SU1659481A1

SU1659481A1 - Strain of bacteria escherichia coli - a producer of inorganic pyrophosphatase

Info

Publication number: SU1659481A1
Application number: SU894711208A
Authority: SU
Inventors: Гедрюс Антано Шпокаускас; Вацловас Йоно Палубинскас; Антанас Антано Глемжа; Элена Юозо Кюдулене; Вида Йоно Янюнайте
Original assignee: Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии
Priority date: 1989-04-03
Filing date: 1989-04-03
Publication date: 1991-06-30

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии . Цель изобретени - получение нового штамма, используемого дл выделени фермента - неорганической пирофосфата- эы. Штамм Escherichia coli ВКПМ B-4780(LG 88) - продуцент неорганической пирофос- фатазы выделен из сточных вод Новый про- дуцент обладает более высокой пирофосфатазной активностью по сравнению с известным. Удельна активность в клеточном экстракте Е. coli ВКПМ В-4780 (LG 88) составл ет 8,0-9,0 ед/мг белка, обща активность 1500-1800 ед. на 1000 мл культуральной жидкости. 1 таблThis invention relates to biotechnology. The purpose of the invention is to obtain a new strain used to isolate an enzyme, inorganic pyrophosphate-ae. The Escherichia coli strain VKPM B-4780 (LG 88) - the producer of inorganic pyrophosphatase was isolated from wastewater. The specific activity in the cellular extract of E. coli VKPM B-4780 (LG 88) is 8.0-9.0 units / mg protein, the total activity is 1500-1800 units. per 1000 ml of culture fluid. 1 tab

Description

слcl

сwith

Изобретение относитс к биотехнологии , в частности к получению нового высокопродуктивного штамма, используемого дл получени фермента - неорганической пирофосфатазы.The invention relates to biotechnology, in particular to the preparation of a new highly productive strain used to obtain the enzyme, inorganic pyrophosphatase.

Целью изобретени вл етс получение штамма Escherichia coil ВКПМ В-4780 (LG 88) - продуцент неорганической пирофосфатазы с более высокой ферментативной активностью.The aim of the invention is to obtain Escherichia coil strain VKPM B-4780 (LG 88) - producing inorganic pyrophosphatase with higher enzymatic activity.

Штамм Е. coll ВКПМ В-4780 (LG 88) - продуцент неорганической пирофосфатазы - выделен из сточных вод.Strain E. coll VKPM B-4780 (LG 88) - producing inorganic pyrophosphatase - isolated from wastewater.

Штамм Е. coli LG 88 характеризуетс следующими признаками.The strain E. coli LG 88 is characterized by the following features.

Культу рал ьно-морфологические признаки .Cult ral morphological signs.

Палочковидные клетки с закругленными концами, соотношение длины и ширины клетки 3x1. На м сопептонном агаре развиваетс в виде слабовыпуклых полупрозрачных , светло-желтых, бежевых колоний, а в самом млсопептонном бульоне вызывает диффузионное помутнение и образование осадка.Rod-shaped cells with rounded ends, the ratio of the length and width of the cell 3x1. On m, septal agar develops in the form of weakly convex translucent, light yellow, beige colonies, and in the very ml of peptone broth causes diffusion cloudiness and sedimentation.

Физиолого-биохимические признаки.Physiological and biochemical signs.

Оптимальна температура роста 30- 37°С, рН среды 6,5-7,5, кишечна палочка погибает при 55±2°С в течение 1 ч, а при температуре 60±2°С - в течение 15 минThe optimum growth temperature is 30-37 ° C, the pH is 6.5-7.5, the intestinal stick dies at 55 ± 2 ° C for 1 h, and at a temperature of 60 ± 2 ° C - for 15 min

Грамотрицательные, подвижные ката- лазоположительные, сбраживающие глюкозу палочки. Желатину не сбраживаетGram-negative, mobile kata-lazo-positive, glucose-digesting sticks. Gelatin does not ferment

Культура Escherichia coli LG 88 хранитс в столбиках МПА под слоем вазелинового масла при 4-20°С в течение 1 годаThe culture of Escherichia coli LG 88 is stored in MPA columns under a layer of vaseline oil at 4-20 ° C for 1 year.

Пример. Культуру E.coli LG 88, законсервированную в столбике МПА под слоем вазелинового масла, дл оживлени пересевают на стерильные чашки Петри с агаризо- ванным рыбным гидролизатом иExample. The E.coli LG 88 culture, preserved in the MPA column under a layer of vaseline oil, is seeded into sterile Petri dishes with agar-fish hydrolyzate and

о ел чэabout ate che

N 00N 00

выращивают в термостате при 37°С в течение 2А ч.grown in a thermostat at 37 ° C for 2A h.

Оживленную культуру используют дл приготовлени инокул та. Инокул т выращивают в качалочных колбах емкостью 750 мл по 250 мл среды в каждой. Состав среды, %: гидролизат отходов жмыха легких 1,0; гидролизат пекарских дрожжей 0,5; КНаРСМ 0,5; D-глюкоза 0,5. рН среды 7,2 довод т при помощи 2 н. едкого натри . Среду стерилизуют 30 мин при 0,8 атм. Температура выращивани инокул та 37°С, продолжительность роста 18ч. Ферментацию провод т в ферментере типа Биолафит емкостью 20 л, заполненного 9 л указанной среды. Количество вносимого инокул та составл ет 0,2% от общего объема среды. Врем культивировани 5 ч, аэраци 5-6 л/мин, температура выращивани 37°С.The lively culture is used to prepare the inoculum. The inoculum is grown in 750 ml rocking flasks with 250 ml of medium each. The composition of the medium,%: hydrolyzed waste cake light 1.0; baker's yeast hydrolyzate 0.5; KNAPCM 0.5; D-glucose 0.5. The pH of the medium is 7.2 adjusted with 2N. caustic soda. The medium is sterilized for 30 minutes at 0.8 atm. The growth temperature of the inoculum is 37 ° C, the duration of growth is 18 h. Fermentation is carried out in a 20-liter Biolafit-type fermenter, filled with 9 liters of this medium. The amount of inoculum introduced is 0.2% of the total volume of the medium. Cultivation time 5 h, aeration 5-6 l / min, temperature of growth 37 ° C.

Клетки от культура л ьной жидкости отдел ют центрифугированием (10 мин при 12000 об/мин).The cells from the culture of the liquid are separated by centrifugation (10 minutes at 12000 rpm).

Дл определени пирофосфатазной активности клетки разрушают дезинтегратором со стекл нными шариками (диаметр шариков 150-200/мк) в течение 10 мин при 4500 об/мин. Разрушенные таким образомTo determine the pyrophosphatase activity, the cells are destroyed by a disintegrator with glass beads (ball diameter 150-200 / micron) for 10 minutes at 4500 rpm. Destroyed in this way

клетки отдел ют путем центрифугировани (15 мин при 15000 об/мин). В полученном супернатанте определ ют пирофосфатаз- ную активность.cells are separated by centrifugation (15 min at 15,000 rpm). In the resulting supernatant, pyrophosphatase activity is determined.

Активность неорганической пирофосфатазы определ ют спектрофотометриче- ским методом (длина волны 660 нм) по интенсивности окраски продукта реакции индикатором. За единицу пирофосфатазнойThe activity of inorganic pyrophosphatase is determined spectrophotometrically (660 nm) by the color intensity of the reaction product. Per unit pyrophosphatase

активности принимают такое количествоactivities take so many

фермента, которое при 30°С и при рН 9,0 заenzyme, which at 30 ° C and at pH 9.0 for

1 мин гидролизует 1 мкмоль пирофосфата.1 min hydrolyzes 1 micromole of pyrophosphate.

Сравнительные данные предлагаемогоComparative data proposed

продуцента - неорганической пирофосфатазы и известного штамма представлены в таблице.producer - inorganic pyrophosphatase and a known strain are presented in the table.

Новый продуцент Escherichia coll LG 88 обладает более высокой пирофосфатазной активностью по сравнению с известнымThe new producer of Escherichia coll LG 88 has a higher pyrophosphatase activity compared with the known

продуцентом Escherichia coll K-12. Удельна активность в клеточном экстракте Е, Coli LG 88 превышает удельную ферментативную активность известного штамма в 2-2,2 раза.producer of Escherichia coll K-12. The specific activity in the cellular extract E, Coli LG 88 exceeds the specific enzymatic activity of a known strain 2-2.2 times.

Claims

Invention Formula

The strain of bacteria Escherichia coll VKPM B-4780 - producing inorganic pyrophosphatase.