SU1129235A1 - Реагент дл идентификации вибрионов - Google Patents
Реагент дл идентификации вибрионов Download PDFInfo
- Publication number
- SU1129235A1 SU1129235A1 SU823480625A SU3480625A SU1129235A1 SU 1129235 A1 SU1129235 A1 SU 1129235A1 SU 823480625 A SU823480625 A SU 823480625A SU 3480625 A SU3480625 A SU 3480625A SU 1129235 A1 SU1129235 A1 SU 1129235A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- paper
- reagent
- diagnostic
- indicator
- cholera
- Prior art date
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
РЕАГЕНТ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИБРИОНОВ, состо вший из высушенного бумажного носител , пропитанного смесью пленкообразующего стабилизатора и индикатора, отличающийс тем, что, с целью упрощени количественного определени холерных вибрионов, в качестве носител используют хроматографическую бумагу, которую пропитьшают средой, содержащей сахарозу, желатину и индикатор , вз тых в соотношении 8-10Z, 1-1,5% и 88,5-91%, при этом в качестве индикатора используют диагностическую сыворотку О, Огава, или Инаба, ипи дагагностический холерный фаг С или Эль Тор.
Description
1
Изобретение относитс к области медицинской микробиологии и может быть использовано дл лабораторной диагностики холеры.
Известен реагент дл идентификации вибрионов, состо щий из высушенного бумажного носител , пропитанного смесью пленкообразующего стабилизатора и индикатора .
Однако известный реагент позвол ет провести только качественный анализ и усложн ет его проведение.
Цель изобретени - упрощение колчественного определени холерных вибрионов.
Указанна цель достигаетс тем, что в реагенте дл идентис1)икации вибрионов, состо щем из высушенного бумажного носител , пропитанного смесью пленкообразующего стабилизатора и индикатора, в качестве носител используют хроматографическую бумагу, которую пропитывают средой, содержащей сахарозу, желатину и индкатор , вз тьк в соотношении 8-10%, 1-1,5% и 88,5-91%, при этом в качестве индикатора используют, диагностическую сыворотку О, Огава или Инаба, или диагностический холерный фаг С или Эль Тор.
Реагент приготовл етс следующим образпм.
Хроматографическую бумагу предварительно обрабатьшают сахарозо-желатинозной средой (8-10% и 1-1,5% соответственно ) . Растворы диагностических сывороток (в физиологическом растворе рН 7,2-7,4) и фагов (в защитной сахарозо-желатинозной среде) готов т с учетом получени конечных разведений при постановке реакций агглютинации и фаголизиса в титровании . Высушивание систем провод т лиофильно.
Пример 1. Дл приготовлени систем диагностических серологических в качестве носител используют стерильную хроматографическую бумагу 5 X 10 см, предварительно обработанную сахарозо-желатинозной средой (10% и 1% соответственно), в количестве 1 мл и подсушенную при 37+1®С в течение 40 мин. Подготовленные листы бумаги указанного размера пропитывают в кюветах двухкратными разведени ми (1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и т.д.) специфических холер ных сывороток О, Инаба, Огава в физиологическом растворе рН 7,2 в
92352
количестве 1,3 мл каждого разведени на лист. Количество вносимьк в бумагу сывороток рассчитывают с учетом получени титров антител, участвующих в реакции агглютинации (в соответствии с рекомендаци ми инструкции). Через 20 мин листы бумаги покрывают стабилизатором - пленкообразующим полимерным покрыQ тием - 1% поливиниловым спиртом в количестве 0,7 мл и спуст 20 мин помещают в морозильный шкаф при на сутки. Лиофилизацию провод т на прот жении 24 ч при остаточном давлении 100 мкм. Температура конденсатора . Начина с четвертого часа дл идентификации процесса ввод т дополнительный подогрев до температуры в камере 31°С. Повьшение температуры не должно превьш1ать 4 в час. После лиофилизации бумагу нарезают в виде дисков диаметром 1 см. Полученные указанным способом диски с холерными агглютинирующими сы- воротками используют дл постановки количественной реакции методом агглютинации .
В р д стерильных пробирок фломбированным пинцетом помещают по одному диску, содержащему по 0,02 мл сьгеоротки соответствующего разведеУИЯ (1:2, 1:4, 1:8 и т.д.). В пробирки с дисками заливают по 0,5 мл стерильного физиологического раство ра (рН 7,2) таким образом, чтобы
5 они были полностью погружены в жидкость . Пробирки выдерживают 30 мин В термостате дл наиболее полного элюировани антител в физиологический раствор. Таким образом,в элюирую щем растворе сыворотки развод т в 25 раз (1:50, 1:100, 1:200 и т.д.). Затем во все пробирки внос т по 0,5 мл одномиллиардной взвеси смыва суточной агаровой культуры исследуе5 мых штаммов (используют -два музейных . штамма холерных вибрионов V. cholerae № 145, серотип Инаба и V. cholerae № 1409, серотип Огава), т.е. сьшоротки развод т еще в 2 раза, полу0 ча конечные разведени 1:100, 1:200, 1:400 и т.д., до титра сьтороток. Пробирки встр хивают, став т на 2 ч в термостат при 37С и затем предварительно учитывают реакцию. Оконча5 тельный учет производ т через 18 ч вьщерживани пробирок при комнатной температуре по четырехкрестовой системе . 3 Результаты постановки реакции агглютинации с помощью бумажных,тестсистем серологических и классическим методом идентичны: через 2 ч наступает четка на 3-4 креста агглютинаци Vibrio cholerae № 145 с сьшоротками О и Инаба до их титра, а Vibrio cholerae № 1409 - с сыворотками О и Огава. Результаты количественного определени антител по белку (методом Лоури) представлены в табл. 1. Пример 2о Дл приготовлени систем диагностических фаговых стерильную хроматографическую бумагу 5 X 10 см обрабатывают сахарозо-же- латинозной средой (10% и 1,5% соответственно ) в количестве 1 мл, затем подсушивают в течение 40 мин при . Подготовленные листы бумаги пропитывают холерными диагностическими монофагами С (классическим) и Эль Тор в объеме 1,2 мл, исполь зу цельные и дес тикратные ( , 10, до рабочего титра ) разведениЯ в сахарозо-желатинозной среде (10% и 1,5% соответственно). 354 Через 20 мин листы бумаги покрывают стабилизатором - пленкообразующим полимерным покрытием - 1% поливиниловым спиртом в количестве О,7 мл и спуст 20 мин помещают в морозильный шкаф при на сутки. Лиофилизацию провод т на прот жении 24 ч при остаточном давлении 100-200 мкм. Температура конденсатора -40°, начина с четвертого часа дл интенсификации процесса ввод т дополнительHbiii подогрев до температуры в камере ,31°С. Повышение температуры не должно превьппать 4 в час. После лиофи1изации бумагу нарезают в виде дисков диаметром 1 см. Диски с холерными фагами используют при определении фагочувствительности двух музейных штаммов холерных вибрионов (vibrio cholerae № 1409 и Vibrio cholerae № 888). Сравнительна характеристика серологических (холерных О)диагности- ческих тест-систем в дисках, приготовленных по прототипу и предлагаемому способу приведены в табл. 1, Таблица
Сушка при +80С приводит к разрушению Данные приведены при сушке 37°С.
В две чашки. Петри разливают по 18-20 мл питательного щелочного агара рН 7,6. После застыйани и подсушивани агара в течение 30 мин при 37+l C дно чашек расчерчивают на квадраты по количеству используемых разведений диагностических фагов. На каждую из чащек нанос т слой 0,6% расплавленного и остуженного
дени х до ра-. бочего титра (срок наблюдени )
питательного агара рН 7,6 (5 мл), содержащего 0,2 мл взвеси смыва суточной агаровой или двухчасовой бульонной исследуемой культуры. Затем в каждую чашку на поверхность агара помещают диски, содержащие холерные фаги С (классический) и Эль Тор в разведени х. После подсушивани с приоткрытыми крышками иммуноглобулина (антитела) .
5 V 1
при комнатной температуре в течение 30 мин чашки инкубируют в термостате при 37+14.
Предварительный учет результатов реакции провод т через 4 ч, окончательный через 18 ч. Наличие ореола лизиса вокруг диска при четком вы влении газона культуры на чашке оценивают как положительный результат . Четкий лизис V. cholerae № 888 наблюдают через 4 ч инкубировани в термостате, а лизис V. cholerae
Способ приготовлени дисков
Прототип
10-V 10-3 Предлагаемый
Сушка при приводит к гибели фаговых частиц.
. Данные приведены при сушке Среда дл сохранени и выхода специфических антител и кор hycKyn фагов подобрана в onbfтах с применением различных кон k;eнтpaций сахарозы и желатина, растворенных в дистиллированной воде.
292356
№ 1409 через 18 ч. Результаты идентичны результатам при постановке реакции классическим методом и с помощью систем диагностических фаго5 вых. Количество живых фаговых частиц в дисках провер ют методом Грациа (табл. 2).
Сравнительна характеристика фаговых холерных Эль Тор диагностических тест-систем в дисках, приготовленных по прототипу и предлагаемому способу приведены в табл. 2.
Таблица 2
Срок хранени
0, 3 мес
0,8-10 1,5 года в рабочих
разведени х (срок наблюдени ) - Оптимальные результаты по всем использованным диагностическим препаратам получены со средой, содержащей 8- 10% сахарозы и 1,0-1,5% желатина. В табл. 3 приведены средние данные из 10 опытов достигаемого эффекта по отношению к прототипу.
п)
а
S
с ю
п) Н
9112923510
Предварительна пропитка хроматог-постановке реакций агглютинации и фарафической бумаги сахарозо-желатиноз-голизиса, Лиофильное высушивание и
ной средой обеспечивает наиболеепредварительна пропитка сахарозополный выход из диска специфическихжелатинозной средой предотвращает
антител и фаговых корпускул. 5гибель антител и фаговых корпускул
-Г;.и позвол ет сохран ть эти системы
:- Различное содер7 а|ше в системахв течение 1,5 лет дл фагов (срок
антител и фаговыз VapTHU позвол етнаблюдени ) и 2 лет дл сывороток
проводить количественный анализ при(срок наблюдени V.
Claims (1)
- РЕАГЕНТ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИВИБРИОНОВ, состоящий из высушенного бумажного носителя, пропитанного смесью пленкообразующего стабилизатора и индикатора, отличающийся тем, что, с целью упрощения количественного определения холерных вибрионов, в качестве носителя используют хроматографическую бумагу, которую пропитывают средой, содержашей сахарозу, желатину и индикатор, взятых в соотношении 8-10%, 1-1,5% и 88,5-91%, при этом в качестве индикатора используют диагностическую сыворотку О, Огава, или Инаба, или диагностический холерный фаг С или Эль Тор.ю кэ оо сл
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU823480625A SU1129235A1 (ru) | 1982-08-05 | 1982-08-05 | Реагент дл идентификации вибрионов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU823480625A SU1129235A1 (ru) | 1982-08-05 | 1982-08-05 | Реагент дл идентификации вибрионов |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1129235A1 true SU1129235A1 (ru) | 1984-12-15 |
Family
ID=21025709
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU823480625A SU1129235A1 (ru) | 1982-08-05 | 1982-08-05 | Реагент дл идентификации вибрионов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1129235A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115261337A (zh) * | 2022-07-29 | 2022-11-01 | 青岛润达生物科技有限公司 | 一种适用于弧菌噬菌体培养及筛选的培养基及方法 |
-
1982
- 1982-08-05 SU SU823480625A patent/SU1129235A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Г. Системы индикаторные бумажные дл идентификации вибрионов. ТУ 4214-123-78 (прототип). * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115261337A (zh) * | 2022-07-29 | 2022-11-01 | 青岛润达生物科技有限公司 | 一种适用于弧菌噬菌体培养及筛选的培养基及方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Advani et al. | Inactivation of Kell blood group antigens by 2‐aminoethylisothiouronium bromide | |
CA2190109C (en) | Compositions and methods for control of reactivity between diagnostic reagents and microorganisms | |
US4588680A (en) | Assay for viruses | |
Le Bouvier | The D→ C change in poliovirus particles | |
Hasegawa et al. | A MICROGRANULOCYTE CYTOTOXICITY TEST1 | |
JPH0782021B2 (ja) | リポ多糖類の非免疫化学的結合およびそのサンドイッチ法による分析方法 | |
CA1089339A (en) | Method of staining micro-organisms | |
SU1129235A1 (ru) | Реагент дл идентификации вибрионов | |
CA1231050A (en) | PROCEDURE FOR DETECTING .beta.-HEMOLYTIC STREPTOCOCCUS ANTIGENS | |
US4176174A (en) | Viral antibody diagnostic test system | |
EP0392865B1 (en) | Extraction procedure | |
US4126671A (en) | Method for detecting bovine leukemia viral infection | |
Lawn et al. | Antibody-stimulated increase in sex pili in R+ enterobacteria | |
Fong et al. | A combined dye exclusion (trypan blue) and fluorochromatic technique for the microdroplet lymphocytotoxicity test | |
RU2189253C1 (ru) | Диагностикум для идентификации escherichia coli o157 : h7 и способ его получения | |
AU671299B2 (en) | Detection of antigens and nucleic acids | |
RU2611359C1 (ru) | Способ и набор для определения продукции холерного токсина и дифференциации эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов классического и эльтор биоваров | |
Fife Jr et al. | Isolation and characterization of a serologically active exoantigen of Schistosoma mansoni cercariae | |
CN108241059B (zh) | 伏马毒素检测胶体金速测卡和试剂盒以及对伏马毒素进行检测的方法 | |
RU2737776C1 (ru) | Тест-комплект для выявления холерного токсина в среде культивирования | |
RU2012331C1 (ru) | Раствор для консервирования энзимированных эритроцитов, используемых в изосерологических реакциях | |
CN114624447B (zh) | 一种用于新型冠状病毒的检测试纸及其制备工艺 | |
JPS60224068A (ja) | 日和見感染における病原菌の判定方法 | |
US1816026A (en) | Process for preparing antigens | |
EP0097506A2 (en) | Method for diagnosis of mastitis using enzyme N-acetyl-beta-D-glucosaminidase and reaction systems for use in method |