SU1273114A1

SU1273114A1 - Способ обнаружени антигенов энтеробактерий

Info

Publication number: SU1273114A1
Application number: SU843796039A
Authority: SU
Inventors: Маргарита Юрьевна Суслова; Виссарион Андреевич Шамардин
Original assignee: Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии,Микробиологии И Инфекционных Болезней
Priority date: 1984-09-26
Filing date: 1984-09-26
Publication date: 1986-11-30

Description

1

Изобретение относитс к медицине, в частности к с€фологической диагностике .

Цель изобретени - повьшение специфичности и чувствительности анализа антигена энтеробактерий в фекали х с помощью эритроцитарных диагностик умов .

Указанна цель достигаетс тем, что до кип чени исследуемый образец трижды отмывают физиологическим раствором , затем образец кип т т, отдел ют надосадок и используют дл анализа в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), а осгцок исследуют с антимикробными сыворотками в реакции торможени пассивной гемагглютинации (РТПГА).

Постановка РТПГА.по известному способу включает агглютинацию диагностикума антисывороткой в заранее подобранной (2-4 гемагглютинирующие единицы) и проконтролированной рабочей дозе, истощенной надосадком фекалий .

Использование отмытого оса,цка существенно повьшает специфичность и чувствительность РТПГА.

Дн постановки РПГА по пре.цлагаеl ioMy способу используют супернатант, полученный путем центрифугировани предварительно отмытого, эмульгиро-, ванного и кип ченого осадка фекалий. Это позвол ет существенно повысить ,с.пецифичность РПГА, а значит, и точность серологического анализа,

Предпагаемьш способ осуществл етс следующим, Ьбразом.

Исследуемую пробу фекалий заливают О,,85 %-ным раствором NaC (5-10 объемов), эмульгируют и двух-трехкратно отмывают свежими порци ми 0,85 %-ного раствора NaCI и прогревают в кип щей вод ной бане в течение 60-90 мин, после чего центрифугируют . Часть надосадочной жи : кости отбирают дп исследовани с помощью РИГА., а оставшуюс часть эмульгируют и смешивают с равным объемом антисыворотки в стандартном разведении, После 30-60 мин экспозиции пробу центрифугируют и надосадок исследуют с помощью РТПГА.

Пример. При обследовании больного на дизентерию проведен поиск в фекали х антигенов щигелл 6 специфичностей (Флекснера, Зонне Ньюкасла, Штуцера- Шмитца, Григорье14г

ва - Шига и Ларди-Сакса) по известному и предлагаемому способам.

По известному способу фекалии заливают 10 объемами 0,85 %-ного раствора NaCl, прогревают в кип щей вод ной бане 60 мин, центрифугируют и исследуют надосадок с помощью РПГА и РТПГА.

По преддтагаемому способу фекалии заливают произвольным объемом 0,85 %ного раствора NaCl, эмульгируют (перемешивают стекл нной палочкой) и отмьшают дважды свежими порци ми 0,85 %-ного раствора NaCl путем центрифугировани при 3500 об/мин в течение 15 мин. После этого к осадку добавл ют 5-кратный объем 0,85 %-ного раствора NaCl, эмульгируют, прогревают в кип щей вод ной бане 60 мин и центрифугируют при 3500 об/мин 15 мин. Затем 0,5 мл супернатанта отбирают дл исследовани с помощью РПГА, дл чего в планшете микротитратора готов т 6 одинаковых р дов последовательных разведений супернатанта в объеме 0,05 мл на 0,85 %-ном растворе NaCl, содержащем 0,4 % нормальной лошадиной сыворотки, рН 7,07 ,2, и внос т в каждый р д определенный антигенный диагностикум в объеме 0,025 мл. Учет РПГА по обычной методике через 1,5-2 ч.

Остаток пробы эмульгируют, внос т в нее равный объем смеси шигеллезных сывороток 6 специфичностей (конечное разведение каждой сьшоротки в неадсорбированной смеси 1:100, в адсорбированной смеси 1:25) и вьщерживают 40 мин при комнатной температуре Затем пробы центрифугируют при 3500 об/мин в течение 15 мин, отбирают 0,5 мл супернатанта и исследуют

с помощью РТПГА. I .

Claims

Дл этого готов т в планшете микротитратора 6 одинаковых последовательно разведенных р дов супернатанта в объеме 0,05 мп на 0,85 %-ном растворе NaCl. Дл постановки контрол к 0,5 мл исходной смеси сывороток добавл ют равный объем 0,85 %ного раствора NaC и готов т 6 р дов разведений смеси антисывороток. В каждый р д (1 опытный и 1 контрольный ) внос т по 0,025 мл определенного 0,5 %-ного антигенного днагностикума . Учет через 1,5-2 ч по обычной схеме дл РТПГА. Присутствие антигена устанавливают по степени истощени гомологичной антисыворотки. В результате при обнаружении анти генов различных видов шигелл с помощью РИГА по известному способу идентифицировано 17 образцов (42 %), с помощью РТПГА - 14 образцов (34 %), по предлагаемому способу - 23 и 37 (56 и 90 %) соответственно. Предлагаемый способ позвол ет зна чительно повысить специфичность анализа за счет удалени активных растворимых агентов и повысить чувствительность индикации дп многоэтапных реакций (РТПГА). Предлагаема модифи наци РТПГА, когда истощение сыворот ки идет за счет суммы растворимого антигена и микробных клеток, присутствующих в осадке фекалий, позволила в р де случаев превысить порог индикации , характерный даже дл антигенных диагностикумов и в целом повысить результативность серологического анализа. Таким образом, предлагаемый способ обнаружени антигена с помощью эритроцитарньгх диагностикумов позво144 л ет значительно повысить точность серологического анализа (на 15-60%) за счет повышени специфичности (дл РПГА и РТПГА) и чувствительности (дл РТПГА) индикации антигена. Значительные затраты времени на отмывание осадка фекалий (30-40 мин) компенсируютс снижением затрат труда и времени на выбор и контроль доз антисыворотки дл нейтрализации по известному способу (3-3,5 ч). Формула изобретени Способ обнаружени антигенов энтеробактерий путем исследовани в реакции пассивной гемагглютинации супернатанта , полученного после кип чени образца фекалий и центрифугировани , отличающийс тем, что, с целью повышени специфичности и чувствительности анализа, до кип чени образец отмывают физиологическим раствором, а после отделени супернатанта осадок фекалий дополнительно исследуют в реакции торможени пассивной гемагглютинации антимикробными сьшоротками.