SU1479511A1 - Способ получени афинного сорбента - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к препаративной биохимии и биотехнологии и касаетс  получени  аффинных сорбентов дл  очистки ферментов. Изобретение может быть также использовано в медицине дл  гемосорбции. Цль изобретени  - повышение биоселективности аффинного сорбента. Дл  этого гепарин присоедин ют к карбоксилсодержащим матрицам с помощью водорастворимого карбодиимида при массовом соотношении матрицы и гепарина от 300:1 до 30:1 и PH 4,5-6,0. 1 ТАБЛ.

Description

1

Изобретение относитс  к биотехнологии и касаетс  получени  аффинных сорбентов, содержащих в качестве ли- ганда гепарин, дл  хроматографической очистки ферментов.

Цель изобретени  - повышение биоселективности аффинного сорбента.

Способ основан на том, что осуществл ют действие карбоксилсодержаще- го носител  с гепарином в водной среде в присутствии водорастворимого карбодиимида при рН 4,5-6,0. При взаимодействии гепарина с сорбентом участвуют аминогруппы частично десульфи- рованного гепарина или аминогруппы следовых количеств белка, прочно св занного с гепарином. Нельз  исключить

и взаимодействие за счет первичных гидроксильньгх групп. Таким образом, данный способ не св зан с модификацией карбоксильных групп гепарина, получаемые сорбенты обладают бопылим отрицательным зар дом, что оказывает вли ние на силу электрического взаимодействи  .

Пример 1. 3 г СН-агарозы оставл ют набухать в дистиллированной воде на 2 ч, трижды мен   воду. Суспензируют отмытую и набухшую агаро- зу в 20 мл воды, в которой растворено 100 мг гепарина и добавл ют 100 мг N-этил-Ы -(3-диметиламинопропил)-карбодиимида . В течение 30 мин поддерживают на рН-метре рН 4,5, а затем

VI

реакционную массу перемешивают 16 ч. Полученный сорбент промывают на пористом фильтре 1М NaCl (200 мл), 0,1 М NaHC03 (200 мл) и водой (300мл) Концентраци  гепарина в полученном сорбенте 8 мг/мл.

Пример 2. Способ осуществл ют аналогично примеру 1, но в качестве карбоксилсодержащего сорбента используют карбоксилированный сило- хром С-80. Концентраци  гепарина в полученном сорбенте 50 мг/г.

П р и м е р 3. Способ осуществл ют аналогично примеру 1, но гепарин берут в количестве 10 мг, а в качестве конденсирующего агента используют М-циклогексил-Н -2(4-метилмор- фолин)-этилкарбодиимид в количестве 10 мг.

Концентраци  гепарина в полученно сорбенте 1 мг/мл.

П р и м е р 4. Способ осуществл ю аналогично примеру 1, но берут 50 мг гепарина, 50 мг -этил-Ы -(3-диме- тиламинопропил)-карбодиимида и конденсацию ведут при рН 6,0. Концентраци  гепарина в полученном сорбенте 5 мг/мл.

Пример 5. Способ осуществл ют аналогично примеру 1, но реакцию ведут в 0,1 МЭС буфере при рН 5,0. Концентраци  гепарина в полученном сорбенте 6 мг/мл.

П р и м е р 6. Способ осуществл ют аналогично примеру 1, но в качестве карбоксилсодержащего сорбента используют полиакриловую кислоту, ра диационно привитую к силохрому. Кон

0

5

5

0

0

5

центраци  гепарина в полученном сорбенте 25 мг/мл.

Полученные сорбенты обладают биоселективностью , отличной от биоселективности сорбентов, получаемых присоединением гепарина к АН-агарозе и BrCN-агарозе, что подтверждаетс  данными хроматографической очистки фермента (плацентарной фосфатазы) на синтезированных сорбентах (см. табл.).

Изобретение позвол ет получать ге- паринсодержащие сорбенты на карбок- силсодержащих носител х различного типа (агароза, силохром, полиакрил- силохром).

Концентрацию стационарного лиганда можно варьировать от 1 до 50 мг на 1 г сорбента, что позвол ет синтезировать сорбенты с требуемой концейт- рацией в зависимости от решаемой задачи . Методика синтеза исключает использование токсичных соединений и проводитс  в водной среде.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  аффинного сорбента путем взаимодействи  гепарина с водонерастворимым носителем в присутствии водорастворимого карбодиимида при рН 4,5-6,0, отличающий- с   тем, что, с целью повышени  биоселективности сорбента, используют носитель, содержащий карбоксильные группы, и процесс ведут при массовом соотношении носитель - гепарин 300:1-30:1.

   1СН-агар-геп

   2сил.СООН-геп

   3сил.СООН-геп

   4сил.СООН-геп 5сил.акрил-геп

   6- АН-агар-геп

   7BrCN-агар-геп

   2350

   1880

   1850

   2100

   1730

   211

   118