SU1659858A1

SU1659858A1 - Способ определени аденилаткиназной активности легких

Info

Publication number: SU1659858A1
Application number: SU884464334A
Authority: SU
Inventors: Светлана Вениаминовна Бестужева; Николай Александрович Жерносек
Original assignee: Белорусский научно-исследовательский институт экспертизы трудоспособности и организации труда инвалидов
Priority date: 1988-06-06
Filing date: 1988-06-06
Publication date: 1991-06-30

Abstract

Изобретение относитс к медицинской биохимии и лабораторной диагностики заболеваний внутренних органов, в частности легких и сердца. Целью изобретени вл етс повышение точности способа за счет использовани в качестве биологического материала конденсата выдыхаемого воздуха , активации вспомогательного фермента пируваткиназы ионами магни и кали , заменой фосфатного буфера,более устойчивым и удобным в работе трис-буфером 0.05М, рН-7,5, увеличением температуры инкубации до 37&deg;С. Дл исследовани в две пробирки берут по 2 мл трис-буфера (0,05 М), 0,2 мл НАД На (0,011 М), 0,2 мл фосфо- энолпирувата (0,015 М). 0,1 мл АТФ (0,025 М). 0.1 мл АМФ (0,025 М), 0,2 мл М 04(0,1 М), 0,2 мл КС (0,025 М). 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы. В опытную пробирку добавл ют 0,1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают пробирки в термостат при 37&deg;С на 30 мин. После инкубации охлаждают на льду и замер ют при 340 нм. Расчет провод т по формуле Е-3-10-1000 Е 2,679 6,22 1800 ммоль/л/с. Способ позвол ет при обследовании больных вы вл ть низкий уровень аденилаткиназной активности, диагностирующей степень функциональных нарушений . 2 табл. w Ё

Description

Изобретение относитс к медицинской биохимии и лабораторной диагностике заболеваний внутренних органов, в частности заболеваний легких и сердца.

Цель изобретени - повышение точности способа.

Способ осуществл ют спектрофотомет- рическим методом, основанным на измерении скорости сопр жени ферментативных реакций. Субстратами реакций вл ютс АТФ и АМФ, а образующийс АДФ реагирует с фосфоэнолпируватом в присутствии пи- руваткиназы. Продуцируемый пируват определ ют при помощи лактатдегидроге- назы при наличии НАД- На

АТФ + АДФ

АДФ АТФ

фосфоэнолпируват2± пируват +

Прируват + НАД Н2 ЈЛактат + НАД4 Дл исследовани в опытную и контрольную пробирки помещают по 2 мл трис- буфера (O.Q5M), 0,2 мл НАД Н2 (0,011 М), 0,2 мл фосфоэнолпирувата (0.015М), 0,1 мл АТФ (0.025М), 0,1 мл АМФ (0.025М). 0,2 мл MgSOo (0.1M). 0,2 мл KCI (0.025M). 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы . В опытную пробирку добавл ют 0.1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, а в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают в термостат при 37°С на 30 мин. После инкубации пробирки охлаждают на

ел ч

00

ел

00

льду, замер ют оптическую плотность при 340 нм. Расчет провод т по формуле

Е 6 221-°1800°0 Е 2679 ммоль/л/с, где Е - разница экстинций контрольной и опытной проб;

6,22 - коэффициент мол рной экстинций НАД На;

3 - q6beM инкубационной смеси;

1000 - пересчет на 1000 мл;

1800 - пересчет на 1 с;

10 - пересчет на 1 мл конденсата.

Пример В клинических услови х данным способом провод т исследование конденсата выдыхаемого воздуха у больных ХНЗЛ без бронхоспастическо Ч) синдрома, с брон кос пасти чес к им синдромом, при бронхиальной астме и ищемической болезни сердца.

Результаты исследовани представле- ны в табл.1.

Как видно из табл.1, показатели адеии- латкиназной активности в конденсате выдыхаемого воздуха у обследованных больных значительно ниже, чем у здоровых и коррелируют со степенью функциональной недостаточности.

При исследовании плазмы крови у данных больных изменени аденилаткиназной активности менее выражены.

Сравнительные данные приведены в табл.2.

Таким образом, способ позвол ет с большим коэффициентом достоверности и специфичности вы вить при обследовании больных хроническими неспецифическими заболевани ми легких (ХНЗЛ) и ишемиче- ской болезни сердца (И Б С) низкий уровень аденилаткиназной активности, диагностирующий степень функциональных нарушений .

Claims

Формула изобретени

Способ определени аденилаткиназной активности легких, включающий исследовани биологической жидкости путем измерени скорости в системе сопр женных ферментативных реакций, отличающий- с тем, что. с целью повышени точности способа, в качестве биологической жидкости используют конденсат выдыхаемого воздуха, система сопр женных ферментативных реакций дополнительно содержит 0.1М MgSCM идо 25М КС, а в качестве буфера - 0.05М трис-HCI буфер рН 7,5 и реакции осуществл ют при 37 С.

Таблица 1

Здоровые11

ХНЗЛ без бронхоспасти- ческого синдрома:

ЛН 1-11 ст„18

ЛН 11 ст11

ХНЗЛ с бронхоспастичес- ким синдромом:

ЛН 0-1 ст.5

ЛН 1-11 ст,17

Бронхиальна астма:

ЛН 0-1 ст.10 ЛН 1-11 ст„ 15

ИБС:

ХКН 0-1 ст.13

ХКН 1-11 ст.25

0,740 0,t25

0,356 1 0,040 0,001 0,,030 0,001

0,,,001

0,251 - 0,,001

0,,049«0,00

0,273 - 0,,01

0,317 i 0,,001

0,1582 0,,001о