RU2018836C1 - Способ депротеинизации цельной капиллярной крови при ферментативном определении глюкозы - Google Patents
Способ депротеинизации цельной капиллярной крови при ферментативном определении глюкозы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2018836C1 RU2018836C1 SU4781548A RU2018836C1 RU 2018836 C1 RU2018836 C1 RU 2018836C1 SU 4781548 A SU4781548 A SU 4781548A RU 2018836 C1 RU2018836 C1 RU 2018836C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- glucose
- determination
- reagent
- deproteinization
- blood
- Prior art date
Links
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 title claims abstract description 37
- 239000008103 glucose Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims description 14
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 title claims description 5
- MHCFAGZWMAWTNR-UHFFFAOYSA-M lithium perchlorate Chemical compound [Li+].[O-]Cl(=O)(=O)=O MHCFAGZWMAWTNR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 14
- 229910001486 lithium perchlorate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 17
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 5
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 5
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 5
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- UGZADUVQMDAIAO-UHFFFAOYSA-L zinc hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Zn+2] UGZADUVQMDAIAO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229940007718 zinc hydroxide Drugs 0.000 description 4
- 229910021511 zinc hydroxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 101710132772 Peroxidase 1 Proteins 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- FEPBITJSIHRMRT-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzenesulfonic acid Chemical compound OC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 FEPBITJSIHRMRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 101710171243 Peroxidase 10 Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: в медицине, в клинической биохимии. Цель: повышение точности способа. Сущность изобретения: используют для депротеинизации 0,1 - 0,4 М перхлорат лития в физиологическом растворе при применении глюкозооксидазно-пероксидазного определения глюкозы. Положительный эффект: применение способа позволяет на 4% повысить точность способа. 5 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической биохимии, и может быть использовано в медицинской практике при изучении биохимических показателей крови в клинике и эксперименте.
Известны способы депротеинизации крови при ферментативном определении глюкозы, включающие использование осаждающих реактивов: гидроксида цинка, хлорной кислоты или трихлоруксусной кислоты.
Однако все эти методы неудобны (трудоемки) в плане практического применения для проведения массовых анализов. При использовании гидроксида цинка осаждение форменных элементов и белков цельной крови происходит в слабощелочной среде, что обеспечивает специфичность ферментативной реакции и достаточно высокую точность определения глюкозы, однако требует использования только свежеприготовленного реактива (т.е. в каждой пробирке непосредственно перед забором крови готовят суспензию гидроксида цинка, сливая растворы сульфата цинка и гидроксида натрия). При использовании хлорной и трихлоруксусной кислот из-за неблагоприятного воздействия кислой среды на ферментативную реакцию для обеспечения достаточной точности определения глюкозы необходимо вводить дополнительную стадию доведения pH реакционной смеси до значений 7,0-8,4.
Наиболее близким техническим решением к изобретению является способ депротеинизации цельной капиллярной крови с использованием в качестве осаждающего реактива 0,0037 М раствора уранилацетата, который практически не влияет на pH среды и не требует специального приготовления.
Однако данный метод не дает достаточно высокой точности при использовании глюкозооксидазно-пероксидазного определения глюкозы. Кроме того, уранилацетат является радиоактивным и труднодоступным реактивом, а точность определения глюкозы при его использовании существенно зависит от состава ферментативной системы.
Целью изобретения является повышение точности определения глюкозы.
Поставленная цель достигается способом депротеинизации цельной капиллярной крови при ферментативном определении глюкозы, включающим добавление осаждающего форменные элементы крови реактива и отделение осадка, при этом в качестве реактива используют 0,1-0,4 М перхлорат лития в физиологическом растворе.
Раствор перхлората лития не влияет на pH среды, устойчив в течение трех месяцев хранения при 4-8оС и в течение месяца при комнатной температуре, не обладает ингибирующим действием по отношению к ферментативным системам определения глюкозы, включая ферментативный реактив фирмы Lachema, Labsystems и используемый в отечественной клинической практике.
П р и м е р 1. Определение содержания глюкозы в сыворотках с известной концентрацией в присутствии депротеинирующего реактива.
К 20 мкл сыворотки, содержащей известную концентрацию глюкозы (5,2 мМ), приливают 200 мкл депротеинирующего реактива (0,2 М перхлорат лития в 0,9% -ном растворе NaCl либо 0,0037 М раствор уранилацетата, либо суспензию: 200 мкл 0,45% сульфат цинка в смеси с 40 мкл 0,1 M NaOH, либо 0,33 М раствор хлорной кислоты), затем перемешивают, суспензию центрифугируют при 15000 об/мин в течение 6 или 15-20 мин при 5000-6000 об/мин (осадок должен быть плотным). Затем к 100 мкл супернатанта добавляют 1000 мкл ферментного реактива, рекомендованного для отечественной клинической практики, состоящего из глюкозооксидазы 18 ед/мл, пероксидазы 1 ед/мл, 4-аминоантипирина 0,72 мМ, фенола 11 мМ, фосфатного буфера pH 7,0, перемешивают и инкубируют смесь при комнатной температуре в течение 40 мин. Одновременно таким же образом обрабатывают 10 мМ раствор глюкозы (эталон). После инкубации измеряют оптическую плотность А пробы и эталона против контрольного раствора и концентрацию глюкозы в пробе рассчитывают по формуле:
глюкоза мМ =
× 10 ..
глюкоза мМ =
Результаты приведены в табл.1.
Как видно из табл. 1, при определении глюкозы в контрольной сыворотке наиболее точные результаты получены при использовании в качестве депротеинирующего реактива перхлората лития.
П р и м е р 2. Оценка воспроизводимости определения глюкозы предлагаемым методом.
Определение содержания глюкозы ведут в одном эталонном растворе глюкозы с концентрацией 10 мМ (эталон приготовлен в 0,2%-ной бензойной кислоте из глюкозы, высушенной до постоянного веса при 37оС) ежедневно в течение 10 дней аналогично описанному в примере 1. По данным анализа рассчитывают среднее арифметическое 
, среднеквадратичное отклонение S и коэффициент вариации V. Результаты представлены в табл.2.
Как видно из табл.2, коэффициент вариации для перхлората лития не превышает 4%, в то время как для уранилацетата эта величина равна 8%, что свидетельствует о более высокой точности предлагаемого способа определения глюкозы.
П р и м е р 3. Определение содержания глюкозы в цельной капиллярной крови здоровых лиц и больных сахарным диабетом.
К 200 мкл депротеинирующего реактива (см. пример 1) добавляют 20 мкл цельной капиллярной крови (для определения глюкозы пробы крови берутся непосредственно из пальца), перемешивают и центрифугируют. Дальнейшее определение ведут аналогично описанному в примере 1. Результаты представлены в табл.3.
Как видно из табл. 3, величина доверительного интервала концентраций глюкозы при определении у здоровых лиц с помощью перхлората лития соответствует общепринятым нормам для глюкозооксидазного метода - 3,5-5,7 мМ. Для уранилацетата и хлорной кислоты определенное количество глюкозы соответственно достоверно занижает или превышает определяемую величину. Перхлорат лития правильно определяет содержание глюкозы и в крови больных сахарным диабетом (сравнение величин концентраций глюкозы, полученных при использовании перхлората лития и суспензии гидроксида цинка, показывает отсутствие достоверных различий).
П р и м е р 4. Определение содержания глюкозы в одной порции цельной крови различными глюкозооксидазно-пероксидазными методами.
Определение глюкозы ведут в одной порции цельной венозной крови, к которой для предотвращения свертывания добавляют 3,8%-ный раствор цитрата натрия (1 ч. раствора цитрата натрия и 9 ч. крови по объему), перемешивают. К 20 мкл крови добавляют 200 мкл раствора депротеинирующего реактива, перемешивают и центрифугируют. Далее определение глюкозы ведут аналогично описанному в примере 2. При этом в качестве ферментативной системы используют либо рекомендованную для отечественной клинической практики (см. пример 1), либо набор готовой аналитической формы фирмы Lachema, либо Labsystems. (Набор фирмы Lachema: глюкозооксидаза - 4 ед/мл, пероксидаза - 1 ед/мл, 4-аминоантипирин - 0,8 мМ, 4-хлор-3-крезол-0,6 мМ, буфер pH 8,4; набор фирмы Labsystems: глюкозооксидаза - 20 ед/мл, пероксидаза - 10 ед/мл, 4-аминоантипирин - 0,6 мМ, п-гидроксибензолсульфонат - 20 мМ, фосфатный буфер pH 7,0). Результаты представлены в табл.4.
Как видно из табл.4, перхлорат лития позволяет получать правильные результаты по определению глюкозы при использовании различных ферментативных методов.
П р и м е р 5. Выбор оптимального интервала концентраций перхлората лития.
Определение глюкозы ведут в одной порции цельной венозной крови аналогично описанному в примере 4, используя отечественный ферментативный набор реактивов (см. пример 1) и меняя концентрацию перхлората лития от 0,05 М до 1,0 М. Результаты представлены в табл.5.
Как видно из табл.5, оптимальный интервал концентраций перхлората лития составляет 0,1-0,4 М. При значениях ниже 0,1 М определяемые величины концентраций достоверно ниже (p<0,05) значений, определяемых в оптимальном интервале. При значениях выше 0,4 М наблюдается гемолиз эритроцитов (красное окрашивание), мешающий проведению анализа.
Claims (1)
- СПОСОБ ДЕПРОТЕИНИЗАЦИИ ЦЕЛЬНОЙ КАПИЛЛЯРНОЙ КРОВИ ПРИ ФЕРМЕНТАТИВНОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГЛЮКОЗЫ, включающий добавление осаждающего форменные элементы крови реактива и отделение осадка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, при использовании глюкозоксидазно-пероксидазного метода определения глюкозы в качестве реактива применяют 0,1 - 0,4 М перхлорат лития в физиологическом растворе.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4781548 RU2018836C1 (ru) | 1990-01-11 | 1990-01-11 | Способ депротеинизации цельной капиллярной крови при ферментативном определении глюкозы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4781548 RU2018836C1 (ru) | 1990-01-11 | 1990-01-11 | Способ депротеинизации цельной капиллярной крови при ферментативном определении глюкозы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018836C1 true RU2018836C1 (ru) | 1994-08-30 |
Family
ID=21491158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4781548 RU2018836C1 (ru) | 1990-01-11 | 1990-01-11 | Способ депротеинизации цельной капиллярной крови при ферментативном определении глюкозы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2018836C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2485515C1 (ru) * | 2011-10-31 | 2013-06-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Амурская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития Российской Федерации | Способ создания реагента для определения сахаров в присутствии редуцирующих веществ |
-
1990
- 1990-01-11 RU SU4781548 patent/RU2018836C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Инструкция по применению набора реактивов для определения глюкозы фирмы ЛаХеМа, ЧССР. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2485515C1 (ru) * | 2011-10-31 | 2013-06-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Амурская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития Российской Федерации | Способ создания реагента для определения сахаров в присутствии редуцирующих веществ |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Laurell et al. | An enzymatic fluorometric micromethod for the determination of glycerol | |
| Liu et al. | Specific spectrophotometry of ascorbic acid in serum or plasma by use of ascorbate oxidase. | |
| US4067775A (en) | Process and composition for determining the activity of creatinekinase-MB | |
| Klein et al. | A colorimetric assay for chemical heparin in plasma | |
| US4455371A (en) | Oxalate oxidase composition for assay of oxalate | |
| EP0215170B1 (en) | Single color reading method for determining fructosamine | |
| CN106367471B (zh) | 用于测定总胆固醇的试剂盒和方法 | |
| Fossati et al. | A step forward in enzymatic measurement of creatinine | |
| US3547586A (en) | Inorganic phosphate assay,and reagents therefor | |
| US4368262A (en) | Diagnostic test for the detection of cancer | |
| RU2018836C1 (ru) | Способ депротеинизации цельной капиллярной крови при ферментативном определении глюкозы | |
| Masayoshi et al. | A new enzymatic method to determine creatine | |
| US4237044A (en) | Antibodies against creatinekinase-M8 and process for the production thereof | |
| US4529708A (en) | Assay for the determination of creatinine | |
| Chung et al. | Effect of nitroblue tetrazolium concentration on the fructosamine assay for quantifying glycated protein. | |
| JPH0236182B2 (ru) | ||
| Baydanoff et al. | Non-enzymatic glycation of elastin | |
| US4095948A (en) | Determination of uric acid | |
| Peake et al. | Mechanism of platelet interference with measurement of lactate dehydrogenase activity in plasma. | |
| Ware et al. | Glucose in serum and cerebrospinal fluid by direct application of a glucose oxidase method | |
| Cattozzo et al. | Evaluation of determination of uric acid in serum and whole blood with the Reflotron. | |
| JP3674388B2 (ja) | アンモニアの測定方法 | |
| Levinson | Use of an enzymatic kit method for cholesterol, designed for continuous-flow instrumentation, with discrete bichromatic and centrifugal analyzers. | |
| JPH10337198A (ja) | 破骨細胞由来酸性ホスファターゼの測定方法 | |
| Nishikawa et al. | Kinetic measurement of guanine deaminase in serum with a centrifugal analyzer. |