SU778263A1 - Способ дифференциации вирулентных и вакцинных штаммов вируса гриппа - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ВИРУЛЕНТНЫХ :и ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ. ВИРУСА ГРИППА путем заражени  вирусом гриппа клеток с последующим инкубированием и гистологическим исследованием зараженных клеток, о т л и ч а ю 1Д и и с   тем, что,с целью ускоре-. НИН способа, дл  заражени  используют лейкоциты периферической,крови человёка, вирус внос т из расчета 1000 ЕИДдо на клетку и гистологические исследовани  провод т через 5, 15, 30 мин до 48 ч инкубировани .

Description

tsD

О

СО т- Изобретение относитс  к области медицины, а именйо к определению в 1рулёнтн6сти вируса гриппаV Известен способ дифференциации вирулентных и вакцинных штаммов вируса гриппа путем заражени  вирусом гриппа клеток с по.следующйм инкубированием и гистологическим исследованием зараженных клеток HlJ. Однако при известном способе зараженные вирусом гриппа клетки в сЕГёднем культивируют в течение 7 дн дл  получени  необходимого ответа. ЦелБЮ йзббретени   вл етс  ускор зние способа. Эта цель достигаетс  тем, что дл  Заражени  используют лейкоциты пёриферичёск:ой крови человека, виру внос т из расчета 1000 ВИДу на клётку; и гистологические, исследовайи  провод т через 5, 15, 30 мин до 48 ч инкубировани . В йсслёйованй х используют йтам .мы вирусагриппа А(Н Н2} - в1даеленные от больных гриппом в перн&д эпи дёмии в 1976-1977 г.г. (2-3 пасаж на куриных эмбрионах) и вакцинный в Иру С А (в ик тори   35)72,- 1йГейШ ьз у е мйй дл  приготовлени  живой гриппоз ной sakiiiiffla, / ; Дл накоплени  вйруссодержаадей аллантоиснрй жидкости испытуемым штаммом isйруса зара а:к1Т 10-И-дневнкгё куринвае эмбрионы, которые вскры вают через 48-72 ч. Сорбцией - элюцйей на куриных эритроцитах получают очищенную и концентрированную 1в;эвесь виру са. Элюцию осуй ествл ют -либо в 0,11 м фосфатном буфере, либо среде 199. К элюату добавЛ ют че ловеческий альЬумйн до конечной кон центрации 1%. . - . Титрованием на 10-11-дневных кур ных эмбрионах определ ют инфекционный , титр элюата. в период проверки йнфёкЦйонного титра, элюат хран т . при 4°С. , ; . ,., . -- . ЛеЙ кЬцйт1Ы перйферич.ескрй kpoBij e-jfcs t ;ffeH6cpeS7c B лёМи  заражают i()OQ .испытуемого вируса.Через 5 мим посл добавлени  вируса одйу треть вэвесй клеток посйе тщательного пЖрёмёшйванй  центрифугируют 8-10 мин при 1000 об/мин, осадок кЛеток фиксируют и заливают в эпоновые смолы. Оставшуюс  взвесь лейкоцитов продолжают культивировать в течение 1 ч при 36°С, затем центрифугируют 8-10 мин при -1000 об/мин, надосадок удал ют, а к осадку добавл ют среду 199 с 1%-ным а.льбумином человека (концентраци  клеток в Культивируемой смеси 1 ) ипомещают в термостат при Зб°С.. Подойину взвеси клеток после тщательного пипетировани . фиксируют и заливают в эпоновые смолы через 7ч, а оставшуюс  - через 24 ч.. Готов т ультратонкие срезы и изучают их в электронном микроскопе. На ультратонких срезах клеток, зафиксированных через 5 мин после заражени , определ ют большое .количество внутри- и внеклеточного вируса , независимо о.т вирулентности испытуемого штамма. В этот срок исследовайй  различи  между вирулентным и вакцинным штаммомвыражаютс  в более активной адсорбции вирионов вакцинного штамма на эритроцитах, которйё в небольшом количестве присутствуют во взвеси лейкоцитов. Четкие различи  между вирулентным и вакцинньам штаммайи вы вл ютс  при изучении ультратрнких срезов лейкоцитов, зафиксированных через7 ч после заражени , Вирионы вирулентного штамма йе разрушаютс  нейтрофилами , внутри- и внеклеточно обнаруживают многочисленные малоизмененные вируснйе .частй1зсы.. В противоположность этому количество внутри и внеклеточнБ Х вирионов вакцинного штамма спуст  7 ч резко уменьшаетс  иЛИШЬ в единичных нейтрофилах вы вл ют 2-3 интактные вирусные частицы. Через 24 ч внеклеточно -вы вл ют большое число вирионов лишь при заражении клеток вирулентнвми штаммами вируса гриппа вирионы -й акцинного в этот период, как правило, не обнаруживаютс . Предлагаемый спрсоб прзвол ет отчетливо дифференцировать вирулентный и ва цинньйштамм вируса гриппа через 24 ч (вместо 7 дней изйестньам способом)

Claims (1)

1. СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ВИРУЛЕНТНЫХ И ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ ВИРУСА ГРИППА путем заражения вирусом гриппа клеток с последующим инкубированием и гистологическим исследованием зараженных клеток, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,'с целью ускоре-. ния способа, для заражения используют лейкоциты периферической,крови человека, вирус вносят из расчета 1000 ЕИД₅₀ на клетку и гистологические исследования проводят через 5, 15, 30 мин до 48 ч инкубирования.

   сл м м ж ьо о

   М

   7:.7-777^7^