SU1093252A3 - Способ получени производных 7- @ 2-(2-аминотиазолил)-2-оксииминоацетамидо @ -3-цефем-4-карбоновых кислот или их фармацевтически приемлемых солей - Google Patents

Abstract

Способ получени  производных 7-.2-

Description

Изобретение относитс  к способу получени  новых антибиотиков цефало споринового р да, которые могут най применение в качестве антимикробных веществ в медицине. Известен способ получени  биолог чески активных производных (2-аминотиазолил )-2-оксииминоацетамид -2-низший алкил-З-цефем-4-карбоново КИСЛО7Ы ацилированием соответствующего 7-аминоцефалоспорина с защищен ной в виде сложного эфира карбоксигруппой 2-(2-аминотиазолил)-2-оксииминоуксусной кислотой или ее реакционноспособным производным с после дующим переводом сложноэфирной груп пы в карбоксильную группу и вьщелен ем целевого продукта в виде свободной кислоты или ее солиП J. Цель изобретени  - получение новых антибиотиков цефалоспоринового р да, расшир ющих арсенал средств воздействи  на живой организм. Цель достигаетс  способом получе ни  производных 7-С2-(2-аминотиазолил )-2- oкcииминoaцeтaмидo -3-цeфeм-4-кapбoнoвыx кислот формулы Т S N-rrC-CONH Л RilJH 5 в форме син-изомеров, когда R.,- водород или группа, защищающа  аминогруппу, така  как формил, водород, С -Сд-алкил, метил замещенный карбоксилом или этоксикарбонилом, этил, замещенный 1-3 атомами гал гена, Cj-алкенил, С -алкинил ИЛИCg-Cj-циклоалкил, или в форме анти-изомеров когда. R группа , защищающа  аминогруппу , така  как формил, метил, или их фармацевтически приемлемых со лей, таких как соль щелочного металла , соль щелочноземельного металла, соль аргинина или соль лизина, заклю чающимс  в том, что в соединении формулы ГТ TJ-jpC-CONH-r-f -j RiNH s COOR, где RX и R, vj имеют указанные значени , группа, защищающа  карбоксигруппу ,. така  как п-нитробензил, удал ют группу, защищающую карбокси .группу, щелочным гидролизом, гидрированием или обработкой ферментом, таким как эстераза, и вьщел ют целевой продукт в виде свободной кислоты или ее сложного эфира или ее фармацевтически приемлемой соли. Частична  структура формулы М -  СG-COД J п K.IJ/S используетс  дл  обозначени  обоих геометрических изомеров: If-Vc-cq1«-0-R2 S -с-соИ Кда S R2-0--K ГА) Геометри  формулы (S) обозначаетс  как син, а геометри  формулы (А) ак анти. Исход  из соотношени  структурной ктивности необходимо отметить, что ин-изомер соединени  формулы Т, ак антимикробнь й агент имеет тененцию к значительно большей активости , по сравнению с соответствуншщм нтиизомером с точки зрени  профилакической и терапевтической ценности. Тиазолилгруппа, характеризуема  астичной формулой Ril5H аходитс  в таутомерноМ равновесии тиазолинилгруппой формулы V C -Cg-алкил может представл ть coой остаток линейного или разветвленого алкана, содержащего 1-8 атомов глерода, такой как метКл, этил, про , изопропил, бутил, изобутил. ретбутил, пентил, неопентил, гексил , гептил или октил, предпочтитель но алкил, содержащий 1-4 атомов углерода . Сэ-алкенил может представл ть соб остаток линейного или разветвленного алкена, такой как аллил, 1-пропенил или изопропенил. Cj-алкинил может представл ть собой остаток алкина, такого как пропаргил или 1-пропинил, С5 С -циклоалкил может представл  собой циклопентил или циклогексил, предпочтительно циклогексил. Предпочтительными примерами этила замещенного 1-3 атомами галогена, мо гут быть 2-хлорэтил, 1,2-дихлЬрэтил или 2,2,2,-трифторэтил и т.д. Эстераза, котора  должна быть при менена при проведении энзиматическог гидролиза, может быть использована не только в очищенном состо нии, но также и в виде материала-сырца. В качестве микроорганизмов, обладающих эстеразной активностью, можно назвать микроорганизмы, принадлежащие к виду Bacillus, Corynebacterium Micrococcus, Flavovacterium, Salmone la, Staphylococcus, Vibrio, Microbac terium, Escherichia, Arthrobacter, Azotobacter, Alcaligens, Rhizobium, Brevibacterium, Kluyvera, Proteus, Sarcina, Pseudomonas, Xanthomonas, Protaminobacter, Comamonus, и им подобные микроорганизмы. Примерами указанных микроорганиз- мов  вл ютс : Bacellus, Sibtilis IAM-1069, IAM-1107, IAM-1214, Bacillus sphacricus IAM-1286, Corynebacte rium egui IAM-1308, Micrococcus varians IAM-1314, Flavobacterium rigens IAM-1238, Salmonella typhimirium IAM-1406, Staphylococcus epibetraidis IAM-1296, Microbacterium flavum IAM-1642, Alcaligens faecalis ATCC-8750, Arthrobacter Simplex ATCC-6946, Azotobacter vinelandii lAM-1078, Escherichia coli IAM-1101 Rhizobium japonicum IAM-0001, Vibrio metchnickovii IAM-1039, Brevibacterium helvolum IAM-1637, Protominobacter Alboflavum IAM-1040, Comamonas terrigena IFO-12685, Syrcina lutea IAM-1099, Pseudomonas schuylki liensis IAM-1055, Xanthomonas trifol ATCC-12287 и им подобные микроорганизмы . При проведении энзиматического гид ролиза эстераза может быть предпочти тельно использована в форме культивированной среды. В качестве культурной среды, могут быть применены питательные среды, включакнцие источники усваиваемого углерода и азота, и неорганические соли К предпочитаемым источникам углеро да относ тс , например, глюкоза, сукроза , лактоза, сахары, глицерин и крахмал. К предпочитаемым источникам азота относ тс , например, м сной экстракт пептон, клейковидна  мука, пшенична  мука, хлопкова  мука (из сем н), соева  мука, жидкость полученна  в результате насто  пшеницы , дрожжевой экстракт, гидролизат казеина и аминокислота, а также неорганический ) и органический азот, в виде солей аммони  (т.е. например , сульфата аммони , нитрата аммони , фосфата аммони  и т.д.), нитрата натри  и им подобных соединений. В случае необходимости минеральные соли, такие как карбонат кальци , фосфат натри  или фосфат кали , соли магни  и соли меди и различные витамины, также могут быть использованы . Необходима  величина водородного показател  рН культурной среды, температура культивировани  и врем  изме н ютс  в зависимости от вида микроорганизма , который предполагаетс  использовать. Требуема  величина водородного показател  обычно находитс  в диапазойе 5-8 рН, температура примерно 20 - 35°С, врем  культивировани  20-120 ч. Полученна  таким образом культивированна  .среда сама по себе и произведенный ее материал могут быть использованы дл  проведени  ферментного гидролиза в соответствии с данным способом. Под произведенным культивированной средой материалом подразумеваетс  любой продукт, характеризуемый эстеразной активностью и ПРОИЗВОДИК&1Й с помощью средств дл  увеличени  указанной эстеразной активности . Ферментный гидролиз проводитс  путем контактировани  соединени  формулы 1 1 с культивированной средой микроорганизмов или ими произведенным материалом, в водной среде, такой как вода или буферный раствор (например фосфатный буферный раствор, предпочтительно в присутствии поверхностноактивного агента. Таким образом, эта реакци  обычно проводитс  путем добавлени  соединени  формулы 11 в культивированную среду микроорганизмов или в ими прои веденный материал, наход щийс  в жид ком состо нии, например в верхний слой, фильтрат или энзимный раствор, либо Б раствор или суспензию культивированной среды или произведенного ею материала в водной среде. В некоторых случа х оказываетс  предпочтительным производить перемешивание ползгченной таким образом реакционной среды. Предпочитаема  величина водородно го показател  рН реакционной смеси, концентраци  субстратов, врем  реакции и температура могут измен тьс  в зависимости от характеристик культивированной среды или произведенног ею материала, или от используемого соединени  формулы П.Однако реакцио ные услови  предпочтительно должны выбиратьс  такими, чтобы величина во дородного показател  находилась в диапазоне 4-10 рН при 20-50°С, более предпочтительно, чтобы величина водо родного показател  находилась в диапазоне 6-8 рН при 25-35°С и в течение 1-100 ч. Концентраци  исходного соединени  формулы 11, котора  должно быть использовано в качестве субстрата в этой реакционной смеси, может находитьс  в диапазоне 0,1-100 мг на 1 мл, более предпочтительно 1-20 мг на 1 МП. Ниже представлены следующие данные испытаний некоторых .представительных соединений формулы Т. Противобактериальна  активность invitro. Определ ют с помощью метода, заключающегос  в применении 2-кратного разжижени  пластинки агара. Одну порцию,100-кратного разбавленного раствора выращенной в течение нрчи культуры каждого из штаммов, подверженньпс . исследованию в соевой среде Tryptlease, нанос т в виде полосы в центральную часть насто  агара, содержащего определенную концентрацию соединени , подвергаемого испытанию, и далее вьщерживают в инкубационных услови х при 37°С в течение 20 ч. Исследуемые соединени : (2-амино-4-тиазолил)-2-метокси иминoaцeтaмидoj-3-цeфeм-4-кapбoнoвa  кислота (сиЯ-изомер), (2-амино-4-тиазолил)-2-этоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер), (2-амино-4-тиазолш1)-2-п-пропоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер). Результаты испытаний представлены в табл.1. Таблица 1

Определение защитного эффекта против экспериментально вызванной инфекцни у мышей.

Самцов мьшей вида ICR в возрасте 4 недели, каждый весом 18,5-21,5 г

разбивают на группы по 100 мьшгей. Испытуемые бактерии, выращенные в течение ночи на соевом krape (Trypti .case) при 37 С, суспендируют в 5% муцине дл  получени  суспензии. соответствующее каждой исследуемой клетке. Мышам парентерально (внутрибрюшинно) ввод т 0,5 мл суспензии . Раствор, содержащий каждое исследуемое соединение, ввод т мьппам подкожно в различных дозировках, спус т  1 ч после заражени  их указанной суспензией. Величины ЕДсррассчитаны исход  из количества выживших мьппей дл  кажКультура , вьфащенна  в течение ночи.

100-кратное разбавление культуры, выращенной в течение ночи.

Обработка двум  раздельными дозами спуст  1 и 3 ч после заражени . Определение острой токсичности. Дес ть самцов крыс и дес ть самок крыс в возрасте 6 недель (вида JCh-SD) разбивают на группы. Исследуемое соединение подвергают растворе нию в дистиллированной воде и ввод т животным подкожно и внутривенно. Животных наблюдают спуст  7 дней. Летальна  дозировка ЬВуд рассчитана исход  из количества мертвых животных в соответствии с методикой, разработанной Letchf ieT.d-WiIIoxq;p . Исследуемое соединение 7-{2-(2-ам но-4-тиазолил)-2-метоксииминоацетами10

Таблица 2 52is дои из доз соединени  после четырех дней наблюдени . Исследуемое соединение: 1). 7-С2-(2-амино-4-тиазолил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер), 2) 7-С2-(2-амино-4-тиазоЬил)-2-мётоксииминоацетамидо -цефалоспоранова  кислота (син-изомер). Результаты испытаний представлены в табл.2. доЗ-З-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер). Результаты испытаний представлены в табл.3. Таблица 3 LD, мг/кг ол крысы Подкожно Внутривенно abaut 8000 8000 При профилактическом и/или терапевтическом применении активное соед нение формулы (1) используетс  в форме обычных фармацевтических препа ратов, которые содержат указанное соединение в виде активного инградие та, в смеси с формацевтически пригодными носител ми, такими как органический или неорганический твердый или ж дкий наполнитель, который  вл  етс  пригодньи дл  орального, парентерального или наружного применени  Фармацевтические формы могут быть тв дыми, например капсулы, таблетки, драже, мази, свечи, - или в жидкой форме, например раствор, суспензи , эмульси . В случае необходимости в указанные фармацевтические формы могут быть включены добавки, стабилизаторы , увлажн ющие или эмульгирующие агенты, наполнители и другие обы но используемые в таких случа х мате риалы . Дозировка соединений может измен тьс  и также зависит от возраста и состо ни  пациента, вида заболевани , его т жести, от вида активного соединени  формулы (1), которое должно быть применено и т.д., средн  единична  дозировка 50, 100, 250 и 500 мг активного соединени  формулы 1  вл етс  достаточной дл  лечени  заболеваний, вызванных патогенными бактери ми. В общем случае акти ное соединение формулы 1 может быть введено пациенту в диапазоне 1-100 м на кг живого веса, предпочтительно 5-50 мг/кг живого веса. П р и м е р 1. 1). К раствору 1.25 г син-изомера п-нитробензил (2-формамид-4-тиазолил )-2-м0т.оксииминоацетамидо -З-дефем-4-карбоксилата в 40 мл метанола и 50 мл тетрагидрофурана добавл ют 0,65 г 10% паллади  на угле и смесь каталитически гидрируют при комнатной температуре и атмосферном давлении 3,5 ч. После отделени  катализатора фильтрат выпаривают в вакууме, к остатку добавл ют 80 мл воды и рН смеси довод т до 7,5 раствором бикарбоната натри , затем нерастворимые отфильтровывают . Фильтрат промывают 50 мл этилацетата и в раствор добавл ют 100 мл этилацетата. После доведени  рН до 1,5 10%-ной сол ной кислоты этилацетатньй слой отдел ют. Оставшийс  водный слой два раза экстрагируют 80 мл этилацетата, экстракты соедин ют с этилацетатным слоем, промывают водным раствором хлорида натри , сушат сульфатом магни , выпаривают в вакууме и получают 0,60 г - син-изомера (2-формамид-4-тиазолил;-;г-метоксииминоацетамидоЦ-З-цефем-А-карбоновой кислоты с т.шт. 176-183 С ( разлож.). ИК 3250, 1780, 1690, 1660, 1550 см ЯМР - f ч/млн ( -Дб):3 ,63 (2H,d,;7 4 Гц), 3,93 (ЗН,5), 5,10(1Н, сЗ, а 5 Гц), 5,90 (1Н,  , , J 5,8 Гц), 6,53 (1Н, i , Гц), 7,47 (1Н, 5 ), 8,57 (1Н, S ), 9,70 (Ш, сЗ, J 8 Гц), 12,63 (1Н 5 ). о 2).1,1 г син-изомера п-нитробензил 7-С2-(2-формамид-1-тиазолил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата суспендируют в смеси 10 мл этанола и 15 мл воды. К суспензии при по капл м добавл ют в течение 10 мин 6 мл 1 н. водного раствора едкого кали  и перемешивают 10 мин. Полученньй раствор подкисл ют до рН 7,5 сол ной кислотой, промывают этилацетатом, рН довод т до 2,5 10%-ной сол ной кислотой, выпавшие кристаллы отфильтровывают и получают смесь 0,32 г син-изомера (2-формамидо-4-тиазолил ) -2-метоксии1«1ноацетамидо -3-цефем-4-карбоновой кислоты и 0,035 г син-изомера (2-амино-4-тиазолил )-2-метоксийминоацетамидо1-3-цефем-4 карбоновой кислоты. 3). 7.& г син-изомера п-нитробензил 7-(;2(2-амино-4-тиазолил-2-меток сииминоацетамид оЗ-З-цефем-4-карбоксиата суспендируют в смеси 60 мл этанола и 60 МП воды. К перемешиваемой суспензии по капл м при перемешивании и охлаждении льдом добавл ют в течение 10 мин 1 н. водный раствор дкого кали  ( мл) и перемешивают ще 15 мин при . рН полученного аствора довод т до 7 концентрированой сол ной кислотой, промывают тилацетатом и выпаривают до половиы объема в вакууме. рН концентрированого раствора довод т до 5,0 и хромаографируют на колонке с 80 мл макроористой неионной смолой Диайон НР-20 (изготовлена Митсубиси Кемикал Индастриз Лмтд), элюируют 5%-ным водным раствором изопропилового спирта. Фра ции, еодержаш,ие целевой продукт, собирают и довод т рН до 3,2 10%-ной сол ной кислотой. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, сушат и получают 2,3 г син-изомера 7-f2- (2-амино-4-тиазолш1)-2-метоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карбоновой кислоты. 4) 1 ,0 г паллади  на угле, смоченном водой (3 мл), добавл ют к раствору 2,3 г син-изомера 4-нитробе зил (2-амино-4-тиазолил-2-этоксинминоацетамидоЭ-З-цефем-4-карбоксилата в смеси 30 мл тетрагид рофурана, 15 мл метанола и 0,3 мл уксусной кислоты. Суспензию каталитически восстанавливают при комнатной температуре при атмосферном дав лении 2 ч. После удалени  катализатора фильтрованием фильтрат выпаривают в вакууме, к остатку добавл ют этилацетат и рН раствора довод т до 7,5 водным раствором бикарбоната натр Отфильтровывают нерастворимые, водный раствор отдел ют, промьшают эти ацетатом, рН довод т до 5,5 г и обрабатывают активированным углем. рН водного : раствора довод т до 3,2 г и осадок отфильтровывают, сушат и получают 0,6 г син-изомера 7-Г2-(2 амино-4-тиазолил)-2-этоксииминоацетамидо )-3-цефем-4-карбоново кислоты. ИК-9 1 $ с. 3500 3300, 3200, 1785, 1625, 1600 см:. ЯМР -с СДМСО -д,ч/млн) : 1,20 о(ЗН, -t , 3 7 Гц), 3,57 (2Н, m ), 4,08 (2Н, с ,3 7 Гц), 5,08 (1Н, d , 3 5 Гц), 5,83 (1Н,сЗа , 3 5 Гц и 8. Гц), 6,47 (1Н, т ), 6,73 (1Н, 5 ), 7,20 (2Н,т), 9,58 (1Н,d , 3 8 Гц). . 5). 1 МП уксусной кислоты и суспензию 2 г 10% паллади  на угле в 8 мл воды добавл ют к раствору .5,0 син-изомера 4-нитро-бензил (2-амино-4-тиазолил )-2 -изопропоксиими ацетамидо3-3-цефем-4-карбоксилата в 150 мл тетрагидрофурана и суспензию каталитически восстанавливают п комнатной температуре и атмосферном давлении. После отделени  катализатора- фильтрат выпаривают в вакууме. К остатку добавл ют 80 мл этилацетата , рН довод т до 7,5 раствором бикарбоната натри . Органический слой отдел ют и экстрагируют, водным раствором бикарбоната натри . Экстракт и водньй слой соедин ют, рН довод т до 3 концентрированной сол ной кислотой и экстрагируют тетрагидрофураном . Экстракт промывают насыщенным раствором хлйркда натри , сушат сульфатом магни , вьшаривают в вакууме. Выпавшие кристаллы отфильтровывают , сушат и получают 0,8 г син-изомера 7-{.2-(2-амино-4-тиазолил)-2-изопропоксииминоацетамйдоЗ-З-цефем-4-карбоновой кислоты. т:: : 3320, 1780, 1670, 1635 см . ЯМР - о ч/млн (ДМСО-д,): 1,20 (6Н, d , :) 6 Гц), 3,55 (, № ),1 4,30 (1Н, CV , J 6 Гц), 5,08 TlHTi J 5 Гц), 5,82 (1H,dd , 5 Гц . , ,,.,„, и 8 Гц), 6,45 (1Н, m ), 6,68 (1Н, 5 ); 7,10 (2Н,т), 10,08 (1Н, ,с1 , D 8 Гц) . 6). 5,0 г син-изомера 4-нитробензил 7-Г2-(2-амино-4-тиазолил)-2-пропоксииьданоацетамь1До}-3-цефем-4-карбоксилата обрабатывают как в примере .1 (5) и получают 0,9 г син-изомера (2-амино-4-тиазолил-2-пропоксииминоацётамидрЗ-3-цефем-4-карбоноврй кислоты. : 3250, 1770, 1650, 1660, 1620 см-1. ЯМР сА ч/млн (ДМСО-Де): 0,93 (ЗН, , J 7 Гц), 1,67 (2Н, секстет, :) 7 Гц), 3,60, (2Н, m ), 4,03 (2Н,Ч , 3 7 Гц), 5,13 (1Н, J , 3 5Гц), 5,83 (1н, cJd, ::Г 5 Гц и 8 Гц), 6,48 (2Н, . , 3 4 Гц), 6,70 (1Н, 5 ), 7,18 (2Н, тт ),9,53 , (1Н, , Л 8 Гц). 7). Смесь 34,5 г син-изомера 4-нитробензил (2-формамидотиазол-4-ил )-2-бутоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоксилата , 345 мл тетрагидрофурана , 14 г 10 паллади  на угле, 140 мл метанола, 2,5 мл уксусной кислоты и 50 мл воды каталитически восстанавливают при атмосферном давлении и комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь фильтруют и промывают т трагндрофураном. Фильтрат выпаривают в вакууме, остаток раствор ют в смеси.этилацетата и раствора бикарбоната натри . Нерастворимые отфильтровывают, этилацетатный слой отдел ют и экстрагируют водным раствором бикарбоната натри . Водный слой и водный экстракт соедин ют. Водный раствор промывают этилацетйтом и диэтиловым спирэфиром, рН раст вора довод т до 2,0-10%-ной сол ной кислотой и перемешивают 30 мин. Осадак отфильтровывают, промьшают водой сушат сульфатом магни  и получают 18,3 г син-изомера 7-|2-(2-формамидтиазол-4-ил )-2-бутоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК 3330, 3040, 1780. 1725 1695, 1655 см. ЯМР сА (ДМСр - д,, ч/млн): 0,90 (ЗН, t, I 7 Гц); 1,1-1,9 (4Н, т); 3,58 (2Н, d, I 5 Гц); 4,12 (2Н, t, Гц); 5,63 (1Н, d, Гц); 5.86(1Н, dd, I 7 5 Гц и 8 Гц); 6,46 1Н, t, I 4 Гц); 7,40 (1Н, S) 8,50 (1Н, .S); 9,63 (1Н, d, I 8 Гц) 12,57 (1Н, широкий S). 8). 14,2 г син-изомера 4-нитробензил 7-С2-(2-формамидтиазол-4-ил)-2- изобутоксииминоацетамидо -3-цефем -4-карбоксш1ата, 5,7 г 10% паллади  на угле, 57 мл метанола, 142 мл тетрагидрофурана , 1 мл уксусной кислоты и 10 мл воды обрабатывают по примеру 1 (7) и получают 4,25 г син-изомера (2-формамидотиазол-4-Ш1 )-2-изобутрксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК 3260, 1790, 1725, 1670 см--. ЯМР - сЛ (ДМСО - д): 0,92 (6СН, d, I 6 Гц); 1,6-2,3 (1Н, т); 3,61 (2Н, d, I 4 Гц); 3,91 (2Н, d, I 6 Гц); 5,14 (1Н, d, I 5 Гц); 5,88 (1Н, dd, I 5 Гц и 8 Гц); 6,50 (1Н, t, I 5 Гц); 7,40 (1Н, S); 8,56 (1Н, S); 9,64 (1Н, d, 1 8 Гц). 9). 2,0 г син-изомера 4-нитробензил (2-формамидотиазол-4-нл )-2 -циклогексилоксинминоацетамидЪ -3-цефем-4-карбоксШ1ата, 0,8 г 10% паллади  на угле, 8 мл метанола, 20 мл тетрагндрофурана, 0,14 мл ук|сусной кислоты и 1,4 мл воды обрабатывают по примеру 1 (7) и получают 0,77 г син-изомера 7-t2-(2-фopмамидотиазол-4-ил )-2-циклогексш1оксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК 3275, 3070, 1780, 1675 см-. ЯМР - (И (ДМСО - Р4, ч /млн) :; 0,82 ,2 (ЮН, м); 3,62 (2Н, широкий S); 4,12 (Ш, ш); 5,13 (1Н, d, 1 5Гц); 5.87(1Н, dd, I 9 Гц и 5 Гц); 6,47 (1Н, широкий S); 7,37 (1Н, S); 8,50 ( 1Н, S); 9,58 (1Н, d, I 9 Гц); 12,61 (1Н, широкий S). 10). Суспензию 4., 2 г антиизомера 4-нитробензнп 7-С2-(2-формамидтиазол-4-йл )-2-метоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карб рксилата , 1,7 г 10% паллади  на угле, 0,63 мл уксусной кислоты, 6,3 мл воды, 42 мл метанола и 84 мл тетрагидрофурана каталитически восстанавливают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 2 ч. После удалени  катализатора фильтрованием фильтрат вьшаривают до объема около 15 мл. в вакууме. К концентрированному раствору добавл ют 30 мл воды и 50 мл этилацетата, рН раствора довод т до 8,0 биакарбонатом натри  при перемешивании. Нерастврримые отфильтровывают, водный слой отдел ют и промывают 50 мл зтил ацетата. Раствор обрабатывают акти- -. вированным углем, рН довод т до 2,2 10%-ной сол ной кислотой при охлаждении льдом. Осадок отфильтровывают, промывают водой и получают 2,52 г антиизомера (2-формамидтиаз,ол-4-Ш1 ) -2-метоксииминоацетамидо 1-3-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК 3300 (широкий) 1780, 1630, 1670, 1550 см. ЯМР (ДМСО - Д, ч/млн): 3,63 (2Н, широкий S); 4,09 (ЗН, S); 5,15 (1Н, d, I 5 Гц); 5,87. (1Н, dd, I 5 Гц и 8 Гц); 6,55.(1Н, t, I 4 Гц); 8,09 (1Н, S); 8,52 (Ш, S); 9,46 (1Н, d, I 8 Гц). 11) 8 г син-изомера 4-нитробензил (2-формамидотиазол-4-ил)-2-пентилоксииминоацетамидо -3-цефем -4-карбоксилата, 3,6 г 10% паллади  на угле, 36 мл метанола, 90 мл тетрагидрофурана , 0,63 г уксусной кислоты и 6,3 мл воды обрабатывают по примеру 1 (7) и получают 3,4 г син-изомера (2-формамидотиазолг4-ил ) -2-пентилоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбон«вой кислоты. ИК 3275, 3075, 1795, 1700, 1660, 1630 см-г ЯМР -еЛ (ДМСО - д,, ч/млн): 0,62 ,0 (9Н, т); 3,60 (2Н, d, 1 4 Гц; 4,12 (2Н, t, I 6 Гц); 5,14 (1Н, d, I 5 Гц); 5,87 (Ш, dd, I . , 5,9Гц);6,49(1н, t, I 3 Гц); 7,40 (1Н, S); 8,53 (1Н, S); 9,64 (1Н, d, Гц); 12,68 (1Н, §). 12). 2,52 г син-изомера 4-нитробензил 7-12-(2-формамидтиазол-4-ил) 2-этоксикарбонилметоксииминоацетамид 1-3-цефем-4-карбоксилата , 1 ,-3 г 10% паллади  на угле, 13 мл этанола, 25 мл тетраг-идрофурана, 0,22 мл уксусной кислоты и 2,2 мл воды обрабатывают по примеру 1 (7) и получают 0,4 г син-изомера 7-Г2-(2-формамидотиазол-4-ил )-2-этоксйкарбонилметоксииминоацетамидоЗ 3-цефем-4-карбонсвой кислоты.

ИК 3250, 3060, 1780, 1750, 1690, 1600 смЧ

ЯМР -«(ДМСО - д., ч/млн): 1,23 (ЗН, t, I 7 Гц); 3,61 (2Н, широкий S); 4,15 (2Н, q, I 7 Гц); А,73 (2Н, S); 5,13 (1Н, d, I 5 Гц); 5,87 (Ш, dd, I 5 Гц и 9 Гц); 6,48 (1Н, широкий S); 7,43 (1Н, S); 8,50 (Ш, S); 9,62 (1Н, d, I 9 Гц); 12,58 (1Н, S).

13). Предкультурна  среда: бульон триптиказа con (BBL). основна  культуральна  среда, г: Глицерин Пептон Кукурузна  барда Сухие дрожжи Карбонат натри  КН.РО NajHPO - 12Н20 Указанные компоненты раствор ют в воде так, чтобы общий объем составит 100 МП и рН довод т до 7,2. Основ ной культуральный бульон (100 мл) помещают в колбу Сакагуси на 500 мл 35 и стерилизуют при 120fС в течение 20 мин. В эту среду инокулируют культуральный бульон (1 мл) каждого из микроорганизмов, которые выращивают в прекультуральной среде соответственно и затем встр хивают 48 ч при 30®С. Реакци : в 1 мл указанного культурального бульона добавл ют О,1 г субстрата, суспендированного в О,1 М

фосфатном буфере (1 мл, рН 7,2) затем смесь встр хивают при 30°С в течение 48 ч.

По окончании реакции с целью идентификации выращенного продукта реакционную смесь хроматографируют на целлюлозе Истмен хроматограм 6065-при комнатной температуре. В качестве про вл ющего реагента примен ют (А и Б соответственно) верхний 5S слой смеси бутанола, этанола и воды (4:1:5 по объему) и смесь пропанола и воды (7:3 по объему). Величину R f

определ ют по индексу противомикробного действи  против чувствительного штамма.

В результат при работе на целлюлозе Истмен хроматограм 6075 наблюдают только одно п тно, показывающее каждый из продуктов Т (син-изомер 7Г- (2-формамидо-4-тиазолил)-2-ме-- токсииминоацетамидоЗ-3-цЁфем-4-карбонова  кислота) и II (син-изомер 7-С2- (2-амино-4-тиазолш1)-2-метокси-. иминоацетамидо.З-З-цефем-4-карбонова  кислота), без обнаружени  п тен дл  каждого из субстратов 1 (син-изомер 4-нитробензил (формамидо-4-тиазолил ) -2-метоксииминоацетамид6 ,j-3-цефем-4-карбоксш1ат ) и 11 (синизомер 4-нитробензил 7- 2-амино-4-тиазолил )-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксш1ат ). Величина Rf показана в табл. 4. .

Таблица 4 сме дис ма зул

50

Bacillus subtilis lAM 1069

75 75 75 85 sphaericus lAM 1286 subtilis lAM 1107

subtilis IAN 1214 Corynebacteriumequi lAM 1038 95 Micrococcus varians lAM 1314 70 Elavobacteruim rigens Продукт, полученный в реакционной си, анализируют методом бумажных ков с помощью чувствительного штамEscheriehia coli ES „ (культура: С, 16 ч), выход рассчитывают. Реьтаты приведены в табл.5. Таблица 5 1710 Продолжение табл. 5 lAM 1238 85 90 Salmonela typhimurium 1Ш 1406 90 20 Staphylococcus epidermides lAM 129690 95 Microbacterium flaomu о lAM 1642 90 95 Ниже привод тс  примеры фармацевтических композиций, полученных в соответствии с изобретением и содержащих в качестве активного вещества син-изомер 7- 2 аМино-4-тиазолш1)-2-метоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоновую кислоту (соединение А). П р и м е р 2. 1). 1,04 бикарбоната натри  добавл ют к раствору 2,6 г син-изомера хлоргидрата (2-амино-4-тиазолш1)-2-метоксииминоацетам1адоЗ-3-цефем-4-карбоноврй кислоты в 100 мл воды при охлаждеНИИ льдом и раствор перемешивают при комнатной температуре. Полученный раствор лиофнпизируют и получают син-изомер (2-амино-4-тиазолил) -2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата натри . ИК 3100, 1760, 1650, 1590 1530 см- ЯМР - сЛ ч/млн: (ДаО): 3,60 (2Н, широкий q); 4,00 (ЗН S); 5,22 (1Н, d); 5,88 (1Н, d); 6,35 (1Н, q); 7,03 (1Н, S). 2). 5 г син-изомера (2-амино -4-тиазолил) -2-мётоксииминоацетамид -З-цефем-4-карбоНовой кислоты посте- пенно добавл ют к 30 мл водного раствора 1,04 г бикарбоната натри  при 35-40 С и перемешивают при 50-53 0 30 мин. После удалени  нерастворимых веществ из полученного раствора фильт рат обрабатывают 0,3 г активированного УГЛЯ и фильтруют. Фильтрат лиофилизируют и получают 4,2 г син-изомера (2-амино-4-тиазолил)-2-метоксиимйноацетамидоЗ 3-цефем-4-карбоксилата натри . ИК 3300-3100, 1760, 1.670, Т595, 1530 . 2 ЯМР- Гч/ипн (DMSO - д): 3,50 (2H, широкий S); 3,83 (3H, S); 5,00 (1H, d, I, 5 Гц); .5,68 (1H, dd, I 5 Гц, 8 Гц); 6,13 (1Н, широкий S); 6,73 (1Н, S): 7,3 (2Н, широкий S); 9,60 (р, d, S 8 Гц). 3). 1,15 г син-изомера 7 -{2-(2-аминотиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоновой кислоты добавл ют к водному раствору 0,111 г гидроокиси кальци  в 100 мл воды и раствор перемешивают при комнатной температуре 10 мин. После фильтрации фильтрат лиофилизуют и получают 1,2 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата кальци . ИК -VM.T: 3350,. 1760, 1670, 1590, 1535, 1465 CMi ЯМР -сГ ч/млн. (fljO): 3,51 (1H;d, I 5 Гц); 3,59 (1Н, d, I 3 Гц); 3,97 (ЗН, S); 5,15 (1Н, d, I 5Гц); 5,82 (1Н, d, I 5 Гц); 6, 33 (1Н, dd, Гц, 3 Гц); 6,95 (1Н, S). 4) 1,15 г син-изомера 7-t2-(2-aминотиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоновой кислоты добавл ют к суспензии 0,088 г гидроокиси магни  в 100 мл воды и смесь перемешивают при 70С 30 мин и получают раствор. После его фильтрации фил)Трат лиофилизуют и получают 1,1 г син-изомера (2-амино-тиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карбоксилата магни . ИК 3350, 1760, 1660, 1610, 1530, 1460 см ЯМР -cfч/млн. (fljO): 3,53 (1Н, d, Гц); 3,59 (1Н, d, I 3 Гц); 3,96 (ЗН,. S): 5,16 (1Н, d, I 5 Гц); 5,84 (1Н, d, I 5 Гц); 6,32 (1Н, dd, I 5 Гц, 3 Гц): 7,98 (1Н, S). 5). 1,15 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоновой кислоты добавл ют к раствору 0,523 г аргинина в 50 мл воды и раствор перемешивают при коМнатной температуре 10 мин. Смесь отфильтровывают, фильтрат лиофилизуют и получают 1,35 г син-изомера аргининовой соли (2-аминотиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК , 3150, 1770, 1650 (широкий), 1580, 530, 1460 см. ЯМР -cA(fljO), ч/млн.): 1,4-2,1 (4Н, га); 3,22 (2Н, t, I 6 Гц): 3,55 (1Н, d, I 6 Гц); 3,65 (1Н, d, Гц); 3,82 (1Н, d, I 6 Гц); 3,97 (ЗН, S); 5,18 (1Н, d, I 5 Гц); 5,85 (Ш, d, I 5 Гц); 6,33 (1Н, dd. I 6 Гц, 3 Гц); 7,00 (1Н, S). 6). 1,21 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата натри  добавл ют к раствору 0,55 г хлоргидрата лизина в 12 мл воды. Раствор лио филизуют и получают 1,6 г син-изомера лизиновой соли (2-аминотиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидо -цефем-4-карбоновой кислоты. ИК -Умакс 350, 3150, 1770, 1600 (широкий, 1530, 1460 смЧ ЯМР -сА(Д..,0), ч/млн.): 1,3-2,1 (6Н, т); 3,03 (2Н, t, 1 7 Гц); 3,54 (1Н, d, I 5 Гц); 3,64 (1Н, d, I 3 Гц); 3,80 (1Н, d, Гц); 3,97 (ЗН, S); 5,17 (Ш, d, 1 5 Гц); 5,84 (1Н, d, I 5 Гц); 6,32 (Ш, dd I 5 Гц и 3 Гц); 6,99 (Ш, S) . 7). 20%-ный водный раствор едкого натри  добавл ют к суспензии 15 г син-изомера 7-С2-(2-аминотиазол-4-ил )-2-метоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоновой кислоты в смеси 8 м этанола и 8 мл вода при комнатной температуре дл  создани  рН раствора 7,5. После фильтровани  и промывки фильтрат и промывки соедин ют (в них содержитс  18,3 мл воды) и к ним добавл ют по капл м 46 мл этанола при 20-25 С при перемешивании, которое продолжают при такой же температуре 30 мин. К смеси добавл ют 28 мл этанола по капл м в течение 30 мин и пе , ремешивают при такой же температуре 30 мин..Осадок отфильтровывают, промывают- 20 мл этанола, сушат в вакууме при комнатной температуре и полу|Чают 13,5 г пластинок син-изомера ди гидрата 7-t2f(2-aминoтиaзoл-4-ил)-2-метоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоксилата натри  с т.пл. 260 С . (разлож). ИК 3430, 3260, 1760. (плечо ), 1745, 1650, 1630 (плечо), 1590, 1540 см 8). 15 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил ) -2-метоксиимйноацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоксилата натри  в 13 мл воды при 35раствор ют 45 С при перемешивании. К перемешиваемому раствору по капл м добавл ют 52 мл теплового (30 С) этанола и при этой температуре перемешивают 5 мин. 109 20 а затем при комнатной температуре еще 2ч. Осадок отфильтровывают промывают этанолом, сушат в вакууме   получают 13,45 г син-изомера дигид- рата 7-С2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоксилата натри  в виде пластинок . 9). 4 н. раствор едкого натри  в воде осторожно по капл м добавл ют к перемешиваемой суспензии 52 г синизомера (2-аминотиаз0л-4-ил)-2-метоксиИминоацетамидо1-3-цефем-4 У -карбоновой кислоты в 100 мл воды ниже дл  подщелачивани  раствора до рН 7,0-7,5. 11о.сле фильтровани  и промьшки соединенный фильтрат и промывки (200 мл) по капл м добавл ют к 2 мл этанола при перемешивании в течение 30 мин, затем перемешивают при комнатной температуре , 15 мин и при 1 1. Осадок отфильтровывают промьгоают 200 мл этанола, сушат в вакууме при и получают 46,3 г син-изомера аморфного 7-f2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилота натри , ИК -. 3400, 3309, 3170, 1750, 1650, 1580 смЧ 10). Суспензию 10 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо О-З-цефем-4-карбоксилата натри  в 250 мл метанола обрабатьтают ультразвуковым прибором и получают прозрачный раствор.Остаивают при комнатной температуре, затем перемепшвают при той же температуре 3ч. Осадок отфильтровьшают и промьтают метанолом, ползгчают аморфный син-изомер 7.(2-аминотиазол-4-ил -2-метоксииминоацетамидо}-З-цефем-4-карбоксилата натри . 11). Кристаллы, полученные в примере 2 (7), сушат над в вакууме в течение 1 дн  при комнатной тем- пературе и получают другие пластинки син-изомера (2-аминотиазол-4-Ш1 )-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата натри . 12). Лиофилизованный препарат дл  инъекций. 20 г натриевой соли соединени  А раствор ют в 200 мл воды и по 5 мл раствора .заполн ют в пузырьки на 10 мл. Эти пузырьки замораживают и сушат в вакузт е (лиофилизаци ). 21 13). Суспензи  дл  инъекций. Соединение А 25 г Метилце плюлоза 0,5 г Метил 4 оксобензоат 0,1 г Полисольват 80 0,1 г Хлоргидрат лидокаина 0,5 г Вода дл  инъекций До 100 мл Эта водна  суспензи  пригодна дл внутримышечных инъекций. 14), Таблетки Соединение А 500 мг Лактоза375,5 мг Оксипропилцеллюлоза2 мг Стеарат 1 агни  22,5 мг. Из такой смеси изготовл ют табле ку дл  перорального введени  при лечении инфекционных заболеваний, вызванных патогенными бактери ми-. 15). Капсулы Соединение А 500 мг Стеарат магни  10 мг Из такой смеси изготовл ют капск лу дл  перорального введени  при ле чении инфекционных заболеваний, вызванных патогенными бактери ми. Пример 3. 1). (2-Аминотиазол-4-ил )-2-п -бутоксииминоаце амидо -3-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер). 3320, 1775, 1660 смЛ ЯMPc(ДMCO-d , ч/млн.): 0,88 (ЗН t, I 7 Гц); 1,1 1,9 (4Н, т); 3,5 ( 2Н, широкий S); 4,05 (2Н, t, I 7 Гц); 5,08 (1Н, d, I 5 Гц); 5,80 (1Н, dd, I 5 Гц, 8 Гц); 6,44 (1Н, широкий S); 7,18 (2Н, S); 9,51 (1Н, d, I 8 Гц). 2). (2-Аминогиазол-4-ил)-2-изо-бутоксииминоацетамидоЗ-3-цефем -4-карбонова  кислота (син-изомер). 3330, 1780, 1665, 1630 1545 см-ч. ЯМР t(mCO-d(,, ч/млн.): 0,89 (6Н d, I 7 Гц); 1,6 ,2 (1Н, т); 3,58 (2Н, широкий S); 3,84 (2Н, d 1-7 Гц); 5,10 (1Н, d, I 5 Гц); 5,82 (1Н, dd, I « 5 Гц, 9 Гц); 6,46 (Ш, широкий S); 6,68 (1Н; S); 7,20 (2Н, S); 9,53 (1Н, d, I 9 Гц). 3). 7-С2-(2-Аминотиазол-4-ил)-2-циклогексилоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбонова  кислота (синизсмер ). ИК/мркс 3350, Г775, 1665, 1620, 1540 см- ЯМР cA(flMCO-d, ч/млн,); 0,8 Л 2,2 (ЮН, т); 3,60 (2Н, широкий S); 2 4,04 (1Н, т); 5,09 (1Н, d, 1 5 Гц) 5,83 (1Н, dd, I 5 Гц, 9 Гц); 6,45 (Ш, t, 1 4 Гц); .6,67 (Ш, .S); 7,19 (2Н, S); 9,48 (1Н, I 9 Гц). 4). (2-Аминотиазол-4-ил)-2-аллилоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер). 3300, 1780, 1660, .1630 см-1. HMPo(ZWCO-d6, ч/млн.): 3,67 (2Н, d, I 4 Гц); 4,67 (2Н, т); 5,17 (1Н, d, I 5 Гц); 5,25 (1Н, т); 5,50 (1Н, т); 5,90 (Ш, dd, I 5 Гц, 8 Гц); 6,03 (1Н, т); 6,55 (1Н, т); 6,80 (1Н, S); 7,50 (2Н, га); 9,68 (1Н, d, I 8 Гц). 5). 7-12-(2-Aминoтиaзoл-4-ил)-2-пpoпapгилoкcииминoaцeтaмидo 3-3-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер). ИК :3500, 3300, 1780, 1720, 1660, 1630 см HMPc(flMCO-dfc, ч/млн.): 3,48 (1Н, т); 3,67 (2Н, т); 4,80 (2Н, d, I 2 Гц); 5,17 (Ш, d, I 5 Гц); 5,88 (1Н, dd, I 5 Гц, 8 Гц); 6,55 (Ш, т); 6,85 (1Н, S); 7,33 (2Н, т); 9,73 (Ш, d, I 8 Гц). 6) 7-С2-(2-Аминотиазол-4-ил)-2-гексилоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карюонова  кислота (син-изомер). HK--j ° 3250, 1760, 1640, /MOtKC 1600 смП flMPd(flMCO-de, ч/млн.): 1,88 (ЗН, т); 1,1 у«1,9 (8Н, т); 3,60 (2Н, т); 4,06 (2Н, t, I « 6 Гц); (Ш, d, 1 5 Гц); 5,82 (1Н, dd, Гц, 8 Гц); 6,46 (Ш, ш); 6,70 (1Н, S); 7,26 (2Н, т); 9,56 (1Н, d, I - 8 Гц). 7). (2 Аминотиазол-4-Ш1)-2-пентилоксииминоацетамвдоЗ-З-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер). 3300, 1775, 1650, 1540 см-1. HMPcf(flMCO-dt, ч/млн.): 0,6-2,0 (9Н, т); 3,56 (2Н, d, I 2 Гц); 4,03 (2Н, t, I - 6 Гц); 5,08 (1Н, d, I 5 Гц); 5.81 (Ш, dd, 1 5 Гц, 8 Гц); 6/6 (Ш, t, 1 4 Гц); 6,69 (Ш, S); 7,20о(2Н, S); 9,15 (Ш, d, I 8 Гц). 8). 7-С2-(2-амиНоТиазол-4-ил)-2этоксикарбонилметоксииминоацетамио -3-цефем-4-карбонова  кислота (син-изомер). HKVJJI : 3250, 3050, 1775, 1720, 1660, 1630, 1550 ciri HMPci(flMCO-d/, ч/млн.): 1,21 (ЗН, , I 7 Гц); 3,59 (2Н, S); 4,14

Claims (2)

1. Способ получения производных 7-[2-(2-аминотиазолил)-2-оксииминоацетамидо ]-3-цефем-4-карбоновых кислот формулы

   к да

   С-С0БН

   II

   и

   а

   оя₂

   соон

   когда 1Ц - водород или группа, защищающая аминогруппу, такая . как формил,

   К2 - водород, С γ-С _а~алкил, метил, замещенный карбоксилом или этоксикарбонилом, этил, замещенный 1-3 атомами галогена, С_э-алкенил, С₃~алкинил или С^-С^-циклоалкил,

   имеют указанные значения ,

   К₃ - группа, защищающая

   карбоксигруппу, такая с

   как п-нитробензил, !*

   удаляют группу, защищающую карбоксигруппу, щелочным гидролизом, гидрированием или обработкой ферментом, таким ,как эстераза, и выделяют целевой продукт в виде свободной кислоты или ее сложного эфира или ее фармацевтически приемлемой соли.

   Приоритет по признакам: .

   14.03.77 при низший алкил, -алкенил или метил, замещенный карбоксилом или этоксикарбонилом;

   11.10.77 при К_г- водород,

   03.01.78 при Кд- водород, С -алкинил или С₅~С_£ циклоалкил,

   14.03.78 при алкил с числом

   атомов углерода до 8 или, этил,

   замещенный 1-3 атомами галогена.

   со

   со

   ю

   СП

   ко

   1 1093252
2. 2