SU1265614A1 - Способ определени активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах - Google Patents

Abstract

НзоВретение относитс  к медицине , а именно к гематологии, и может быть применено дл  диагностики гемолитических анемий и оценки метаболизма эритроцитов. Цель изобретени  повышение точности способа. У пациента берут кровь, смешивают с инкубационной средой, содержащей дополнительно хлористый магнш, гепарин, метиленовую синь. Инкубир пот смесь при 37°С. 30 мин. Затем делают мазок, высушивают и микроскопируют (окул р х10; объектив х90). При этом подсчитывают общее количество гранул формазана в 200 эритроцитах. Определ ют среднее содержание гранул в одном эритроците, что и  вл етс  показатеi л ми активности фермента. При сред (Л ней концентрации гранул 3-5 констатируют сниженную, 7-9 - нормальную, 10-14 - повышенную активность фермента . 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано клинико-диаг ностическими и научно-исследовательскими лаборатори ми дл  диагностики ; гемолитических с анемий и оценки метаболизма эритроцитов. Цель изобретени  - повьтение точности способа за счет исключени  ин гибировани  фермента фиксацией и до бавленип в инкубационную среду дополнительно хлористого магни , гепа рина и метиленовой сини, проведени  инкубации непосредственно с пробой крови, приготовлени  мазков и подсчета в них .среднего числа гранул формазана в одном эритроците. Способ осуществл ют следующим . образом. Из пальца пациента берут 0,05 мкл .крови и смешивают с 0,1 мкл инкубаци онной среды в центрифужной пробирке, котора  предварительно нагрета до Состав инкубационной среды приведен , в таблице. Кровь инкубируют в термостате при в течение 30 мин, предварительно тщательно и осторожно перешав с инкубационной средой.-По истечении срока инкубации делают мазок, высушивают и микроскопируют (Окул р X 10 объектив X 90). При микроскопии мазков подсчитывают общее количество гранул формазана в 200 эритроцитах и определ ют среднее содержание гранул в одном эритроците, что и  вл етс  показателем активности фермента . Разработаны критерии дл  оценки активности Г-6-ФДГ при использовании предлагаемого способа: при средней концентрации гранул от 3 до 5 констатируют сниженную, от 7 до 9 нормальную , от 10 до 14 - повышенную активность фермента. II р и м е р 1 . Больной М., 32 го . да, поступил с диагнозом: остра  лекарственна  гемолитическа  анеми . С 15-летного возраста страдает приступами острого гемолиза, св занными с приемами анальгина. Антибиотики гемолитических кризов не дают. Анализ крови: гемоглобилин 73,0 г эритроцнтЕ 2250000, ц.п. 0,95; ретикулоциты (45 тыс./мкл). Содержапие непр ;.юго билирубина в сыво 142 ротке крови 45 мкмоль/л. Реакци  Кумбса отрицательна . Дл  вы снени  причины гемолиза эритроцитов проведено определение активности Г-6-ФДГ по предлагаемому способу. У обследуемого больного общее количество гранул в 200 эритроцитах составило 631. Следовательно, активность Г-6-ФДГ составл ет 3,15, что свидетельствует о низком уровне активности фермента, обусловившем острый гемолиз эритроцитов после приема анальгетиков. П р и м е р 2. Больна  Р. 40 лет, поступила с диагнозом: гемолитическа  анеми . Анализ крови: гемоглобин 50 г/л; эритроциты 1600000; ц.п. 0,9; ретикулоциты 1,2% (19,2 тыс/мкл). В миелограмме содержание эритроидных клеток 45%. Содержание непр мого билирубина в сыворотке крови составл ет 14 мкмоль/л, пр мого нет. С целью исключени  гемолитической анемии, обусловленной недостаточной активностью глюкозо-б-фосфатде гидрогеназы эритроцитов, проведено определение активности данного фермента по предлагаемому способу. У обследуемой больной общее количество гранул в 200 эритроцитах составило 1566. Таким образом, активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы составл ет 7,83, что соответствует нормальному уровню и позвол ет иск .гаочить дефицит фермента как причину гемолиза эритроцитов. П р И М е р 3. Больной Б. 35 лет, поступил с диагнозом: гемолитическа  анеми . Анализ крови: гемоглобин 87 г/л; эритроциты 2900000; ц.п. 0,9; ретикулоциты 20% (580 тыс/мкл). Содержание непр мого билирубина в сыворотке крови 37 мкмоль/л, реакци  Кумбса отрицательна . В мазке крови выражен микроцитоз. Осмотическа  резистентность эритроцитов снижена. При объективном исследовании больного обнаружено увеличение селезенки. При .определении активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы по предлагаемому способу обнаружены высокие показатели: 12,8, что позвол ет исключить энзимопенический вариант гемолитической анемии и подтверждает диагноз:

наследственна  микрофероцитарна  гемолитическа  анеми ,

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  активности гл1окозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах путем исследовани  ее цитохимическим методом с использованием инкубационной среда, содержащей пнитротетразолий фиолетовый, трис-буфер рН 8,0, глюкозо-6-фосфатдинатриевую соль и НАДФ при физиологичесКоличество вещества, растворенного в 10 мл физиологического раствора, мг

   Глюкозо-6-фосфатдинатриева  соль

   НАДФ MgCl п-Нитротетразолий фиоких услови х, отличающи йс   тем, что, с целью повьппени  точности за счет исключени  ингибировани  фермента фиксацией, инкубационна  среда дополнительно содержит хлористый магний, гепарин и метиленовую синь, а инкубацию провод т непосредственно с пробой крови , далее готов т мазки и определ ют число гранул образовавшегос  форма- зана в одном эритроците и по средней величине этого показател  определ ют активность фермента.

   Количество раствора, используемого на одно исследование,

   мкл

   0,01 0,01 0,01