SU1124228A1

SU1124228A1 - Method of determination of glucose in biological liquids

Info

Publication number: SU1124228A1
Application number: SU833571012A
Authority: SU
Inventors: Виктор Юзефович Домбровский; Виктор Павлович Панферов
Original assignee: Белорусский научно-исследовательский институт охраны материнства и детства
Priority date: 1983-01-10
Filing date: 1983-01-10
Publication date: 1984-11-15

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГгаОКОЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ путем фотометрического определени комплекса, образовавшегос при повьшенной температуре в реакщ и глюкозы с ортотолуидином в КИС.1ТОЙ среде, о т л и чающий .с тем, что, с целью повышени чувствительности способа, рН реакционной среды довод т до 3,253 ,35 путем добавлени к ортотолуидиновомУ реактиву водного раствора аммиака.A METHOD FOR DETERMINING GGAOZY IN BIOLOGICAL LIQUIDS by photometric determination of the complex formed at elevated temperatures in the reaction and glucose with orthotoluidine in an AIS1 THAT environment, with a view to improving the sensitivity of the process, the pH of the reaction medium is dilutable, the pH of the reaction medium is approx. 3.253, 35 by adding an aqueous ammonia solution to the orthotoluidine reagent.

Description

О)ABOUT)

сwith

toto

ю Yu

00 Изобретение относитс к биологии и медицине и может быть использовано при определении глюкозы в крови и других биологических жидкост х. Известен способ определени глюк зы в биологических жидкост х путем фотометрического определени комплекса глюкозы с сртотолуидином в кислой среде при повышенной температуре , по KotopOMy глюкозу в крови определ ют следующим образом: в пробирку наливают 0,9 мл 0,18 моль/л ( 3%) раствора трихлоруксусной кислоты вьщувают в нее 0,1 мл крови, перемешивают и центрифугируют, 0,5 мл центрифугата перенос т в другую про бирку, добавл ют 4,5 г-ш ортотолуиди нового реактива из набора дл определени глюкозы НПО Биохимреактив и помещают в кип щую водную баню на 8 мин, после чего охлаждают водо проводной водой до комнатной темпер туры. Оптическую плотность образова шегос цветного комплекса измер ют на фотоэлектроколориметре при оранж вом или красном светофильтре (590650 нм) в кювете с толщиной сло 10 мм против контрол на реактивы, который став т так же, как опытную пробу, но вместо крови берут 0,1 мл дистиллированной воды. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую став т так же, как опытную, -но вместо крови бе рут 0,1 мл эталонного раствора глюко-. зы,с известной концентрацией fl3Расчет ведут по формуле . . концентраци глюкозы в опытной-пробе, ммоль/л; концентраци глюкозы в эталонной пробе, ммоль/л; оптическа - плотность опытной пробы; оптическа плотность эталон ной пробы. Известный способ имеет недостаточ высокую чувствительность. Цель изобретени - повышение чувствительности способа. Указанна .цель дост1ггаетс тем, что согласно способу определени глюкозы в биологичес;сих. жидкост х путем фотометрического определени комплекса, образовавшегос при повышенной температуре в реакции глюкозы ортотолуидином в кислой среде, рН рев:,;-, .с шой среды довод т до 3,253 ,35 путем добавлени к ортотолуидиновому реактиву водного раствора аммиака. . Пример 1 (макровариант). В пробирку наливают 0,9 мл 0,18 моль/л раствора трихлоруксусной кислоты, выдувают в.нее 0,1 мл крови, перемеашвают и через 5 мин центрифугируют . 0,5 мл центрифугата перенос т в другую пробирку и добавл ют 4,5 мл модифицированного ортотолуидинового реактива, который готов т перед опытом смешиванием ортотолуидинового реактива из набора дл определени глюкозы НПО Биохимреак ив 25%-ным водным раствором аммиака (12:1 по объему). npo6Hpky помещают в кип щую вод ную баню на 8 мин, после чего охлаж;дают водопроводной водой до комнатнол температуры. Оптическую плотность образовавшегос цветного комплекса измер ют на фотоэлектроколориметре при оранжевом или красном светофильтре (590-650 нм) в Кювете с толщиной сло 10 мм Против контрол на реактивы, который став т так же, как опыт, но вместо крови берут дистиллированную воду. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую став т так же, как опытную, но вместо крови берут эталонный раствор с известной концентрацией глюкозы. Расчет ведут по формуле (1) . При Е,„ 0,120; 0,060; С, - 2,0 ммоль/л л. OJ20 , ,, , ° о ОбО ммоль/л. Аналогично определ ют содержание глюкозы,в сыворотке крови, спинномозговой жидкости и моче. Пример 2 (микровариант), В пробирку наливают О, 15 мл О, 18 ммоль/л раствора трихлоруксусной кислоты, выдувают в нее 0,01 мл крови, перемешивают и через 5 мин центрифугируют. 0,1-мл супернатанта перенос т в другую пробирку и. добавл ют 0,7 мл модифицированного ортотолуидинового реактива, который готов т перед опытом смешиванием ортстолуидинового реактива дл определени глюкозы из набора НПО Биохимреактив воднЬм раствором аммиака (12:1 по00 The invention relates to biology and medicine and can be used in the determination of glucose in blood and other biological fluids. The known method of determining glucose in biological fluids by photometric determination of the complex of glucose with srptoluidine in an acidic medium at elevated temperature, according to KotopOMy, blood glucose is determined as follows: 0.9 ml of 0.18 mol / l (3%) is poured into a test tube trichloroacetic acid solution is added into it with 0.1 ml of blood, stirred and centrifuged, 0.5 ml of centrifugate is transferred to another tube, 4.5 g-sh orthotoluidy and a new reagent from the glucose determination kit of NPO Biochemical are added and placed in kip water bath for 8 minutes, then cooled with tap water to room temperature. The optical density of the color complex formed was measured with a photoelectric colorimeter with an orange or red light filter (590650 nm) in a cuvette with a layer thickness of 10 mm against the control reagents, which were placed in the same way as an experimental sample, but 0.1 ml was taken instead of blood. distilled water. The amount of glucose in the test sample is calculated taking into account the optical density of the reference sample, which is set in the same way as the test sample, but taking 0.1 ml of the standard gluco solution instead of blood. PS, with a known concentration of fl3Calculation is carried out according to the formula. . concentration of glucose in the experimental sample, mmol / l; glucose concentration in the reference sample, mmol / l; Optical — density of the test sample; optical density of the reference sample. The known method has insufficient high sensitivity. The purpose of the invention is to increase the sensitivity of the method. This goal is achieved by the fact that according to the method of determining glucose in biologicals. liquids by photometric determination of the complex formed at elevated temperature in the reaction of glucose with orthotoluidine in an acidic medium, the pH of the roar:,; -,. high medium is adjusted to 3.253, 35 by adding an aqueous ammonia solution to the orthotoluidine reagent. . Example 1 (macrovariant). 0.9 ml of a 0.18 mol / l solution of trichloroacetic acid is poured into the tube, more than 0.1 ml of blood is blown out, mixed and centrifuged after 5 min. 0.5 ml of the centrifugate is transferred to another tube and 4.5 ml of the modified orthotoluidine reagent is added, which is prepared prior to the experiment by mixing the orthotoluidine reagent from the glucose test kit of the NPO Biochimotok in 25% aqueous ammonia solution (12: 1 by volume ). The npo6Hpky is placed in a boiling water bath for 8 minutes, then cooled and provided with tap water up to room temperature. The optical density of the color complex formed is measured with a photoelectric colorimeter with an orange or red light filter (590-650 nm) in a ditch with a layer thickness of 10 mm. Against the control for reagents, which are set in the same way as experience, distilled water is taken instead of blood. The amount of glucose in the test sample is calculated taking into account the optical density of the reference sample, which is set in the same way as the test sample, but a reference solution with a known glucose concentration is taken instead of blood. The calculation is carried out according to the formula (1). With Е, „0,120; 0.060; C, - 2.0 mmol / l. OJ20 ,, ,,, о о ОО mmol / l. The content of glucose, serum, cerebrospinal fluid and urine is determined in the same way. Example 2 (microvariant), About 15 ml of O, 18 mmol / l of trichloroacetic acid solution are poured into the test tube, 0.01 ml of blood is blown into it, mixed and centrifuged after 5 min. 0.1 ml of the supernatant is transferred to another tube and. 0.7 ml of modified orthotoluidine reagent is added, which is prepared prior to the experiment by mixing orthotoluidine reagent to determine glucose from the NGO Biochemical Reagent Kit with aqueous ammonia solution (12: 1 according to

33

) . Пробирку помещают в кип щую ьод иук:, банк, на 8 мин, после чего охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры. Оптическую плотность образовавшегос цветного комплекса измер ют на микроколориметре при красном светофильтре (615 нм) в кювете с толщиной сло 10 мм против коьТрол на-реактивы, который став т так же, как и опытную пробу, но вместо крови берут 0,01 мл дистиллированной воды.). The test tube is placed in a boiling water bath, bank, for 8 minutes, then cooled with tap water to room temperature. The optical density of the color complex formed is measured on a microcolorimeter with a red light filter (615 nm) in a cuvette with a layer thickness of 10 mm against co-rollers, which are set in the same way as the test sample, but 0.01 ml distilled water is taken instead of blood .

Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую став т так же, как опытную, но-вместо крови берут 0,01 мл эталонного раствора глюкозы с известной ее кон284The amount of glucose in the test sample is calculated taking into account the optical density of the reference sample, which is set in the same way as the test sample, but 0.01 ml of the reference glucose solution with its known concentration is taken instead of blood.

центрацией. Расчет ведетс по формуле (1) .centering. The calculation is carried out according to the formula (1).

При Едп 0,060; С„ 6 ммоль/л; ЕЗ 0,240With Ehp 0.060; C 6 mmol / l; EZ 0.240

„ 0,060 , . ,„0.060,. ,

о О ° - Аналогично определ ют содержание глюкозы в сыворотке крови, спинномозговой жидкости и моче.o o ° - The content of glucose in the serum, cerebrospinal fluid and urine is determined in a similar way.

Вли ние рН реакционной среды на величину оптической плотности подтверждаетс экспериментально при сследовании эталонных растворов глюкозы,с концентрацией 5,55 ммоль/л.The effect of the pH of the reaction medium on the value of optical density is confirmed experimentally by examining standard glucose solutions with a concentration of 5.55 mmol / l.

Предлагаемый способ позвол ет повысить чувствительность определени глюкозы в биологических жидкост х на 36-37%.The proposed method makes it possible to increase the sensitivity of the determination of glucose in biological fluids by 36-37%.

Claims

METHOD FOR DETERMINING GLUCOSE IN BIOLOGICAL LIQUIDS by photometric determination of a complex formed at elevated temperature in the reaction of glucose with ortotoluidine in an acidic medium, characterized in that, in order to increase the sensitivity of the method, the pH of the reaction medium is adjusted to 3.253.35 by adding water to the ortotoluidine reagent solution ammonia.

SU „„ 1124228