SU1442919A1 - Способ диагностики силикотуберкулеза - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине , точнее к клинической иммунологии, предназначено дл  ранней диагностики силикотуберкулеза in vitro у лиц. контактирующих с высокофиброгенной кварцсодержащей пылью. Цель изобретени  - повышение точности. В пробе крови проводитс  иммунологическа  идентификаци  специфических рецепторов к туберкулину на субпопул ци х лимфоцитов в реакции тройного роэет- кообразовани  и при содержании лимфоцитов с рецепторами к туберкулину 7 3% и лимфоцитов с реце пторами к комплементу и туберкулину /0,5% реакци  считаетс  положительной и позвол ет провести раннюю диагностику силикотуберкулеза в 78,6% случаев. Предлагаемый способ может быть внедрен в практику отделений профпатоло- гии, а также лечебно-диагностических и фтизиопульмонологическнх стационаров . (Л с

Description

ilib 1

Ф

Изобретение относитс  к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано при диагностике силикотуберкулеза, возникающего у лиц, работающих в контакте с высокофиброгенной кварцсодержащей пылью.

Цель изобретени  - повьшение точности диагностики силикотуберкулеза.

Способ осуществл ют следующим образом.

Выдел ют лимфоциты из гепарини- зированной периферической венозной крови обследованных лиц в градиенте 14,5% верографина фирмы Spofa (ЧССР) на физиологическом растворе, рН - 7,35, 6 - 1,076, центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин. Из образовавшихс  трех слоев отбирают второй слой (мутное кольцо) в силикони- рованную пробирку и добавл ют питательную среду № 199 до 10 мл, дважды отмывают по 2 мин при 1500 об/мин и сливают до 1 мл, смешивают и считывают в камере Гор ева в п ть и более квадратах и развод т до f lO кл/мл,

В качестве индикаторных частиц примен ют зритроциты барана и зимо- зан в виде 0, суспензии Таллинского химико-фармацевтического завода или зимозан дл  определени  пропердина Олайнского БХЗ.Последний растирают в фарфоровой ступке с мер нык количеством физиологического раствора, которьм добавл ют по капл м .

В качестве диагностикума примен ют конъюгат предварительно окрашеннго зимозана с раствором стандартног туберкулина, содержащего 20000 ТЕ в 1 мл (сухой очищенный туберкулин Предпри ти  по производству бакпре- паратов Ленинградского НИИ вакцин и сывороток).

Зимозан предварительно окрашиваю в контрастный цвет по способу Хиль- ко Т.Ф.

Далее 5 мл раствора, содержащего 100000 ТЕ смешивают с 5 мл 0,1%-ной взвеси предварительно окрашенного зимозана, инкубируют 60 мин при 37°С, отмывают дважды центрифугированием при 1500 об/мин с физиологическим раствором, приготавливают из осадка 0,17%-ную взвесь, которую используют в работе.

Постановка реакции.

5

5

В силиконированную микропробирку с О,1 мл суспензии лимфоцитов 2-х 10 в 1 мл среды № 199 добавл ют 0,1 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов барана, 0,1 мл 0,17%-ной взвеси комплекса зимозан-туберкулин. Смесь инкубируют в течение 5 мин при 37 С, осаждают в течение 2 мин при 1500 об/мин, инкубируют в течение 60 мин при 10°С. После этого фиксируют 0,1 мл 3%-ного глютарового альдегида в течение 20 мин. Далее запивают дистиллированной водой до кра  пробирки, центрифугируют 2 мин при 1500 об/мин, отсасывают надоса- дочную жидкость пастеровской пипеткой и готов т мазок на предметном стекле из тщательно ресуспендиро- Q ванного осадка. Мазок подсушивают на воздухе, фиксируют в течение 10 мин в метиловом или абсолютном этиловом спирте, отмывают 2 мин в дистиллированной воде, подсушивают затем метиловым зеленым и пирони- ном по Браще.В мазках препаратов подсчитывают при микроскопии под иммерсией 200 лимфоцитов. За розетку принимают лимфоцит, присоедин ющий к своей поверхности три и более индикаторные частицы одного типа. При подсчете клеток определ ют процентное соотношение восьми субпопул ций лимфоцитов, учитыва , что комплекс зимозан-туберкулин имеет при окраске 5 по Враше синий цвет.

Прием реакции розеткробразовани  позвол ет отдифференцировать субпопул ции розеткообразующих лимфоцитов на основании образовани  розеток со всеми использованными индикаторами: Л TvS -fJ эЕ+ На основании анализа полученных результатов в группе больных и контрольных лиц выделены в качестве диагностики значимых субпопул ци -лимфоцит только с туберкулиновыми рецепторами. Вы вление предлагаемых диагностических показателей возможно только в предлагаемой реакции .

При содержании процента лимфоцитов с рецепторами к туберкулину (Л У 7/37, реакцию считают положительной и диагностируют силикотубер- кулез.

Пример 1. Больной 58 лет, в прошлом в процессе работы длительно подвергавшийс  воздействию кварцсодержащей пыли, направлен в клинику

0

0

5

0

5

дл  уточнени  диагноза. На рентгенограмме на всем прот жении легких определ лись мелкоп тнистые тени, имеющие слева в верхнем по се различную величину. Клинически симптомов интоксикации не было, температура нормальна . Лабораторные показатели , включающа  общий анализ крови и биохимические данные, воспалительных изменений не вы вили. Градуированна  кожна  туберкулинова  проба Пирке была отрицательной во всех разведени х. При иммунологическом исследовании крови в реакции тройного розеткообразовани  с туберкулином вы влены Л -7,6%. Таким образом, реакци  расцениваетс  как положительна , что позволило впервые у больного диагностировать силикотуберкулез и рекомендовать проведение противотуберкулезной терапии.

Пример 2. Вольной 60 лет, в прошлом работал в услови х воздействи  кварцсодержащей пыли. Направлен в клинику дл  обследовани  и уточнени  диагноза. На рентгенограмме легких на фоне диффузно усиленного и деформированного легочного рисунка видны множественные различной величины кольцевидные тени с перифокальным воспалением. Клинически имелись симптомы интоксикации (субфебрилитет, слабость, потливость). В общем анализе крови и при биохимическом исследовании определ лись воспалительные изменени  в виде ускоренной СОЭ, повышенного содержани  гаптоглобина, фибриногена к сиаловой кислоты. Градуированна  реакци  Пирке отрицательна . При постановке реакции тройного розеткообразовани  1,0%. Реакци  расценена как отрицательна . Таким образом, на основании комплекса клинико-рентгенолабораторных исследований , включа  микробиологическое исследование мокроты, где обнаружены пневмококк и гемолитический стрептококк , у больного диагностирован пневмокониоз, осложненный хронической неспецифической инфекцией с формированием кист и с перифокальным воспалением вокруг них. Проводилась неспецифическа  антибактериальна  терапи  с положительным эффектом.

0

5

0

5

Таким образом, преимуществом предлагаемого способа диагностики  вл етс  возможность установлени  диагноза силикотуребкулеза на ранних этапах, в том числе и при клинически не определ емой активности силикотуберку- лезного процесса, а также и при туберкулиновой энергии, что  вл етс  положительной стороной и важно дл  своевременного назначени  специфического лечени .

Диагностическа  ценность изучена у 30 больных с подозрением на силикотуберкулез в возрасте от 45 до 60 лет с длительным стажем работы в пылевых услови х.

По клинико-рентгенологическим критери м диагноз силикотуберкулеза вызывал затруднени  у больных с отрицательной кожной туберкулиновой пробой Пирке (14 человек).

Всем больным была проведена предлагаема  реакци  тройного розеткообразовани , котора  окалазась положительной у 11 из 14 больных с отрицательной туберкулиновой IJOжнoй пробой (78,6%), что позволило установить диагноз силикотуберкулеза на ранней стадии его развити , остальные методы этого не позволили и повысить точность диагностики на 28%.

Предлагаемый способ осуществл етс  in vitro и исключает обострение заболевани  в результате диагностического исследовани .

Claims (1)

1. Формулаизобретени 

   0

   5

   0 Способ диагностики силикотуберкулеза , включающий исследовани  больного с помощью туберкулина, о т л и чающийс  тем, что, с целью повышени  точности, у больного вы45 дел ют из крови лимфоциты, добавл ют эритроциты барана и обрабатывают окрашенным коньюгатом зимозана с туберкулином , подсчитывают розеткооб- разующие клетки и при содержании

   50 розеткообразующих туберкулин-зимоза- новых клеток равном 3% и выше по от- ношению к общему числу розеткообразующих клеток диагносцируют силикотуберкулез .