SU1402257A3 - Способ получени 3 @ -цианоморфолинопроизводного доксорубицина - Google Patents

Abstract

Изобретение касаетс  производных доксорубицина, в частности 3 -ци- аноморфолинодоксорубицина, обладающего противоопухолевой активностью, что может быть использовано в медицине . Цель - создание нового более активного соединени  указанного класса . Его синтез ведут из хлоргидрата доксорубицина (ХР),который обрабатывают в водно-пол рной органической среде 18 моль-экв 2,2-оксидиацеталь- дегида. Последующее непосредственное расщепление 1,4-ангидроэритритола в водном растворе ведут периодатом натри  при комнатной температуре в присутствии 2 моль-зкв по отношению к исходному ХР цианборгидрида щелочного металла (кали  или натри ). Полу ченный сырой продукт раздел ют на основные и нейтральные фракции. Последние хроматографируют на колонке с силикагелем с использованием в качестве элюента смеси СН 01 -

Description

см

Изобретение касаетс  способа получени  нового 3 -цианоморфолинопроиз- водного доксорубицина формулы

О ОН

CO-CHgO

он

НхСО

(I)

обладающего противоопзгхолевой активностью .

Цель изобретени  - получение нового производного доксорубицина, обладающего большей активностью, чем из- вестный структурный аналог - доксору- бицин и его аналоги.

П .р и м е р 1. Получение и отделение 3.-деамино-3 -(3 -циано-4 -мор- фолинил)доксорубицина и З -деамино- 3-(3 -циано-4 -морфолинил)-13-ди- гидродоксорубйцина.

К перемешиваемому раствору, состо щему из 6,25 г (60,0 ммоль) 1,4- ангидро-эритритола, характеризуемого

формулой

ОН он

Q

в 75 мл воды, охлажденной в вод ной бане до 15-20°С, добавл ют 6,42 г (30 ммоль) метапериодата натри . Полученный в результате чистый раствор перемешивают при комнатной темпера- туре в течение 17 ч, величину рН раствора довод т от 3 до 7,3 с помощью NaHCO и затем полученный раствор разбавл ют при перемешивании 75 мл , при этом происходит образова- ние осадка. Полученную смесь подвергают перемешиванию и добавл ют 0,126 г (2 ммоль) в 15 мл смеси, состо щей из СНзСН и воды в соотношении , равном 1:1 (объемным). К этой смеси далее добавл ют 1,16 г (2,0 ммоль) гидрохлорида доксорубицина в 30 МП смеси, состо щей из CH,CN и воды в соотношении 1:1, Спу0

5

5

0

-

ст  10 мин полученную реакционную смесь разбавл ют 50 мл разбавленного раствора NaHCO, и экстрагируют далее три раза с помощью СНС1, порци ми по 50 мл. Этот полупродукт - экстракт, содержащий 3 -деамино-3 -(4 -морфо- линил)доксорубицин,3 -деамино-3-(4 - морфолинил)- 3-дигидродоксорубицин, 3 -деамино-3 -(3 -циано-4 -морфолинил ) доксорубицин и 3 -деамино-З -( циано-4 -морфолинил)-13-дигидродоксо- рубицин. Соединенные экстракты подвергают экстрагированию с помощью 0,1 н. уксусной кислоты 5 раз по 25 МП, а затем с помощью воды и далее промывают разбавленным раствором и насыщенным водным раствором хлорида натри . Кислотную водную фазу затем отдел ют. Хлороформную фазу подвергают сушке с помощью сульфата натри , фильтруют через целит-диатомовую землю и подвергают концентрированию с получением в результате остатка. Этот остаток подвергают растворению в 25 мл СНС и. растворитель подвергают повторному вьшариванию под вакуумом при комнатной температуре. В результате получают 0,518 г (40% от теоретического выхода) стеклообразного вспененного материала темно-красного цвета.

Образец этого вспененного стеклообразного материала в количестве 0,424 г подвергают растворению в 1,5 мл и ввод т в колонку размером .1 ,5 -3,5 см, промытую и заполненную селикагелем типаВ10-511А имеющим размер частиц, соответствующий ситу № 200-400 (т.е. 0,074 - 0,037 мм). Колонку подвергают элюи- рованию с помощью 50 мл , а затем смесью, состо щей из CHCl и CHjOH, причем перва  порци , объемом 150 мл представл ет собой смесь в ciD- отношении 99:1. Втора  порци  объемом 150 мл представл ет собой смесь в соотношении 98:2, треть  порци  объ емом 300 мл представл ет собой смесь в соотношении 97:3, четвертай порци  объемом 100 мл представл ет собой смесь в соотношении 95:5 и п та  порци  объемом 300 мл представл ет собой смесь в соотношении 90:10. После сбора начального элюата в количестве 445 мл фракцию объемом 80 мл подвергают вьшариванию с получением в результате 0,217 г продукта. Этот материал подвергают смешению с 0,039 г рчищенного продукта, полученного ранее , и полученную смесь подвергают растворению в 2 мл , разбавл ю 10 мл СН,ОН и вьшаривают досуха. В результате растирани  этого остатка с 5 мл CH,OH получают 0,218 г з -де- амино-3 -{3 -циано-4 -морфолинил) доксорубицина.

Анализ данных, полученных с помощью жидкостного хроматографировани  с высокой разрешающей способностью и методом  дерно-магнитного резонанса при частоте 400 МГц, показал, что этот продукт представл ет собой ди- астереоизомерную смесь.

Анализ методом жидкостного хроматографировани  с высокой разрешающей 20 способностью на колонке типа С-18 фирмы Waters Radial - Rak с использованием 0,05 М буферного раствора цитрата, характеризуемого рН 4 и , в соотношении 65:35 при скорое- 25 N 4,20. ти подачи, равной 2 мл/мин, показал наличие двух близкорасположенных пиков , на 14,4 мин и 15,7 мин, в соотношении 58:39. Анализ спектра ЯМР этого материала при частоте, равной .. 400 МГц, показал существование двух резонансов дл  1-Н, 2-Н, 3-Н, 1 -Н, 7-Н, 14-Н, 9-ОН, OCH-j, 10А-Н и

6 -Hj-npOTOHOB.

Данные анализа спектра 5ШР при частоте 400 МГц, (CDClj)S : 14,02 (син- глет, 6-ОН), 13,26 (синглет, 11-ОН), 8,05, 8,04 (2 дублета, 1-Н), 7,80, 7,79 (2 триплета, 2-Н), 7,41, 7,40

Дальнейшее элюирование содержимого указанной колонки привело к получению 0,041 г 3 -деамино-3 -(3 -ци 15 ано-4 -морфолинил)- 3-дигидродоксо- рубицина.

Данные ультрафиолетового спектра Vis () максимум 234 нм ( 252 (28,000), 289 (9,390), 475 (12,700), 496 (12,800), 530 (7,410).

Масс-спектр (как производные три- метилсилила) м/е 985 М (триметилси- лил)5-СН,, 973 М (триметилсилил)5-НС

Вычислено,%: С 57,57; Н 5,89;

1,5 Найдено,%: С 57,35; Н 5,94; N3,82

Предлагаемое соединение обладает 30 полезностью в качестве противоопухолевого агента дл  млекопитающих. Дан на  активность подтверждаетс  данны ми исследований ин виво и ин витро. В одном из опытов ин виво, проводите MOM в соответствии с протоколом, опи санным в работе Gamer Chemotherapy Reports National Gamer Institute, 3, № 2, Ч.З, от сент бр  1972 г., здоро вые мыши инокулировались интраперито

(2 дублета, 3-Н), 5,61. 5,57 (2 дуб- 40 нально асцитной жидкостью лимфоцит лета, I -H), 5,34, 5,30 (2 мульти- плета, 7-Н), 4,79, 4,78 (2 синглета. 14-Hj, 4,54, 4,42 (2 синглета, 9-ОН), 4,11, 4,10 (2 синглета, OGH,), 4,05

лейкеми  Р-388. Инокулированные мыши затем обрабатывались на 5,9 и 13 сут истекшего периода времени различными количествами предлагаемого соедине (мультиплет, 5 -Н), 3,97 (мультиплет, 45  . Дл  сравнени  другие мыши были 2 -В-Н, 3 -Н, 6 В-Н), 3,71. (муль- необработанными, а еще дополнитель- типлет, 4 -Н, б -А-Н), 3,58 (триплет , 2 А-Н), 3,30 (дублет, J-19Гц, 10 В-Н), 3,07, 3,06 (2 дублета,IOA-H) 3,03 (мультиплет, з -Н), 2,69 (мультиплет , 5 -Н), 2,38 (мультиплет 8В-Н), 2,22 (мультиплет, 8А-Н), 1,84 (мультиплет, 2 -Н), 1,61 (синглет, ), 1,40, 1,39 (2 дублета, ,5Гц, 6 -Н,).

на  Группа мышей обрабатывалась даун рубицином или доксорубицином, 3 -дез амино-3 -(4 -морфолинил) даунорубиgQ цином или 3 -дезамино-З -(4 -морфолинил ) -13-дигидродаунорубицином, или 3 -дезамино-З -(4-метокси-1-пипери- динил)даунорубицином или его 13-ди- гидро эквивалентом.

gc Среднее врем  выживани  различных обработанных мышей определ лось и сравнивалось со временем дл  мышей, инокулированных лейкемийной асцитной жидкостью, но которым не давалось

Данные ультрафиолетового спектра Vis () максимум 234 нм (40, 100), 252 (27,700), 289 (9,420),

лил)-НСН.

478 (13,000), 495 (13,000), 495 (12,900), 530 (7,190).

Масс-спектр (как производные три- метилсилила) м/е 899 М (триметилсилил )-НСН.

Вычислено,%: С 56,97; Н 5,68; N 4,16.

лил)-НСН.

N 4,20.

Найдено,%: С 57,07; Н 5,37; N 4,17.

Дальнейшее элюирование содержимого указанной колонки привело к получению 0,041 г 3 -деамино-3 -(3 -ци- ано-4 -морфолинил)- 3-дигидродоксо- рубицина.

Данные ультрафиолетового спектра Vis () максимум 234 нм () 252 (28,000), 289 (9,390), 475 (12,700), 496 (12,800), 530 (7,410).

Масс-спектр (как производные три- метилсилила) м/е 985 М (триметилси- лил)5-СН,, 973 М (триметилсилил)5-НСН.

Вычислено,%: С 57,57; Н 5,89;

,20.

1,5 Найдено,%: С 57,35; Н 5,94; N3,82.

N 4,20.

Предлагаемое соединение обладает . полезностью в качестве противоопухолевого агента дл  млекопитающих. Данна  активность подтверждаетс  данными исследований ин виво и ин витро. В одном из опытов ин виво, проводиMOM в соответствии с протоколом, описанным в работе Gamer Chemotherapy Reports National Gamer Institute, 3, № 2, Ч.З, от сент бр  1972 г., здоровые мыши инокулировались интраперитонально асцитной жидкостью лимфоцит

лейкеми  Р-388. Инокулированные мыши затем обрабатывались на 5,9 и 13 сут истекшего периода времени различными количествами предлагаемого соедине  . Дл  сравнени  другие мыши были необработанными, а еще дополнитель-

на  Группа мышей обрабатывалась дауно- рубицином или доксорубицином, 3 -дез- амино-3 -(4 -морфолинил) даунорубицином или 3 -дезамино-З -(4 -морфолинил ) -13-дигидродаунорубицином, или 3 -дезамино-З -(4-метокси-1-пипери- динил)даунорубицином или его 13-ди- гидро эквивалентом..

Среднее врем  выживани  различных обработанных мышей определ лось и сравнивалось со временем дл  мышей, инокулированных лейкемийной асцитной жидкостью, но которым не давалось

5I

никакого лечени  испытываемым соединением .

Данные, полученные таким образом, представлены в табл.1 в виде величин Т/С которые представл ют собой врем  выживани , обработанных мышей, де ленное на врем  выживани  контрольных и умноженное на 100. В таблице 1 даютс  также уровни дозировок различ ных соединений, которые наблюдаютс  дл  получени  наилучших результатов улучшени  времени выживани .

Результаты показывают, что предлагаемое соединение обладает противоопухолевой активностью ин виво от хорошей до превосходной при низких оптимальных дозировках. Соединение NSC 357704 показало уровень оптиналь- ной дозы около 1/150 от дозы, требуемой в случае родительского соединени  (т.е. от которого оно произошло ) .

Дополнительные испытани  были проведены дл  подтверждени  биологической активности предлагаемого соединени . Это были испытани  ин виво на мьшах против лейкемии Р-388 и L-1210 и Меланомы В-16, которые осуществл лись по методике работы Cancer Chemotherapy Reports, 1972. Испытывались различные дозы и 1.Р (интраперито- нальный), 1.V (внутривенный) и оральный способы приема препаратов.

Противоопухолева  активность на мьшах при оптимальной дозе (% Р/с, мг/кг) представлена в табл.2.

Новое соединение  вл етс  средне- токсичным.

4022576

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ получени  3 -цианоморфоли- нопроизводного доксорубицина. формулы

   О ОН

   со -СНдОН

   ОН

   -10

   HsCO

   CN

   отличающийс  тем, что

   хлоргидрат доксорубицина подвергают взаимодействию в смешанной водно-пол рной органической среде с 18 моль- эквивалентами 2,2-оксидиацетальдеги- да, полученного in situ расщеплением

   1,4-ангидроэритритола в водном растворе с периодатом натри  при ком- Натной температуре, в присутствии 2 моль-экзивалентов по отношению к исходному доксорубицину цианборгидрида щелочного металла, например

   цианборгидрида натри  или кали , сы-. рой продукт реакции раздел ют на основные и нейтральные фракции и последние хроматографируют на колонке с

   силикагелем, использу  в качестве элюента смесь с объемным соотношени-. ем ,,OH 99:1, CH GH/CH Cl с постепенгйм увеличением количества HjOH, до объемного соотношени  9:1

   в конце элюировани .

   357704

   187.

   Т а

   лица

   0,075

   0,003

   0,0005

   150

   360291

   82151

   123127

   3 -Дезамино-З (4 -МОРФОлИНИЛ)

   даунорубицин i2475 166

   / 3 -Дезамино-З (4 -морфолинил)13-дигидродаунорубицин 327450 132

   Регистрационный номер Национального института рака Национального центра услуг США.

   Тав но 2

   0,2

   0,021

   0,0030

   0,2

   0,76

   0,10

   0,2

   2,2

   0,67

   Соединение

   285(2) 197(20)

   129,146(3) 195(4) 292(4)

   Примечание, ip - Введение внутрнб1 о0ин о; iv - в утривешю;

   ро - чсре  рЬт.

   jd - q график приема, например q - ка юЛ 4vr аертъй день.

   158(O.J)

   138(0.0063)

   123(0,0125)

   135(0,25). 121(0,25)