 2 о2/о2 wx/wx 285 1,03 312 0,96 1,07 W64A+/+ 285 1,18 313 0,84 1,40 W 64 A su 2/ su 2 285 1,12 310 0,90 1,24 W64Ao2/o2 su 2/ su 2 285 1,34 312 1.14 1,18 А 619 +/+ 285 1,16 313 1,00 1,16 А 619 su 2/ su 2 294 1,72 315 1,80 0,96 А 619 о2/о2 su 2/ su 2 294 1,53 315 1,57 0,97