SU1111723A1 - Способ получени белкового гидролизата эритроцитарной массы - Google Patents

Abstract

1. СПОСОБ ПОГОЧЕНЙЯ БЕЛКОВОГО ГИДРОЛИЗАТА ЭРИТРОЦИТАРНОЙ МАССЫ , предусматривающий разрушение эритроцитов в воде при соотношении эритроцитарна  масса : вода, равном 1:1, гомогенизацию с последунщим ферментативным гидролизом, отличающийс  тем, что, с целью сокращени  длительности процесса, его упрощени , а также увеличени  содержани  незаменимых аминокислот в гидролизате , разрушение эритроцитов провод т путем кип чени  эритроцитарной массы, а после гомогенизации готов т 9-15%-ную взвесь эритроцитарной массы в воде и стерилизуют ее, затем осзпцествл ют ферментативный гидролиз путем вьфащивани  мутантного штамма Bacillus subtijis ВНИИгенетика-4 . i 2.Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с   тем, что стерилизацию СЛ провод т в режиме автоклавировани  при 0,6-0,8 атм в течение 20-30 мин. 3.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что ферментативный гидролиз осуществл ют при рН 8,0 8 ,5 и температуре 37 С в течение 65 - 72 ч.

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, в частности к промышленному получению белковых гидролизатов из различных отходов , содержащих белковое сырье. Ценным белковым сырьем  вл етс  компонент крови - эритроцитарна  мас са (осадок абортной и плацентарной сывороток), Белковые гидролизаты эритроцитарной массы наход т широкое применение дл  приготовлени  основы ,питательных сред, используемьк при культивировании микроорганизмов (вме то дорогосто щих компонентов) и дл  получени  отдельных аминокислот. Известен способ получени  белково го гидролизата путем ферментативного гидролиза очищенного белка из зритроцитарной массы - .убойного скота с помощью препарата протеаз из Actinomyces fradie 10, иммобилизованном на силикатных носител х СП. Однако этот способ не обеспечивает получени  гидролизата с достаточным содержанием незаменимых аминокис лот. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемо му эффекту  вл етс  способ получени  гидролизата эритроцитарной массы, предусматривающий разрушение эритроцитов в воде при соотношении эритроцитарна  масса:вода, равном 1:1, гомогенизацию с последующим ферментативным гидролизом. Способ заключает с  в том, что разрушают эритроциты путем гемолиза эритроцитарной массы водой в соотношении 1:1, выдел ют белок - обрабатывают ацетоном и сол  ной кислотой в соотношении эритроци- 40 тарна  масса:ацетон:сол на  кислота- 1 : 8:0, 008, провод т гомогенизацию при помощи мешалки, осаждают белок при помощи вакуум-фильтрации , отмывают осажденный белок ацето ном в соотношении белок:ацетон 1:1 сушат в термостате в течение 1 ч при 40 С, провод т гидролиз бел ка - приготавливают 2%-ный раствор белка, провод т ферментативный гидролиз культурой Actinomyces fradie при рН 8,0, температуре 37 С, продолжительности 72 ч С21. Однако известный .-способ характери зуетс  многостадийной предварительной очисткой эритроцитарной массы, необходимостью дополнительного приго товлени  питательной среды дл  выращиванн  Act. fradie, что усложн ет процесс, длительным вьфаисиванием гидролизующей культуры Act. fradie 5-7 сут, повьгшенным расходом реактивов , недостаточным содержанием незаменимых аминокислот в гидролизате. Цель изобретени  - упрощение и сокращение длительности процесса получени  белкового гидролизата эритроцитарной массы, а также увеличение содержани  незаменимых аминокислот в гидролизате. Поставленна  цель достигаетс  тем, что согласно способу получени  белнового гидролизата эритроцитарной массы, предусматривающему разрушение .эритроцитов в воде при соотношении эритроцитарна  масса:вода, равном 1:1, гомогенизацию с последующим ферментативным гидролизом, разрушение эритроцитов провод т путем кип чени  эритро1р1тарной массы, а после гомогенизации готов т 9 - 15%-ную взвесь эритроцитарной массы в воде и стери- ЛИЗуют ее, затем осуществл ют ферментатигный гидролиз путем вьфащивани  мутантного штамма Bacillus sabtilis ВНИИгенетика-4. При этом стерилизацию провод т в режиме автоклавировани  при 0,6 0 ,8 атм в течение 20-30 мин. Кроме того, ферментативный гидролиз осуществл ют при рН 8,0 - 8,5 и температуре 37°С в течение 65-72 ч. Штамм Bacillus subtilis ВНИИгенетика-4  вл етс  мутантом, полученным в результате генетико-селекционных методов работы из исходного штамма Вас. subtilis В-340. Штамм Вас. subtilis ВНШгенетика-4 хран.итс  в Центральном музее культур промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика под номером ЦМПМ В-2722. Культурально-морфологические свойства штамма Bacillus subtilis ВНИИгенетика-4 . Морфологи . Штамм Вас. subtilis ВНИИгенетика-4 представл ет собой грамположительную палочку, подвижную, со жгутиками, размером: длина 2 - 2,5jj , ширина 0,6 - 0,8 J. Образует споры: длина 1 - 1,5j(, ширина 0,6 - 0,9j4 . Культуральные и физиологические признаки. М со-пептонный агар (МПА). При инкубации в течение 48 ч (при температуре 35-40 С) образует колонии диаметром 2,5 - 3 мм круглой формы со слегка волнистым краем, желтовато-белого цвета. Поверхность гладка , матова . Посев штрихом на м со-пептонном агаре. При инкубации в течение 24 ч при 35-40 °С рост хороший, край волнистый , поверхность гладка , матова  просвечиваетс  на свет, цвет светложелтый . Посев уколом. Факультативный анаэроб . Рост на поверхности и по длине укола. М со-пептонный бульон. При инкубации в течение 24 ч при 35-40 °С без встр хивани  наблюдаетс  noNfyTHeHHe среды, на поверхности образуетс  пле ка, при встр хивании на качалке сильное помутнение среды. При сто нии образуетс  осадок. Агаризованна  среда Хоттингера. При инкубации в течение 24 ч при 3540 С образует колонии диаметром 3 мм круглой формы со слегка волнистым краем, желтовато-белого цвета. Поверх ность гладка , матова . Агаризованна  синтетическа  среда Спицайзена. При инкубации в течение А8 ч при 35-40 °С образует колонии диаметром 1,5-2 мм круглой формы, серого цвета. Поверхность морщиниста , матова . На ломтиках картофел . После инкубации в течение 24 ч при 35-40 °С рост обильный, цвет культуры серовато-белый . Пигмента при росте на картофеле не образует. Биохимические свойства. Желатину разжижает хорошо, послойно . Молоко пептонизирует и подщелачивает . Клетчатку не разрушает и не ус ваивает. Нитраты не восстанавливает. Крахмал гидролизует. Усваивает мальтозу , галактозу, сахарозу, глюкозу, фруктозу, глицерин, лактозу, арабино зу, маннит, рибозу. Не усваивает рам нозу, сорбозу, маннозу. Способ осуществл ют следутопшм образом . Эритроцитарную массу (осадок абор ной и плацентарной сьгеороток) развод т водой в соотношении 1:1, кип т т в течение 30 мин, сгустки гомогенизи руют при помощи мешалки. Из гомогена та готов т 9 - 15%-ную взвесь эритро цитарной массы в воде, затем стерилизуют ее в режиме автоклавировани  при 0,6-0,8атм в течение 20-30 мин. Готов т посевной материал гидролизующего агента - штамма Bacillus subtilis ВНИИгенетика-4 - путем выращивани  в МПБ в течение 18 ч. Взвесь эритроцитарной массы засевают 4 об.% полученного посевного материала штамма Bacillus subtilis ВНИИгенетика-4. Ферментативньй гидролиз осуществл ют в. колбах емкостью 250 мл в услот ВИЯХ перемешивани  при 37-40 °С, рН 8-8,5 в течение 65-72 ч. Пример 1. Юл эритроцитарной массы заливают равным объемом воды . Смесь кип т т в течений 30 мин. Сгустки гомогенизируют при помощи мешалки в течение 10 мин. Из гомогената готов т 15%-ную взвесь ритроци- тарной массы в воде и стерилизуют в режиме автоклавировани  при 0,8 атм 30 мин. Стерильную взвесь засевают гидролизуюЕцим агентом - 18-часовой культурой штамма Bacillus subtil-is ВНИИгенетика-4 - в количестве 4 об.%. Гидролиз провод т в колбах емкостью 250 мл при 37 С, рН 8-8,5 в течение 72 ч при посто нном перемешивании. В результате получе гидролизат с глубиной гидролиза 56%, имеющий характеристики , приведенные в таблице. Пример 2. Приготовление гомогената эритроцитарной массы то же, что и в примере 1. Отличие состоит в процентном содержании взвеси эритроцитарной массы и режиме ее стерилизации . Из гомогената готов т 9%-ную взвесь эритроцитарной массы в воде. Взвесь стерилизуют в режиме автоклавировани  при 0,6 атм в течение 20 мин. Приготовление посевного материала гидролизующего агента штамма Вас., subtilis 1 ВНИИгенетика-4 и ус-пови  ферментативного гидролиза те же, что и в примере 1. Отличие состоит в продолжительности ферментатинного гидролиза, который провод т в течение 65, ч. В результате получен гидролизат с глубиной гидролиза 52%. Предлагаемый способ по сравнению с известным имеет следующие преимущества: гидролиз эритроцитарной массы провод т путем культивировани  мутантного штамма Bacillus subtilis ВНШгенетика-4, примен   18-часовую культуру (по сравнению с 5-7 суточной культурой Act. fradie), при этом дл  выращивани  штамма Вас. subtilis ВНИИгенетика-4 не требуетс  дополнительных затрат на приготовление пита$ 11 тельной среды гидролиз осуществл ют непосредственно после стадии разрушени  эритроцитов, мину  сложный процесс вьщелени  белка, как это осуществл лось по известному способу. Предлагаемый способ по-звол ет не только удешевить, но и упростить процесс . Как следует из таблицы, при довольно высокой степени глубины гвдролиза , (до 56%) значительно увели36 чиваетс  выход свободных незаменимых аминокислот. Таким образом, предлагаемый способ позвол ет улучшить питательную ценность гидролизата эритроцитарной массы, что  вл етс  его основным качественным показателем и определ ет его применение как основы дл  приготовлени  питательных сред.

8

Продолжение таблицы

Пролин Серии Цистин Тирозин

5,2

2,1

Следы

48,1

Claims (4)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОГО ГИДРОЛИЗАТА ЭРИТРОЦИТАРНОЙ МАССЫ, предусматривающий разрушение эритроцитов в воде прй соотношении эритроцитарная масса : вода, равном

1:1, гомогенизацию с последующим ферментативным гидролизом, отличающийся тем, что, с целью сокращения длительности процесса, его упрощения, а также увеличения содержания незаменимых аминокислот в гидролизате, разрушение эритроцитов проводят путем кипячения эритроцитарной массы, а после гомогенизации готовят 9-15%-ную взвесь эритроцитарной массы в воде и стерилизуют ее, затем осуществляют ферментативный гидролиз путем выращивания мутантного штамма Bacillus subtiiis ВНИИгенетика-4.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что стерилизацию проводят в режиме автоклавирования при 0,6-0,8 атм в течение 20-30 мин.

3. Способ поп. 1, отличающийся тем, что ферментативный гидролиз осуществляют при pH 8,0 -

8,5 и температуре 37°С в течение

65 - 72 ч.

SU (in 1111723.