SU1450749A3

SU1450749A3 - Способ получени производных морфолинилдоксорубицина

Info

Publication number: SU1450749A3
Application number: SU843751084A
Authority: SU
Inventors: Волкер Мошер Кэрол; Лоу Тонг Джордж; Мк Интош Эктон Эдвард
Original assignee: Сри Интернэшнл (Фирма)
Priority date: 1983-07-18
Filing date: 1984-06-14
Publication date: 1989-01-07

Abstract

Изобретение касаетс замещенйых гетероциклических веществ, в частности получени 3 -дeзaминo-3 -(4 -мop- )-5-иминoдoкcopyбицинa или З -дезамино- З (3 -циано-4 морфоли- нил)-5-иминодоксорубицина, обладающих противоопухолевой активностью, что может быть использовано в меди- 1щне. Цель - создание более активных и менее токсичных веществ указанного класса Их -синтез ведут реакцией соответствующего морфолинил-доксоруби- цина ГБ нем ОН-заместитель в группе С(0)СН20Н замещают п-метокситритило- вой группой с помощью п-анизилхлорди- фенилметанаЗ с насыщени.1м аммиаком спиртовым раствором сначала при 1 ч, а затем при 26-27 ч. После удалени растворител полученный 5-амино-14-эфир очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием элюирук цей смеси CHjOH (объемное соотношение 99:1, причем количество GHijOH возрастает до соотношени 90:10), После очистки удал ют защитную группу с помощью CHjCOOH или лед ной CFgCOOH при комнатной температуре и выдел ют целевой продукт, содержащий CN-грушгу, или превращают его в хлоргидрат обработкой 0,1 Н. НС1. Новые вещества ингибируют лейкемию L-1210, Р-388, обеспечива врем выживани мышей до 157-160% в сравнении с контролем. 1 табл. О) 4ib :л о sl 4 :о

Description

см

Изобретение относитс к способу получени новых производных доксору- бицина общей формулы

СОСНгОН ОН

НзСО NH ш

(1)

де А - водород или циангруппа, 20 бладающих про-вивоопухолевой активостью .

Цель изобретени получение но- вых производных:доксорубицина, облаающих большей активностью и меньшей 25 токсичностью, чем известные даунору- бицин и доксорубицин.

Пример 1. Получение 3 -дез- амино-3 -{А-морфолинил)-5-иминодоксо- рубицина.I30

К раствору 0,396 г 3 -дезамино- 3 -(4 -морфолинш1)доксорубицина в 5 мл сухогЪ пиридина добавл ют 0,990 г п-анизипхлордифенилметана. Смеси дают возможность реагировать при комнатной температуре в темноте, в те чение примерно двух дней. Раствор охлаждают в лед ной воде и добавл ют 0,5 мл метанола. Смесь перемешивают в течение 2 ч и добавл ют 0,5 мл метанола. Смесь перемевшвают в течение 2 ч и доба вл ют к 50 мл разбавленного бикарбоната натри и экстрагируют метиленхлоРИДОМ. Экстракты концентрируют, получа смолеобразный j остаток, который раствор ют в толуоле , концентрируют, раствор ют в мети- ленхлориде и осаждают с помощью медленного добавлени петролейного эфира . Осадок выдел ют, повторно раство- р ют в метиленхлориде и осаждают смесью 2:1 петролейного эфира и диэтило- вого эфира, получа 14-0-п-aнизилди- фeншIмeтшI-3 -дeзaминo-3 -(4 -морфо- линиа)доксорубицина (II) в виде амор- фного твердого вещества с выходом

94%.

Вещество идентг фицируетс с помо ,щью 90 МГц ЯМР в СДС1з.

Раствор 0,532 г 14-0-п-аннзилдифё- нилметил-З -дезамино-З -(4 -морфоли- нш1)доксорубицина в 10 мл метиленхло- рида добавл ют к 30 мл метанола, насыщенного аммиаком, при 0°С. Смесь перемещивают при в течение 1 ч, а затем ее оставл ют сто ть при 3 С в течение 27 ч. Растворитель в реак- ционном продукте упаривают. Остаток раствор ют в 4:1 смеси метиленхлори- да и метанола и концентрируют. Опера- цию повтор ют два раза, и твердое вещество раствор ют в метиленхлориде, фильтруют через целит, концентрируют, раствор ют в 1:2 смеси метиленхлори- да и метанола и снова концентрируют и сушат, получа 0,52 г (97%) фиолетового остатка.

Полученный остаток раствор ют в 2 мл метиленхлорида и нанос т на 1,5x40 см силикагельную колонку и элюируют метиленхлоридом (50 мл), а затем смесью метиленхло рида и метано- ла (99:1, 150 мл; 98:2, 150 мл; 97:3, 500 мл; 95:5, 100 мл; 93:7, 100 мп и 90:10, 200 мл). После 565 эл г ента отдел ют фракцию 335 мл, фильтруют , упаривают и получают 59,9% нанесенного образца в виде ед нствен- ыого вещества. Это вещество идентифицируетс как 1 4-0-п-анизилдифенш1- метил-З -дезамино-З -(4 -морфоли- нил)-5-иминодоксорубицин по данным 90 МГц ЯМР.

Образец 0,341 г полученного продукта раствор ют в 20 мл 80%-ной уксусной кислоты, и раствор перемеши вают в темноте в течение 7 ч. Раствор затем разбавл ют 50 мл воды и экстрагируют три раза хлороформом. Водную фазу, содержащую требуемый продукт, лиофилизуют в темноте, получа 0,29 г твердого вещества, которое раствор ют в 0,1 н. уксусной кислоте. Раствор промывают хлороформом , подщелачивают бикарбонатом натри и экстрагируют хлороформом, Трё-, буемый продукт переходит в органическую фазу, которую промывают, сушат, фильтруют и концентрируют. Остаток раствор ют в смеси.хлороформа и метанола (1:10), концентрируют и сушат получа 0,228 г з -дезамино-З ( морфолинш1)-5-иминодоксорубицина. Идентичность вещества подтверждает с данным ЯМР 300 МГц и элементным анализ ом.

Пример 2, Получение аддитивной соли кислоты.

Продукт в виде свободного основа- НИИ примера I суспендируют в 20 мл воды. Смесь перемешивают, медленно добавл ют 3,2 мл 0,1 н. НС1 с получением рН 4,5. Суспендированное твердое вещество постепенно раствор етс . Раствор лиофшшзуют в темноте, получа аддитивную соль кислоты - гидро- хлорид 3 -деэамино-З -(4 -морфоли- нил)-5-иминодоксорубицина с чистотой 97% по данным анализа HPLC.

Вычислено, %: С 54,35; Н 6,03; СГ 5,17; N 4,09.

Cg HseNjO. НС1-2Н О

Найдено, %: С 54,20; Н 5,96; СГ 4,33; N 4,03.

Остаток в 1,5 мл метиленхлорида нанос т на силикагельную колонку размером см (200-400 меш) и элюируют метиленхлоридом (50 мл) а затем смесью метиленхлорида и метанола (99:1, 20 мл, 98:2, 300 мл, 97:3, 100 МП, 95:5, 100 мл,и 90:10, 200мл), После сбора 360 мл начального элюата

125 мл фракции упаривают, получа

0,203 г 14-0-п-анизилдифенилметил-З - дезамино-З - (З -цйано-4 -морфо инил) - 5-имннодоксорубицина.

Образец в 0,158 г полученного остатка охлаждают до и раствор ют в 8 йЭп охлажденной льдом 50%-ной трифторуксусной кислоты. Раствор перемешивают при 0°С в течение 2 мин, а затем выливaюt в 100 мл лед ной во

Пример 3. К раствору 0,241 г20 ды. Водную смесь экстрагируют хлоро- З -дезамино-З -(3 -циано-4 -мор фс ли- формом ( 4x10 мл), объединенные зкст- ннл)доксорубицина в 4 мл сухого пи- ракты промывают разбавленным бикар- ридина добавл ют 0,587 г п-анизил-бонатом натри и водой, сушат над

хлордифенилметана. Раствор перемеши-сульфатом натри , фильтруют через

вают при комнатной температуре в тем- 25 целит и упаривают. Остаток раствор - ноте в течение 44 ч. Реакционнуюют в 3 мл смеси хлороформа и метаносмесь охлаждают, разбавл ют 0,5 млл а (4:1), раствор перемешивают, по

метанола, перемешивают при комнатнойкапл м добавл ют 25 wi эфира. Полутемпературе в течение 3 ч, а затемчающийс в результате остаток собидобавл ют к 50 мл разбавленного би-30 рают, получа 0,093 г З -дезамино-з - карбоната натри и экстрагируют ме-(з -циано-4 -морфолинш1)-5-иминодоктиленхлоридом . Экстракты концентрируют , остаток раствор ют при медленном добавлении 40 мл диэтилового эфира ,получа 0,333 г (97%) 14-0-п-ани- 35 ставл ет собой диастереоизомерную

зилдифенилметил-з -дезаминЬ-з -(3 - ,. um г „, ..«r,««vo V«T

циано-4 -морфолиншт)доксорубицина.

90 МГц ЯМР СДС1з,( , 13,84 (с., 6-ОН); 12,99 (с., 11-ОН); 7,82 (д., 1-Н); 6,70-7,75 (м., 2-Н, 3-Н, три- тил-арил); 5,42 (иир.с., I -H); 5,08 (шир.с., 7-Н); 4,45 (шир.с., 2, 14- Hg); 4,19 (с., 9-Ш); 4,00 (с., ОСИ,); 3,79 (с., OCHj); 3,30-4,15 (м, 4 -Н, 5 -Н, , , ); 1,60-3,10 (м. , 2 -Hg, 8-Н.2, 5 -Hf, 10-Н, З -Н); 1,13 (д., 6«-Нэ).

Раствор 0,369 г 14-0-п-аиизилдисмесь . Анализ HPLC на колонке Уотерс Радиал-Пак С-18 с использованием смеси 0,05 М рН 4 цитратного буфера и метанола (40:60) показывает пики при

40 18,4 и 25,0 мин в соотношении 69:31. Спектр 300 МГц данного продукта показывает два резонанса дл 1-Н, 2-Н, 3-Н, 1 -Н,. 7-Н, 14-Н2, 9-ОН, OCHg, 1ОА-Н и 6 -Н 5 протонов.

45, 300 МГц ЯМР СДС1з , cf : 15,61 (с., 11-ОН); 13,74 (д., 6-ОН); 9,27 (д., Ш); 8,21 и 8,19 (2 д., 1-Н); 7,73

и 7,72 (2 т., 2-Н); 7,33 и 7,32 (2 д., 3-Н); 5,77 и 5,72 (2 д., I -H); фенилметил-3 -дезамино-З -(3 -циано- 50 5,4j.,H 5,38 (2 м., 7-Н); 4,79 и 4,77 4 -морфолинил)доксорубицина в 8 мл(2с., 14-Не); 4,72 и 4,66 (2 с.,

S-OH); 4,15 и 4,14 (2 с., ОСН); 4,04 (м., 5 -Н); 3,97 (м., , 2 В-Н); 3,75 (м., , 4 -И); 553,59 (м., 2 А-Н); 3,23 (д., 10В-Н); 3,03 (м., 10А-Н, ); 2,72 (м., ); .2,33 .(м., 8В-Н); 2,14 (м., 8А-Н); 1,85 (м., 2 -Н); 1,38 и 1,37

метиленхлорида добавл ют к 25 мл метанола , насьщенного аммиаком, при . Смесь перемешивают при в течение 1 ч, а затем ее оставл ют сто ть при течение 26. ч. Реак ционную смесь упаривают до полного удалени аммиака и получают 0,376 г фиолетового остатка.

(2 д., 6 -Из).

сорубицина.. ,

Анализ HPLC и 300 МГц ЯМР указывает на то, что данное вещество пред35 ставл ет собой диастереоизомерную

,. um г „, ..«r,««vo V«T

смесь. Анализ HPLC на колонке Уотерс Радиал-Пак С-18 с использованием смеси 0,05 М рН 4 цитратного буфера и метанола (40:60) показывает пики при

(2 д., 6 -Из).

51

УФ-Вис (CHgOH) марке., 221 им . ( 31000), 252 (32900), 307 (7100), 520 плечо (91Ю), 551 (17400), 592 (20700), ДС1-КС м/е 638 (), 611 (M H-HCN).

Вычислено, %: С 58,62; Н 5,69; N6,41.

СзвНз М Ог -НсО

Найдено, Z: С 58,79; Н 5,47, N 6,30.

Соединени иэо.бретени обладают полезностью в качестве противоопухолевых агентов дл млекопитающих Данна активность подтверждаетс данны ми исследований in vivo и in vitro.

Claims

Среднее врем выживани различных обработанных ь&ппей определ етс и сравниваетс с временем дл мьшей, инокулированных лейкемийной асцитной жидкостью, но которым не даетс ника кого лечени испытываемыми соединени ми . Данные, полученные таким образом , представлены в таблице. Данные представлены в виде величин Т/С, которые представл ют собой врем выживани обработанных мьшей, деленное на врем выживани контрольных и умноженное на ЮО. В таблице даютс также уровни дозировки различных сое динений, которые наблюдаютс дл получени наилучших результатов улучшени времени выживани . Формула изобретени

Способ получени производных морфолинил-доксорубицина общей фор- мулыQ он СОСН/Ж

ОН

4507496

где А - водород или цианогруппа, отличающийс тем, что соединение общей формулы

5О ОН

СрСНгОН ОН

НзСО О ОН

I- 15

0

5

где А - имеет указанные значени , а оксигруппа в CO-CHjOH-rpynne защищена неустойчивой умеренно кислотной защитной группой, такой как п-меток- си-тритилова группа, подвергают взаимодействию при температуре в течение 1 ч и затем при температуре 3°С в течение 26-27 ч с насыщенным аммиаком спиртовым раствором с получением сырого 5-амино-14-эфира, который после удалени растворител подвергают очистке колоночной хрома0 тографией на силикагеле с использованием в качестве элюирующей системы, смеси СН.гС1(г-СНо,ОН/99:1 V/V с возрастающим количеством СНй,ОН до 90:10 V/V, получа чистый 5-амино-14-эфир,

g который дл удалени вышеупом нутой неустойчивой умеренно кислотной за- 1ЦИТНОЙ группы в 14 положении обрабатывают уксусной кислотой или лед ной трифторуксусной кислотой при комнатной температуре, получа целевой продукт в виде свободного основани , которое выдел ют, когда А CN, или, если А Н, превращают в его хлор- гидрат путем обработки 0,1 н. хлорис- то-водородной кислотой, о

Доксо|)у6ицин

З -деамино-З -(4 - морфолинил (-5-имино- Доксорубицин

З -деамино-3 -(4 - (Морфолинил-З -циано)- |5-иминодоксорубицин

0,031 0,047 157

160

252 7,5 внутрибрл- шинно

2,0 внутрибрю- шинно

2,5 внутривенно

4,0 внутрнбрю- шинно

0,5

165 0,8 внутрйбрю- шинно