SU1508150A1

SU1508150A1 - Способ определени содержани прекалликреина в плазме крови

Info

Publication number: SU1508150A1
Application number: SU864023697A
Authority: SU
Inventors: Галина Михайловна Боголюбова; Сергей Сергеевич Михайлов; Андрей Александрович Санковский; Игорь Григорьевич Щербак
Original assignee: 1-Й Ленинградский Медицинский Институт Им.Акад.И.П.Павлова
Priority date: 1986-02-14
Filing date: 1986-02-14
Publication date: 1989-09-15

Abstract

Изобретение относитс к медицинской биохимии, а именно к способам определени содержани прекалликреина в плазме крови. Цель изобретени - повышение чувствительности способа определени за счет специфического св зывани свободного ингибитора калликреина - α₂ - макроглобулина. Дл этого в известном способе перед активацией каолином в плазму добавл ют метиламин в конечной концентрации 1-1,2%, выдерживают 1,5-2 ч при комнатной температуре. 1 табл.

Description

Изобретение относитс к медицинской биохимии, а именно к способам определени в плазме крови компонен - тов протеолитических систем, и может быть использовано в клинико-диагностических лаборатори х.

Цель изобретени - повьшение чувствительности способа.

Способ осуществл ют следующим образом ,

В полиэтиленовую пробирку внос т 0,4 мл. плазмы и монометиламина в конечной концентрации ,27, и оставл ют на 1 ч при комнатной температуре, затем эту пробирку помещают в вод ную баню при 25°С и внос т 0,4 мл суспензии 1%-ного раствора каолина. После 1-минутного контакта плазмы с каолином отбирают по О,2 мл смеси в пробирки, содержащие 0,4 мл 0,05 М мединалового буфера, рН 7,6, Добавл ют 0,2 мл 1%-ного раствора протамин- сульфата и инкубируют пробы 15 мин при 37 С, после чего реакцию останавливают , добавл ют 0,8 мл 20%-ной , трихлоруксусной кислоты (ТХУ), В контрольные пробы протаминсульфат внос т после ТХУ, После осаждени не- расщепившегос протаминсульфата ТХУ пробы центрифугируют 20 мин при 8000 об/мин,

В прозрачном центрифугате опреде- ,л ют содержание аргинина по реакции Сакагучи в модификации Храмова и соавторов. Дл этого к 1 мл центри- фугата добавл ют 1 мл арствора энте- росептола, 1 мл 2,5%-ного раствора NaOH и 1 мл NaBrO, После добавлени очередного реактива пробы тщательно перемешивают или встр хивают. Интенсивность окраски определ ют на ФЭКе

СЛ

3150

(светофильтр № 5, кювета 10 мм), сравнива опытную пробу с контрольной

Количетсво аргинина в пробах слу- жит мерой определени активированного прекалликреина.

Активность прекалликреина выражают в микромол х аргинина, отщеплен- . кого от протаминсульфатд 1 л плазмы крови за 1 мин по формуле

л E.Y ilz:§jil2oo

, ,1 74,2

где Р - количество аргинина в пробе , мкг; V - объем инкубированной смеси , мл;

v объем плазмы в пробе, мл; t - врем инкубации; М - молекул рна масса аргинина 1000 - пересчет на I мл плазмы.

При расчете уровн прекалликреина учитывают разность между содержанием аргинина в плазме, активированной в течение 1 мин каолином, и неактиви рованной плазме.

Полученные данные приведены в таблице .

Claims

Предложенньм способ может быть использован дл определени истинного значени прекалликреина при любых заболевани х, сопровождающихс изменением прекалпикреин-калликре- нновой системы. Формула изобретени

Способ определени содержани прекалликреинав плазме крови, вклю

чающий активацию плазмы каолином, инкубацию активной плазмы с протамин- сульфатом, остановку реакции трихлор- уксусной кислотой и определение содержани калликреина по аргинину, отличающийс тем, что, с целью повышени чувствительности способа за счет специфического св зывани свободного ингибитора калликреина -макроглобулина, перед активацией каолином в плазму добавл ют метиламин в конечной концентрации 1-1,2%, выдерживают 1 ,5-2 ч при комнатной температуре и определ ют содержание прекалликреина.

Составитель Н.Литвиненко Редактор М.Келемеш Техред И.Верес

Заказ 5535/47

Тираж 789

ВНИИПЙ Государственного комитета по изобретени м и открыти м при ГКИТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушска наб., д. 4/5

Корректор С.Черни

Подписное