RU2077577C1 - Strain of bacterium deleya marina - a producer of alkaline phosphatase and a method of alkaline phosphatase preparing - Google Patents
Strain of bacterium deleya marina - a producer of alkaline phosphatase and a method of alkaline phosphatase preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2077577C1 RU2077577C1 RU94036816A RU94036816A RU2077577C1 RU 2077577 C1 RU2077577 C1 RU 2077577C1 RU 94036816 A RU94036816 A RU 94036816A RU 94036816 A RU94036816 A RU 94036816A RU 2077577 C1 RU2077577 C1 RU 2077577C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- alkaline phosphatase
- strain
- producer
- preparing
- enzyme
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству ферментов, и может быть использовано для получения высокоактивной щелочной фосфатазы, применяемой в медицине, генной инженерии, молекулярной биологии. The invention relates to biotechnology, in particular to the production of enzymes, and can be used to obtain highly active alkaline phosphatase used in medicine, genetic engineering, molecular biology.
Морские микроорганизмы являются перспективными источниками новых щелочных фосфатаз. В литературе имеются отдельные сведения о способности морских микроорганизмов продуцировать щелочные фосфатазы. Описаны несколько щелочных фосфатаз, выделенных из бактериальных штаммов морского происхождения. Показано, что эти ферменты отличаются от уже известных щелочных фосфатаз по некоторым физико-химическим свойствам. Так, из морской бактерии Pseudomonas sp. выделена внеклеточная щелочная фосфатаза, на активность которой влияют повышение давления, а также присутствие основных ионов, содержащихся в морской воде. Фермент имеет удельную активность 192 ед/мг белка [1] Из антарктической морской бактерии НК-47 выделена термолабильная щелочная фосфатаза, которую используют для отщепления концевых 5'-фосфатных групп в молекулах нуклеиновых кислот, а после окончания реакции легко инактивируют прогреванием при 60oC. Удельная активность фермента 906 ед/мг белка [3]
В последние годы найдены штаммы симбионтных морских бактерий, преимущественно двустворчатых моллюсков (Crenomytilus grayanus), отличающиеся способностью синтезировать высокоактивные щелочные фосфатазы. Известен штамм морской бактерии, первоначально идентифицированный как Acinetobacter sp. позднее реклассифицированный как Alteromonas macleodii КММ 162 (ВКПМ В-3905, 40 МС), продуцирующий щелочную фосфатазу с высокой удельной активностью (6000 6700 ед/мг белка).Marine microorganisms are promising sources of new alkaline phosphatases. In the literature, there is some information about the ability of marine microorganisms to produce alkaline phosphatases. Several alkaline phosphatases isolated from bacterial strains of marine origin are described. It was shown that these enzymes differ from the already known alkaline phosphatases in some physicochemical properties. So, from the marine bacteria Pseudomonas sp. extracellular alkaline phosphatase was isolated, the activity of which is affected by an increase in pressure, as well as the presence of the main ions contained in sea water. The enzyme has a specific activity of 192 u / mg protein [1] From the Antarctic marine bacteria NK-47, thermolabile alkaline phosphatase is isolated, which is used to cleave terminal 5'-phosphate groups in nucleic acid molecules, and after the reaction is completed, it is easily inactivated by heating at 60 o C The specific activity of the enzyme is 906 units / mg protein [3]
In recent years, strains of symbiotic marine bacteria, mainly bivalve mollusks (Crenomytilus grayanus), have been found that are distinguished by the ability to synthesize highly active alkaline phosphatases. A known strain of marine bacteria, originally identified as Acinetobacter sp. later reclassified as Alteromonas macleodii KMM 162 (VKPM B-3905, 40 MS), producing alkaline phosphatase with high specific activity (6000 6700 u / mg protein).
Щелочная фосфатаза штамма КММ 162 имеет молекулярную массу 90 кДа, проявляет максимальную активность при рН 9,5 9,8 в присутствии 1 мМ MgCl2, ингибируется ЭДТА. Фермент термостабилен, но в присутствии 2-меркаптоэтанола или дитиотреитола полностью инактивируется при 55 - 60oC, что позволяет использовать его при мечении нуклеиновых кислот и выводить из реакционной смеси тепловой обработкой [2] Несмотря на высокую удельную активность, данная щелочная фосфатаза не была использована в иммуноферментном анализе для получения конъюгатов, так как фермент неустойчив к химическим модификациям и теряет свою активность при соответствующих обработках и хранении.Alkaline phosphatase of
Задача изобретения выявление нового штамма, продуцирующего щелочную фосфатазу с более высокой, по сравнению с аналогами, удельной активностью. The objective of the invention is the identification of a new strain producing alkaline phosphatase with a higher, in comparison with analogues, specific activity.
Поставленная задача решена тем, что из целомической жидкости дальневосточного двустворчатого моллюска Crenomytilus grayanus выделен штамм бактерии Deleya marina, отобранный по признаку высокой исходной удельной фосфатазной активности. The problem was solved in that a strain of the bacterium Deleya marina was selected from the coelomic fluid of the Far Eastern bivalve mollusk Crenomytilus grayanus, selected according to the high initial specific phosphatase activity.
Штамму бактерии Deleya marina авторами присвоен номер КММ 296 (4 МС 37), он депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов под номером ВКМ В-2021 Д. The strain of bacteria Deleya marina, the authors assigned the number KMM 296 (4 MS 37), it is deposited in the All-Russian collection of microorganisms under the number VKM B-2021 D.
Штамм выделен методом прямого высева на агаризованную среду следующего состава (г/л): пептон 5 г, дрожжевой экстракт 2,5 г, глюкоза 1 г, MgSO4 0,5 г, K2HPO4 0,2 г; морская вода 750 мл, дистиллированная вода 250 мл, рН 7,5.The strain was isolated by direct seeding on an agar medium of the following composition (g / l): peptone 5 g, yeast extract 2.5 g, glucose 1 g, MgSO 4 0.5 g, K 2 HPO 4 0.2 g; seawater 750 ml, distilled water 250 ml, pH 7.5.
Культуру хранят в пробирках под слоем минерального масла на полужидкой среде приведенного выше состава, при температуре 10oC.The culture is stored in test tubes under a layer of mineral oil in a semi-liquid medium of the above composition, at a temperature of 10 o C.
Характеристика штамма. Characterization of the strain.
Культурально-морфологические признаки:
а) бактерии образуют круглые с ровными краями, выпуклые колонии до 5 мм в диаметре, поверхность колоний гладкая, консистенция слизистая. Пигмент не накапливается;
б) штамм КММ 296 (4 МС 37) представляет собой небольшие граммотрицательные палочки, подвижные с помощью жгутиков. У бактерии формируется 1 2 полярных жгутика и 1 2 латеральных. Хемоорганотрофы с окислительным типом метаболизма. Оксидазо-отрицательные, каталазо-положительные, без NaCl в среде не растут, пигмента не накапливают. Люминесценция и флюоресценция отсутствуют. Растут при 4oC, при 41oС рост отсутствует.Cultural and morphological signs:
a) the bacteria form round with smooth edges, convex colonies up to 5 mm in diameter, the surface of the colonies is smooth, the mucous consistency. The pigment does not accumulate;
b) strain KMM 296 (4 MS 37) is a small gram-negative bacilli, mobile using flagella. In bacteria, 1 2 polar flagella and 1 2 lateral flagella are formed. Chemorganotrophs with an oxidative type of metabolism. Oxidase-negative, catalase-positive, do not grow in the medium without NaCl, and do not accumulate pigment. Luminescence and fluorescence are absent. Grow at 4 o C, at 41 o C no growth.
Физиолого-биохимические признаки. Physiological and biochemical characteristics.
Штамм КММ 296 (4 МС 37) желатин, крахмал, твин-80 не гидролизует. Аргининдегидролаза отсутствует, не денитрификатор. Индол и сероводород не образует. Лактозу, мелибиозу, мальтозу, сахарозу, глицерин не утилизирует. Молярный процент Г+Ц оснований в ДНК 65,5. Strain KMM 296 (4 MS 37) gelatin, starch, tween-80 does not hydrolyze. Arginine dehydrolase is absent, not a denitrifier. Indole and hydrogen sulfide does not form. Lactose, melibiosis, maltose, sucrose, glycerin does not utilize. The molar percentage of G + C bases in DNA is 65.5.
Штаммы рода Deleya не патогенны и не токсичны для теплокровных животных. Strains of the genus Deleya are neither pathogenic nor toxic to warm-blooded animals.
Штамм Deleya marina КММ 296 (4 МС 37) отличается от известного штамма-прототипа Alteromonas macleodii КММ 162 (40 МС) по культурально-морфологическим признакам: формирует беловатые непрозрачные колонии, у клеток образуется от 1 до 4 полярных жгутиков, включая латеральные; по физиолого-биохимическим признакам: оксидазо-отрицательный, практически не утилизирует углеводы, а также имеет высокий молярный процент Г+Ц оснований в ДНК. The strain Deleya marina KMM 296 (4 MS 37) differs from the well-known strain of the prototype Alteromonas macleodii KMM 162 (40 MS) in cultural and morphological characteristics: it forms whitish opaque colonies, from 1 to 4 polar flagella, including lateral ones, are formed in cells; according to physiological and biochemical characteristics: oxidase-negative, practically does not utilize carbohydrates, and also has a high molar percentage of G + C bases in DNA.
Задачей изобретения является также разработка способа получения щелочной фосфатазы из штамма КММ 296, позволяющего получить фермент с более высокой, по сравнению с аналогами, удельной активностью и более высокой устойчивостью к химическим модификациям. The objective of the invention is the development of a method for producing alkaline phosphatase from strain KMM 296, which allows to obtain an enzyme with higher, in comparison with analogues, specific activity and higher resistance to chemical modifications.
Поставленная задача решена тем, что предложен способ, позволяющий получить щелочную фосфатазу с удельной активностью 14000 15000 ед/мг белка, обладающую также высокой стабильностью, что делает возможным использование фермента в иммуноферментном анализе. The problem is solved in that the proposed method allows to obtain alkaline phosphatase with a specific activity of 14,000 to 15,000 units / mg of protein, which also has high stability, which makes it possible to use the enzyme in an enzyme immunoassay.
Предлагаемый способ получения щелочной фосфатазы предусматривает выращивание штамма-продуцента на питательной среде, отделение биомассы от культуральной жидкости, разрушение микробных клеток с последующим выделением целевого продукта водной экстракцией, а также хроматографическую очистку сырого ферментного препарата. В качестве продуцента используют штамм бактерии Deleya marina КММ 296 (4 МС 37; ВКМ В-2021 Д). Очистку фермента осуществляют сначала анионообменной хроматографией на ДЕАЕ-целлюлозе, затем гидрофобной хроматографией на бутил-тойоперле и гель-фильтрацией на сефадексе G-100. The proposed method for producing alkaline phosphatase involves the cultivation of a producer strain on a nutrient medium, the separation of biomass from the culture fluid, the destruction of microbial cells, followed by isolation of the target product by aqueous extraction, as well as chromatographic purification of the crude enzyme preparation. The bacterium strain Deleya marina KMM 296 (4 MS 37; VKM B-2021 D) is used as a producer. Purification of the enzyme is carried out first by anion exchange chromatography on DEAE cellulose, then by hydrophobic chromatography on butyl toyoperl and gel filtration on Sephadex G-100.
Способ иллюстрируется следующими примерами. The method is illustrated by the following examples.
ПРИМЕР 1. Свежепересеянную культуру смывают с косяка питательной средой в колбу емкостью 1000 мл, содержащей 500 мл питательной среды следующего состава (г/л): пептон 5,0; дрожжевой экстракт 2,5; глюкоза 1; K2HPO4 0,2; MgSO4 0,05; 750 мл натуральной морской воды (допустима замена 25 г/л NaCl); 250 мл дистиллированной воды; рН среды 7,5 7,8 и выращивают 24 часа в термостате при 28oC. Приготовленным таким образом посевным материалом инокулируют колбы емкостью 1000 мл (с 500 мл питательной среды). Выращивают в течение 24 28 часов на качалке (120 об/мин) при 24oC.EXAMPLE 1. A freshly seeded culture is washed from a jamb with nutrient medium into a 1000 ml flask containing 500 ml of nutrient medium of the following composition (g / l): peptone 5.0; 2.5 yeast extract;
Для получения фермента бактериальные клетки осаждают на проточной центрифуге при 5000 об/мин. Выход бактериальной биомассы 5 г с 500 мл культуральной жидкости. Продуктивность по белку 95 мг/л. Удельная активность щелочной фосфатазы в водном экстракте 45 ед/мг белка. Общая фосфатазная активность водного экстракта 4275 ед. с 1 л культуральной жидкости. To obtain the enzyme, bacterial cells are precipitated in a flow centrifuge at 5000 rpm. The output of bacterial biomass 5 g with 500 ml of culture fluid.
Сравнение полученных для штамма КММ 296 данных с характеристиками штамма КММ 162 показывает, что данный штамм в аналогичных условиях дает больший выход общей фосфатазной активности с 1 л питательной среды, а также щелочную фосфатазу с более высокой удельной активностью (табл.1). A comparison of the data obtained for strain KMM 296 with the characteristics of
ПРИМЕР 2. EXAMPLE 2
Штамм выращивают как описано в примере 1. The strain is grown as described in example 1.
К 200 г сырой биомассы, полученной из 20 л жидкой питательной среды, описанной в примере 1, добавляют 1000 мл 0,02 М трис-HCl буфера, рН 7,5, содержащего 0,01% NaN3 (буфер А) и суспензию клеток дезинтегрируют порциями по 80 мл в течение 5х30 сек, охлаждая во льду. Затем центрифугируют при 3000 об/мин в течении 30 мин. Надосадочную жидкость собирают и полученный водный экстракт перемешивают с 700 мл уравновешенной буфером А ДЭАЭ-целлюлозой в холодной комнате в течение 1 часа. Затем ДЭАЭ-целлюлозу промывают на фильтре Шотта 0,2 М NaCl в буфере А. Фермент элюируют 0,4 М NaCl в буфере А. К элюату добавляют сухую соль сульфата аммония до конечной концентрации 1,5 М; после растворения соли раствор белка наносят на колонку (V 32 мл) с бутил-тойоперлом, уравновешенную 1,5 М сульфатом аммония на буфере А, и проводят элюцию градиентом сульфата аммония от 1,5 М до 0,5 М (по 250 мл каждого раствора), со скоростью 40 мл/ч, отбирая фракции по 6 мл. Фермент выходит при концентрации сульфата аммония 1,1 М 0,9 М. Активные фракции собирают, концентрируют ультрафильтрацией на мембране РМ-30 (Amersham) и наносят на колонку (V 140 мл) с сефадексом G-100, уравновешенную буфером: 0,01 М трис-HCl, 0,005 М MgCl2, 0,05 М NaCl, 0,01% NaN3, рН 8,0. Фермент элюируют этим же буфером со скоростью 12 мл/ч, отбирая фракции по 4 мл. Активные фракции собирают и концентрируют на мембране РМ-30. В табл.2 приводятся характеристики продукта в процессе очистки. Данный способ выделения обеспечивает высокую стабильность препарата щелочной фосфатазы.To 200 g of crude biomass obtained from 20 l of the liquid nutrient medium described in example 1, add 1000 ml of 0.02 M Tris-HCl buffer, pH 7.5, containing 0.01% NaN 3 (buffer A) and cell suspension disintegrate in portions of 80 ml for 5x30 sec, cooling in ice. Then centrifuged at 3000 rpm for 30 minutes The supernatant was collected and the resulting aqueous extract was mixed with 700 ml of equilibrated buffer A DEAE cellulose in a cold room for 1 hour. Then DEAE cellulose was washed on a Schott filter with 0.2 M NaCl in buffer A. The enzyme was eluted with 0.4 M NaCl in buffer A. Dry ammonium sulfate salt was added to the eluate to a final concentration of 1.5 M; after dissolving the salt, the protein solution is applied to a column (V 32 ml) with butyl-tooper, balanced with 1.5 M ammonium sulfate in buffer A, and elution is carried out with a gradient of ammonium sulfate from 1.5 M to 0.5 M (250 ml each solution), at a rate of 40 ml / h, taking fractions of 6 ml. The enzyme leaves at a concentration of ammonium sulfate 1.1 M 0.9 M. Active fractions are collected, concentrated by ultrafiltration on a PM-30 membrane (Amersham) and applied to a column (V 140 ml) with Sephadex G-100, equilibrated with buffer: 0.01 M Tris-HCl, 0.005 M MgCl 2 , 0.05 M NaCl, 0.01% NaN 3 , pH 8.0. The enzyme is eluted with the same buffer at a rate of 12 ml / h, taking 4 ml fractions. Active fractions are collected and concentrated on a PM-30 membrane. Table 2 summarizes the product characteristics during the cleaning process. This isolation method provides high stability of the alkaline phosphatase preparation.
Активность щелочной фосфатазы определяют по расщеплению п-НФФ. Стандартная инкубационная смесь в объеме 500 мкл содержит 15 мМ паранитрофенилфосфата (п-НФФ), 1 М диэтаноламина (ДЭА), рН 10,3 и фермент. После 30 мин инкубации при 37oC реакцию останавливают добавлением 2 мл 0,5 М NaOH. Количество образовавшегося в процессе ферментативной реакции п-НФФ определяют спектрофотометрически при 400 нм. За единицу активности щелочной фосфатазы принимают количество фермента, катализирующего освобождение 1 мкМ п-НФФ (Е400 нм 18600) в течение 1 мин инкубации. Удельную активность выражают в единицах активности фермента на 1 мг белка. Концентрацию белка в растворе определяют по методу Брэдфорд.Alkaline phosphatase activity is determined by p-NFF cleavage. A standard incubation mixture in a volume of 500 μl contains 15 mm paranitrophenyl phosphate (p-NFF), 1 M diethanolamine (DEA), pH 10.3 and the enzyme. After 30 minutes of incubation at 37 ° C., the reaction was stopped by the addition of 2 ml of 0.5 M NaOH. The amount of p-NFF formed during the enzymatic reaction is determined spectrophotometrically at 400 nm. The unit of alkaline phosphatase activity is the amount of an enzyme that catalyzes the release of 1 μM p-NFF (E 400 nm 18600) during 1 min of incubation. Specific activity is expressed in units of enzyme activity per 1 mg of protein. The protein concentration in the solution is determined by the Bradford method.
Исследование свойств щелочной фосфатазы, продуцируемой штаммом КММ 296 и выделяемой согласно изобретению, показало, что фермент имеет молекулярную массу 55 кДа, стабилен в области рН 6,0 11,0, проявляет максимальную активность в 1 М ДЭА буфере при рН 10,3 в присутствии катионов двухвалентных металлов. Данная щелочная фосфатаза термостабильна и не теряет первоначальной активности после 15 мин прогрева в интервале температур 20 50oC. Аналогичная преинкубация при 60oC приводит к потере 80% исходной активности. Фермент не требует присутствия катионов двухвалентных металлов для проявления своей максимальной активности, причем добавление 5 мМ ЭДТА в инкубационную смесь не приводит к заметному уменьшению активности щелочной фосфатазы. Фермент с одинаковой скоростью расщепляют п-НФФ 5'-АМФ, 5'-ЦМФ и 5'-дЦМФ. Щелочная фосфатаза штамма КММ 296 успешно использована на первой стадии ферментативного мечения ДНК фага лямбда, а также для получения ферментных конъюгатов.The study of the properties of alkaline phosphatase produced by strain KMM 296 and isolated according to the invention showed that the enzyme has a molecular weight of 55 kDa, is stable in the range of pH 6.0 to 11.0, and exhibits maximum activity in 1 M DEA buffer at pH 10.3 in the presence of divalent metal cations. This alkaline phosphatase is thermostable and does not lose its initial activity after 15 minutes of heating in the temperature range of 20-50 o C. A similar preincubation at 60 o C leads to the loss of 80% of the original activity. The enzyme does not require the presence of divalent metal cations to exhibit its maximum activity, and the addition of 5 mM EDTA to the incubation mixture does not lead to a noticeable decrease in alkaline phosphatase activity. The enzyme is cleaved at the same rate with p-NFP 5'-AMP, 5'-CMP and 5'-dCMP. Alkaline phosphatase of strain KMM 296 was successfully used in the first stage of enzymatic labeling of lambda phage DNA, as well as for the preparation of enzyme conjugates.
Все вышеперечисленное свидетельствует в пользу широкого применения выделенного фермента в практике лабораторных исследований, а также в иммунодиагностике. All of the above testifies in favor of the widespread use of the isolated enzyme in the practice of laboratory research, as well as in immunodiagnostics.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU94036816A RU2077577C1 (en) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Strain of bacterium deleya marina - a producer of alkaline phosphatase and a method of alkaline phosphatase preparing |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU94036816A RU2077577C1 (en) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Strain of bacterium deleya marina - a producer of alkaline phosphatase and a method of alkaline phosphatase preparing |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU94036816A RU94036816A (en) | 1996-07-20 |
RU2077577C1 true RU2077577C1 (en) | 1997-04-20 |
Family
ID=20161179
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU94036816A RU2077577C1 (en) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Strain of bacterium deleya marina - a producer of alkaline phosphatase and a method of alkaline phosphatase preparing |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2077577C1 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2447151C1 (en) * | 2010-12-29 | 2012-04-10 | Учреждение Российской академии наук Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН (ТИБОХ ДВО РАН) | ALKALINE PHOSPHATASE CmAP SYNTHESIS-DETERMINING 40Ph PLASMID, E. coli rosetta(DE3)/40Ph STRAIN - PRODUCER OF CHIMERIC PROTEIN, CONTAINING AMINO ACID SEQUENCE OF RECOMBINANT ALKALINE PHOSPHATASE CmAP, AND PRODUCTION METHOD THEREOF |
RU2511416C1 (en) * | 2012-10-24 | 2014-04-10 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАО ВПО КФУ) | Strain of bacteria bacillus pumilus 2a-5 with low proteolytic activity, increased phosphatase activity, method of its obtaining and application |
-
1994
- 1994-09-30 RU RU94036816A patent/RU2077577C1/en active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. Kobori H., Taga N. 1980, Extracellular AlkalinePhosphatase from marine bacteria : Purification and properties of extracelluar phosphatase from a marine Pseudomonas sp. Can. J.Microbiol. 26:833-838. 2. Федосов Ю.В., Михайлов В.В., Жигалина И.И. и др. Высокоактивная щелочная фосфатаза из морской бактерии. - 1991, ДАН СССР. Т.320, N 2, с.485 - 487. 3. Kobori H., Sullivan C.W., Shizuya H. 1984. Heat-labile, alkaline phosphatase from Antarctic bacteria : Rapid 5' end-labelind of nucleic acids.Proc.Natl. Acad sci. USA 81(21):6691-6695. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2447151C1 (en) * | 2010-12-29 | 2012-04-10 | Учреждение Российской академии наук Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН (ТИБОХ ДВО РАН) | ALKALINE PHOSPHATASE CmAP SYNTHESIS-DETERMINING 40Ph PLASMID, E. coli rosetta(DE3)/40Ph STRAIN - PRODUCER OF CHIMERIC PROTEIN, CONTAINING AMINO ACID SEQUENCE OF RECOMBINANT ALKALINE PHOSPHATASE CmAP, AND PRODUCTION METHOD THEREOF |
RU2511416C1 (en) * | 2012-10-24 | 2014-04-10 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАО ВПО КФУ) | Strain of bacteria bacillus pumilus 2a-5 with low proteolytic activity, increased phosphatase activity, method of its obtaining and application |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU94036816A (en) | 1996-07-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4778760A (en) | Thermostable α-amylase-producing, thermophilic anaerobic bacteria, thermostable α-amylase and process for producing the same | |
US4745067A (en) | L-aminoacylases | |
US4315988A (en) | Thermophilic collagenases, thermophilic bacteria capable of producing thermophilic collagenases, and process for producing said collagenases | |
RU2077577C1 (en) | Strain of bacterium deleya marina - a producer of alkaline phosphatase and a method of alkaline phosphatase preparing | |
US4420562A (en) | Method for producing creatinase | |
US5281527A (en) | Process for producing pullalanase | |
JP3635133B2 (en) | Trehalose phosphorylase and preparation method thereof | |
JPS6362195B2 (en) | ||
JP3076856B2 (en) | Degradation method of alginic acid by bacteria | |
US4918012A (en) | Method for producing carnitine, L-carnitinamide hydrolase and method for producing same | |
JPH0669381B2 (en) | Carnitine manufacturing method | |
JP3529173B2 (en) | Novel agar-degrading enzyme and method for producing neo-agarobiose using the same | |
NIHARIKA et al. | ANALYSING THE BIOCATALYTIC ASPECT OF AMYLASE FROM PLANT AND MICROBIAL SOURCES FOR INDUSTRIAL APPLICATION | |
RU2026347C1 (en) | Strain of bacterium alteromonas haloplanktis - a producer of polyuridyl-endoribonuclease | |
JP3055041B2 (en) | α-1,2-mannosidase, method for producing the same, and bacteria producing the same | |
JPH06113846A (en) | Chitinase | |
SU1095645A1 (en) | Method of producing restriction endonuclease | |
RU2141526C1 (en) | STRAIN OF BACTERIUM FLAVOBACTERIUM SPECIES - PRODUCER OF α-N-ACETYLGALACTOSE AMINIDASE | |
JPH0127714B2 (en) | ||
JPH08275776A (en) | New chitinase and its production | |
JPH08131182A (en) | Production of trehalose | |
SU1440919A1 (en) | Strain of kurthia zopfii bacteria as producer of restrictive endonuclease | |
JPH0248231B2 (en) | SHINKIKISHIRANAAZEOYOBISONOSEIZOHO | |
JPH0117675B2 (en) | ||
JP3026312B2 (en) | Production method of chitin degradation products |