SK5522001A3

SK5522001A3 - 5ht1 receptor agonists and metoclopramide for the treatment of migraine

Info

Publication number: SK5522001A3
Application number: SK552-2001A
Authority: SK
Inventors: George Harry Sands
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 1998-10-30
Filing date: 1999-10-18
Publication date: 2002-05-09
Also published as: TNSN99203A1; US6255334B1; PA8484801A1; ID28291A; TW524692B; EP1126840A1; KR20010089363A; HUP0104696A3; NO20012013D0; BR9914901A; CA2348543A1; NO20012013L; IS5898A; AU5994799A; TR200101174T2; CN1325304A; AR019246A1; EE200100243A; GT199900189A; MA26702A1

Description

Vynález sa týka spôsobu liečby migrény cicavcov vrátane človeka podávaním agonistu receptoru ôHT-^ v kombinácii s metoklopramidom danému cicavcovi. Vynález rovnako zahŕňa farmaceutické kompozície obsahujúce farmaceutický prijatelný nosič, agonistu receptoru 5ΗΤ^ a metoklopramid. Príklady agonistov receptoru 5HT₁ zahŕňajú agonisty jedného alebo viacerých receptorov zo skupiny zahŕňajúcej 5HT_1A, 5HT_1B, 5HT_1C, 5HT_1D, 5HT_1Ei a 5HT_1F.

Doterajší stav techniky

Kombinované použitie metoklopramidu a agonistov 5HTj (napríklad eletriptánu, rizatriptánu, naratriptánu, sumatriptánu ale s vylúčením zolmitriptánu) na akútnu liečbu migrény ponúka zvýšenú účinnosť a zníženie nevolnosti v porovnaní s obvykle používanými terapiami.

V roku 1975 zistil Volans, že metoklopramid pomáha mierniť gastrické sťázy sprevádzajúce záchvaty migrény (pozri Volans G.N., British Journal of Pharmacology, február 1975, 2(1), 67-73; a Volans G.N., Clinical Pharmacokinetics, júl 1978, 3(4), 313-318). Uvedený autor tento jav študoval a preukázal, že hladiny aspirínu a acetaminofénu (paracetamol) v krvi pri ich orálnom podaní pacientom pri migrénovom záchvate klesajú a v období medzi záchvatmi sa vracajú na normálne hodnoty. Použitie metoklopramidu s aspirínom alebo s acetaminofénom zvyšuje hladiny uvedených liečiv v krvi a umožňuje tak ich účinnejšie využitie pri liečbe migrény.

Predpokladá sa, že agonisty 5111^ budú viest pri liečbe migrény kombinovaným podávaním s metoklopramidom k významne vyššej účinnosti liečby vyvolanej zvýšenými hladinami orálne podaných agonistov 5111^ v krvi spojenej s antiemetickým a antimigrenickým účinkom metoklopramidu.

Metoklopramid je derivát benzamidu a i keď má blízky vztah k liečivám s neuroleptickým účinkom nemá žiadne antipsychotické alebo sedatívne účinky. Metoklopramid je antagista dopamínového a 5HT3 receptoru a súčasne vykazuje určité agonistické účinky na 5HT₄. Účinky metoklopramidu zahŕňajú antaganistické účinky na vracanie indukované apomorfínom alebo ergotamínom. Zahŕňajú rovnako indukciu hyperprolaktinémie, charakteristickú vlastnosť dopamínergnej blokády. Metoklo- pramid má relatívne nízku afinitu na dopamín2(D2)receptor.

Je opísané, že kombinácie metoklopramidu s niektorými agónistami δΗΊ^ ako je zolmitriptän, nemá buď žiadny účinok alebo dochádza k zníženiu farmakokinetickéj účinnosti zolmitriptánu. Seaber E.J. et al., European Journal of Clinical Pharmacology, (1997) 53(3-4), a Roian P, Cephelalgia (október 1997), 17 Suppl. 18, 21-7.

Podstata vynálezu

Vynález sa týka farmaceutických kompozícií na liečbu migrény cicavcov vrátane človeka, obsahujúcich metoklopramid; agonistu receptoru 5HTj alebo jeho farmaceutický prijatelnú sol s vylúčením zolmitriptánu; a farmaceutický prijatelný nosič.

Vynález sa rovnako vzťahuje na spôsob liečby migrény cicavcov vrátane človeka, kde uvedený spôsob zahŕňa podávanie farmaceutickej kompozície obsahujúcej metoklopramid; agonistu receptoru 5111^ alebo jeho farmaceutický prijatelnú sol okrem zolmitriptánu; a farmaceutický prijateľný nosič; danému cicavcovi, v dávke kompozície účinnej na liečbu migrény.

’ Vynález rovnako zahŕňa spôsob liečby migrény cicavcov vrátane človeka, kde uvedený spôsob zahŕňa podávanie metoklopramidu; agonistu SHTj receptoru alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli s vylúčením zolmitriptánu; danému cicavcovi v množstvách umožňujúcich, aby uvedená kombinácia obidvoch liečivých látok bola účinná na liečbu alébo na prevenciu migrény.

Výhodné uskutočnenia vynálezu zahŕňajú farmaceutické kompozície na liečbu migrény a spôsoby liečby migrény ako je uvedené hore, kde uvedený agonista receptoru 5HTj sa zvolí zo skupiny zahŕňajúcej eletriptán, naratriptán, rizatriptán, sumatriptán, almotriptán, avitriptán, frovatriptán, alniditán, LY 334370, LY 306258, BMS-180048 a BMS-181855. Najvýhodnejšia je farmaceutická kombinácia eletriptánu.a metoklopramidu, kde sa rovnako predpokladá zlepšenie farmakokinetických vlastností eletriptánu.

Ďalšie uskutočnenia vynálezu zahŕňajú farmaceutické kompozície na liečbu migrény a spôsoby liečby migrény ako je opísané hore, kde uvedený agonista receptoru 5HT^ je zlúčenina všeobecného vzorca (I)

kde R³, R⁴ a Z znamenajú skupinu nezávisle zvolenú zo skupiny zahŕňajúcej vodík, halogén (napr. chlór, fluór, bróm alebo jód), (C₁-C₄)alkyl prípadne substituovaný jedným až tromi atómami fluóru, (C-^-Cg) alkoxyskupinu prípadne substituovanú jedným až tromi atómami fluóru, a (C₁~C₄)alkoxy-(C₁~C₄)alkyl, kde každá z alkylových častí skupiny môže byt prípadne substituovaná jedným až tromi atómami fluóru;

W znamená skupinu -CH₂~O-(C₁-Cg)alkyl, kde alkylová čast môže mat priamy alebo rozvetvený retazec;

alebo W znamená -CH₂NR¹R², kde R¹ a R² každý nezávisle znamená skupinu zvolenú zo skupiny zahŕňajúcej vodík a (Cj-Cg) alkylovú skupinu s priamym alebo s rozvetveným retazcom;

alebo R^x á R spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené tvoria nasýtený štvorčlenný monocyklický kruh alebo nasýtený alebo nenasýtený nearomatický päťčlenný äž sedemčlenný monocyklický kruh, alebo nasýtený alebo nenasýtený nearomatický sedemčlenný až desaťčlenný bicyklieký kruh, ktorý môže prípadne obsahovať okrem atómu dusíka skupiny NR^R² ďalší jeden alebo dva heteroatómy nezávisle zvolené zo skupiny zahŕňajúcej kyslík, dusík a síru, a kde jeden až tri kruhové atómy uhlíka alebo jeden z kruhových atómov dusíka môže býť prípadne a nezávisle substituovaný skupinou zo skupiny zahŕňajúcej (Cl-C4)alkyl s priamym alebo s rozvetveným retazcom, (^ci“^c6Jalkoxy s priamym alebo s rozvetveným reťazcom, skupinou (C1-C3)alkyl-(C3-C₇) cykloalkyl s priamou alebo s rozvetvenou alkylovou skupinou, hydroxy, amino, kyán, aryl-(alkyl(¢^-03) s priamym alebo s rozvetveným reťazcom) alebo heteroaryl(alkyl(C₁-C₃) s priamym alebo s rozvetveným reťazcom), kde uvedený aryl znamená skupinu zvolenú zo skupiny zahŕňajúcej fenyl.a naftyl a uvedený heteroaryl znamená skupinú zo skupiny zahŕňajúcej oxazolyl, izoxazolyl, tiazolyl, izotiazolyl, furyl, pyrazolyl, pyrolyl, tetrazolyl, triazolyl, tienyl, imi5 dazolyl, pyrazinyl, pyrazolyl, indolyl, izoindolyl, pyrazinyl, cinolinyl, pyridyl a pyrimidinyl;

s výhradou, že pre akýkoľvek kruh vzniknutý z NR^-R² platí: a) nemôže obsahovat viac ako jeden kruhový atóm kyslíka; b) žiadna zo skupín zo skupiny zahŕňajúcej hydroxy, alkoxy, alkoxyalkyl, kyán, amino alebo alkylamino ňie je priamo naviazaná na ktorýkoľvek z kruhových atómov dusíka; a c) žiadny z kruhových atómov uhlíka, ktorý je spojený dvojnou väzbou s dalším kruhovým atóm uhlíka a ktorý nie je súčastou aromatického kruhového systému nemôže byt naviazaný na kruhový atóm kyslíka alebo na kruhový atóm dusíka;

alebo jéj farmaceutický prijateľná soľ.

Podrobný opis vynálezu

Príklady agonistov 5HT_l7 ktoré je možné použit vô farmaceutických kompozíciách a spôsoboch podľa vynálezu a ich spôsoby prípravy sú uvedené v nasledujúcich patentoch a patentových prihláškach; U.S. patent 5,545,644 vydaný 13. augusta 1996; Európsky patent 776,323 udelený 11. februára 1998; U.S. patent 5,618,834 vydaný 8. apríla 1997; svetová patentová prihláška PCT/EP98/04176 dezignovaná pre USA podaná 1. júla 1998; Európsky patent 503,440 udelený 18. júna 1998; U.S. patent 4,816,470 vydaný 28. marca 1989, Japonský patent 9,423,197, udelený 30. marca 1994; Kanadský patent 1,241,004, udelený 23. augusta 1988; Európsky patent 497,512 udelený 24. septembra 1997; U.S.patent 5,300,506 vydaný 15. mája 1994; Európska patentová prihláška,711,769 zverejnená 15. mája 1996; svetová patentová prihláška WO 94/2460 zyerejnená 3. februára 1994; U.S. patent 5,541,180 vydaný 30. júla 1996; Európska patentová prihláška 591,280 zverejnená 13. apríla 1994; Európsky patent 639,192 udelený 15. mája 1996; Európska patentová prihláška 674,621 zverejnená 4. októbra 1995 .

a Európsky patent 486,666 udelený 13. augusta 1997. Hore uvedené patenty a patentové prihlášky sú úplne včlenené do tohto opisu odkazom.

Nasledujúce Odkazy zahŕňajú práce opisujúce farmakologické vlastnosti určitých agonistov 5HTj uvedených hore vhodných na použitie vo výhodných rozpracovaniach vynálezu: Róbert a sp., Cephalagia 18(6):406, júl/august 1998; Marathe a sp., Biopharm Drug.Dispos. 19(6):381-94, septembra 1998; Saxena a sp., Eur.J.Pharmacol. 351(3):329-39, 26.jún 1998; Goldstein a sp., Cephalagia 18(6):410, júl/aúgust 1998; Buchan a sp., Cephalagia 18(6):410, júl/august 1998; Block a sp., Cephalagia 18(6):409-10, júl/august 1998; a Sheftell a sp., Cephalagia 18(6):403-4, júl/august 1998; Perry a sp., Drugs (Nový Zéland) 55(6):889-922, jún 1998; Bomhof a sp., Cephalagia (Nórsko) 18(1):33-7, november 1998; Klasson a sp., Headaches (USA) 37(10):640-5, november/december 1997; Goldstein a sp., Cephalagia (Nórsko) 16(7):497-502, november 1996; Parsons a sp., J.Cardiovasc.Pharmacol (ÚSA) 32(2):220-4, august 1998; a Schoenen J., Curr.Opin.Neurol. 10(3):237-43, jún 1997. Uvedené práce sú do tohto opisu úplne včlenené odkazom.

Výraz liečenie použitý v tomto texte sa vztahuje na spomalenie alebo na reverziu vývoja alebo na zmiernenie alebo prevenciu bučť choroby alebo stavu, ku ktorému sa výraz liečenie vzúahuje alebo na jeden alebo viac symptómov uvedenej choroby alébo stavu. Výraz liečba použitý v tomto texte sa vztahuje na uskutočnenie liečenia choroby alebo . stavu tak, ako je výraz liečenie opísaný hore.

Vynález sa vztahuje ako na spôsoby liečenia migrény, v ktorých sa metoklopramid a agonista δΗΤ^ receptoru podávajú spoločne ako súčast jednej farmaceutickej kompozície, tak na spôsoby, v ktorých sa uvedené dve účinné zložky podávajú oddelene podía dávkovacej schémy navrhnuté dosiahnutia úspešnej kombinačnej terapie. V uvedenej dávkovacej schéme je množstvo každej podanej dávky a intervaly medzi dávkami účinných zložiek závislé od použitého agonistu 5HT^, druhu použitej liekovej formy, vlastností subjektu liečby a závažnosti liečenej migrény. Všeobecne sa pri aplikácii spôsobov podlá vynálezu orálne podáva agonista 5HTj receptoru priemernému dospelému človekovi s hmotnosťou 70 kg v množstve v rozmedzí od asi 1 do asi 400 mg denne, v jednej alebo v rozdelených dávkach, a metoklopramid sa podáva v množstve od asi 5 do asi 125 mg denne v jednej alebo v rozdelených dávkach. Metoklopramid sa všeobecne podáva v množstve v rozmedzí od asi 20 do asi 80 mg denne, v závislosti od stupňa bolesti hlavy a od spôsobu podania. Metoklopramid je možné podávať orálne, intranazálne, intravenózne, na rektálne podanie vo forme čapíkov alebo vo flash forme (tzn. liekovej forme umožňujúcej medikáciu rozpustením prípravku v ústach bez nutnosti použitia vody).

V ďalej uvedenej tabulke sú uvedené príklady výhodných rozmedzí dávok určitých špecifických agonistov 5HT^ a metoklopramidu pri ich kombinovanom vzájomnom použití.

5HT-j^ agonista	dávkové rozmedzie pre dávkové rozmedzie
zvolenú medikáciu	metoklopramidu
eletriptán	20 až 80 mg	5 až 20 mg
rizatriptán	5 až 10 mg	5 až 20 mg
sumatriptán	25 až 100 mgi	5 až 20 mg
naratriptán	1 až 5 mg	5 až 20 mg

Agonisty receptoru 5HT_lz ktoré sa používajú vo farmaceutických kompozíciách a v spôsoboch podlá vynálezu, a ich farmaceutický prijatélné soli, je možné podávať samotné alebo v kombinácii s farmaceutický prijateínými nosičmi alebo rie8 didlami. Je možné ich formulovať obvyklým spôsobom s jedným alebo s viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi. Uvedené zlúčeniny je možné podávať orálne, bukálne, intranazálne, parenterálne (napr. intravenózne, intramuskulárne alebo subkutánne) alebo rektálne alebo vo forme vhodnej na podanie inhaláciou alebo insufláciou.

Na orálne podanie môžu byť farmaceutické kompozície napríklad vo forme tabliet alebo toboliek pripravených obvyklými spôsobmi s farmaceutický prijateľnými prísadami ako sú spojivá (napr. preželatizovaný kukuričný škrob, polyvinylpyrolidón alebo hydroxypropylmetylcelulóza); plnivá (napr. laktóza, mikrokryštalická celulóza alebo fosforečnan vápenatý), klzné prostriedky (napr. stearan horečnatý, talk alebo oxid kremičitý); prostriedky ovplyvňujúce rozpadavosť (napr. zemiakový škrob alebo sodná soľ glykolátu škrobu); alebo namáčacie prostriedky (napr. laurylsíran sodný). Tablety je ittožné poťahovať spôsobmi v odbore dobre známymi. Tekuté prípravky na orálne podanie môžu byt vo forme napríklad roztokov, sirupov alebo suspenzií, alebo môžu byť vo forme suchého produktu, ktorý sa pred použitím rozpustí vo vode alebo inom vhodnom vehikule. Uvedené tekuté prípravky je možné pripraviť obvyklými spôsobmi pri použití farmaceutický prijateľných aditív, ako sú suspenzačné prostriedky (napr. sorbitolový sirup, metylcelulóza alebo hydrogenované jedlé tuky); emulgačné prostriedky (napr. lecitín alebo arabská guma); nevodné vehikulá (napr. mandľový olej, olejové estery alebo etylalkohol); a konzervačné prostriedky (napr. metyl- alebo propyl-p-hydroxybenzoátý alebo kyselina sorbová).

Na bukálne podanie môže kompozícia byť vo forme tabliet alebo pastiliek pripravených obvyklým spôsobom.

Agonisty 5HTj podľa vynálezu a ich soli je možné spracovať do parenteráIných prípravkov vhodných na injekčné podanie zahŕňajúcich obvyklé spôsoby katetrizácie alebo infúzie. Injekčné prípravky môžu byt vo forme jednodávkových prípravkov, napríklad vo forme ampúl alebo vo viacdávkovej forme v nádobke s prídavkom konzervačného prostriedku. Uvedené kompozície môžu rovnako byt vo forme suspenzií, roztokov alebo emulzií, v olejovom alebo vo vodnom vehikule, ktoré môžu obsahovat pomocné prostriedky ako sú suspenzačné, stabilizačné a/alebo dispergačné prostriedky.

Alternatívne môže byt účinná zložka vo forme prášku určeného pred použitím na rekonštitúciu s vhodným vehikulom, napríklad s apyrogénnou vodou.

Agonisty SHT^·podía vynálezu a ich soli je tiež možné spracovat do kompozícií na rektálne podanie ako sú čapíky alebo retenčné klystíry, napríklad pri použití obvyklých čapíkových základov ako je kakaové maslo alebo iné glyceridy.

Na intranazálne podanie alebo podanie inhaláciou je možné účinné zlúčeniny podía vynálezu spracovat do formy roztoku alebo suspenzie obsiahnutej v tlakovom zásobníku na rozprašovanie, kde uvedený roztok pacient rozprašuje tlačením alebo pumpovaním, alebo do formy aerosolového spreja obsiahnutého v tlakovom zásobníku alebo rozprašovači pri použití vhodného hnacieho plynu, napríklad dichlórdifluórmetánu, trichlórfluórmetánu, dichlórtetrafluóretánu, oxidu uhličitého alebo iného vhodného plynu. V prípade tlakového aerosolového prípravku je možné zaistit dávkovú jednotku tak, že sa nádobka opatrí dávkovacím ventilom poskytujúcim odmerané množstvo prípravku. Tlaková nádobka alebo rozprašovač môžu obsahovat roztok alebo suspenziu aktívnej zlúčeniny. Tiež je možné pripravit tobolky alebo zásobníky (vyrobené napríklad z želatíny) na použitie v inhalátore alebo insuflátore, ktoré obsahujú práškovítú zmes zlúčeniny podía vynálezu a vhodného prášku ako základu, ako je laktóza alebo škrob.

Aerosólové prípravky na liečbu migrény priemerného dospelého človeka sa výhodne vyrobia tak, aby jednotlivá odmerané dávka alebo vypúšťaná dávka aerosólu obsahovala 20 μg až 1000 μ9 zlúčeniny podlá vynálezu. Celková denná dávka pri použití aerosolového prípravku je zvyčajne v rozmedzí od asi 100 μg do 10 mg. Prípravok je možné podávať niekolkokrát denne, napríklad 2, 3, 4, alebo 8-krát denne vždy po 1, 2 alebo 3 dávkach.

Aktivitu agonistu 5-HTj receptoru alebo jeho soli je možné stanoviť v in vitro stanoveniach väzby opísaných pre receptor 5-HT·^, pri použití mozgovej kôry potkana ako zdroja receptoru a [³H]8-OH-DPAT ako rádioligandu (D.Hoyer a sp., Európ.J.Pharmacol., 1985; 118:13) a stanoveniach opísaných pre 5-HT_1D pri použití hovädzej kaudy ako zdroja receptoru a [³HJ5-HT ako rádioligandu (R.E.Heuring a S.J.Peroutka, J.Neuroscience, 1987; 7:894).

Aktivitu zlúčeniny in vitro na 5-HT_1D väzbové miesto je možné stanoviť nasledujúcim spôsobom. Tkanivo hovädzej kaudy sa homogenizuje a suspenduje sa v 20 objemoch tlmivého roztoku obsahujúceho 50 mM tris-hydrochloridu (tris[hydroxymetyl]aminometánhydrochlórid) s pH 7,7. Homogenát sa potom odstreďuje pri 45 000 g 10 minút. Supernatant sa potom odstráni a získaná peleta sa resuspenduje v asi 20 objemoch tris-hydrochloridového tlmivého roztoku s pH 7,7. Získaná suspenzia sa potom preinkubuje 15 minút pri 37’C a potom sa suspenzia opäť odstreďuje 10 minút pri 45 000 g a supernatant sa odstráni. Získaná peleta (asi 1 gram) sa potom resuspenduje v 150 ml tlmivého roztoku 15 mM tris-hydrochloridu obsahujúceho 0,01 % kyseliny askorbovej s konečným pH 7,7 a súčasne obsahujúceho 10 mM pargylínu a 4 mM chloridu vápenatého (CaCl₂). Získaná suspenzia sa pred použitím uchováva najmenej 30 minút v íade.

Inkubácia s inhibítorom, kontrolnou vzorkou alebo vehikulom sa vykoná nasledujúcim spôsobom. K 50 ml roztoku 20 dimetylsulfoxid/80 % destilovaná voda sa pridá 200 ml trítiovaného 5-hydroxytryptamínu (2 nM) v tlmivom roztoku obsahujúcim 50 mM tris-hydrochloridu obsahujúceho 0,01 %skyseliny askorbovej pri pH 7,7 a dalej obsahujúceho 10 mM pargylínu, 4 mM chloridu vápenatého, a 100 nM 8-hydroxy-DPAT (dipropylaminotetralín) a 100 nM mesulergínu. K tejto zmesi sa pridá 750 ml tkaniva z hovädzej kaudy a získaná suspenzia sa vortexuje, aby suspenzia bola homogénna. Získaná suspenzia sa potom inkubuje na trepačke s vodným kúpelom 30 minút pri 25°C. Po skončení inkubácie sa suspenzia sfiltruje cez filter zo sklenených vláken (napr. Whatman GF/B). Získaná peleta sa potom trikrát premyje 4 ml tlmivého. roztoku obsahujúceho 50 mM tris-hydrochloridu s pH 7,7. Potom sa peleta, vnesie do scintilačnej nádobky obsahujúcej 5 ml tekutého scintilátoru (aquasol 2) a ponechá sa cez noc. Pre každú dávku hodnotenej zlúčeniny sa potom vyráta percento inhibície. Z hodnôt percent inhibície sa potom vyráta hodnota IC₅₀·

Schopnosť zlúčeniny alebo jej soli viazať sa na 5-HT_1Areceptory je možné stanoviť nasledujúcim spôsobom. Tkanivo mozgovej kôry potkana sa zhomogenizuje a rozdelí sa na 1 gramové podiely, ktoré sa zriedia 10 objemami 0,32 M roztoku sacharózy. Získaná suspenzia sa potom odstreduje 10 minút pri 900 g, supernatant sa oddelí a opäť sa odstreduje 15 minút pri 70 000 g. Supernatant sa odstráni a získaná peleta sa resuspenduje v 10 objemoch 15 mM tris-hydŕochloridu s pH 7,5. Potom sa. suspenzia inkubuje 15 minút pri 37°C. Po skončení preinkubácie sa suspenzia odstreduje 15 minút pri 75 000 g a supernatant sa.odstráni. Získaná peleta obsahujúca spracované tkanivo sa potom resuspenduje v tlmivom roztoku obsahujúcom 50 mM tris-hydrochloridu s pH 7,7 a dalej obsahujúcom 4 mM chloridu vápenatého a 0,01 kyseliny askorbovej. Získané tkanivo sa potom uchováva pri -70°C až do prípravy pred pokusom. Bezprostredne pred použitím sa tkanivo rozmrazí, zriedi sa 10 mM pargylínu a uchováva sa v ľade.

Potom sa tkanivo inkubuje nasledujúcim spôsobom. Pripraví sa po 50 mikrolitroch kontrolnej vzorky, inhibítoru alebo vehikula (konečná koncentrácia je 1 % v DMSO) s rôznymi koncentráciami. K tomuto roztoku sa pridá 200 ml trítiovaného DPAT s koncentráciou 1,5 nM v tlmivom roztoku obsahujúcom 50 mM tris-hydrochloridu s pH 7,7 obsahujúceho 4 mM chloridu vápenatého, 0,01 % kyseliny askorbovej a pargylín. K tomuto roztoku sa pridá 750 ml tkaniva a získaná suspenzia sa vortexuje aby suspenzia bola homogénna. Získaná suspenzia sa potom inkubuje na trepačke s vodným kúpelom 30 minút pri 37°C. Potom sa suspenzia sfiltruje, dvakrát sá premyje 4 ml tlmivého roztoku obsahujúceho 10 mM tris-hydrochloridu s pH 7,5 obsahujúceho 154 mM chloridu sodného. Pre každú dávku hodnotenej zlúčeniny, kontrolnej vzorku alebo vehikula sa potom vyráta percento inhibície. Z hodnôt percent inhibície sa potom vyráta hodnota IC₅₀·

Agonistickú a antagonistickú aktivitu zlúčenín voči receptorom 5-HT_1Ä a 5-HT_1D je možné stanovii pri použití jednej saturačnej koncentrácie nasledujúcim spôsobom. Samčeky morčiat Hartley sa dekapitujú a na získanie receptorov 5-HT_1A sa použije hippokampus, zatial čo receptory 5-HT_1D sa získajú z rezov 350 mM, pripravených pomocou Mcllwainova noža na rezanie tkanív a odohraním substantia nigra z vhodných rezov. Jednotlivé druhy tkaniva sa potom homogenizujú v 5 mM HEPES tlmivého roztoku obsahujúceho 1 mM EGTA (pH 7,5) pri použití ručného sklo-Teflonového^R homogenizátoru a odstreďujú sa 10 minút pri 35 000 x g pri 4°C. Peletý sa resuspendujú v 100 mM HEPES tlmivom roztoku obsahujúcom 1 mM EGTA (pH 7,5) na konečnú koncentráciu 20 mg (hippokampus) alebo 5 mg (substantia nigra) proteínu v skúmavke. Potom sa pridajú nasledujúce zložky v takom množstve, aby každá skúmavka obsahovala 2,0 mM

MgCl2» 0,5 mM ATP, 1,0 mM cAMP, 0,5 mM IBMX, 10 mM fosfokreatínu, 0,31 mg/ml kreatínfosfokinázy, 100 mM GTP a 0,5-1 mikrocurie [³²P]-ATP (30 Ci/mmol; NEG-003- New England Nuclear). Inkubácia sa zaháji prídavkom tkaniva do silikónovanej mikroskúmavky na odstreďovanie (tri paralelne stanovenia), a prebieha 15 minút pri 30°C. Do každej skúmavky sa vnesie 20 ml tkaniva, 10 ml liečiva alebo tlmivého roztoku (lOx konečná koncentrácia), 10 ml 32 nM agonistu alebo tlmivého roztoku (lOx konečná koncentrácia), 20 ml forskolínu (3 mM konečnej koncentrácie) a 40 ml hore uvedenej reakčnej zmesi. Inkubácia sa ukončí prídavkom 100 ml 2% SDS, 1,3 mM cAMP, 45 mM roztoku ATP obsahujúceho 40 000 dpm [³H]-cAMP (30 ci/mmol; NET-275New England Nuclear) na sledovanie výťažku cAMP zo stĺpcov. Separácia [³²P]-ÄTP a [³²P]-cAMP sa vykoná spôsobom opísaným, autormi Salomon a sp., Analytical Biochemistry, 1974, 58, 541-548. Rádioaktivita sa stanoví scintilačne s tekutým scintilátorom. Maximálna inhibícia sa definuje 10 mM (R)-8-OH-DPAT pre receptory 5-HT1Ä, a 320 nM 5-HT pre 5-HT1D receptory. Percentuálna inhibícia testovaných zlúčenín sa potom vyráta podía inhibičného účinku na (R)-8-0H-DPAT pre receptory ^5_HT1A ^al^ek° ^{na 5}~^HT pre receptory 5-HT1D· Opačná agonistom indukovaná inhibícia forskolínom stimulovanej aktivity adenylátcykĺaáz sa vyráta z agonistického účinku pri koncentrácii agonistu 32 nM.

Uvedené zlúčeniny je tiež možné hodnotiť z hladiska ich antagonistickej aktivity in vivo voči agonistom 5-HT_1D indukovanej hypotermii morčiat nasledujúcim spôsobom;

Použijú sa samčeky morčiat Hartley, Charles River, s hmotnosťou 250-275 g pri dodaní a ,s hmotnosťou 300-600 g pri zaradení do pokusu. Morčatá sa chovajú za štandardných laboratórnych podmienok s režimom osvetlenia od 7 do 19 hodín na najmenej sedem dní pred pokusom. Až do zahájenia pokusu majú vodu a potravu k dispozícii podlá potreby.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné podávať vo forme roztokov v objemu 1 ml/kg. Voľba vehikulá závisí od rozpustnosti zlúčeniny. Hodnotené zlúčeniny sa zvyčajne podávajú buď orálnym podaním (p.o) šesťdesiat minút pred podaním agonistu alebo subkutánne (s.c.) 0 minút pred podaním agonistu 5-HT_1D ako je (3-(l-metylpyrolidin-2-ylmetyl)-lH-indol-5-yl)-(3-nitropyridin -3-yl)amín, ktorý je možné pripraviť spôsobom opísaným v PCT publikácii WO 93/111 06 zverejnenej 10. júna 1993, a ktorý sa podáva s.c. v dávke 5,6 mg/kg. Pred prvým odčítaním sa morča umiestni do boxu z priehľadnej plastickej hmoty s podložkou obsahujúcou drvené piliny a mriežkovanou kovovou podlahu a nechá sa aklimatizovať na okolité prostredie 30 minút. Pri každom odčítaní teploty sa potom zvieratá umiestnia do rovnakého boxu. Pred každým odčítaním teploty sa zviera pevne pridrží jednou rukou na 30 sekúnd. Na meranie teploty sa použije digitálny teplomer v malej sonde na meranie teploty Zvierat. Sonda je.vyrobená zo semiflexibiIného nylonu s epoxidovou špičkou. Teplota sa merí zavedením do rekta v dĺžke 6 cm a ponechá sa v rekte počas 30 sekúnd alebo až do stabilnej hodnoty odčítanej teploty. Zaznamenajú sa zistené teploty.

Pri hodnotení s p.o. podaním sa v čase -90 minút odčíta bazálna teplota pred podaním liečiva, testovaná zlúčenina sa podá v čase -60 minút a v čase -30 minút sa vykoná ďalšie odčítanie teploty. V čase 0 minút sa podá agonista 5-HT_1D a v čase 30, 60, 120 a 240 minút sa vykonajú ďalšie odčítania teploty.

Pri hodnotení pri použití subkutánneho podania sa bazálna teplota pred podaním liečiva odčíta v čase -30 minút. Hodnotená zlúčenina a δ-ΗΤ^β agonista sa podajú súčasne a teploty sa odčítajú v čase 30, 60, 120 a 240 minút.

Výsledky sa analyzujú dvojsmerovou analýzou premenných s opakovaným hodnotením pomocou Newman-Keulsovej post hoc analýzy.

Agonistickú aktivitu pre 5-HT-j^ je možné stanovil; stanovením väzby na receptor in vitro, ako je to opísané na stanovenie väzby na receptor 5-HT_1A pri použití mozgovej kôry potkana ako zdroja receptoru a [³H]-8-0H-DPAT ako rádioligandu (D.Hoyer a sp., Eur.J.Pharm., 118. 13 (1985)) a pri použití spôsobu opísaného na stanovenie väzby na 5-HT_1D receptor pri použití hovädzej kaudy ako zdroja receptoru a [^JH]serotonínu ako rádioligandu (R.E.Heuring a S.J.Peroutka, J.Neuroscience, 7, 894 (1987)).

Všetky hodnotené účinné zlúčeniny vykazujú hodnotu IC₅₀v každom z uvedených stavení 1 mM alebo menšiu.

Uvedené zlúčeniny a ich soli je možné rovnako hodnotiť na ich antimigrénickú účinnosť skúškou, v ktorej sa hodnotia účinky podobné účinkom sumatriptánu na kontrakciu izolovaného prúžku psej saphena vena (P.P.A. Humprey a sp., Br.J.Pharmacol., 1988, 94:1128). Tento jav je možné blokovať pomocou metiotepínu, čo je známy antagonista serotonínu. Sumatriptán je známy prostriedok na liečbu migrény, a poskytuje selektívne zvýšenie vaskulárnej rezistencie karótidy pri anestetizovaných psoch. Predpokladá sa, že táto vlastnosť je základom jeho účinnosti (pozri Fenwick a sp., British Journal of Pharmacology, 1989, 96:83).

/'U- σ

Claims

1. Farmaceutická kompozícia na liečbu migrény, vyznačujúca sa tým, že obsahuje eletriptán, metoklopramid a farmaceutický prijateľný nosič.

2. Spôsob liečenia migrény cicavca, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa podávanie antimigrenicky účinného množstva farmaceutickej kompozície podľa nároku 1 uvedenému cicavcovi.

3. Spôsob liečenia migrény cicavca, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa podávanie metoklopramidu a eletriptánu uvedenému cicavcovi v takých množstvách, kde uvedená kombinácia obidvoch účinných zložiek je účinná na liečbu migrény.

4. Spôsob podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým , že eletriptán a metoklopramid sa podávajú oddelene v režime dávkovania ktorý umožňuje, aby kombinácia týchto samostatne podávaných účinných zložiek bola účinná na liečbu migrény.

5. Spôsob podľa nároku 3,vyznačujúci sa tým, že eletriptán sa podáva v dávke od asi 1 mg do asi 400 mg denne a metoklopramid sa podáva v dávke od asi 5 mg do asi 125 mg denne.

6. Spôsob liečenia migrény cicavca, vyznačujúci sa tým, že agonista receptoru 5-HT^ s vylúčením zolmitriptáriu, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ, sa podáva orálne a metoklopramid sa podáva intravenózne.

7. Spôsob podporenia farmakokinetických vlastností eletriptánu na liečbu migrény cicavca, vyznačujúci sa t ý m, že zahŕňa použitie eletriptánu s metoklopramidom.