SK280539B6 - Spôsob výroby 7-aminodesacetoxycefalosporánovej ky - Google Patents
Spôsob výroby 7-aminodesacetoxycefalosporánovej ky Download PDFInfo
- Publication number
- SK280539B6 SK280539B6 SK1630-97A SK163097A SK280539B6 SK 280539 B6 SK280539 B6 SK 280539B6 SK 163097 A SK163097 A SK 163097A SK 280539 B6 SK280539 B6 SK 280539B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- adca
- penicillin
- expandase
- phenylacetyl
- chrysogenum
- Prior art date
Links
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 title claims abstract description 33
- 101710104123 Deacetoxycephalosporin C synthase Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 title claims abstract description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 3
- NVIAYEIXYQCDAN-CLZZGJSISA-N 7beta-aminodeacetoxycephalosporanic acid Chemical compound S1CC(C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](N)[C@@H]12 NVIAYEIXYQCDAN-CLZZGJSISA-N 0.000 title abstract 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 8
- 241000228150 Penicillium chrysogenum Species 0.000 claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 241000187433 Streptomyces clavuligerus Species 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 2
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000006049 ring expansion reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 24
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 24
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 20
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 19
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 19
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 14
- -1 D-5-amino-5-carboxypentanoyl side chain Chemical group 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- MIFYHUACUWQUKT-UHFFFAOYSA-N Isopenicillin N Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(NC(=O)CCCC(N)C(O)=O)C(=O)N21 MIFYHUACUWQUKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 108700016155 Acyl transferases Proteins 0.000 description 4
- 102000057234 Acyl transferases Human genes 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229950008644 adicillin Drugs 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- MIFYHUACUWQUKT-GPUHXXMPSA-N penicillin N Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)C(=O)N21 MIFYHUACUWQUKT-GPUHXXMPSA-N 0.000 description 4
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical class [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 3
- OYIFNHCXNCRBQI-BYPYZUCNSA-N L-2-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCC(O)=O OYIFNHCXNCRBQI-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 description 3
- 101150091913 cefE gene Proteins 0.000 description 3
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 3
- NNQIJOYQWYKBOW-UHFFFAOYSA-N desacetoxycephalosphorin G Natural products S1CC(C)=C(C(O)=O)N2C(=O)C(NC(=O)CCCC(N)C(O)=O)C12 NNQIJOYQWYKBOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 3
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228431 Acremonium chrysogenum Species 0.000 description 2
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710107944 Isopenicillin N synthase Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 101150055760 glcA gene Proteins 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODJQKYXPKWQWNK-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Thiobispropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCSCCC(O)=O ODJQKYXPKWQWNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWWJFMCCTZLKNT-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydro-2h-thiazine Chemical group C1CC=CSN1 NWWJFMCCTZLKNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187390 Amycolatopsis lactamdurans Species 0.000 description 1
- HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N Cephalosporin C Natural products S1CC(COC(=O)C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)[C@@H]12 HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 108700005088 Fungal Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229930191709 Isopenicillin Natural products 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710123388 Penicillin G acylase Proteins 0.000 description 1
- 108010031091 Separase Proteins 0.000 description 1
- 102000005734 Separase Human genes 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 101150044453 Y gene Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 1
- 229940106164 cephalexin Drugs 0.000 description 1
- HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-M cephalosporin C(1-) Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C([O-])=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O)[C@@H]12 HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-M 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 1
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 108010005802 desacetoxycephalosporin C synthetase Proteins 0.000 description 1
- JSYGRUBHOCKMGQ-UHFFFAOYSA-N dichloramine Chemical group ClNCl JSYGRUBHOCKMGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 101150073906 gpdA gene Proteins 0.000 description 1
- 125000003651 hexanedioyl group Chemical group C(CCCCC(=O)*)(=O)* 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- MIFYHUACUWQUKT-GTQWGBSQSA-N isopenicillin N Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H](NC(=O)CCC[C@H](N)C(O)=O)C(=O)N21 MIFYHUACUWQUKT-GTQWGBSQSA-N 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000002500 microbody Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- UHZYTMXLRWXGPK-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentachloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)(Cl)Cl UHZYTMXLRWXGPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001984 thiazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka biosyntetického spôsobu prípravy a izolácie 7-aminodesacetoxycefalosporánov kyseliny (7-ADCA).
Doterajší stav techniky β-Laktámové antibiotiká tvoria najdôležitejšiu skupinu antibiotických zlúčenín s dlhou históriou klinického používania. V tejto skupine sú prominentné penicilíny a cefalosporíny. Tieto zlúčeniny sa prirodzene produkujú vláknitou hubou Penicillium chrysgenum, resp. Acremonium chrysogenum.
V dôsledku zlepšených postupov klasických kmeňov sa v poslednom desaťročí úroveň výroby antibiotík Penicillium chrysogenum a Acremonium chrysogenum dramaticky zvýšila. So vzrastajúcimi znalosťami biosyntetických postupov vedúcich k penicilínom a cefalosporínom a nástupom rekombinantných DNA technológií sa stali dostupnými nové nástroje na zdokonalenie výroby kmeňov a derivatizáciu zlúčenín in vivo.
Bolo identifikovaných mnoho enzýmov obsiahnutých v β-laktámových biosyntézach a boli klonované ich príslušné gény, ako je možné zistiť v Ingolia a Queener, Med. Res. Rev. 9 (1989), 245-264 (biosyntetický postup a enzýmy) a Aharonowitz, Cohen, a Martin, Ann. Rev.Microbiol. 46 (1992), 461-495 (génové klonovanie).
Prvé dva kroky v biosyntéze penicilínu v P. chrysogenum sú kondenzácia troch aminokyselín L-5-amino-5-karboxypentánovej kyseliny (L-aminoadipovej kyseliny) (A), L-cysteínu (C) a L-valínu (V), na tripeptid LLD-ACV, nasledovaná cyklizáciou tohto tripeptidu za vzniku izopenicilínu N. Táto zlúčenina obsahuje typickú B-laktámovú štruktúru.
Tretí krok zahrnuje výmenu hydrofilného bočného reťazca kyseliny L-5-amino-5-karboxypentánovej hydrofóbnym bočným reťazcom pôsobením enzýmu acyltransferázy (AT). Enzymatická výmenná reakcia sprostredkovaná AT nastáva vnútri celulámej organely, mikrotelieska, a je opísaná v EP-A-448180.
Cefalosporíny sú oveľa drahšie ako penicilíny. Jedným z dôvodov je to, že niektoré cefalosporíny (napr. cefalexín) sú vyrobené z penicilínov pomocou mnohých chemických konverzií. Iným dôvodom je to, že doteraz mohli byť fermentované len cefalosporíny s D-5-amino-5-karboxypentanoylovým bočným reťazcom. Cefalosporíny C, z tohto hľadiska doteraz najdôležitejší východiskový materiál, je veľmi rozpustný vo vode pri akomkoľvek pH, teda predpokladá dlhé a drahé izolačné postupy použitím ťažkopádnej a finančne nákladnej kolónovej technnológie. Týmto spôsobom získaný cefalosporín C sa musí premeniť na terapeuticky používané cefalosporíny pomocou mnohých chemických a enzymatických konverzií.
Postupy bežne používané v priemysle pri príprave medziproduktu 7-ADCA zahrnujú komplex chemických stupňov vedúcich k rozšíreniu a derivatizácii penicilínu G. Jeden z nevyhnutných chemických stupňov pri výrobe 7-ADCA zahrnuje expanziu 5-člennej kruhovej štruktúry penicilínu na 6-člennú kruhovú štruktúru cefalosporínu (pozri napr. US 4 003 894). Tento komplex chemických postupov je takisto finančne náročný a nebezpečný pre okolie.
Preto existuje veľká potreba nahradiť tieto chemické postupy enzymatickými reakciami, ako sú enzymatické katalýzy, prednostne počas fermentácie. Kľúčom k nahra deniu chemického expanzného spôsobu biologickým postupom je centrálny enzým v cefalosprínovej biosyntetickej dráhe, syntetáza desacetoxycefalosporínu C alebo expandáZti.
Bolo zistené, že enzým expandáza z baktérie Streptomvces clavuligerus uskutočňuje in vitro, v niektorých prípadoch, rozšírenie penicilínového kruhu (Baldwin a kol., Tctrahedron 43 (13), 3009 (1987)). V Cantwell a kol. (Current Genetics, 17, 213-221 (1990)) je opísaná expresia S. clavuligerus expandázy v P. chrysogenum. Expresia expandázy nemala za následok vytvorenie cefalosporínov vo fermentácii, ako sa predpokladá v publikácii. Len vtedy, keď sa zabuduje do P. chrysogenum spoločne s izopenicilínom N-gén epimerázy. S. clavuligerus, predpokladá sa konverzia penicilínovej kruhovej štruktúry penicilínu N (jeho prirodzeného substrátu) na cefalosporínovú kruhovú št-uktúru desacetoxycefalosporínu C (jeho prirodzený produkt), ako je to opísané v Cantwell a kol., Proc. R. Soc. Lnnd. B. 248 (1992), 283-289. Enzým expandáza bol veľmi dobre charakterizovaný (EP-A-0366354) biochemický aj funkčne, ako má jeho príslušný gén. Obidve fyzikálne mapy cefE génu (EP-A-0341892), DNA sekvencie a transformačné štúdie v P. chrysogenum s cefE boli opísané.
Iným zdrojom kruhového expanzného enzýmu je baktéria Nocardia lactamdurans (predtým Streptomyces lactamditrans). Biochemické vlastnosti enzýmu a DNA a sekvenci.' génu boli opísané (Cortes a kol., J. Gen. Microbiol. 133 (1987), 3165-3174; resp. Coque a koľ, Mol. Gen. Genet. 236(1993), 435-458).
Keďže expandáza katalyzuje rozšírenie 5 členného tiazcldinového kruhu penicilínu N na 6-členný dihydrotiazínový kruh desacetoxycefalosporínu C, bude tento enzým samozrejme logickým kandidátom na na náhradu krokov rozširovania kruhu v chemickom postupe. Prekvapivo prací j e enzým na medziprodukte penicilínu N cefalosporínove j biosyntetickej cesty, ale nie na ľahko dostupných lacných penicilínoch, ako sa produkuje P chrysogenum vrátane penicilínu G. Penicilín N je komerčne nedostupný a dokonca keď expanduje, nemôže byť jeho D-aminoadipylový bočný reťazec ľahko odstránený penicilínovými acylázami.
Nedávno bolo zistené, že enzým expandáza je schopný o. pančovať penicilíny s konkrétnymi bočnými reťazcami n< príslušné 7-ADCA deriváty. V EP-A-268343 je opísaný in vitro postup rozšírenia penicilínu s 3-karboxyfenylacetylovými alebo adipoylovým bočným reťazcom použitím syntetázy desacetoxycefalosporínu C. Tento znak expandázy bol využitý v technológii, ako je opísaná v EP-A-0532341, EP-A-0540210, WO95/04149. V týchto opisoch sú bežné konverzie penicilínu G na 7-ADCA nahradené in vi’o konverziou určitých derivátov 6-aminopenicilánovej kv seliny (6-APA) v rekombinantných Penicillium chrysogenum líniách obsahujúcich gén expandázu.
Konkrétnejšie, EP-A-0532341 uvádza in vivo použitie enzýmu expandázy v P. chrysogenum v kombinácii s 5-karboxypentanoylovým bočným reťazcom ako vstupnou surovinou, ktorá je substrátom pre enzým acyltransferázou v P. chrysogenum. To vedie k vytvoreniu 5-karboxypentynoyl-6-APA, ktorá je premenená enzýmom expandázou zavedenou do P. chrysogenum reťazca pri vytvorení 5-karboxypentanoyl-7-ADCA. Nakoniec, odstránenie 5-karboxypentanoylového reťazca je odporučené, za vzniku 7-ADCA ako konečného produktu.
Vo WO95/04148 a WO95/04149 je uvedené, že sa zistilo, že kyselina 3'-karboxymetyltiopropiónová a 3,3'-kyselina tiodipropiónová sú substráty na expandázu, za vzniku 2-(karboxyetyltio)acetyl- a 3-(karboxymetyltio)-propionyl-7-ADCA.
Postup podľa predloženého vynálezu však poskytuje viac výhod, vzhľadom na vysokú pen G syntézovú kapacitu penicilín produkujúcich kmeňov a oveľa výhodnejší postup extrakcie fenylacetyl-7-ADCA-kyseliny. Takisto fenylacetylový bočný reťazec penicilínu je oveľa prístupnejší enzymatickému štiepeniu penicilínovými G amidázami produkovanými mnohými typmi mikroorganizmov s výťažkom 6-APA, napríklad separázou G, ako je to opísané v EP-A-0453047.
Rôzne publikácie uvádzali, že expandáza neakceptuje penicilín G ako substrát na exanziu (Baldwin & Abraham (1988), Natural Produkt Reports, 5 (2), p. 129-145; Maeda a koľ, (1955), Enzýme and Microbial Technology, 17, 231234; Crawford a kol. (1995), Bio/technology, 13, p. 58-61; Wu/Kuang Yeh akol., v 50. rokoch Penicillin Application (vyd. Kleinkauf a Von Dohren), 209 (1991), pozri konkrétnejšie tabuľku 3A).
Ale doteraz bolo prekvapivo zistené, že penicilín G produkujúci P. chrysogenum transformovaný expandázu kódujúcim génom je schopný produkovať fcnylacctyldesacetoxycefalosporánovú kyselinu.
Podstata vynálezu
Predložený vynález poskytuje spôsob prípravy a izolácie 7-aminodesacetoxycefalosporánovej kyseliny (7-ADCA):
a) transformovaním Penicillium chrysogenum línie expandázovým génom, pri transkripčnej a translačnej regulácii hubových signálov expresie;
b) fermentáciou uvedených línií v kultivačnom prostredí a pridaním kyseliny fenyloctovej alebo jej soli alebo esteru do uvedeného kultivačného média pri získaní penicilínu G, ktorý je expandovaný, aby vytvoril fenylacetyl-7-ADCA;
c) izolovaním fenylacetyl-7-ADCA z fermentačnej živnej pôdy;
d) deacyláciou fenylacetyl-7-ADCA; a
e) izolovaním kryštalickej 7-ADCA.
Výhodne je stupňom (e) filtrácia.
Výhodne je fenylacetal-7-ADCA izolovaná z fermentačnej živnej pôdy extrahovaním filtrátu živnej pôdy organickým rozpúšťadlom nemiešateľným s vodou pri pH nižšom ako asi 4,5 a spätným extrahovaním toho istého vodou pri pH medzi 4 a 10.
Navyše vektor rekombinantnej DNA s obsahom DNA kódujúcej expandázu, funkčne viazanú na transkripčné a translačné riadiace prvky hubovitého génu, napríklad Aspergillus nidulans gpdA gén a Aspergillus niger glcA gén a hostiteľské bunky transformované tým istým, sú poskytnuté.
Predložený vynález sa týka použitia funkčných génových konštruktov v P. chrysogenum pre in vivo rozšírenie kruhovej štruktúry penicilínu G za vzniku derivátu kľúčového medziproduktu, v cefalosporínovej biosyntéze, 7-aminodesacetoxycefalosporánovej kyseliny, alebo 7-ADCA. Tento derivát má také chemické zloženie, že umožňuje účinnú extrakciu rozpúšťadlom a tým poskytuje ekonomicky atraktívny izolačný postup.
Transformácia P. chrysogenum môže byť v podstate dosiahnutá rôznymi spôsobmi dodania DNA, ako je PEGCa sprostredkovaný absorpciou protoplastu, elektroporáciou alebo technikami ostreľovania časticami a výberom transformantov. Pozri napríklad Van den Hondel en Punt,
Gene transfer and Vector Development forFilamentous Fungi, V: Applied Molecular Gcnetics of Fungi (Peberdy, Laten, Ogden Bennet, vyd.), Cambridge University Press (1991). Bola opísaná aplikácia dominantných a nedominantných selekčných markérov (Van den Hondel, supra). Boli opísané selekčné markéry tak homológneho (P. chrysogenum odvodený), ako aj hetrológneho (ne- P. chrysogenum odvodený) pôvodu (Gouka a kol., J. Biotechnol. 20 (1991), 189-200).
Použitie rôznych transformačných selekčných markerov, homológnych alebo heterológnych, v prítomnosti alebo absencie vektorových sekvencii, fyzikálne viazaných alebo neviazaných na ne-selektívnu DNA, pri výbere transformantov, sú dobre známe.
Reakcia rozširovania kruhu je sprostredkovaná zabudovaním enzýmu expanázy a týmto spôsobom exprimovaním v P. chrysogenum, napríklad v línii Penlabs P14-B10, DS 18541 (uloženej v CBS pod prijímacím číslom 455.95). Je jasné, že v prípade rozširovania kruhu sa reakcia uskutočňuje v ich mutantoch, podmienky musia byť prispôsobené na vytvorenie účinného rastu.
Gén cefE je vložený pod transkripčnou a translačnou kontrolou hubových (ich vláknami alebo nie) génových kontrolných elementov, prednostne odvodených od génu Y P. chrysogenum (opísaného v EP-A-0549062), IPNS génu P, chrysogenum, β tubulín génu, Aspergillus nidulans gdpA génu, alebo Aspergillus niger glcA génu.
Súhrnne sa v predloženom vynáleze uvádza, ako môže byť aktivita expandázy zabudovaného do P. chrysogenum venovaná in vivo do rozšírenia kruhu penicilínu G.
Podľa predloženého vynálezu jc β-laktámový medziprodukt fenylacety-7-ADCA produkovaný v P. chrysogenum pridaním kyseliny fenyloctovej alebo jej soli alebo esteru do média. Vhodnými soľami sú napríklad sodné alebo draselné soli. 7-ADCA sa z prostredia účinne izoluje jednoducho extrakciou rozpúšťadlom, napríklad týmto spôsobom:
Živná pôda sa prefiltruje a k filtrátu sa pridá organické rozpúšťadlo nemiešateľné s vodou. Nastaví sa pH tak, aby sa z vodnej vrstvy extrahoval cefalosporín. Rozmedzie pH má byť nižšie ako 4,5; prednostne medzi 4 a 1, výhodnejšie medzi 2 a 1. Týmto spôsobom sa cefalosporín vydeľuje z mnohých iných nečistôt prítomných vo fermentačnej pôde. Prednostne sa používa malý objem organického rozpúšťadla a získa sa koncentrovaný roztok cefalosporínu, čím sa dosiahne zníženie objemových prietokových rýchlosti. Druhou možnosťou je extrakcia celej živnej pôdy pri pH 4 alebo nižšom. Prednostne sa živná pôda extrahuje medzi pH 1 a 4 organickým rozpúšťadlom nemiešateľným s vodou.
Môže sa použiť akékoľvek rozpúšťadlo, ktoré nenarušuje molekulu cefalosporínu. Vhodnými rozpúšťadlami sú napríklad butylacetát, etylacetát, metylizobutylketón, alkoholy ako butanol, atď. Výhodne sa použije butylacetát.
Potom je cefalosporín spätne extrahovaný vodou pri ph medzi 4 a 10, výhodne medzi 6 a 9. Opäť sa konečný objem drasticky zníži. Izolácia sa môže uskutočňovať pri teplotách medzi 0 a 50 °C a výhodne pri teplotách okolia.
Takto získaný vodný roztok cefalosporínu sa spracúva s vhodným enzýmom, aby sa odstránil fenylacetylový bočný reťazec a získala sa požadovaná 7-ADCA. Vhodným enzýmom na to isté je acyláza penicilínu G, ako je to opísané v EP-A-0453047, označovaná tiež penicilínová amidáza.
Výhodne sa používa imobilizovaný enzým, aby bolo možné používať enzým opakovane. Metodika prípravy týchto častíc a imobilizácie enzýmov bola široko opísaná v EP-A-0222462. pH vodného roztoku má hodnotu napríklad ph 4 až pH 9, pri ktorom je degradačná reakcia cefalosporínu minimálna a požadovaná konverzia s enzýmom je optimálna. Preto sa enzým pridáva do vodného roztoku cefalosporínu pri udržiavaní pH na príslušnej hodnote, napríklad pridávaním anorganickej bázy, ako je roztok hydroxidu draselného, alebo používaním katiónovej výmennej živice. Keď je rekcia skončená, imobilizovaný enzým sa odstráni filtráciou. Inou možnosťou je aplikácia imobilizovaného enzýmu v pevnom alebo fluidnom lôžku kolóny, alebo použitím enzýmu v roztoku a odstraňovaním produktov membránovou filtráciou. Následne sa reakčná zmes okysli za prítomnosti organického rozpúšťadla nemiešateľného s vodou.
Po nastavení pH na asi 0,1 až asi 1,5 sa vrstvy oddelia a pH vodnej vrstvy sa nastaví na pH 2 až 5. Kryštalická 7-ADCA sa potom odfiltruje.
Deacylácia sa takisto môže uskutočňovať chemicky, ako je známe zo stavu techniky, napríklad cez vytvorenie iminochloridového bočného reťazca, pridaním chloridu fosforečného pri teplote nižšej ako 10 °C a potom izobutanolu pri teplotách okolia alebo nižších.
Nasledujúce príklady sú predložené na ilustráciu a nie na obmedzenie rozsahu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Fermentačná výroba fenylacetyl-7-ADCA
P. chrysogenum línia PanlabsP14-B10, uložená v CBS pod číslom 455, 95, sa použije ako hostiteľská línia pre konštrukty expresnej kazety expandázy.
Použitá expresná kazeta obsahujúca gén expandázu pod IPNS génom P. chrysogenum transkripčnými a translačnými regulačnými signálmi je opísaná v Crawford a kol. (suprd). Podmienky transformácie a kultivácie sú opísané v Crawford a kol.ísi/pra)· Transformanty sú purifikované a analyzované pre expresiu enzýmu expandázy testovním ich kapacity na výrobu adipoyl-7-ADCA, ako je to opísané Crawfordom a kol. (supra).
Adipoyl-7-ADCA produkujúci transformanty, ako napríklad P. chrysogenum línia PC 100, uložená s ATCC pod číslom 74182, sú inokulované pri 2,106 konídií/ml do očkovaného prostredia zloženého z (g/1): glukózy, 30; Pharmamedia (jedlé semená bavlníka), 10; nasiaknutej kukuričnej pevnej hmoty, 20; (NH4)2SO4, 20; CaCO3, 5; KH2PO4, 0,5; laktózy, 10; kvasinkového extraktu, 10 pri pH pred sterilizáciou 5,6.
Zárodočná kultúra (20ml v 250 ml Erlemyerovej banke uzatvorene bavlnenou zátkou) sa inkubuje pri 25 °C pri 220 ot./min. Po 48 hodinách sa použije 1 ml na inokuláciu 15 ml produkčnéh prostredia zloženého z (g/1): KH2PO4, 0,5; K2SO4, 5; (NH4)2SO4, 17,5; laktóza 140; Pharmamedia, 20; CaCO3, 10; sadlo, 10 pri pH pred sterilizáciou 6,6.
Po inukulácii zárodočnou kultúrou sa 0,15 - 0,75 ml 10 % roztoku kyseliny fenyloctovej, nastavenej pomocou KOH na pH 7,0 pridá do fermentácie.
Produkčná kultúra sa naočkuje inokulom pri 25 °C pri 220 ot/min., počas 168 hodín v 250 ml Erlemeyerovej banke uzatvorenej mliečnym filtrom. Odparovaná voda sa dopĺňa každý ďalší deň.
Na konci fermentačnej výroby sa mycélium odoberie odstredením alebo filtráciou a penicilín G a fenylacetyl-7-ADCA sa analyzujú HPLC.
Príklad 2
Analýza výroby fenylacetyl-7-ADCA
Fermentačné produkty z transformovaných Penicillium línií sa analyzujú vysokovýkonnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC). HPLC systém je zložený z nasledujúcich spektrálnych komponentov: P1500 systém uvoľňovania rozpúšťadla, AS 1000 vstrekovacie zariadenie, UVI000 detektor premennej vlnovej dĺžky (nastavený na 214 nm) a 1SM 100 integrátor alebo podobný. Stacionárnou fázou je Chrompack Chromspher C18 kolóna. Mobilná fáza je zložená zo 75 % fosfátového pufra pH 2,6 a 25 % acetonitrilu. Produkty sa stanovia porovnaním so štandardnou krivkou fenylacetyl-7-ADCA a penicilínu G. Totožnosť fenylacetyl-7-ADCA sa stanoví 600MHz NMRdeutero-chloroformového roztoku získaného kyslou extrakciou kultivačného filtrátu. Rezonancia fenylacetyl-7-ADCA v kyselinovom extrakte dokazuje zhodu s rezonanciou syntetickej vzorky.
Claims (4)
- PATENTOVÉ NÁROKYL Spôsob prípravy a izolácie 7-aminodesacetoxycefalosporánovej kyseliny (7-ADCA), vyznačujúci sa tým, že sa:a) transformuje bunková línia Penicillium chrysogenum expandázovým génom, pri transkripčnej a translačnej regulácii signálov hubovej expresie;b) uvedená línia sa fermentuje v kultivačnom prostredí a Jo uvedeného kultivačného prostredia sa pridá kyselina fenyloctová alebo jej soľ alebo ester vhodné na získanie penicilínu G, ktorý sa expanduje do formy fenylacetyl-7-ADCA;c) fenylacetyl-7-ADCA sa izoluje z fermentačnej živnej pôdy;d) deacyluje sa fenylacetyl-7-ADCA; ae) izoluje sa kryštalická 7-ADCA.
- 2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že stupňom (e) je filtrácia.
- 3. Spôsob podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že stupňom (c) je filtrácia a filtrát živnej pôdy sa extrahuje organickým rozpúšťadlom nemiešateľným vodou pri pH nižšom ako asi 4,5 a to isté sa spätne extrahuje vodou pri pH medzi 4 a 10.
- 4. Spôsob podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že gén expandázy pochádza z Streptomyces clavuligerus alebo Nocardia lactamdurnas.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP95201455 | 1995-06-02 | ||
| PCT/EP1996/002434 WO1996038580A1 (en) | 1995-06-02 | 1996-06-03 | Process for the production of 7-adca via expandase activity on penicillin g |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK163097A3 SK163097A3 (en) | 1998-05-06 |
| SK280539B6 true SK280539B6 (sk) | 2000-03-13 |
Family
ID=8220352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1630-97A SK280539B6 (sk) | 1995-06-02 | 1996-06-03 | Spôsob výroby 7-aminodesacetoxycefalosporánovej ky |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6020151A (sk) |
| JP (1) | JPH11505726A (sk) |
| KR (1) | KR100421225B1 (sk) |
| CN (1) | CN1084791C (sk) |
| AT (1) | ATE209255T1 (sk) |
| BR (1) | BR9608954A (sk) |
| CA (1) | CA2223105A1 (sk) |
| DE (1) | DE69617228T2 (sk) |
| DK (1) | DK0828850T3 (sk) |
| ES (1) | ES2167568T3 (sk) |
| HU (1) | HUP9801906A3 (sk) |
| PL (1) | PL182509B1 (sk) |
| RU (1) | RU2192471C2 (sk) |
| SK (1) | SK280539B6 (sk) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6383773B2 (en) * | 1998-04-23 | 2002-05-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Penicillin conversion |
| MD4030C2 (ro) * | 2009-12-12 | 2010-11-30 | Тимофей ПОПЕСКУ | Bază pentru prepararea mediilor nutritive pentru cultivarea microorganismelor din genul Mycobacterium şi procedeu de obţinere a acesteia |
| CN101880302B (zh) * | 2010-06-11 | 2012-10-24 | 中国科学院海洋研究所 | 一种多羟基甾醇衍生物及其制备和应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL81555A0 (en) * | 1986-11-17 | 1987-09-16 | Baldwin Jack Edward | Enzymatic process for 3-substituted cephalosporins |
| US5070020A (en) * | 1988-05-09 | 1991-12-03 | Eli Lilly And Company | Recombinant dna expression vectors and dna compounds that encode deacetoxycephalosporin c synthetase |
| KR100227711B1 (ko) * | 1991-10-15 | 1999-12-01 | 한스 발터 라벤 | 7-아미노세팔로스포란산 및 7-아미노데아세틸세팔로스포란산 제조를 위한 신규한 생물학적 공정 |
| SK282617B6 (sk) * | 1993-07-30 | 2002-10-08 | Dsm N. V. | Spôsob výroby a izolácie 7-aminodesacetoxycefalosporánovej kyseliny |
| PL180799B1 (pl) * | 1993-07-30 | 2001-04-30 | Gist Brocades Bv | Sposób wydajnego wytwarzania 7-ADCA poprzez 2-(karboksyetylotio)acetylo-7-ADCA i 3-(karboksymetylotio)-propionylo-7-ADCA |
| US5731165A (en) * | 1995-06-02 | 1998-03-24 | Gist-Brocades, B.V. | Process for the production of 7-ADCA via expandase activity on penicillin G |
-
1996
- 1996-06-03 AT AT96917498T patent/ATE209255T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-06-03 PL PL96323639A patent/PL182509B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-06-03 CN CN96195316A patent/CN1084791C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-03 RU RU98100072/13A patent/RU2192471C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-06-03 CA CA002223105A patent/CA2223105A1/en not_active Abandoned
- 1996-06-03 BR BR9608954A patent/BR9608954A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-06-03 US US08/973,292 patent/US6020151A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-03 HU HU9801906A patent/HUP9801906A3/hu unknown
- 1996-06-03 ES ES96917498T patent/ES2167568T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-03 DK DK96917498T patent/DK0828850T3/da active
- 1996-06-03 JP JP8536220A patent/JPH11505726A/ja not_active Abandoned
- 1996-06-03 SK SK1630-97A patent/SK280539B6/sk unknown
- 1996-06-03 DE DE69617228T patent/DE69617228T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-03 KR KR1019970708709A patent/KR100421225B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0828850T3 (da) | 2002-05-21 |
| SK163097A3 (en) | 1998-05-06 |
| JPH11505726A (ja) | 1999-05-25 |
| CN1190440A (zh) | 1998-08-12 |
| BR9608954A (pt) | 1999-03-02 |
| HUP9801906A3 (en) | 2001-01-29 |
| PL182509B1 (pl) | 2002-01-31 |
| PL323639A1 (en) | 1998-04-14 |
| HUP9801906A2 (hu) | 1998-11-30 |
| DE69617228T2 (de) | 2002-06-27 |
| ATE209255T1 (de) | 2001-12-15 |
| US6020151A (en) | 2000-02-01 |
| DE69617228D1 (de) | 2002-01-03 |
| CN1084791C (zh) | 2002-05-15 |
| KR19990022230A (ko) | 1999-03-25 |
| ES2167568T3 (es) | 2002-05-16 |
| RU2192471C2 (ru) | 2002-11-10 |
| CA2223105A1 (en) | 1996-12-05 |
| KR100421225B1 (ko) | 2004-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0912754B1 (en) | Process for the fermentative production of deacylated cephalosporins | |
| JP3072101B2 (ja) | ７―ａｄｃａの生化学的新規製造法 | |
| US5731165A (en) | Process for the production of 7-ADCA via expandase activity on penicillin G | |
| Vandamme | Peptide antibiotic production through immobilized biocatalyst technology | |
| CZ15896A3 (en) | Process for preparing and isolation of 7-aminodesacetoxycephalosporanic acid, recombinant dna vector and host cell | |
| EP0711348B1 (en) | Process for the efficient production of 7-adca via 3-(carboxyethylthio)propionyl-7-adca | |
| US5919680A (en) | Process for the production of SSC's via expandase activity on penicillin G | |
| RU2208643C2 (ru) | Способ получения n-деацилированного цефалоспорина | |
| US6020151A (en) | Process for the production of 7-ADCA via expandase activity on penicillin G | |
| MXPA98010758A (en) | Process for the fermentative production of deacylated cephalosporins | |
| EP0716698B1 (en) | Process for the efficient production of 7-ADCA via 2-(carboxyethylthio)acetyl-7-ADCA and 3-(carboxymethylthio)propionyl-7-ADCA | |
| MXPA98010757A (en) | Process for the fermentative production of deacylated cephalosporins | |
| RU2139350C1 (ru) | Способ эффективного производства 7-адцк через 3-(карбоксиэтилтио)пропионил-7-адцк | |
| MXPA99005545A (en) | Process for the production of penicillin g or v, cephalosporin g or v, and derivatives thereof |