SK56696A3 - Process for producing a virus-inactivated factor viii-containing fraction by chromatographic methods, and a fraction prepareable by this method - Google Patents
Process for producing a virus-inactivated factor viii-containing fraction by chromatographic methods, and a fraction prepareable by this method Download PDFInfo
- Publication number
- SK56696A3 SK56696A3 SK566-96A SK56696A SK56696A3 SK 56696 A3 SK56696 A3 SK 56696A3 SK 56696 A SK56696 A SK 56696A SK 56696 A3 SK56696 A3 SK 56696A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- factor viii
- membrane
- fraction
- carried out
- ionic strength
- Prior art date
Links
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 13
- 238000011140 membrane chromatography Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 10
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 4
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 32
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 8
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 7
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 4
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 4
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 4
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical group CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- -1 diethylaminoethyl groups Chemical group 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N glucosamine group Chemical group OC1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical group OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 230000005495 cold plasma Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N glycidyl methacrylate Chemical class CC(=C)C(=O)OCC1CO1 VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N hydrazine group Chemical group NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229920002454 poly(glycidyl methacrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- A61K38/37—Factors VIII
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Spôsob výroby frakcie s inaktivovanými vírusami obsahujúcej faktor VIII chromatografickými metódami a frakcia pripravitelná týmto spôsobomProcess for producing a factor VIII inactivated virus fraction by chromatographic methods and a fraction obtainable by this method
Oblasť technikyTechnical field
Vynález sa týka spôsobu výroby frakcie s inaktivovanými vírusami obsahujúcej faktor VIII chromatografickými metódami a dalej sa týka frakcie obsahujúcej faktor VIII, ktorú je možné získať spôsobom podlá vynálezu.The invention relates to a process for the production of a factor VIII inactivated virus fraction by chromatographic methods and further relates to a factor VIII containing fraction obtainable by the process according to the invention.
Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Faktor VIII je životne dôležitá látka, ktorá hrá dôležitú úlohu pri zrážaní krvi. Poruchy zrážavosti krvi je možné liečiť, podaním faktoru VIII. Preto existuje velká potreba farmaceutických prípravkov obsahujúcich faktor VIII, ktoré by boli vhodné pre podanie pacientom. Bol vykonaný rad pokusov o izoláciu faktoru VIII vo vysoko obohatenej forme z prírodných zdrojov. Sú už známe chromatografické metódy purifikácie faktoru VIII z kryoprecipitátov. Kryoprecipitát je frakcia, ktorú je možné získať spracovaním plazmy za chladu. EP 367 840 BI sa týka chromatografického spôsobu izolácie faktoru VIII z krvnej plazmy bez predbežnej kryoprecipitácie. Frakcia obsahujúca faktor VIII sa oddeluje chromatografickou separáciou na hydrofiInom chromatografickom materiáli, ktorý je modifikovaný skupinami vymeňujúcimi ióny. EP 0 238 701 sa týka spôsobu výroby ultračistého infekčného antihemofi1ického faktoru, pri ktorom sú predbežne upravené frakcie tvorené kryoprecipitátom zbaveným fibrinogénu, globulínu, albumínov a iných rušivých zložiek zrážaním etanolom. V európskej patentovej prihláške č. 88 108 458.6 je opísaná chromatografická separácia pomocou ionexov, ktorej sa podrobuje frakcia kryoprecipitátu po inaktivácii vírusov. V EP 0 173 242 A je opísaný spôsob získavania príprav2 kov obsahujúcich faktor V III chromatografiou na anexových materiáloch, ktoré sú výhradne založené na uhľohydrátoch, pričom uhľohydrátová matrica je modifikovaná skupinami DEAE. Ako užitočné materiály sú opísané najmä DEAEA Sepharose a DEAE celulóza. V GB-A-1 178 958 je opísaná purifikácia faktoru VIII pri použití stĺpcov ECTEOLA celulózy. Táto modifikovaná celulóza obsahuje bázické substituenty zavedené reakciou s epichlórhydridom a trietanolamínom. Podľa hore opísaného doterajšieho stavu techniky sa chromatografická separácia vykonáva buď pri použití diskontinuálnych procesov alebo pri použití stĺpcovej chromatografie. Napriek tomu, že sa týmito metódami dosahujú pomerne dobré výsledky, stále existuje z ekonomických a z etických dôvodov potreba zvýšiť výťažky biologicky cenného faktoru VIII.Factor VIII is a vital substance that plays an important role in blood clotting. Blood coagulation disorders can be treated by administration of factor VIII. Therefore, there is a great need for pharmaceutical formulations containing factor VIII that are suitable for administration to patients. A number of attempts have been made to isolate Factor VIII in highly enriched form from natural sources. Chromatographic methods for the purification of factor VIII from cryoprecipitates are already known. Cryoprecipitate is a fraction obtainable by cold plasma processing. EP 367 840 B1 relates to a chromatographic method for the isolation of factor VIII from blood plasma without preliminary cryoprecipitation. The Factor VIII-containing fraction is separated by chromatographic separation on hydrophilic chromatography material which is modified by ion exchange groups. EP 0 238 701 relates to a process for the production of an ultra-pure infectious anti-haemophilia factor, wherein the pretreated fractions consist of a cryoprecipitate devoid of fibrinogen, globulin, albumins and other interfering components by ethanol precipitation. In European patent application no. No. 88,108,458.6 discloses ion exchange chromatography separation to which a cryoprecipitate fraction is subjected to virus inactivation. EP 0 173 242 A discloses a process for obtaining Factor V III containing metal preparations by chromatography on anion exchange materials that are exclusively based on carbohydrates, wherein the carbohydrate matrix is modified by DEAE groups. In particular, DEAEA Sepharose and DEAE cellulose are described as useful materials. GB-A-1 178 958 describes the purification of factor VIII using ECTEOLA cellulose columns. This modified cellulose contains basic substituents introduced by reaction with epichlorohydride and triethanolamine. According to the prior art described above, the chromatographic separation is carried out either using discontinuous processes or using column chromatography. Although these methods achieve relatively good results, there is still a need, for economic and ethical reasons, to increase the yields of biologically valuable factor VIII.
Úlohou tohto vynálezu je teda vyriešiť technický problém spočívajúci vo vývoju spôsobu, ktorý vychádza z doterajšieho stavu techniky, ale umožňuje zlepšenú prípravu faktoru VIII, pokiaľ sa týka výťažkov a biologickej účinnosti .It is therefore an object of the present invention to solve the technical problem of developing a prior art process but allowing improved preparation of factor VIII in terms of yields and biological activity.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
S prekvapením bol tento problém vyriešený spôsobom, pri ktorom sa vychádza z kryoprecipitátu alebo krvnej plazmy a po prípadnom spracovaní hydroxidom hlinitým sa po rozpustení kryoprecipitátu uskutoční separačný stupeň pri použití membránovej chromatografie.Surprisingly, this problem has been solved by a process based on cryoprecipitate or blood plasma and, if necessary, treatment with aluminum hydroxide, after separation of the cryoprecipitate, a separation step is carried out using membrane chromatography.
Spôsob podlá vynálezu sa môže vykonávať pri použití obchodne dostupného kryoprecipitátu alebo krvnej plazmy. Roztavený kryoprecipitát sa prednostne spracováva hydroxidom hlinitým za účelom ďalšej predbežnej purifikácie vzorky, ktorou sa predbežne zvýši koncentrácia faktoru VIII.The method of the invention may be carried out using commercially available cryoprecipitate or blood plasma. Preferably, the molten cryoprecipitate is treated with aluminum hydroxide to further pre-purify the sample to pre-raise the factor VIII concentration.
Inaktivácia vírusov sa prednostne uskutočňuje pred vlastnou chromatografickou purifikáciou na materiáloch, ktoré sú usporiadané v membránach alebo na nich. Inaktivácia vírusov sa pritom vykonáva spôsobom opísaným v EP 131 740 Al pomocou spracovania biokompatibiInými organickými rozpúšťadlami (detergentmi), zmesou Tritom/R) X-100 a tri-n-butylfosfátu (TNBP), prednostne zmesou Tweenu^R^ a TNBP. Dobré výsledky sa dosiahnu tiež pri použití zmesi chalátu sodného a TNBP. Detergenty sa prednostne používajú v množstvách do 15% hmotnostných. Inaktivácia vírusov sa však môže tiež vykonávať až po separácii membránovou chromatografiou.The virus inactivation is preferably performed prior to the actual chromatographic purification on materials arranged in or on the membranes. The virus inactivation is carried out in the manner described in EP 131 740 A1 by treatment with biocompatible organic solvents (detergents), a mixture of Tritom / R ) X-100 and tri-n-butyl phosphate (TNBP), preferably a mixture of Tween ® R and TNBP. Good results are also obtained with a mixture of sodium challate and TNBP. Detergents are preferably used in amounts up to 15% by weight. However, virus inactivation can also be carried out after separation by membrane chromatography.
Chromatografický separačný stupeň pre purifikáciu faktoru VIII vo vzorke sa môže vykonávať buď na základných materiáloch modifikovaných skupinami vymeňujúcimi ióny, najmä na anexoch alebo pri použití materiálov modifikovaných imunoafinitnými liagandami. Pritom je rozhodujúce, že uvedené materiály musia byt usporiadané do podoby membrán. Tieto membrány sa prednostne skladajú zo základného materiálu, ako je modifikovaná celulóza alebo plastové vlákno. Vhodné sú najmä membrány a tiež kompaktné disky vyrobené z poréznych poly(glycidylmetakrylátov) a/alebo iných poréznych hydrofilných polymérov s podobnou štruktúrou a tiež z hydrofilizovaného polystyrénu.The chromatographic separation step for the purification of factor VIII in the sample can be carried out either on basic materials modified with ion exchange groups, in particular on anion exchangers, or using materials modified with immunoaffinity liagands. It is crucial here that the materials mentioned must be arranged in the form of membranes. These membranes preferably consist of a base material such as modified cellulose or plastic fiber. Especially suitable are membranes as well as compact discs made of porous poly (glycidyl methacrylates) and / or other porous hydrophilic polymers of similar structure and also of hydrophilized polystyrene.
V prvom prípade sa membrána vhodná pre delenie skladá buď zo súboru na seba položených tenkých fólií z celulózy alebo plastových vláken a v druhom prípade je tvorená kompaktnými diskmi zo silikagélu alebo polymérnych nosičov. Základné materiály membrán alebo diskov sú opatrené zodpovedajúcimi skupinami vymeňujúcimi anióny, ako sú skupiny kvaterných amínov alebo dietylaminoetylskupiny. Vhodnými katexmi sú najmä v podstate slabo a silne kyslé meniče katiónov, ako sú materiály, ktoré sú modifikované sulfónovými skupinami alebo skupinami kyseliny fosforečnej.In the first case, the membrane suitable for separation consists either of a plurality of superimposed thin films of cellulose or plastic fibers and in the second case it consists of compact discs of silica gel or polymeric carriers. The base materials of the membranes or disks are provided with corresponding anion exchange groups such as quaternary amine groups or diethylaminoethyl groups. Suitable cation exchangers are, in particular, substantially weak and strongly acidic cation exchangers, such as materials which are modified with sulfonic or phosphoric acid groups.
Skupiny vytieňujúce ióny môžu byt pripojené k vláknom základného materiálu prostredníctvom tzv. medzerníkov (spacerov) alebo bez nich. Materiály obsahujúce spacery sa tiež označujú názvom tentaklové (tykadlové) materiály. Zodpovedajúce spacery a ligandy sú uvedené v DE 42 04 694. Ako spacer môže tiež napríklad slúžit glukozamínový zvyšok. Skupiny vymenujúce anióny, ako sú DEAE alebo skupiny kvaterných amínov, môžu byt tiež pripojené k membránam zhotovených z porézneho poly(glycidylmetakrylátu) alebo iných hore uvedených materiálov. Skupiny vymeňujúce anióny môžu byt pritom pripojené buď priamo k membránotvornému materiálu alebo tiež prostredníctvom spaceru, napríklad glukozamínovému zvyšku.The ion-shielding groups may be attached to the fibers of the base material by means of so-called " or spacers. Materials containing spacers are also referred to as tentacle materials. Corresponding spacers and ligands are disclosed in DE 42 04 694. For example, a glucosamine residue may also serve as a spacer. Anion exchange groups such as DEAE or quaternary amine groups can also be attached to membranes made of porous poly (glycidyl methacrylate) or other materials mentioned above. The anion exchange groups can be attached either directly to the membrane-forming material or also by means of a spacer, for example a glucosamine residue.
Podľa ďalšieho rozpracovania spôsobu podľa vynálezu sa používa afinitná membránová chromatografia s imibolizovanými látkami, ktoré vykazujú vysokú afinitu voči faktoru VIII Pre tento účel sa hodia najmä monoklonálne a/alebo polyklonálne protilátky alebo fragmenty protilátok viazajúcich faktor VIII (imunoafinitná membránová chromatografia). Protilátky sú prednostne humánneho alebo murinného pôvodu.According to a further embodiment of the process according to the invention, affinity membrane chromatography with imibolized substances having a high affinity for factor VIII is used. Monoclonal and / or polyclonal antibodies or antibody VIII binding fragments (immunoaffinity membrane chromatography) are particularly suitable for this purpose. The antibodies are preferably of human or murine origin.
Látky vykazujúce afinitu voči faktoru VIII sa na nosičoch imobilizujú prostredníctvom chemicky reaktívnych skupín. Také reaktívne skupiny prednostne atakujú koniec spacera a nie priamo nosičový materiál. Imobilizácia látok pre faktor VIII sa vykonáva prostredníctvom väzby k reatívnym skupinám ako je tozylová, trezylová alebo hydrazínová skupina apod. Zodpovedajúce postupy sú známe z T. M. Phillips Afinity Chromatography v Chromatography (E. Heftman ed.),Substances exhibiting affinity for factor VIII are immobilized on carriers through chemically reactive groups. Such reactive groups preferably attack the end of the spacer and not directly the support material. The immobilization of the factor VIII substances is accomplished through binding to reative groups such as the tosyl, tresyl or hydrazine groups and the like. Corresponding procedures are known from T. M. Phillips Afinity Chromatography in Chromatography (E. Heftman ed.),
5. vydanie, Elsevier, Amsterdam, 1992.5th edition, Elsevier, Amsterdam, 1992.
Protilátky je tiež možné predasorbovat na membrány nesúce ligandy proteínu A alebo proteínu G. Nasledujúcim kovalentným zasietovaním sa môže zabránit elúcii protilátok (vylúhovaním zo stĺpca). Pre zasietovanie protilátok na membránach s proteínom A alebo proteínom G sa môže použiť podobný postup ako v prípade voíných nosičov. Výhodou imobilizácie na proteínu A alebo proteínu G je, že protilátky sú imobilizované výhradne na konštantnom segmente molekuly (Fc). Časť viazajúca antigén (Faj3) teda zostáva voíná a nebráni sa jej interakcii s faktorom VIII.Antibodies can also be pre-adsorbed onto membranes bearing protein A or protein G ligands. For crosslinking of antibodies on Protein A or Protein G membranes, a similar procedure to that of free carriers can be used. An advantage of immobilization on protein A or protein G is that the antibodies are immobilized exclusively on the constant segment of the molecule (F c ). Thus, the antigen binding portion (F and β ) remains free and is not prevented from interacting with factor VIII.
Podlá iného prednostného rozpracovania sa pre separáciu faktoru VIII používajú materiály, ktoré sú schopné zaistiť hydrofóbnu interakciu. Ako hydrofóbne materiály sa používajú acyklické a/alebo cyklické alkylové reťazce, napríklad alkylové reťazce s 1 až 18 atómami uhlíka a aromatické látky. Vhodné materiály poskytujúce hydrofóbnu interakciu prednostne zahŕňajú látky s odstupňovanou hydrofobicitou. Hydrofobicitu je možné odstupňovať zavedením polárnych skupín, ako sú protické polárne alebo aprotické polárne skupiny, napríklad hydroxyskupiny, aminoskupiny a kyanoskupiny. Prednostne sa toto odstupňovanie hydrofobicity vykonáva s ohľadom na príslušné separačné podmienky.According to another preferred embodiment, materials capable of providing a hydrophobic interaction are used to separate factor VIII. As hydrophobic materials, acyclic and / or cyclic alkyl chains are used, for example alkyl chains of 1 to 18 carbon atoms and aromatics. Suitable materials providing hydrophobic interaction preferably include graded hydrophobicity. The hydrophobicity can be graded by introducing polar groups such as protic polar or aprotic polar groups, for example hydroxy, amino and cyano groups. Preferably, this hydrophobicity graduation is performed with respect to the respective separation conditions.
Inaktivácia vírusov sa tiež môže uskutočňovať spracovaním teplom. Prednostne sa pritom postupuje tak, že sa eluovaná vzorka, obsahujúca faktor VIII, spracováva v pasterizačnom stupni po prvom membránovom chromatografickom stupni Zodpovedajúci postup je navrhnutý v P 43 18 435.9. Pritom sa frakcie obohatené faktorom VIII uvádzajú do styku s di- alebo trialkylfosfátmi a prípadne s namáčadlami v prítomnosti stabilizátorov a súčasne alebo následne sa na ne pôsobí počas 5 hodín až 30 hodín zvýšenými teplotami v rozmedzí od 55 do 67°C. Môže byt výhodné kombinovať obidve tieto metódy inaktivácie vírusov, tzn. spracovaním detergentmi a pôsobením tepla.Virus inactivation can also be carried out by heat treatment. Preferably, the eluted sample containing factor VIII is treated in a pasteurization step after the first membrane chromatography step. The corresponding procedure is suggested in P 43 18 435.9. The Factor VIII-enriched fractions are contacted with di- or trialkylphosphates and optionally wetting agents in the presence of stabilizers and simultaneously or subsequently treated at elevated temperatures in the range of from 55 to 67 ° C for 5 to 30 hours. It may be advantageous to combine both of these methods of virus inactivation, i. detergent treatment and heat treatment.
Pre odstránenie chemikálií použitých v pasterizačnom stupni môže nasledovať druhá membránová chromatografia. Oddeiovanie prídavných stabilizátorov sa prednostne vykonáva pomocou membrány modifikovanej DEAE alebo kvaternými amóniovými zlúčeninami, ktoré sú usporiadané na povrchu chromatograf ického nosičového materiálu pri použití spacerov. Zodpovedajúce ligandy je možné usporiadať na povrchu nosičového materiálu tiež bez použitia spacerov. V zvolených podmienkach nie sú stabilizátory týmto anexovým materiálom retardované, avšak faktor VIII sa adsorbuje na chromatografickom materiáli.A second membrane chromatography may be followed to remove the chemicals used in the pasteurization step. The separation of the additional stabilizers is preferably carried out by means of a DEAE-modified membrane or quaternary ammonium compounds, which are arranged on the surface of the chromatographic support using spacer. Corresponding ligands can also be arranged on the surface of the support material without the use of spacers. Under selected conditions, the stabilizers are not retarded by this anion exchange material, but Factor VIII adsorbs on the chromatographic material.
Potom sa faktor VIII eluuje vodným rozpúštadlovým systémom s postupne vzrastajúcimi koncentráciami soli.Then, Factor VIII is eluted with an aqueous solvent system with progressively increasing salt concentrations.
Frakcia obsahujúca faktor VIII, ktorá sa takto získa, sa skoncentruje, naplní do vhodných nádob a prípadne konvenčnými postupmi lyofilizuje.The factor VIII-containing fraction thus obtained is concentrated, filled into suitable containers and freeze-dried, if necessary, by conventional means.
V prvom membránovom chromatografickom separačnom stupni sa faktor VIII prednostne aplikuje z roztoku s nízkou iónovou silou. Vodný systém má prednostne iónovú silu, ktorá zodpovedá roztoku chloridu sodného s 0 až 150 mM koncentráciou. Pri takej iónovej sile sa faktor VIII ešte adsorbuje na chromatografickom materiáli, zatiai čo nečistoty, ktoré sa viažu slabšie, je možné vymyť pri použití vodného systému s rovnakou iónovou silou.In the first membrane chromatographic separation step, factor VIII is preferably applied from a low ionic strength solution. The aqueous system preferably has an ionic strength that corresponds to a sodium chloride solution of 0 to 150 mM concentration. At such an ionic strength, factor VIII is still adsorbed onto the chromatographic material, while impurities that bind weaker can be washed out using an aqueous system with the same ionic strength.
Podlá ďalšieho rozpracovania spôsobu pódia vynálezu sa purifikácia adsorbovaného materiálu môže vykonávať pri použití vodného systému s iónovou silou zodpovedajúcou 200 až 400 mM roztoku chloridu sodného. Desorpcie faktoru VIII a elúcie tejto frakcie sa potom uskutočňujú vodným systémom s iónovou silou zodpovedajúcou 500 až 1 5000 mM roztoku chloridu sodného, pričom hodnota pH sa udržuje v rozmedzí od 4 do 9. Pokial sa uskutočňuje katexová chromatografia, prednostne prebieha pri pH nižšom ako 6, zatial čo anexová chromatograf ia sa vykonáva skôr pri vyšších hodnotách pH, tzn. nad 6.According to a further embodiment of the process according to the invention, the purification of the adsorbed material can be carried out using an aqueous system having an ionic strength corresponding to 200 to 400 mM sodium chloride solution. The desorption of factor VIII and elution of this fraction is then carried out with an aqueous system having an ionic strength corresponding to 500 to 1 000 mM sodium chloride solution, maintaining the pH in the range of 4 to 9. whereas the anion exchange chromatography is carried out earlier at higher pH values, i. over 6.
Pokial sa purifikácia faktoru VIII vykonáva imunoafinitnou chromatografiou, potom sa na rozdiel od hore opísaného spôsobu pri použití anexových materiálov, uskutočňuje elúcia chaotropickými činidlami alebo vysoko koncentrovanými solným roztokmi. Prednostne sa elúcia uskutočňuje s takými koncentráciami chaotropických činidiel alebo solí, ktoré sú dostačujúce pre rozbitie väzby medzi látkou s vysokou afinitou k faktoru VIII a faktorom VIII. Koncentrácia uvedených látok v konkrétne použitých elučných systémoch závisí od intenzity afinity medzi faktorom VIII a zodpovedajúcou väzbovou zložkou. Ako imunoafinitné ligandy sa prednostne používajú protilátky, ktoré nemajú príliš vysokú afinitu. V dôsledku toho sa elúcia môže vykonávať vodnými roztokmi s nižšou denaturačnou schopnosťou. Prednostne sa pre elúciu faktoru VIII z imunoafinitnej zložky používajú vodné roztoky močoviny s 1 až 6M, najmä s 2 až 4M koncentráciou alebo zodpovedajúce vysoko koncentrované soli.If the purification of factor VIII is carried out by immunoaffinity chromatography, in contrast to the method described above using anion exchange materials, elution is carried out with chaotropic reagents or highly concentrated saline solutions. Preferably, the elution is carried out with concentrations of chaotropic agents or salts sufficient to break the binding between the high affinity factor VIII agent and the factor VIII agent. The concentration of said compounds in the particular elution systems used depends on the affinity intensity between Factor VIII and the corresponding binding component. Preferably, antibodies that do not have too high affinity are used as immunoaffinity ligands. As a result, the elution can be carried out with aqueous solutions of lower denaturing ability. Preferably, aqueous urea solutions of 1-6M, especially 2-4M, or the corresponding highly concentrated salts are used to elute Factor VIII from the immunoaffinity component.
Pri hydrofóbnej interakčnej chromatografii sa vzorka aplikuje z vodného roztoku s velmi vysokou iónovou silou, napríklad z vysoko koncentrovaného roztoku síranu amónneho (až do koncentrácie 4 M) alebo chloridu sodného (až do koncentrácie 5M). Elúcia sa najmä vykonáva postupne alebo kontinuálne solnými roztokmi s nižšou iónovou silou. Ako roztoky s nižšou iónovou silou pre elúciu vzoriek pri hydrofóbnej interakčnej membránovej chromatografii sa tiež môžu použiť vodné roztoky s organickými rozpúšťadlami, najmä riedené alkoholické roztoky.For hydrophobic interaction chromatography, the sample is applied from an aqueous solution of very high ionic strength, for example from a highly concentrated ammonium sulfate solution (up to 4 M) or sodium chloride (up to 5M). In particular, the elution is carried out successively or continuously with saline solutions of lower ionic strength. Aqueous solutions of organic solvents, in particular dilute alcoholic solutions, can also be used as solutions of lower ionic strength for the elution of samples in hydrophobic interaction membrane chromatography.
Spôsob podľa vynálezu s prekvapením zaisťuje rýchlu a nekomplikovanú purifikáciu faktoru VIII, ktorý sa získava súčasne s vysokou čistotou a vo vysokom výťažku. Okrem toho, špecifická aktivita faktoru VIII, získaného týmto spôsobom je dosť vysoká, čo je možné vysvetliť nízkou denaturáciou aktívneho faktoru pri spôsobu podľa vynálezu. Predmetom vynálezu je teda tiež frakcia obsahujúca faktor VIII, pripraví teľná spôsobom podľa vynálezu.Surprisingly, the process of the invention provides for a rapid and uncomplicated purification of factor VIII, which is obtained simultaneously with high purity and high yield. In addition, the specific activity of factor VIII obtained in this way is quite high, which can be explained by the low denaturation of the active factor in the process of the invention. Accordingly, the present invention also provides a factor VIII containing fraction obtainable by the process of the invention.
Claims (14)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4337573A DE4337573C1 (en) | 1993-11-04 | 1993-11-04 | Process for the preparation of a virus-inactivated factor VIII-containing fraction by means of chromatographic methods |
| PCT/EP1994/003258 WO1995012609A1 (en) | 1993-11-04 | 1994-09-30 | Process for producing a virus-inactivated factor viii-containing fraction by chromatographic methods |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK56696A3 true SK56696A3 (en) | 1996-10-02 |
| SK284215B6 SK284215B6 (en) | 2004-11-03 |
Family
ID=6501733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK566-96A SK284215B6 (en) | 1993-11-04 | 1994-09-30 | Processing for producing a virus-inactivated factor VIII-containing fraction by chromatographic method |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0726907B1 (en) |
| JP (1) | JP3739788B2 (en) |
| KR (1) | KR960705841A (en) |
| CN (1) | CN1109045C (en) |
| AT (1) | ATE228533T1 (en) |
| AU (1) | AU687451B2 (en) |
| CA (1) | CA2175670C (en) |
| CZ (1) | CZ290186B6 (en) |
| DE (2) | DE4337573C1 (en) |
| ES (1) | ES2182846T3 (en) |
| FI (1) | FI116569B (en) |
| HU (1) | HU222087B1 (en) |
| IL (1) | IL111263A (en) |
| MY (1) | MY113294A (en) |
| NO (1) | NO317112B1 (en) |
| PL (1) | PL181725B1 (en) |
| RU (1) | RU2148411C1 (en) |
| SK (1) | SK284215B6 (en) |
| UA (1) | UA43855C2 (en) |
| WO (1) | WO1995012609A1 (en) |
| ZA (1) | ZA948667B (en) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19618851C1 (en) * | 1996-05-10 | 1997-07-24 | Octapharma Ag | Testing factor VIII containing preparations |
| US6057164A (en) * | 1996-03-08 | 2000-05-02 | Octapharma Ag | Process for testing suitability of protein fractions containing factor VIII |
| ES2137878B1 (en) * | 1997-12-01 | 2000-10-01 | Grifols Grupo Sa | PROCEDURE FOR OBTAINING AN ATTENUATED HUMAN PLASMA OF VIRUSES FOR THERAPEUTIC USE. |
| CN102066417B (en) | 2008-06-24 | 2015-11-25 | 奥克塔法马股份有限公司 | The method of purification and solidification Factor IX |
| AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| DE3432083A1 (en) * | 1984-08-31 | 1986-03-06 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | PASTEURIZED, ISOAGGLUTININ-FREE FACTOR VIII PREPARATION AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
| US5043428A (en) * | 1984-08-31 | 1991-08-27 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production |
| JPS62191042A (en) * | 1986-02-17 | 1987-08-21 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Blood coagulation factor viii adsorbent and method for purifying blood coagulation factor viii using same |
| CA1339946C (en) * | 1987-03-31 | 1998-07-07 | Michael J. Griffith | Ultrapurification process for polypeptides |
| US4774323A (en) * | 1987-06-29 | 1988-09-27 | Rorer Pharmaceutical Corporation | Purification of von Willebrand Factor solutions using gel permeation chromatography |
| US4795806A (en) * | 1987-07-16 | 1989-01-03 | Miles Laboratories, Inc. | Phospholipid affinity purification of Factor VIII:C |
| CA2001720C (en) * | 1988-10-31 | 2001-10-02 | Randal A. Goffe | Membrane affinity apparatus and purification methods related thereto |
| EP0367840B1 (en) * | 1988-11-05 | 1993-02-03 | Octapharma AG | Process for producing by chromatography a non-infectious antihemophilic factor with high purity |
| CH678155A5 (en) * | 1989-08-09 | 1991-08-15 | Fischer Ag Georg | |
| AT399818B (en) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | METHOD FOR PRODUCING A HIGH PURIFIED VIRUS-SAFE FACTOR VIII PREPARATION |
-
1993
- 1993-11-04 DE DE4337573A patent/DE4337573C1/en not_active Revoked
-
1994
- 1994-09-30 KR KR1019960702337A patent/KR960705841A/en not_active Application Discontinuation
- 1994-09-30 UA UA96041756A patent/UA43855C2/en unknown
- 1994-09-30 JP JP51297795A patent/JP3739788B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-30 AU AU78109/94A patent/AU687451B2/en not_active Expired
- 1994-09-30 CZ CZ19961187A patent/CZ290186B6/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 PL PL94314185A patent/PL181725B1/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 RU RU96110890A patent/RU2148411C1/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 DE DE59410213T patent/DE59410213D1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-30 HU HU9601192A patent/HU222087B1/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 ES ES94928846T patent/ES2182846T3/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-30 CN CN94194020A patent/CN1109045C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-30 SK SK566-96A patent/SK284215B6/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 CA CA002175670A patent/CA2175670C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-30 WO PCT/EP1994/003258 patent/WO1995012609A1/en active IP Right Grant
- 1994-09-30 AT AT94928846T patent/ATE228533T1/en active
- 1994-09-30 EP EP94928846A patent/EP0726907B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-12 IL IL11126394A patent/IL111263A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-11-03 ZA ZA948667A patent/ZA948667B/en unknown
- 1994-11-03 MY MYPI94002921A patent/MY113294A/en unknown
-
1996
- 1996-05-03 FI FI961900A patent/FI116569B/en active IP Right Grant
- 1996-05-03 NO NO19961816A patent/NO317112B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8399620B2 (en) | Purification of factor VIII using a mixed-mode or multimodal resin | |
| RU2025129C1 (en) | Method of preparing of concentrate of factor viii and von villebrand factor | |
| JP4250769B2 (en) | Method for obtaining highly purified vWF or factor VIII / vWF complex | |
| US7659247B2 (en) | Production of a von Willebrand factor preparation having a high specific activity | |
| SK56696A3 (en) | Process for producing a virus-inactivated factor viii-containing fraction by chromatographic methods, and a fraction prepareable by this method | |
| KR100320394B1 (en) | Method for Purifying Vitamin-K-dependent Protein by Membrane Chromatography | |
| US5445958A (en) | Process for purifying blood clotting factors | |
| US6414125B1 (en) | Method of chromatographically purifying or fractionating, respectively, von Willebrand factor from a VWF-containing starting material | |
| US4981951A (en) | Lectin affinity chromatography of factor VIII | |
| DE19521313A1 (en) | Purificn. of Factor-VIII by affinity chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20130930 |