SU1472493A1

SU1472493A1 - Strain of providencia stuartii bacteria as producer of restrictase

Info

Publication number: SU1472493A1
Application number: SU874293057A
Authority: SU
Inventors: Юрий Николаевич Бойков; Владимир Евгеньевич Репин; Сергей Харитонович Дегтярев; Зайга Арвидовна Виестуре; Олафс Андреевич Стенгревицс
Original assignee: Научно-производственное объединение "Биолар"; Научно-производственное объединение "Вектор"
Priority date: 1987-08-03
Filing date: 1987-08-03
Publication date: 1989-04-15

Abstract

Изобретение относитс к микробиологической промышленности и представл ет собой штамм, который используетс дл получени рестриктазы PST 1. Цель изобретени - получение нового штамма, обладающего более высоким уровнем синтеза рестриктазы. Предлагаемый штамм PROVIDENCIA STUARII 17 ВКПМ В-4076 дает выход рестриктазы PST 1 4000-45000 ед/г биомассы или 300000-400000 ед/л культуральной жидкости и имеет высокую стабильность, а именно сохран ет способность продуцировать фермент при хранении не менее 5 лет без селекцционной работы. В результате использовани предлагаемого изобретени выход рестриктазы PST 1 возрастает с 400-600 ед/г биомассы до 40000-45000 ед/г биомассы или с 3000-4800 ед/л культуральной жидкости до 300000-400000 ед/л культуральной жидкости. 1 табл.The invention relates to the microbiological industry and is a strain that is used to produce PST restrictases 1. The purpose of the invention is to obtain a new strain having a higher level of restrictase synthesis. The proposed strain PROVIDENCIA STUARII 17 VKPM B-4076 yields restriction enzyme PST of 1 4000-45000 u / g biomass or 300000-400000 u / l of culture fluid and has high stability, namely, it retains the ability to produce the enzyme during storage for at least 5 years without selection work. As a result of the use of the proposed invention, the yield of restriction enzyme PST 1 increases from 400-600 U / g biomass to 40000-45000 U / g biomass or from 3000-4800 U / l of culture liquid to 300000-400000 U / l of culture liquid. 1 tab.

Description

не образуетс . Тесты на метиловьш красный и феиилаланиндеаминазу положительные , а орнитиндекарбоксилазу и реакцию Фогес-Проскауэра - отрицательные . Индол образуетс , а сероводород не образуетс . Строгие аэробы. Культуральные признаки. Штамм растет на твердой питательной среде, содержащей 3,5% агара сухого питательного и воду, при 35-37 С в течение 16-18 ч.not formed. Tests for methyl red and feiylalanine deaminase are positive, and ornithine decarboxylase and Voges-Proskauer reactions are negative. Indole is formed, and hydrogen sulfide is not formed. Strict aerobes. Cultural features. The strain grows on solid nutrient medium containing 3.5% dry nutrient agar and water at 35-37 C for 16-18 h.

Рост штамма Providencia stuartii (17) ВКПМ В-4076 умеренный, штрих четковидный. Характер кра колоний гладкий, блеск поверхности колоний матовый, характер поверхности - гладкий .The growth of the Providencia stuartii (17) VKPM B-4076 strain is moderate, the stroke is chetiform. The nature of the edge of the colonies is smooth, the gloss of the surface of the colonies is matte, the surface character is smooth.

Профиль штриха - выпуклый. По оптическим признакам колонии вл ютс опаковыми, т.е. не проеве- -чиваюидамис .The profile of the stroke is convex. Optically, the colonies are opaque, i.e. do not project

Штамм Providencia stuartii 17 имеет специфичный запдх, колонии этого штамма по консистенции вл ютс масл нистыми .The strain Providencia stuartii 17 has a specific zapdh, the colonies of this strain are oily in consistency.

Хорошо растет на жидкой питатель ной среде, содержащей рыбный гидрали зат 50 г/л; воду до 1,0 л, рН 7,2 - 7,4. На такой питательной среде штамм растет при 35-37 С в течение 5-6 ч.It grows well on a liquid nutrient medium containing fish hydral for 50 g / l; water up to 1.0 l, pH 7.2 - 7.4. On such a nutrient medium, the strain grows at 35-37 C for 5-6 h.

При.вырагдавании 1чтамма на питательной среде данного состава происходит помутнение среды, что свидетельствует о сильном росте культуры. Рост глубинный и пленки на поверхности не образуетс . Осадок, состо щий из клеток Providencia stuartii 17 т гучий, при воздействии на него ли- зоцимом быстро происходит лизис клеток . Количество осадка обильное,цвет осадка - светло-серьот.At the start of 1 gram on a nutrient medium of a given composition the turbidity of the medium occurs, which indicates a strong growth of the culture. Growth is deep and film does not form on the surface. The sediment, consisting of Providencia stuartii cells 17 tons of gougey, when exposed to lysozyme, cell lysis quickly occurs. The amount of sediment is abundant, the color of the precipitate is light gray.

В отрличие от известного предлагаемый штамм дает выход рестриктазы Pst 1 40000-45000 ед/г биомассы или 300000-400000 ед/л культуральной ; жидкости; имеет высокую стабильность а именно: сохран ет способность- про ду1дировать фермент при хранении не менее 5 лет без селекционной работы. При выра1цивании культуры на питательной среде известного.состава рН 7,4; температуре 37°С; аэрации 40 л/мин ферментацию ведут до достижени значени рН 8,0. Выход биомассы: 7,5-8,0 г/л культуральной жидкости . Выход рестриктазы Pst 1,:In contrast to the known, the proposed strain yields restriction enzyme Pst of 1 40000-45000 u / g biomass or 300000-400000 u / l of culture; liquids; It has a high stability, namely: it retains the ability to reproduce the enzyme during storage for at least 5 years without selection work. When cultivating a culture on a nutrient medium of known composition pH 7.4; temperature 37 ° С; aeration of 40 L / min. fermentation is carried out until a pH of 8.0 is reached. Biomass yield: 7.5-8.0 g / l of culture fluid. The output of restrictase Pst 1:

20000-22500 ед/г биомассы; 150000 - 180000 ед/л культуральной жидкости. Сравнение стабильности содержани рестриктазы Pst 1 при хранении представлено в таблице.20000-22500 u / g of biomass; 150000 - 180000 u / l of culture fluid. A comparison of the stability of the Pst 1 restrictase content during storage is presented in the table.

00

5five

00

5five

00

5five

00

Пример Г. Дл получени Example G. To obtain

штамма с высоким содержанием рестриктазы Pst Г велась непрерьшна селекционна работа с отбором вари- 5 антов, имеющих высокую продуктивность рестриктазы Pst 1.A strain with a high content of restriction enzymes Pst G was carried out continuous selection work with the selection of variants that have high productivity of restriction enzyme Pst 1.

Селекци велась в чашках Петри по твердой среде, содержащей 3,5% агара cyxofo питательного и воду.Selection was carried out in Petri dishes on solid medium containing 3.5% nutrient cyxofo agar and water.

Проверка продуктивности штамма Providencia stuartii 17 ВКПМ В-4076, ползд1енного селекционным путем, велась в сравнении со штаммом Providencia stuartii (164) ВКПМ В-1789, . которьй апробирован в производственных услови х.The verification of the productivity of the Providencia stuartii 17 VKPM B-4076 strain, half a selection, was carried out in comparison with the Providencia stuartii (164) VKPM B-1789 strain. which has been tested under production conditions.

Готов т среду следующего состава , г /л:Prepare the medium of the following composition, g / l:

Рыбньй гидролизат 50Fish hydrolyzate 50

Вода1 ,0Water1, 0

Оживление штамма Providencia stuartii ВКПМ В-4076 осуществл ют на сухом питательном агаре (сухой питательный агар 35 г/л, вода 1 ,0 л) в чашках Петри. Инкубируют в термокамере при З7 с в течение 18 ч.The recovery of the Providencia stuartii VKPM B-4076 strain was carried out on dry nutrient agar (dry nutrient agar 35 g / l, water 1, 0 l) in Petri dishes. Incubated in a heat chamber at 37 ° C for 18 hours.

С поверхности агара в чашках Петри культуру перенос т бактериологической петлей в качалочные колбы с питательной средой данного состава, рН 7,4.From the surface of the agar in Petri dishes, the culture was transferred with a bacteriological loop to the shaker flasks with a nutrient medium of a given composition, pH 7.4.

Выращивают посевной материал при 37°С в течение 18 ч на качалке.Grow seed at 37 ° C for 18 h on a rocking chair.

Ферментацию культуры провод т на питательной среде данного состава при рН 7,4; температуре 37 С; перемешивании 200 об/мин; подаче воздуха - 2 объема воздуха на 1:объем питательной среды,выращивают до дос5 1472493оFermentation of the culture is carried out on a nutrient medium of this composition at pH 7.4; temperature 37 С; stirring 200 rpm; air supply - 2 air volumes per 1: volume of the nutrient medium, grown to reach 1472493о

тижени оптической плотности бакте-В-4076 по сравнению с известным спориальной суспензии 1,5 опт. ед. (ФЭК,собой выход рестриктазы Pst 1 возф .ильтр № 6, кювета 0,5 см).растает с 400-600 ед/г биомассы доBite-B-4076 optical density compared to the known spore suspension 1.5 opt. units (FEK, a restriction enzyme yield Pst 1, the filter No. 6, a cuvette 0.5 cm). Grows from 400-600 u / g of biomass to

Выход биомассы: 7,5-8,0 г/л куль-40000-А5000 ед/г. туральной жидкости.Biomass yield: 7.5-8.0 g / l cul-40000-A5000 u / g. Tural fluid.

Claims

Pst I 40,000 restriction enzyme yield - Invention formula 45,000 u / g biomass; 300,000

400000 units / l of culture fluid. Strain of bacteria Providencia stuarSo, when using ™ B-4076 - the producer of the restriction strain Providencia stuartii VKPMtaz Pst 1.