SU1537690A1 - Способ определени вида грамотрицательных микроорганизмов - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и может быть использовано дл  диагностики инфекционных заболеваний. Цель изобретени  - повышение точности и ускорение способа. Исследуемые культуры высевают на питательные среды, содержащие один из субстратов, в отношении которого определ ют ферментативную активность, в частности среды с углеводами, аминокислотами, среды дл  определени  образовани  сероводорода и индола. Параллельно делают посевы на контрольные среды (не содержащие субстраты). После инкубировани  посевов определ ют изменение цвета сред и индикаторов. Дл  определени  утилизации аминокислот лизина, орнитина и аргинина к посевам добавл ют реактив Несслера. При утилизации аминокислот образуетс  осадок, в контроле осадок отсутствует. Врем  проведени  анализа 18 - 24 ч, ложно положительные результаты исключаютс .

Description

1

(21)4417347/30-13

(22)28.04.88

(46) 23.01 .90. Бюл. УР 3

(71)Центральный институт усовершенствовани  врачей

(72)Т.Б.Сафонова, Л.А.Тараненко, Е.А.Ведьмина и В.Р.Соболев

(53)576.8.093.1 (088.8)

(56)Энтеробактерии. Руководство дл  врачей./Под ред. В.И.Покровского, М.: Медицина, 19&5, с. 31-55.

(54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДА ГРАМОТ- РИЦАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

(57)Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и может быть использовано дл  диагностики инфекционных заболеваний. Цель изобретени  - повышение точности и ускорение способа . Исследуемые культуры высевают на питательные среды, содержащие один из субстратов, в отношении которого определ ют ферментативную активность, в частности среды с углеводами, аминокислотами , среды дл  определени  образовани  сероводорода и индола. Параллельно делают посевы на контрольные среды (не содержащие субстраты). После инкубировани  посевов определ ют изменение цвета сред и индикаторов. Дл  определени  утилизации аминокислот лизина, орнитина и аргинина к посевам добавл ют реактив Несслера. При утилизации аминокислот образуетс  осадок, в контроле осадок отсутствует. Врем  проведени  анализа 18-24 ч, ложно положительные результаты исключаютс  .

9

(Л

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и может быть использовано дл  диагностики инфекционных заболеваний.

Цель изобретени  - повышение точности и ускорение способа.

Способ осуществл ют следующим образом .

Способность утилизировать углеводы определ ют посевом исследуемых культур на среды Гисса,способность образовывать H2S и индол на среде Клиглера. Показани  этих тестов учитывают через 24 ч по изменению окраски индикатора в этих средах.

Определение утилизации аминокислот осуществл ют следующим образом. Готов т реактив Несслера: берут 10 мл

воды, 1 г йодистой ртути, растирают в ступке с небольшим количеством воды, перенос т в темный стекл нный флакон, ступку ополаскивают водой и сливают в тот же флакон, куда добавл ют 0,5 г йодистого кали . В оставшейс  воде раствор ют 2 г гидроксид натри , и после охлаждени  раствор щелочи выливают во флакон. Дают отсто тьс  осадку в течение нескольких часов. Надосадоч- ную жидкость сливают и хран т в темном флаконе с притертой пробкой. Среды готов т известным методом: с аминокислотами и без аминокислот (контрольные ) . Посев испытуемых культур провод т известным методом, культуры инкубируют 18-24 ч в термостате при 37°С.

сл

СО 1

to to

Реактив Несслера в об-ьеме 0,15- 0,25 мл добавл ют в каждую пробирку под слой вазелинового масла.

Реакцию считают положительной, ее ли сразу после добавлени  реактива в опытную пробирку образуетс  объемный белый осадок в случае продукции микроорганизмами декарбокс лазы ор- нитина или лизина, и большое количе- ство белого или желто-коричневого осадка при продукции аргининдигидро- лазы. По вление легкой опалесценции расцениваетс  как отрицательный результат .

В контрольной пробирке после добавлени  реактива происходит изменение цвета индикатора без образовани  осадка.

Пример 1. Вы вление вида культуры рода Klebsiella pneumoniae.

Определение исследуемой культуры начинают с посева в две пробирки со средой Гисса, содержащей глюкозу и лактозу, в пробирку со средой Клигле ра, на которой определ ют образование и индола, а также на среду с аминокислотой. Перва  пробирка - среда с лизином (опытна ), втора  пробирка - среда без лизина (контрол на ). Исходный цвет сред - светло-зеленый . Пробирки заливают стерильным вазелиновым маслом дл  создани  анаэробных условий.

Посевы став т в термостат и ин ку- бируют при 37°С 2k ч. Изменение окраски индикатора на средах Гисса свидетельствует о способности микроорганизма утилизировать глюкозу и лактозу . Отсутствие почернени  среды Клиглера и отсутствие изменени  индикаторной бумажки на индол свидетельствует о неспособности исследуемой культуры образовывать сероводород и индол. Через 2 ч инкубации в контрольной пробирке (среда без лизина ) происходит изменение цвета среды из зеленого в желтый, а цвет опытной пробирки (среда с лизином) приобретает желтый цвет с зеленоватым оттенком . Такое изменение цвета не позво л ет четко интерпретировать результаты . В пробирки добавл ют реактив Несслера в количестве 0,15 мл под вазелиновое масло. В опытной пробир- ке сразу по вл етс  объемный белый осадок. В контрольной пробирке при добавлении 0,15 мл реактива образование осадка не наблюдаетс .

5

0

о

5

0

Пример 2. Вы вление вида микроорганизма Pseudomonas aerugino- sa.

Определение начинают с посева исследуемой культуры в две пробирки со средой Гисса, содержащей глюкозу и лактозу, в пробирку со средой Клиглера , на которой определ ют образование и индЬла,а также на две пробирки - опытную и контрольную, соответственно с аргинином и без аргинина . Пробирки с аминокислотами заливают вазелиновым маслом, и все посевы инкубируют в термостате при 37°С ч.

Изменение окраски индикатора на среде с глюкозой говорит о способности культуры утилизовать глюкозу. Неизмененна  окраска среды с лактозой , отсутствие почернени  среды Клиглера и изменени  индикаторной бумажки на индол свидетельствуют об отрицательных реакци х. Через 18- ч инкубации с аминокислотами происходит изменение цвета посева в опытной пробирке (среда с аргинином) в сине-зеленый, а в контрольной (среда без аргинина) - в зелено-синий, что не дает возможность интерпретировать полученные результаты.

Добавл ют в пробирки с аминокислотами по 0,25 мл реактива Несслера под масло. В опытной пробирке сразу образуетс  желтовато-коричневый осадок , в контрольной осадка не наблюдаетс  .

Использование способа позвол ет повысить точность определени  вида микроорганизма за счет модификации определени  утилизации аминокислот. По сравнению с известным способом ускор етс  определение на 2-3 сут.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  вида грамотри- цательных микроорганизмов путем посева исследуемых культур на питательные среды, предназначенные дл  определени  утилизации углеводов и аминокислот , образовани  индола и сероводорода , с последующим инкубированием посевов и определением вида микроорганизма пс совокупности биохимических свойств, отличающийс  тем, что, с целью повышени  точности и ускорени  способа, утилизацию аминокислот лизина, орнитина и аогинина

   51537690б

   определ ют по образованию осадка пос- выросшей культурой реактива Нессле- ле добавлени  в питательную среду с ра.