SU1654333A1 - Способ обнаружени неклассического вируса - Google Patents
Способ обнаружени неклассического вируса Download PDFInfo
- Publication number
- SU1654333A1 SU1654333A1 SU894666839A SU4666839A SU1654333A1 SU 1654333 A1 SU1654333 A1 SU 1654333A1 SU 894666839 A SU894666839 A SU 894666839A SU 4666839 A SU4666839 A SU 4666839A SU 1654333 A1 SU1654333 A1 SU 1654333A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- astrocytes
- culture
- virus
- mitogen
- con
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к вирусологии и полет быть использовано дл обнаружени некл ссических вирусов з анализируемых образцах. Целью изобретени вп етс повышение точности. 71лч того отбирают пробу вируссодер- .кап ого материала, освобождают ее от классических вирусов, внос т в культуру ГГ-1.НИ астроцитов морской свинки, и RuTopvw внос т конканавалин А в концентрации 20-25 мкг и Н-тимидин, и оценивают уровень включени Н-тнми- л,ича в клеточную ДНК и при отсутствии пролифе-рации суд т о наличии вируса. 1 таил. с $ (Л
Description
Изобретение относитс к -wpvcoio- гии и может быть использовано дл обнаружени неклассических вирусов в анализируемых образцах.
Целью изобретени вл етс похищение точности.
Дл этого вируссолержатий материал освобождают от классических возбудителей инфекционных заболеваний обработкой при 10()°С в течение 15 мин, ввод т в культуру астроцитов морских свинок и сразу же в нее внос т Кон-А (в дозе 20-25 мкг/мл), через 2 дн дополнительно ввод т Н-тнмидин, на 3 сут о наличии возбудител суд т ло потере астроцитами способности отвечать пролиферацией на м тоген.
Сущность способа заключаетс в следующей последовательности операций.
Предварительные этагш. Прежде, чем наследовать инфекционный материал, sapai: f готов т ростовые среды, культуру асттоцитов и определ ют оптимальную концентрацию митогена (Кон-А).
Приготовление культур астроцитов. Источником получени культур служат новорожденные морские свинки. Под пфнрным наркозом вскрывают черепную коробку, извлекают большие полушари голов:юге мозга и немедленно помещают во флаконы со стандартным раствором Хенкса, содержанием пенициллин (100 ед/мп) и гентамицин ( У мкг/мл). Удал ют пинцетом м гкую мозговую оболочку и крупные сгустки крови. Ножницами с узкими браншами разрс зают большие полушари на две части, из области височной части коры вырезают кусоОЭ СП
-U со со
СО
чек ткани объемом 10-15 мм3 и перенос т его в чашку Петри с ростовой средой (сыворотка плодов коров 30%, 5%-ный гемогидролизат 70% с добавлением 0,2 М раствора L-глутамина из расчета 1 мл на 100 мл среды и гента- мицина 25 мкг/мл), где измельчают до кусочков объемом 0,5-1 мм3. После этого, совместно с ростовой средой собирают кусочки пастеровской- пипеткой и пропускают через нейлоновое . сито первоначально с размером пор 150 мкм, а затем 75 мкм.
Получают первичный моноолой, сое- то щий на 85-90% из астроцитов. Дл этого приготовленную клеточную взвесь (10 мл) перенос т в культуральные флаконы с площадью дна 22 см2, помещают в термостат и инкубируют при 37°С с 5% содержанием СО в течение 1 недели.
После образовани сплошного моносло культуральную среду удал ют, внос т 2,5 мл смеси (+37°С), состо щей из 0,1% трипсина и 0,02% версена в соотношении 1:5, выжидают 1-2 мин (контроль под микроскопом, до набухани клеток). Сливают смесь и пастеклетки , соблюда следующий режим, град/мин: ст -10 до -20° 1; от -20 до -40°1,5; от -40 до -70° 3. После чего погружают в сосуд с жидким азотом и хран т при -196°С.
Жизнеспособность клеток сохран етс более двух лет.
Восстановление культур астроцитов после хранени в жидком азоте и подготовка их дл вирусологических исследований .
Ампулы с суспензией астроцитов извлекают из азота и немедленно помещают в вод ную баню на -2 мин при +ЗУ°С. Затем вскрывают, содержимое перенос т в культуральные флаконы объемом 50 мл и помещают в С02 инкубатор при +37°с. Через 24 ч мен ют ростовую среду на RPMI-1640 с 10% сывороткой плодов коров и культивируют в течение 5-6 дней до образовани сплошного моносло . Монослой снимают раствором трипсина и версена, как описано выше. В камере Гор ева подсчитывают количество клеток в полученной суспензии, затем развод т ростезой средой RPMI-1640 до концентрации 7 10 кл ./мл . Приготовленную
ровской пипеткой внос т ростовую ере-з0 купьтуру астроцитов в суспензии, вноду в объеме 5 мл, пипетиру струей дл сн ти клеточного пласта (5-10 манипул ций ). Использу камеру Гор ева, подсчитывают количество клеток в 1 мл,
с в чейки 96-луночных пластиковых панелей, используют дл обнаружени возбудител .
Приготовление сред дл культнвиропри необходимости довод т их концент- ,, вани астроцитов. Дл приготовлени рацию ростовой средой до кл./мп. первичной монослойной культуры астКлеточную взвесь можно сразу переносить дл культивировани в лунки пластиковой панели и использовать дл ,
роцитов используют ростовую среду на основе 5% гемогидролизата.
Дл постановки опыта в пластиковых
обнаружени вируса или хранить в жид- до панел х примен ют среду RPMI-1640. ком азоте, восстанавлива по мере не- В среду добавл ют следующие необ- обходимости.
Хранение культур астроцитов.
Клетки перенос т пипеткой в пробирходимые ингредиенты. 1-глутамин 2мМ, антибиотики 100 мкг/мл хлоркальциево- го комплекса стрептомицина и
ки, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин, надосадок удал ют, а оставшиес клетки развод т криозащит ной средой.(5% гемогидролиэат, рН - 7,2-7,4 70%, сыворотка плодов коров ,20%, глицерин 10%) до концентрации 2-10 кл./мл.
Приготовленную суспензию астроцитов разливают по 3 мл в стерильные ампулы и герметично закрывают. Ампулы с астроцитами поэтапно охлаждают выдерживанием при +4°С 2 ч, затем помещают в ванночку с 96%-ным этиловым спиртом, охлажденным до -10 С. Использу жидкий азот, замораживают
купьтуру астроцитов в суспензии, внос в чейки 96-луночных пластиковых панелей, используют дл обнаружени возбудител .
Приготовление сред дл культнвиророцитов используют ростовую среду на основе 5% гемогидролизата.
Дл постановки опыта в пластиковых
панел х примен ют среду RPMI-1640. В среду добавл ют следующие необ-
ходимые ингредиенты. 1-глутамин 2мМ, антибиотики 100 мкг/мл хлоркальциево- го комплекса стрептомицина и
10i) ед./мл пенициллина, 10% сыворотки плодов коров, инактивированной при 56°С в течение 30 мин. Дл стабилизации рН среды (7,4) добавл ют раствор HEPES (М-2-гидроксиэтилпиперазин-М-2- этансульфанова кислота) в окончательной концентрации 10 мМ.
Приготовление раствора митогена. В качестве митогена используют Конка- навалин A (Concanavalin A, Serva). Готов т матричный концентрированный раствор на среде RPflI-1640, содержащий Кон-А, в дозе 100 мкг/мл, который разбавл ют перед использованием до нужной концентрации. Исход из того.
что в лунки пластиковой панели приготовленную суспензию астроцитов и раствор митогена добавл ют в равных количествах (т.е. происходит разбавление митогена в два рача), растворы митогенов готов т в концентраци х, в два раза превышающих необходимую (20, 30, 40 мкг/мл и т.д.).
Определение оптимальной концентрации митогена Кон-А дл стимул ции пролиферативной активности астроцито
Определение дозоэависимого стимулирующего эффекта митогена осуществл ют внесением Кон-А в конечных концентраци х 10,20,25,40 и 50 мкг/мл в незараженные культуры астроцитов морских свинок, наход щихс в лунках пластиковых панелей (/0000 кл./мл ротовой среды). Дл этого в каждую из 15 лунок с астроцитами в первом варианте опыта внос т Кон-А в О,1 мл ростовой среды RPMI-1640 (концентраци Ю мкг/мл).
Во втором варианте опыта в 15 лунок с культурой астроцитов внос т Кон-А в 0,1 мл ростовой среды RPMI- 1640 (концентраци 20 мкг/мл).
В третьем варианте опыта в каждую
с
из 15 лунок с астроцитами внос т Кон-А 30 в термостатах при +3/ С с 5% содер- в 0,1 мл ростовой среды RPMI-1640 жанием C(V . (концентраци 25 мкг/мл и т.д.).
Контролем служат 15 лунок с культивируемыми астроцитами без митогена.
Через ч в первые 15 лунок внос т по 0,05 мл обработанного вируссодер- жащего материала и сразу же в них Пластиковые панели помещают в тер- ,, добавл ют по 0,1 мл Кон-А в дозе
20-25 мкг/мл. Во вторые 15 лунок
мостат и культивируют при С с 5% содержанием COj.
На вторые сутки культивировани в каждую лунку опыта и контрол внос т 5 мкКм Н-тимидина в 0,05 мл среды RPMI-1640.
На третьи сутки из лунок пипеткой удал ют культуральную среду и добавл ют 0,2 мл физраствора, клетки суспензируют и перенос т на целлюлозные фильтры с диаметром пор 0,85 мкм. Затем их последовательно обрабатывают 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты , 96%-ным этиловым спиртом и перенос т во флаконы с 6 мл толуолового сцинтилл тора. Пролиферативную активность астроцитов определ ют на жидкостном сцинтилл ционном спектрометре, учитыва уровень синтеза клеточной ДНК по включению в нее Н-тимидина.
Установлено, что индекс стимул ции пролиферации (отношение количества импульсов в 1 мин в культурах астроцитов с Кон-А к количеству импульсов
(контроль митогена) внос т по 0,05 мл среды культивировани и 0,1 мл Кон-А в дозе 20-25 мкг/мл. В оставшиес
до 15 лунок (контроль опыта) внос т
только по 0,05 мл среды культивировани без митогена.
Культуры помещают в термостат и инкубируют при +37°С с 5% содержани45 ем С(2На вторые сутки в каждую лунку опыта и контрол внос т 5 мкКи Н-тимидина в 0,05 мл среды культивировани .
50 Обнаружение возбудител провод т на третьи сутки, испотьзу жидкостный сцинтилл ционный спектрометр, определ ют пролифератнвную активность астроцитов по включению Ч-тнмидина
55 в клеточную ДНК, учитывают количество импульсов в 1 мин в опытных и контрольных культурах. Присутствие возбудител устанавливают по потере инфицированными астроцитами способв 1 мин в культурах без Кон-А) наиболее высокий при внесении Кон-А в концентрации 20-25 мкг/мл. Малые концентрации Кон-А (Ю мкг/мл) на третьи сутки вызывают более низкую стимул цию пролнферативной активности, а более высока концентраци (50 мкг/мл) вообще не вызывает пролиферации клеток.
Таким образом, наиболее оптимальной концентрацией митогена Кон-А дл стимул ции пролиферативной активности астроцитов морских свинок вл етс доза 20-25 мкг/мл.
5 Вли ние различных концентраций Кон-А на пролиферативнуто активность астроцитов морской свинки показано в таблице.
Инфекционный материал (нервна
0 ткань людей, животных, культура клеток и т.п.) гомогенизируют, добавл ют физраствор, центрифугируют при 6000 об/мин 15 мин и удал ют осадок. Надосадок обрабатывают в вод ной
5 бане при ЮО°С в течение 15 мин.
В 45 плоскодонных лунок пластиковой панели внос т взвесь астроцитов в объеме 0,1 мл ростовой среды, содержащей Л 10 клеток, и инкубируют
с
0 в термостатах при +3/ С с 5% содер- жанием C(V .
(контроль митогена) внос т по 0,05 мл среды культивировани и 0,1 мл Кон-А в дозе 20-25 мкг/мл. В оставшиес
15 лунок (контроль опыта) внос т
только по 0,05 мл среды культивировани без митогена.
Культуры помещают в термостат и инкубируют при +37°С с 5% содержанием С(2На вторые сутки в каждую лунку опыта и контрол внос т 5 мкКи Н-тимидина в 0,05 мл среды культивировани .
Обнаружение возбудител провод т на третьи сутки, испотьзу жидкостный сцинтилл ционный спектрометр, определ ют пролифератнвную активность астроцитов по включению Ч-тнмидина
в клеточную ДНК, учитывают количество импульсов в 1 мин в опытных и контрольных культурах. Присутствие возбудител устанавливают по потере инфицированными астроцитами способности отвечать пролиферацией на дей-| ствие мнтогена.
Пример 1. Обнаружение возбудител амиотрофического лейкоспонгио- за (АЛ) в ткани ЦНС больного Д.
Из мозга (кора больших полушарий) через 3 ч после смерти выдел ют кусочек ткани (0,3 г), помещают в ступку, гомогенизируют, добавл ют 2,7 мл физраствора , перенос т суспензию в пробирку и центрифугируют при 6000 об/мин в течение 15 мин. Собирают надосадок и прогревают при 100°С 15 мин в вод ной бане.
В первые 15 лунок пластиковой панели , содержащей культуру астроцитов, внос т 0,05 мл обработанного, как указано выше, надосадка суспензии мозга больного Л. и сразу же в эти лунки добавл ют 0,1 мл Кон-А (в дозе 25 мкг/мл).
Во вторые 15 лунок пластиковой панели с культурой астроцитов внос т 0,05 мл среды RPMI-1640 и добавл ют 0,1 мл Кон-А (в дозе 25 мкг/мл).
В контрольные 15 лунок пластиковой панели с культурой астроцитов внос т только 0,05 мл среды RPMI-1640 без митогена.
Пластиковые панели помещают в термостат и инкубируют при +3 С с 5% содержанием COg.
На вторые сутки во все лунки с аст роцитами в опыте и контроле внос т 5 мкКи Н-тимидина в -,М5 мл среды RPMI-1640.
На третьи сутки пипеткой удал ют культуральную жидкость, добавл ют в каждую лунку 0,2 мл физраствора, клет ки суспензируют и перенос т на целлюлозные фильтры с диаметром пор 0,85 мкм. Обрабатывают фильтры 5%-ным раствором треххлоруксусной кислоты, промывают 96%-ным этиловым спиртом, высушивают и помещают во флаконы с толуоловым сцинтилл тором. Пролифера- тивную активность оценивают по включению Н-тимидина в клеточную ДНК. Уровень включени Н-тимидина в пер- вых (опытных) 15 лунках с внесенным вируссодержащим материалом и митоге- ном - 5380+240 имп/мин, во вторых (контроль митогена) 15 лунках, содержащих астроциты и митоген без вируса, 13088t982 имп/мин и в последних (конт роль опыта) 15 лунках, содержащих только культивируемые клетки, 5260i i590 имп/мин. Разница между средним
числом импульсов с учетом средней ошибки в опыте (первые 15 лунок) и контроле опыта статистически незначима , а разница между средним числом импульсов в стимулированных митогеном астроцитах (контроль митогена - вторые 15 лунок) и контролем опыта статистически значима, т.е. зараженные астроциты не отвечают пролиферацией на внесенный митоген.
Таким образом в ткани ЦНС больного Д. содержитс возбудитель АЛ. Посмертна верификаци заболевани - амнотрофической лейкоспонгиоз.
Пример 2. Обнаружение возбудител АЛ в ткани ЦНС больного Л.
Проведено вз тие ткани объемом 0,5 см3 из области центральной извилины коры больших полушарий головного мозга. Обработку вируссодержащего материала, последующее заражение клеток , внесение митогена Кон-А, (концентраци 20 мкг/мл) и подсчет проли- феративной активности провод т, как описано в примере 1. В зараженных культурах стимулирующего действи Кон-А на астроциты не отмечено. Уровень включени Н-тимидина в клеточную ДНК, имп/мин: 61501955 (опыт); 128501354 (контроль митогена); 589О±340 (контроль опыта).
Таким образом; внесение суспензии ткани мозга больного Л. в культуру привело к потере астроцитами способности отвечать пролиферацией на митоген . В ЦНС больного Л. находитс возбудитель АЛ.
П р и м е р 3. Определение возбудител АЛ в ткани ЦНС морской свинки с экспериментально воспроизведенным заболеванием.
Морской свинке инокулируют интра- церебрально 0,1 мл 10%-ной суспензии мозга больного Д., умершего от АЛ. Через 1,5 мес после заражени у него по вл ютс клинические признаки заболевани , про вл ющиес в выпадении шерсти, атрофии мышц, развитии парезов и параличей конечностей и туловища . В терминальной стадии заболевани у животного под эфирным наркозом берут мозг дл вирусологических исследований . Обработку и внесение вируссодержащего материала в культуру астроцитов морской свинки провод т как описано в примере 1 . Через 3 дн определ ют пролиферативную активность астроцитов по уровню включени 3Н-тимидина в ДНК. В зараженных культурах стимулирующего действи митогена на астроциты не отмечено. Уровень включени Н-тимидина в клеточную ДНК, имп/мин: 4980+350 (опыт), 120501:900 (контроль митогена); 5420+570 (контроль опыта).
Таким образом, ь ткани ЦНС исследованной морской свинки находитс возбудитель АЛ.
П р и м е р 4. Определение перси- стенции возбудител АЛ в монослой- ных культурах клеток, полученных из мозга больного Д., умершего от АЛ.
Сливают культуральную жидкость, механически отдел ют клетки (около 1000 клеток), добавл ют 5 мл физраствора и перенос т в пробирку. Дают клеткам 15-20 мин отсто тьс , сливают физраствор, 3-кратно замораживают и размораживают, гомогенизируют и обрабатывают, как описано в примере 1 . После этого вируссодержащий материал внос т в культуру астроцитов морской свинки. Через 3 дн исследуют уровень включени 3Н-тимидина в клеточную ДНК. В зар женных культурах стимулирующего действи Кон-А в дозе 25 мкг/мл на астроциты не. отмечено. Уровень включени н-тимидчна в клеточную ДНК составл ют, имп/мин: 4778 ±294 (опыт); 14001±200 (контроль митогена ); 4960+310 имп/мин (контроль
опыта).
Таким образом, в монослойной культуре клеток, полученной от больного Д., персистирует возбудитель АЛ.
П р и м е р 5. Определение вли ни очищенных препаратов возбудител АЛ на астроциты.
Культуральную жидкость, полученную из монослойной культуры больного Д., (титр возбудител АЛ в культуральной жидкости 5, 1 1р, ИД 50/мл), обрабатывают как в примере 1, затем концентрируют 8 раз сухим полиэтилен- гликолем и внос т по 0,1 мл в лунки пластиковой панели с культурой астро- цитов, учитывают так, как описано ранее. В зараженных клетках стимул ции пролиферации Кон-А в дозе 25 мкг/мл не отмечено. Уровень включени Н-тимидина в клеточную ДНК, имп/мин: 6200+356 (опыт); 13240+450 (контроль митогена); (контроль опыта).
Таким образом, внесение очищенных препаратов возбудител АЛ в культуру
,
Q
5
0 5 0
5
о
$ „, 5
привело к потере астроцитами способности отвечать пролиферацией на мито- ген.
11 р и м е р 6. Вольной П. Патолого- анатомический диагноз - болезнь 1 1иль- дера.
Вирусологическое исследование ткани ЦНС провод т, как описано в примере 1 .
Как в первых 15 лунках с внесенной мозговой суспензией больного ПВ, так и во вторых 15 лунках, не содержащих какого-либо дополнительного материала под действием Кон-А в дозе 25 мкг/мл, отмечаетс увеличение пролиферативной активности астроцитов. Уровень включени Н-тимидина в клеточную ДНК, имп/мин: 12384+405 (опыт);13233±370 (контроль митогена); 5ЮО±ЗЮ (контроль опыта).
Таким образом в ЦНС больного ПВ возбудитель АЛ отсутствует.
Пример. Больной П. Патоло- гоанатомический диагноз - амиотрофи- ческий боковой склероз .
Вирусологическое исследование ткани провод т, как описано в примере 1.
Как в первых 15 лунках с внесенной мозговой суспензией, так и во вторых 15 лунках, не содержащих какого-либо дополнительного материала под дейст- зием Кон-А в дозе 25 мкг/мл, отмечено увеличение пролиферативной активности астроцитов. Уровень включени
Н-тимидина в клеточную ДНК имп/мин: 12820±290 (опыт); 13115+570 (контроль митогена); 5490+520 (контроль опыта).
Таким образом в ЦНС больного П. неклассический вирус АЛ отсутствует.
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ обнаружени неклассического вируса, включающий отбор пробы вируссодержащего материала, освобождение его от классических вирусов, внесение его в культуру клеток с последующей оценкой наличи вируса, отличающийс тем, что, с целью повышени точности, в качестве культуры используют астроциты морской свинки, в которую внос т кокко- навалин А в концентрации 20-25 мкг/мл и 3Н-тимидин, а оценку провод т по включению 3Н-тимидина в клеточную ДНК и при отсутствии пролиферации суд т о наличии вируса.Астроциты, обработанные Кон-А, имп/мин Астроциты без Кон-А, имп/мин Индекс стимул ции пролиферации t, P10440 880 13088+982 8050+1051,5,29,,)12,0t-5,5РСО,0015284+310 2,5t-7,58 ,0011,5 ,45Р),0010,9,79РХ),0501,5 ,45Р),0010,9,79РХ),05
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894666839A SU1654333A1 (ru) | 1989-03-27 | 1989-03-27 | Способ обнаружени неклассического вируса |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894666839A SU1654333A1 (ru) | 1989-03-27 | 1989-03-27 | Способ обнаружени неклассического вируса |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1654333A1 true SU1654333A1 (ru) | 1991-06-07 |
Family
ID=21436226
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU894666839A SU1654333A1 (ru) | 1989-03-27 | 1989-03-27 | Способ обнаружени неклассического вируса |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1654333A1 (ru) |
-
1989
- 1989-03-27 SU SU894666839A patent/SU1654333A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Баринский И.и., ИК-бладте А.К. Этиологи хроническ 1х вирус ньгх чейроинфекций. - М.: Медицина, Г-г4 , с. 166. Коломиец Н , I. к др. Кли:шко-морфологическа характеристика и лабораторна диагностика лейкоггюнгиоэа, Минск, 1986. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
OSGOOD et al. | Culture of human marrow: details of a simple method | |
KR860000897B1 (ko) | 인체 에리트로포이에틴의 제조방법 | |
US20030232432A1 (en) | Growth of human Mesenchymal Stem Cells (hMSC) using umbilical cord blood serum and the method for the peparation thereof | |
Morgan et al. | LATENT VIRAL INFECTION OF CELLS IN TISSUE CULTURE: I. Studies on Latent Infection of Chick Embryo Tissues with Psittacosis Virus | |
Gordon | Studies of the viruses of vaccinia and variola | |
JPH09176043A (ja) | 魚類用のイリドウイルス感染症ワクチンと診断剤並びにこれ等の製法 | |
Vaughn et al. | Susceptibility of an insect tissue culture to infection by virus preparations of the nuclear polyhedrosis of the silkworm (Bombyx mori L.) | |
Hockmeyer et al. | The culture of Leishmania donovani in Schneider's insect medium: its value in the diagnosis and management of patients with visceral leishmaniasis | |
US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
SU1654333A1 (ru) | Способ обнаружени неклассического вируса | |
Burke et al. | The isolation of a latent adenolike virus from chicken kidney cell cultures | |
Fattal et al. | Enterovirus types in Israel sewage | |
Clayton | A simplified method for the culture of Blatella germanica under aseptic conditions | |
CN109792972B (zh) | 一种囊尾蚴体外培养方法 | |
Wilde Jr | Technical procedures for the study of organogenesis in vitro in Amblystoma | |
Lock | The chemotherapeutic action of phenanthridine compounds: Part IV. Activity in vitro | |
Alexander et al. | Mechanism of emergence of resistance to streptomycin of H. pertussis and H. parapertussis during treatment with this antibiotic | |
Kaplan et al. | A method for preparing smallpox vaccine on a large scale in cultured cells | |
CN109453371A (zh) | 一种羊痘、山羊传染性胸膜肺炎二联灭活疫苗及其生产方法 | |
RU2067866C1 (ru) | Способ получения ингибитора клеточной пролиферации | |
RU2404800C2 (ru) | Вакцина против тейлериоза | |
RU2080600C1 (ru) | Способ обнаружения и идентификации энтеровирусов в патологическом материале | |
RU2059413C1 (ru) | Способ специфического лечения сапа у чувствительных животных | |
JPH10248557A (ja) | 細胞培養法 | |
SU778263A1 (ru) | Способ дифференциации вирулентных и вакцинных штаммов вируса гриппа |