SK15592002A3

SK15592002A3 - Spôsob a medziprodukty na prípravu substituovaných acetálov kyseliny aspartovej

Info

Publication number: SK15592002A3
Application number: SK1559-2002A
Authority: SK
Inventors: Marion W. Wannamaker; Cornelin Forster
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date: 2000-04-24
Filing date: 2001-04-19
Publication date: 2003-04-01
Also published as: NO20024111L; DE60142470D1; HK1053307A1; CZ20023506A3; US7109357B2; IL152393A0; RU2002135317A; BG107028A; WO2001081330A3; WO2001081330A2; NO20024111D0; ZA200206658B; US20030119899A1; EP1278737B1; CA2402128A1; AU2001253692B2; AU5369201A; EP1278737A2; ES2347133T3; ATE472539T1

Description

Spôsob a medziprodukty na prípravu substituovaných acetálov kyseliny aspartovej

Táto prihláška nárokuje prioritu US doterajšej patentovej prihlášky 60/199 329, podanej 24.4.2000.

Oblasť techniky

Vynález sa týka spôsobu prípravy substituovaných acetálov kyseliny aspartovej. Postup je použiteľný na prípravu biologicky aktívnych zlúčenín, najmä inhibítorov kaspázy, alebo ich profarmák, ako sú inhibítory interleukín-ΐβ konvertujúceho enzýmu („ICE).

Doterajší stav techniky

Kaspázy . sú rodina cysteínových proteolytických enzýmov, ktoré sú kľúčovými sprostredkovateľmi pri signalizácii ciest pre apoptózu a demontáž buniek (Thornberry, Chem. Biol., 1998, 5,

R97-R103). Apoptóza, alebo programové hynutie buniek je základným mechanizmom, ktorým organizmus eliminuje nežiaduce bunky. Deregulácia apoptózy, buď nadbytočná apoptóza alebo zlyhanie priebehu apoptózy je príčinou radu ochorení, ako je rakovina, akútne zápaly a autoimúnne poruchy a určité neurodegeneratívne poruchy (pozri všeobecne Science, 1998, 281, 1283-1312; Ellis a kol., Ann. Rev. Celí. Biol., 1991, 7, 663). Kaspáza-1, prvá identifikovaná kaspáza, je tiež známa ako interleukín-ΐβ konvertujúci enzým alebo „ICE. Kaspáza-1 konvertuje prekurzor interleukín-ΐβ („pIL-Ιβ) na pro-zápalovo aktívnu formu špecifickým štiepením pIL-Ιβ medzi Asp-116 a Ala-117. Okrem kaspázy-1 je tiež známych 11 iných ľudských kaspáz, ktoré sa klasifikovali do rodín na základe ich biologických funkcií.

Uviedol sa rad užitočných inhibítorov kaspáz, ktoré obsahujú ako časť molekuly aldehyd aspartovej kyseliny, ktorý existuje v rovnováhe s jeho cyklickou hemiacetálovou formou, ako je uvedené ďalej:

kde R² je zvyšok molekuly kaspázového inhibítora. Na základe hemiacetálu sa vyvinuli orálne dostupné profarmaká týchto inhibítorov, ktoré majú acetálovú štruktúru 1, kde R¹ je alkylová skupina alebo aralkylová skupina, ako je napríklad zlúčenina vzorca 2. Tento ICE inhibítor 2 je profarmakum, vyvinuté na liečenie reumatickej artritídy (pozri US Patent 5, 716, 929).

Postup pre prípravu peptidických inhibítorov kaspáz, profarmák všeobecného vzorca 1, kde R¹ je benzylová skupina a R² je sekvencia aminokyselín Ac-Y-V-A, je opísaná v práci Chapman a kol., (Bioorg. Med. Chem. Lett., 1992, 2 (6), 613). Avšak tento postup má značné nevýhody, najmä ak sú žiaduce chirálne zlúčeniny. Napríklad, postup vyžaduje drahé východiskové materiály a chromatografickú separáciu diastereomérov (pozri diskusiu v PCT prihláške WO/9903852) .

Nedávno sa opísal kratší postup na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca 1, kde R¹ je etylová skupina (PCT patentová prihláška WO/9903852) . Postup zahŕňa konjugovanú adíciu aralkylamínu na alkoxyfuranón 3, pričom vznikajú diastereomérne zlúčeniny

4, ako je uvedené ďalej:

4 S,R-5 kde R³ je alkylová skupina s jedným až štyrmi atómami uhlíka a R⁴je prípadne substituovaná arylová skupina. Diastereoméry 4, alebo ich adičné soli sú podlá údajov oddeliteľné kryštalizáciou. Aralkylová skupina na amíne sa môže potom odstrániť hydrogenolýzou a uvoiní sa zlúčenina 5, ktorá je užitočným syntetickým medziproduktom na prípravu inhibítorov kaspáz. Jedným obmedzením tohto postupu sú podmienky hydrogenolýzy, používané na odštiepenie R³R⁴CH- ak R¹ je benzylová skupina. Za týchto podmienok sa tiež odštiepi substituent R¹.

Je teda žiaduce mať syntetickú cestu pre inhibítory kaspáz na báze acetálov aspartovej kyseliny, alebo ich profarmák, ktoré by umožňovali prípravu vo veľkom a odstraňovali skôr uvedené nevýhody alebo inak zlepšovali doterajšie metódy.

Podstata vynálezu

Tento vynález sa týka spôsobu prípravy zlúčenín všeobecného vzorca I

v ktorom

R¹ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny zahŕňajúcej alifatickú skupinu, aralkylovú skupinu, heterocyklylalkylovú skupinu alebo arylovú skupinu a

R* je organický zvyšok.

Postup sa používa najmä na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorých R² je P₂-P₄ časť molekuly inhibítora kaspázy alebo jej časť.

Určité zlúčeniny všeobecného vzorca I sú profarmaká inhibítorov kaspázy, najmä ICE inhibítorov. R² je výhodne akákoľvek časť, ktorá v prípade, ak je pripojená na zvyšok molekuly všeobecného vzorca I, poskytuje inhibítor. Časti R² sa konkrétne opisujú v odbore ako P₂, P3 alebo P₄ časti molekuly alebo miesta. Tieto P_x výrazy sú odkazované na sekvenciu aminokyselín vedia aspartylového štiepiaceho miesta príslušného kaspázového substrátu. Pi opisuje aspartylový zvyšok substrátu, kde kaspázou indukované štiepenie sa vyskytuje v prírodnom substráte. U novo navrhnutých nepeptidických inhibítorov kaspázy, označenie P_x sa často zachováva, aby sa ukázalo ktorá časť sekvencie aminokyselín sa nahradila nepeptidickou časťou molekuly. Ako je tu použité, výraz „P₂-P₄ časť molekuly sa týka buď sekvencie aminokyselín opísanej skôr alebo chemickej časti molekuly známej ako náhrada tejto sekvencie pre ciele stať sa substrátom kaspázy, a najmä ICE substrátom.

P₂-P₄ častí molekuly, ktoré

Príklady opísané a kol.) ; a kol.) a kol.) bert);

(Idun); WO 98/11109 (Idun);, (Warner-Lambert), ktoré všetky

v US 5	919	790	(Alien a	kol.)
; US 5	847	135	(Bemis	a kol
; US 5	756	466	(Bemis	a kol
; US 5	656	627	(Bemis a	kol.) ;
Doile a	kol.	., J.	Med. Chem., 40

sú nepeptidické, sú 5 874 424 (Batchelor US 5 843 904 (Bemis US 5 716 929 (Bemis 99/36426 (Warner-Lam1941 (1997) ; WO 98/10778

WO 98/11129 (Idun) a WO 98/16502 sú tu uvedené ako odkazy.

Jedna metóda podľa'tohto postupu na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I, tu uvedená ako metóda A, zahŕňa stupne:

(a) získanie butenolaktónu všeobecného vzorca II:

(II)

O-_R1 v ktorom R¹ má význam uvedený skôr;

I (b) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca II s azidom N₃-Y, kde Y je atóm vodíka, silylová skupina alebo protiión, pričom vznikne azidolaktón všeobecného vzorca III:

(III) (c) prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca III na aminolaktón IV alebo iminofosforan V:

(IV) (V) (d) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca IV alebo všeobecného vzorca V s R²COOH alebo jej reaktívnym ekvivalentom, pričom vznikne zlúčenina všeobecného vzorca I.

Rozumie sa, že skupina R² sa môže zvoliť z akéhokoľvek organického zvyšku, ktorý je stabilný v podmienkach kopulačnej reakcie, ako sú podmienky tu opísané. Výhodne R² je P₂-, P₂-P3~z alebo Ρ₂-Ρ₃-Ρ₄- časť molekuly.

Ak nie je uvedené inak, používajú sa ďalej nasledujúce definície. Výraz „laktón a „furanón sa môžu použiť zameniteľné, ako je známe odborníkom v odbore. Výraz „alifatický, ako sa tu použil znamená nerozvetvené, rozvetvené alebo cyklické uhľovodíky s 1 až 12 atómami uhlíka, ktoré sú plne nasýtené alebo obsahujú jednu alebo viac jednotiek nenasýtenosti. Napríklad, vhodné alifatické skupiny zahŕňajú substituované alebo nesubstituované lineárne, rozvetvené alebo cyklické alkylové skupiny, alkenylové skupiny, alkinylové skupiny a ich hybridy, ako sú (cykloalkyl)alkylové skupiny, (cykloalkenyl)alkylové skupiny alebo (cykloalkyl)alkenylové skupiny. Výrazy „alkyl a „alkoxy použité samostatne alebo ako časť väčšej časti molekuly sa týkajú ako nerozvetvených tak rozvetvených reťazcov obsahujúcich 1 až 12 atómov uhlíka. Výrazy „alkenyl a „alkinyl použité samostatne alebo ako časť väčšej časti molekuly zahŕňajú ako nerozvetvené alebo rozvetvené reťazce, ktoré obsahujú 2 až 12 atómov uhlíka. Výraz „aryl, použitý samostatne alebo ako časť väčšej časti molekuly, ako v „aralkyle, znamená aromatické cyklické skupiny s 5 až 14 členmi, ako je fenylová skupina, benzylová skupina, 1-naftylová skupina, 2-naftylová skupina,

1- antracylová skupina a 2-antracylová skupina, a heterocyklické aromatické skupiny alebo heteroarylové skupiny, ako sú

2- furanylová skupina, 3-furanylová skupina, N-irnidazolylová skupina, 2-imidazolylová skupina, 4-imidazolylová skupina, 5-imidazolylová skupina, 3-izoxazolylová skupina, 4-izoxazolylová skupina, 5-izoxazolylová skupina, 1, 3,4-oxadiazolylová skupina, 1,2,4-oxadiazolylová skupina, 2-oxadiazolylová skupina, 5-oxadiazolylová skupina, 2-oxazolylová skupina, 4-oxazolylová skupina, 5-oxazolylová skupina, 2-pyrolylová skupina, 3-pyrolylová skupina, 2-pyridylová skupina, 3-pyridylová skupina, 4-pyridylová skupina, 2-pyrimidylová skupina, 4-pyrimidylová skupina, 5-pyrimidylová skupina, 3-pyridazinylová skupina, 2-tiadiazolylová skupina, 5-tiadiazolylová skupina, 2-tiazolylová skupina, 4-tiazolylová skupina, 5-tiazolylová skupina, 5-tetrazolylová skupina, 2-triazolylová skupina, 5-triazolylová skupina, 2-tienylová skupina alebo 3-tienylová skupina. Výraz „arylový kruh sa týka tiež kruhov, ktoré sú prípadne substituované. Arylové skupiny sa týkajú tiež kondenzovaných polycyklických aromatických kruhových systémov v ktorých karbocyklický aromatický kruh alebo heteroarylový kruh je kondenzovaný na jeden alebo viac iných kruhov. Príklady sú tetrahydronaftylová skupina, benzimi7 dazolylová skupina, benzotienylová skupina, benzofuranylová skupina, indolylová skupina, chinolinylová skupina, benzotiazolylová skupina, benzooxazolylová skupina, benzimidazolylová skupina, izochinolinylová skupina, izoindolylová skupina, akridinylová skupina, benzoizoxazolylová skupina a podobne. Do rozsahu výrazu „aryl, ako sa tu použil, spadajú tiež skupiny s jedným alebo viacerými karbocyklickými aromatickými kruhmi a/alebo heteroarylovými kruhmi, ktoré sú kondenzované na cykloalkylovú skupinu alebo nearomatický heterocyklický kruh, ako je napríklad indanylová skupina alebo tetrahydrobenzopyranylová skupina. Výraz „heterocyklické skupina sa týka nasýteného a nenasýteného monocykiického alebo polycyklického kruhového systému, ktorý obsahuje jeden alebo viac heteroatómov v kruhu s veľkosťou 3 až 8 atómov v kruhu, ako je piperidinylová skupina, piperazinylová skupina, tetrahydrofuranylová skupina, pyrolidinylová skupina, tetrahydropyranylová skupina, morfolinylová skupina a podobne.

Alifatické skupiny, alkylové skupiny, arylové skupiny, heterocyklické skupiny, alebo a karbocyklické skupiny môžu obsahovať jeden alebo viac substituentov. Substituenty sú vybrané z tých, ktoré sú stabilné za podmienok reakcie podía tohto vynálezu, ako je všeobecne známe odborníkom v odbore. Príklady substituentov sú atómy halogénu, skupiny -R, -OR, -OH, chránené -OH (ako je acyloxyskupina) , fenylová skupina, substituovaná fenylová skupina, skupina -Ofenyl, substituovaná -Ofenyl skupina, skupiny -N0₂, -CN, -NHR, -N(R)₂, -NHCOR, -NHCONHR, -NRCONHR, -NHCON(R)₂, -NRCON(R)₂, -NRCOR, -nhco₂r, -nrco₂r, -co₂r, -COR, -CONHR, -CON(R)_2z -S(O)₂R, -SONH₂, -S(O)R, -SO₂NHR, -SO₂N(R)_2z -NHS(O)₂R, -NRS(O)₂R, =o, =S, =NNHR, =NNR₂, =N-OR, =NNHC0R, =NNRC0R, =NNHCO₂R, =NNRC0₂R, =NNHSO₂R, =NNRSO₂R alebo =NR, kde R je prípadne substituovaná alifatická skupina, arylová skupina alebo arylalkylová skupina.

Substituovateľný atóm dusíka v heterocyklickom kruhu môže byť prípadne substituovaný. Vhodnými substituentami na atóme dusíka sú skupiny R, COR, S(O)₂R a CO₂R, kde R je alifatická skúpi8 na alebo substituovaná alifatická skupina.

Ak nie je uvedené inak, znamená, že tu uvedené štruktúry tiež zahŕňajú všetky stereochemické formy štruktúr, to je R a S konfiguráciu na každom z asymetrických centier. Preto do rozsahu predloženého vynálezu spadajú jednotlivé stereochemické izoméry ako aj enantiomérne a diastereomérne zmesi uvedených zlúčenín. Ak nie je uvedené inak, uvedené štruktúry tiež zahŕňajú tie zlúčeniny, ktoré sa odlišujú len prítomnosťou jedného alebo viacerých izotopicky obohatených atómov. Napríklad, zlúčeniny, ktoré majú uvedenú štruktúru okrem náhrady atómu vodíka za atóm deutéria alebo trítia alebo náhradu atómu uhlíka za uhlík obohatený ¹³C- alebo ¹⁴C-, spadajú do rozsahu podľa tohto vynálezu.

Butenolaktóny všeobecného vzorca II sú zlúčeniny ľahko dostupné a nie sú nákladné. Výhodnými skupinami R¹ sú metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, 2-propylová skupina, butylová skupina, pentylová skupina, hexylová skupina, 4-metylpentylová skupina,. 2-metylpropylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina, cyklopentylmetylová skupina, cyklohexylmetylová skupina, fenyletylová skupina, fenylpropylová skupina, fenylbutylová skupina, (d)-mentylová skupina, (1)-mentylová skupina, 1-adamantylová skupina, 2-adamantylová skupina, 1-indanylová skupina, 2-indanylová skupina, bornylová skupina,

3- tetrahydrofuranylová skupina, benzylová skupina, a-metylbenzylová skupina, 4-chlórbenzylová skupina, 4-fluórbenzylová skupina, 4-metylbenzylová skupina, 4-(2-propyl)benzylová skupina a

4- trifluórmetylbenzylová skupina. Najvýhodnejšími skupinami R¹ je etylová skupina a benzylová skupina.

Azidolaktóny III sa môžu získať konjugáciou alebo Michaelovou adíciou skupiny N₃ na zlúčeninu všeobecného vzorca II, postupom, ktorý je všeobecne známy v odbore pre analogické zlúčeniny (pozri S.J. Miller a kol., 1999, Org. Lett., 1 (7), 1107). Napríklad zlúčenina všeobecného vzorca III sa môže získať adíciou zlúčeniny všeobecného vzorca II na dopredu zmiešaný roztok zlúčeniny vzorca N₃-Y a kyslého katalyzátora vo vhodnom rozpúšťadle a nasledujúcim pridaním Lewisovej zásady. Ako azidy sa môžu použiť akékoľvek vhodné nukleofilné azidy známe v odbore. Príklady takýchto azidov sú azidy alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín, ako je azid sodný alebo azid lítny, tetraalkylamónium azid, azidotrialkyl-, azidotriaryl-, azidoalkyldiaryl- alebo azidodialkylarylsilán, ako je trimetylsilylazid, trifenylsilylazid, alebo difenylmetylsilylazid, alebo azidotrialkylcíny, ako je azidotrimetylcín alebo azidotributylcín.

Ak N₃-Y je trisubstituovaný silylazid, ako je trimetylsilylazid, môžu sa použiť nasledujúce podmienky a reakčné činidlá. Vhodnými kyslými katalyzátormi sú karboxylové kyseliny, ako je kyselina mravčia, kyselina octová, kyselina propánová a kyselina benzoová a halogénované karboxylové kyseliny, ako je kyselina trifluóroctová a kyselina trichlóroctová a Lewisove kyseliny, ako je BF₃-OEt2, chlorid hlinitý, chlorid zinočnatý a chlorid titanitý. Výhodnými kyselinami je kyselina octová a BF₃-OEt2. Vhodnými rozpúšťadlami sú éterické rozpúšťadlá, ako je tetrahydrofurán, dimetyléter, dietyléter, metyl-terc-butylketón, alebo dioxán; aromatické uhľovodíky, ako je benzén, toluén alebo xylén; halogénované uhľovodíky, ako je chloroform, chlorid uhličitý, dichlórmetán 'alebo dichlóretán. Výhodným rozpúšťadlom je dichlórmetán. Lewisova zásada musí byť prítomná len v katalytickom množstve. Vhodnými Lewisovými zásadami sú alifatické terciárne amíny, ako je trietylamín, diizopropylamín, 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-én (DBU), 1,5-diazabicyklo[4.3.0]non-5-én (DBN); heteroaromatické zásady, ako je N-alkylimidazol (ktorý sa môže viazať na živicu) alebo pyridín. Výhodnou zásadou je DBU. Reakcia sa môže uskutočňovať pri teplotách v rozsahu od asi 0 až 100°C, výhodne v rozsahu asi 0 až 40°C a najlepšie v rozsahu asi 20 až 40°C. Koncentrácia zlúčeniny všeobecného vzorca II sa pohybuje v rozsahu od 0,01M do 10M, výhodne asi od 0,1 do l,0M.

Množstvo reakčného komponentu N₃-Y, ako je trimetylsilylazid a Lewisovej kyseliny je všeobecne v rozsahu od asi 1,0 do 10 ekvivalentov na ekvivalent zlúčeniny všeobecného vzorca II.

Opísané podmienky a reakčné zložky na prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca II na zlúčeninu všeobecného vzorca III môžu byť rôzne v závislosti od typu zlúčeniny N₃-Y. Ak zlúčenina N₃-Y je azid, v ktorom opačne nabitý ión je alkalický kov alebo kov alkalickej zeminy, ako je lítium, sodík, bárium alebo vápnik, môžu sa použiť nasledujúce podmienky a reakčné činidlá. Množstvo azidu môže byť znova v rozsahu od asi 1,0 do 10,0 ekvivalentov. Reakčná teplota je rovnaká ako tá, ktorá je opísaná pre trimetylsilylazid. Vhodné kyseliny zahŕňajú kyselinu mravčiu, kyselinu octovú, kyselinu benzoovú a pufrované kyseliny, ako je tetrabutylamónium hydrogensulfát, chlorid amónny, octan amónny a mravčan amónny. Výhodnými kyselinami je kyselina octová, tetrabutylamónium hydrogensulfát a chlorid amónny. Množstvo kyseliny sa obvykle pohybuje v rozsahu od asi 1,0 do asi 10,0 ekvivalentov. Vhodnými rozpúšťadlami sú aprotické organické rozpúšťadlá, ako je acetón, W-metylpyrolidón, metyletylketón, tetrahydrofurán (THF), dioxán, dimetoxyetán (DME), dimetylformamid (DMF) a halogénované uhlovodíky opísané skôr.

Ak N₃-Y je HN₃, je výhodné, ak sa použije prebytok azidu, všeobecne od asi 5 do 25 ekvivalentov azidu na ekvivalent butenolaktónu II (pozri Lakschmipathi a kol., 1997, Tetrahedron Lett., 38 (14), 2551). Je potrebné len katalytické množstvo zásady, všeobecne od asi 0,01 do 0,25 ekvivalentov, výhodne aspoň 0,10 ekvivalentov. Vhodnými zásadami sú terciárne amínové zásady, ako je trietylamín, diizopropylamín, DBU, DBN alebo aromatické N-heterocykly, ako sú pyridín, alkylpyridíny a N-alkylimidazol (ktorý sa môže viazať na živicu), výhodne trietylamín. Vhodnými rozpúšťadlami sú aromatické uhlovodíky, ako je benzén, toluén alebo xylén, výhodne toluén. Reakčná teplota sa všeobecne pohybuje v rozsahu od asi 20°C do asi 110°C, výhodne od asi 70°C do asi 90°C.

Ak N₃-Y je Et2AlN₃, potom sa výhodne používajú asi od 1,0 do 3,0 ekvivalentov azidu na ekvivalent butenolaktónu II (Chung a kol., 1998, Bull. Korean Chem. Soc., 9, 269). Vhodnými rozpúšťadlami sú aprotické organické rozpúšťadlá, ako je dietyléter, metyl-terc-butyléter, dioxán, tetrahydrofurán, hexán, benzén a toluén, ktorý je výhodným rozpúšťadlom. Reakčná teplota sa pohybuje v rozsahu od asi -20°C do asi 40°C, výhodne od asi 20°C do asi 40°C.

Azidolaktón všeobecného vzorca III sa môže previesť na zodpovedajúci aminolaktón všeobecného vzorca IV hydrogenáciou alebo reakciou s trifenylfosfinom. Hydrogenácia je výhodnejšia, ak R¹je skupina, ktorá je stabilnejšia za hydrogenačných podmienok, ako alkylová skupina. Môžu sa použiť štandardné hydrogenačné podmienky, ako je použitie plynného vodíka pri tlaku 0,1-0,4 MPa. Alternatívne sa vodík môže generovať in situ, známymi metódami, ako je z mravčanu amónneho v podmienkach fázového prenosu.

Azidolaktóny všeobecného vzorca III, ktoré obsahujú benzylovú a iné R¹ skupiny, ktoré nie sú stále pri hydrogenácii sa môžu redukovať na aminolaktón všeobecného vzorca IV trifenylfosfinom s použitím známej Staudingerovej reakcie. Podobnými redukčnými činidlami sú trimetylfosfin, trietylfosfin alebo tributylfosfin, alebo alkyldifenylfosfinit, ako je metyldifenylfosfinit alebo etyldifenylfosfinit. Pre túto redukciu sú vhodnými rozpúšťadlami organické rozpúšťadlá, ako je tetrahydrofurán, dioxán, acetonitril, acetón a dimetyl f ormamid, ktorý obsahuje asi 1% až 50% vody, výhodne asi 5% až 10% vody. Výhodným organickým rozpúšťadlom je tetrahydrofurán. Reakčná teplota sa môže pohybovať v rozsahu od asi 0°C do asi 60°C, výhodne je v rozsahu 20°C a 40°C.

Alternatívne sa azidolaktón všeobecného vzorca III môže nechať reagovať s trifenylfosfinom alebo podobným redukčným činidlom za bezvodých podmienok, pričom vzniká iminofosforan všeobecného vzorca V, ktorý je užitočným medziproduktom:

(V)

Preto podľa jedného variantu metódy A prebieha postup cez medziprodukt všeobecného vzorca V a iného variantu metódy A prebieha postup cez medziprodukt všeobecného vzorca IV.

Aminolaktón všeobecného vzorca IV, ktorý sa získal skôr opísaným postupom, sa môže použiť bez izolácie z reakčnej zmesi. Požadovaný inhibítor kaspázy, profarmakum všeobecného vzorca I je odvodené zo zlúčeniny všeobecného vzorca IV pripojením príslušnej P₂, P₂-P3 alebo P2-P4 časti molekuly. Kopulácia zlúčeniny všeobecného vzorca IV s touto časťou molekuly sa môže uskutočňovať s použitím zodpovedajúcej karboxylovej kyseliny alebo jej reaktívneho ekvivalentu v štandardných podmienkach tvorby amidickej väzby alebo kopulačných podmienkach. Typická kopulačná reakcia zahŕňa vhodné rozpúšťadlo, zlúčeninu všeobecného vzorca IV v koncentrácii od asi 0,01 do 10M, výhodne od asi 0,1 do l,0M, potrebnú karboxylovú kyselinu, zásadu a peptidické kopulačné reakčné činidlo.

Ak sa zlúčenina všeobecného vzorca IV používa bez izolácie, potom sa kopulácia uskutočňuje in situ v rozpúšťadle reakčnej zmesi použitej na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca IV, alebo v inom rozpúšťadle. K tejto reakčnej zmesi sa potrebná karboxylová kyselina môže pridať a reakcia sa udržiava pri teplote v rozsahu od asi 0 do 100°C, výhodne v rozsahu asi 20 až 40 °C. Zásada a peptidické kopulačné činidlo sa potom pridá k zmesi, ktorá sa udržiava pri teplote v rozsahu od asi 0 do 60°C, výhodne v rozsahu asi 20 až 40°C. Typickými vhodnými zásadami sú terciárne aminické zásady, ako je trietylamín, diizopropyletylamín, N-metylmorfolín, DBU, DBN, N-metylimidazol, výhodne trietylamín alebo diizopropyletylamín. Množstvo použitej zásady sa všeobecne používa od asi 20 ekvivalentov na ekvivalent zlúče13 niny všeobecného vzorca IV, výhodne aspoň asi 3 ekvivalenty zásady. Príklady peptidických kopulačných činidiel sú DCC (dicyklohexylkarbodiimid) , DIC (diizopropylkarbodiimid), di-p-toluoylkarbodiimid, BDP (1-benzotriazol dietylfosfát-l-cyklohexyl-3-(2-morfolinyletyl)karbodiimid) , EDC (1-(3-dimetylaminopropyl-3-etylkarbodiimid hydrochlorid) , kyanurfluorid, kyanurchlorid, TFFH (tetrametylfluórformamidínium hexafluórfosfofát), DPPA (difenylfosforazidát), BOP (benzotriazol-l-yloxy-tris-(dimetylamino) fosfónium hexafluórfosfát) , HBTU (O-benzotriazol-l-yl-Ν,Ν,Ν'ζΝ-tetrametylurónium hexaf luórfosfát) , TBTU (O-benzotriazol-l-yl-Wz^V^/V-tetrametylurónium tetrafluórborát) , TSTU (0- (N-sukcínimidyl) -Ν,ΝζΝ',Ν-tetrametyluróniumtetrafluór-borát) , HATU (N-[(dimetylamino)-1-tf-l,2,3-triazolo[4,5,6]pyri-din-l-ylmetylén]-N-metylmetánamínium hexafluórfosfát-N-oxid), B0P-C1 {bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfínchlorid), PyBOP (1-H-1,2,3benzotriazol-l-yloxy)-tris-(pyrolidino)fosfónium tetrafluórfosfát) , BrOP (bróm-tris-(dimetylamino) fosfónium hexafluórfosfát), DEPBT (3-(dietoxyfosforyloxy)-l,2,3-benzotriazin-4(3H)-ón), PyBrOP (bróm-tris-(pyrolidino)fosfónium hexafluórfosfát). EDC, HOAT, ΒΟΡ-Cl a PyBrOP sú výhodnými peptidickými kopulačnými činidlami. Množstvo peptidického kopulačného činidla sa pohybuje v rozsahu od asi 1,0 do asi 10,0 ekvivalentov. Prípadnými reakčnými činidlami, ktoré sa môžu použiť pri reakcii tvorby amidickej väzby sú DMAP (4-dimetylaminopyridín) alebo aktívne esterové reakčné činidlá, ako je HOBT (1-hydroxybenzotriazol), HOAT (hydroxyazabenzotriazol), HOSu (hydroxysukcínimid), HONB (endo-N-hydroxy-5-norbornén-2,3-dikarboxamid), v množstvách v rozsahu od asi 1,0 do asi 10,0 ekvivalentov.

Alternatívne sa môže nechať reagovať buď zlúčenina všeobecného vzorca IV alebo zlúčenina všeobecného vzorca V s reaktívnym ekvivalentom karboxylovej kyseliny R²COOH, ako je P₂-C(=O)X, P₂-P₃-C(=O)X alebo P₂-P₃-P₄-C (=0) X, kde C(=O)X je skupina, ktorá je pri kopulačnej reakcii reaktívnejšia ako COOH. Príklady skupín C(=O)X sú skupiny, v ktorých X je atóm chlóru, atóm fluóru, skupina OC(=O)R (R = alifatická alebo arylová skupina), tioskupina, alkyltioskupina, aryltioskupina alebo Se-arylskupina. Ak sa používa zlúčenina všeobecného vzorca V, ktorá je medziproduktom, skôr ako zlúčenina všeobecného vzorca IV, potom výhodným derivátom kyseliny je atóm fluóru (X je F) . Vhodné podmienky na použitie týchto reaktívnych ekvivalentov sú známe odborníkom v odbore.

Je známy rad chemických skupín, ktoré sa môžu použiť ako P3-P2^_časti ICE alebo profarmák inhibítorov kaspáz. Príklady týchto P₃-P₂-skupín sú uvedené v Tabuľke 1, ako súčasť P4-P3-P2časti molekuly.

Tabulka 1 P₄-P3-P₂-skupiny

kde n je nula až tri; AA je bočný reťazec aminokyseliny; X je atóm dusíka, atóm kyslíka, atóm síry, skupiny SO, S0₂, CHF, CF₂, C (R³) ₂, C=0 alebo C=NOR; A je atóm kyslíka, atóm síry alebo H₂; Y je N alebo CH; R je atóm vodíka, alkylová skupina s 1 až 12 atómami uhlíka, arylová skupina alebo heteroarylová skupina, skupiny R sú prípadne substituované jedným alebo viacerými atómami halogénu; R³ je alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka; a R⁵ je atóm vodíka, atóm halogénu, alkylová skupina, alkoxylová skupina, halogénalkylová skupina, halogénalkoxylová skupina, aminoskupina, fenylová skupina, fenoxylová skupina, hydroxylová skupina, alkoxykarbonylová skupina, karboxylová skupina, alkylkarbonylové skupina, alkylsulfonylová skupina, alkylsulfoxylová skupina, alkylkarbonylaminoskupina, alkylkarbonylalkylaminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, aminosulfonylová skupina alebo kyanoskupina; a R⁶ a R⁷ sú nezávisle od seba vybrané zo substituentov R³, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, alkylarylovej skupiny s 1 až 12 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo benzocykloalkyl s 1 až 12 atómami uhlíka, alebo alkylheteroarylovej skupiny s 1 až 12 atómami uhlíka v alkylovej časti.

Výhodné P₄-P₃-P2^-skupiny sú uvedené v Tabuľke 2.

Tabulka 2 Výhodné P₄-P₃-P₂-skupiny

c-5 c-6 d-l

0-1

Ο

η-1 kde R⁶ je prípadne substituovaná benzylová skupina, ako sa opísa lo ďalej alebo 2-indanylová skupina a P₄ časť molekuly je repre zentovaná skupinou R-T-, kde R-T sú skupiny R-CO, ROC=O, RNHC=O RC(O)C=O alebo RSO₂.

Výhodné skupiny R v P₄ sú uvedené v Tabulke 3.

100

101

102

103

104

121

122

123

124

125 126 127

128

skupina, 2-naftylová skupina, 1-izochinolinylová skupina alebo skupina vzorca

kde polohy 3 a 5 substituenta R sú od seba nezávisle substituované atómom halogénu, výhodne atómom chlóru alebo alkylovou skupinou s 1 až 3 atómami uhlíka a poloha 4 je prípadne substituovaná aminoskupinou, acetamidoskupinou, hydroxyskupinou alebo metoxyskupinou.

Najvýhodnejšie P₄-P3-P2~skupiny sú uvedené v Tabuľke 4.

o-2a c-7a c-la

kde R zodpovedá v tabulke 3 jednej z nasledujúcich skupín: 100, 105, 107, 108, 114, 117, 119, 126, 136, 139, 140 a 141.

Pri pripájaní P₄-P₃-P₂-časti molekuly alebo jej častí, sa táto časť molekuly môže pripojiť v jednom kuse, ako sa opísalo skôr alebo ako jednotlivé diely, ktoré sa pripájajú postupne. Napríklad, Boc-chránený prolín sa môže kopulovať so zlúčeninou všeobecného vzorca IV, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca VI.

(VI)

Po odstránení Boe skupiny, sa P₃ alebo P₃-P4 časti molekuly môžu pripojiť alkyláciou alebo acyláciou atómu dusíka v prolíne.

O

(4R, 5R) -Hla (4S,5S)-Illb la

lb

IC

Id

Reakciou N₃-Y s racemickou zlúčeninou všeobecného vzorca II všeobecne vznikajú antiizoméry všeobecných vzorcov Hla a Illb, uvedené skôr. Tieto sa môžu previesť postupom podía vynálezu na antiprodukty všeobecných vzorcov la a Ib. V mnohých prípadoch R²je chirálnym fragmentom a zlúčeniny všeobecných vzorcov la a Ib sú diastereoméry. Na rozdelenie diastereomérov sa môže použiť chromatografia a/alebo kryštalizácia, v závislosti od typu substituentov R¹ a R². Epimerizácia buď zlúčeniny všeobecného vzorca la alebo Ib poskytuje syn izoméry všeobecných vzorcov lc alebo Id, prípadne. Epimerizačná reakcia sa uskutočňuje v prítomnosti protickej kyseliny alebo Lewisovej kyseliny (francúzska patentová prihláška 97/08932). Vhodnými Lewisovými kyselinami sú chlorid železitý, chlorid titaničitý, chlorid boritý, fluorid boritý a chlorid ciničitý a vhodnými protickými kyselinami sú organické kyseliny, ako je metánsulfónová kyselina, trifluóroctová kyselina a p-toluénsulfónová kyselina a minerálne kyseliny, ako je kyselina chlorovodíková a kyselina sírová.

Podía inej metódy podľa tohto vynálezu na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I, príprava prebieha cez butenolaktón VII, kde X je atóm chlóru, atóm brómu alebo- atóm jódu:

O (VII)

Výhodným východiskovým butenolaktónom všeobecného vzorca VII je brómfuranón (X = Br), ktorý sa môže získať podía publikácie

Escobar a kol., An. Quim., 1971, 67, 43. Tento postup sa ďalej označuje ako metóda B, zahŕňajúca stupne:

(a) získanie butenolaktónu všeobecného vzorca VII

O

(VII)

O'R¹ v ktorom R¹ má význam uvedený skôr a X je atóm chlóru, atóm brómu alebo atóm jódu;

(b) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca VII s azidom N3-Y, kde Y je silylová skupina alebo protiión, pričom vzniká azidobutenolaktón všeobecného vzorca VIII:

N3 (°

O-R1 (VIII) (c) prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca VIII na aminobutenolaktón všeobecného vzorca IX alebo iminofosforan všeobecného vzorca XI:

(d) kopuláciu buď zlúčeniny všeobecného vzorca IX alebo všeobecného vzorca XI s kyselinou Ŕ²COOH, álebo jej reaktívnym ekvivalentom, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca X:

a (e) redukciu furanónovej dvojitej väzby v kruhu v zlúčenine všeobecného vzorca X, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca I. R²COOH je organický zvyšok, výhodne P₂-, P2-P3·· alebo P2-P4. karboxylovej kyseliny.

Je zrejmé, že stupne (b) - (d) uvedené v metóde B sú· analogické tým, ktoré sa opísali v metóde A a môžu sa uskutočňovať podobným spôsobom.

Do rozsahu tohto vynálezu spadá kopulačná reakcia amínu všeobecného vzorca IX na zlúčeninu všeobecného vzorca I uskutočňovaná acyláciou aniónu všeobecného vzorca IX s použitím reaktívneho ekvivalentu karboxylovej kyseliny, ako je P₂ ^_z P2^-P3^- alebo P2-P3-P4-C(=0)X, kde C(=O)X má význam uvedený skôr. Anión zlúčeniny všeobecného vzorca IX sa najskôr generuje reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca IX v rozpúšťadle akoukoľvek vhodnou zásadou. Príklady rozpúšťadiel, ktoré sa môžu použiť, sú éterické rozpúšťadlá, ako je tetrahydrofurán, DME, dioxán, dietyléter, metyl-terc-butyléter; aromatické uhľovodíky, ako je benzén, toI luén, xylén; halogénované uhľovodíky, ako je dichlórmetán, chlorid uhličitý, dichlóretán; alebo iné organické rozpúšťadlá, ako je acetonitril. Výhodnými rozpúšťadlami sú tetrahydrofurán, DME, toluén alebo dichlórmetán. Vhodnými zásadami na generovanie aniónu sú organické zásady, ako je hydrid alkalického kovu, terc-butoxid alkalického kovu, alkyllítium alebo aryllítium, ako sú metyllítium, butyllítium alebo fenyllítium; amidy alkalického kovu, ako je lítium, nátrium alebo kálium bis- (trimetylsilyl) amid, diizopropylamid alebo tetrametylpiperidín. Výhodnými zásadami sú lítium bis-(trimetylsilyl) amid, lítium diizopropylamid alebo lítium tetrametylpiperidín. Anión zlúčeniny všeobecného vzorca IX sa nechá reagovať s ekvivalentom karboxylovej kyseliny pri teplote reakcie v rozsahu od asi -78°C do 120°C, výhodne v rozsahu asi 0°C až 60°C.

Azidobutenolaktón všeobecného vzorca VIII sa môže pripraviť

I zo zlúčeniny všeobecného vzorca VII vytesnením jej substituenta X azidom. Pre reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca VII v ktorom substituentom X je atóm brómu, sa reakcia výhodne uskutočňuje so soľou azidu s alkalickým kovom alebo kovom alkalickej zeminy, ako je azid sodný alebo azid lítny. Silylazid (N₃-Y, kde Y je silylová skupina, ako sa opísalo skôr) sa môže použiť v prítomnosti fluoridového reakčného činidla, ako je tetrabutylamónium fluorid, fluorid cézny, fluorid draselný, fluorid sodný alebo podobne a generuje sa tak nukleofilný azidový anión. Vhodnými rozpúšťadlami sú aprotické organické rozpúšťadlá, ako je acetón, NMP, MEK, THF, DME a dioxán a halogénovanú uhlovodíky, ako je chloroform, chlorid uhličitý, dichlórmetán a dichlóretán. Reakcia sa uskutočňuje pri teplotách v rozsahu od asi 0°C do 100°C, výhodne v rozsahu asi 20°C až 40°C.

Redukcia dvojitej väzby vo furanónovom kruhu zlúčeniny všeobecného vzorca X, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca I sa môže uskutočňovať hydridovým redukčným činidlom, najmä borohydridom. Príklady týchto borohydridov sú borohydrid sodný alebo borohydrid lítny, triacetoxyborohydrid sodný alebo triacetoxyborohydrid lítny, kyanoborohydrid sodný alebo kyanoborohydrid lítny, tetrabutylamónium kyanoborohydrid sodný alebo tetrabutylamónium kyanoborohydrid lítny, trialkylborohydrid sodný alebo trialkylborohydrid lítny, výhodne kyanoborohydrid sodný. Bežne sa reakčná zmes upraví tak, aby bola mierne kyslá, výhodne na pH v rozsahu 3,0 a 6,0 s použitím kyseliny chlorovodíkovej, kyseliny bromovodíkovej, kyseliny octovej, kyseliny mravčej, kyseliny fluóroctovej, bórtrifluóreterátom, chloridom hlinitým, chloridom zinočnatým alebo chloridom titaničitým. Prípadne sa reakčná zmes môže pufrovať 1,0-5,0 ekvivalentami octanu sodného.

Prípadne sa reakcia môže katalyzovať pridaním 1-5% CoCl₂/semicorin, ZnCl₂ alebo 1-2 ekvivalentami chlórtrimetylsilánu. Asymetrická redukcia sa môže uskutočňovať chirálnymi redukčnými činidlami známymi ako R- alebo S-Alpine Hydride®; (lítium B-izopinokamfeyl-9-bora-bicyklo[3.3.1]nonyl hydrid).

Redukcia dvojitej väzby v kruhu zlúčeniny všeobecného vzorca X, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca I sa môže uskutočňovať hydrogenáciou. Tá sa môže použiť ak substituent R¹je stabilný za podmienok hydrogenácie, ako keď R¹ je alkylová skupina. Bežnými hydrogenačnými podmienkami je použitie plynného vodíka pri tlaku od 0,1 do 10 MPa, bežne v rozsahu asi 1,5 do 7 MPa za prítomnosti katalyzátora v množstve od asi 0,01 do 0,5 ekvivalentov na ekvivalent zlúčeniny všeobecného vzorca X. Vhodnými katalyzátormi sú Pd/C, Pd(OH)₂, PdO, Pt/C, PtO₂, najlepšie Pt/C alebo Pd/C. Vhodnými rozpúšťadlami sú etylacetát, alkoholy, ako je metanol, etanol, izopropanol, aromatické uhlovodíky, ako je benzén, toluén, xylén, étery, ako je THF, DME, dioxán, výhodne etanol alebo tetrahydrofurán. Ak R¹ je alkylová skupina alebo arylalkylová skupina, ako je benzylová skupina, potom pre stereoselektívnu redukciu sú výhodné katalyzátory rodia (I) alebo ruténia (II). Tieto katalyzátory vznikajú reakciou kovu vo forme rôznych komplexov s chirálnymi formami ligandov, ako sú metyl- alebo etyl-DuPHOS (1, l-bis-2, 5-dialkylfosfolano)benzén, DIOP (2,3-O-izopropylidén-2,3-dihydroxy-l, 4-bis(difenylfosfino)bután), BINAP (2,2'-bis- (difenylfosfino)-1, ľ-binaftyl) , CHIRAPHOS (bis- (difenylfosfino)bután), BPPM (N-terc-butoxykarbonyl-2-(difenylfosfino)metyl-4-(difenylfosfino) pyrolidín) , BPPFA (N, N-dimetyl-1 [ľ, 2-bis (difenylfosfino) ferocenyl]etylamín), DEGPHOS (N-benzyl-3,4-bis(difenylfosf ino)pyrolidín) alebo alkyl-ΒΡΕ (bis-fosfolanoetán). Mnohé iné vhodné ligandy sú známe v odbore. Výhodnými katalyzátormi sú 1,2-bis-(2,5-dialkylfosfolano)benzén (cyklooktadién)ródium (I) trifluórmetánsulfonát, kde alkylová skupina má nerozvetvený alebo rozvetvený reťazec s 1 až 8 atómami uhlíka, pri28 padne substituovaný aromatickou uhľovodíkovou skupinou, ako je fenylová skupina. Použitie (P,P)-izoméru týchto ligandov vedie k (S)-konfigurácii na uhlíku nesúcom a-aminoskupinu v produkte a použitie (S, S)-izoméru vedie k (P)-konfigurácii. Vhodnými rozpúšťadlami sú etylacetát, alkoholy, ako je metanol, etanol alebo izopropanol, aromatické uhľovodíky, ako je benzén, toluén alebo xylén, étery ako je THF, DME, dioxán. Výhodnými rozpúšťadlami sú toluén alebo metanol. Koncentrácia zlúčeniny všeobecného vzorca X sa bežne pohybuje v rozsahu od asi 0,01 M do 1,0 M, výhodne od asi 0,1 M do 1,0 M. Reakčná teplota sa bežne pohybuje od asi 0°C do 60°C, výhodne v rozsahu asi 20°C až 40°C. (Pre použitie katalyzátorov rodia pozri: G. Zhu, Z. Chen, X, Zhang; J. Or. Chem., (1999)64, 6907-6910; M. J. Burk, J. G. Alien, W. F. Kiesman; J.

Amer. Chem. Soc., (1998), 120, 657-663; M. J. Burk, J. E.

Feaster, W. A. Nugent, R. L. Harlow, J. Amer. Chem. Soc., (1993), 115, 10125-10138; Pre použitie katalyzátorov ruténia pozri: J. M. Brown, M. Rose, F. I. Knight, A. Wienand; Reči Tráv Chim Pays-Bas, (1995), 114, 242-251; M. Saburi, M. Ohnuki, M.

Ogasawara, T. Takahashi, Y. Uchida; Tetrahedron Lett. (1992), 33, 5783-5786; U. Matteoli, V. Beghetto, A. Scrivanti; J Molecular Catalysis A: Chemical 140 (1999) 131-137).

V metóde B sa opisuje sekvencia, v ktorej sa aminobutenolaktón všeobecného vzorca IX najskôr kopuluje na kaspázovú P_xalebo P_x-_y časť molekuly a potom sa redukuje dvojitá väzba v kruhu. Alternatívne sa redukcia a kopulácia môže uskutočňovať

I ' · · v opačnom poradí (Metóda C).

Metóda C podľa tohto vynálezu zahŕňa stupne:

(a) získanie butenolaktónu všeobecného vzorca VII:

O (VII) v ktorom R¹ má význam uvedený skôr a X je atóm chlóru, atóm brómu alebo atóm jódu;

(b) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca VII s azidom N₃-Y, kde Y je silylová skupina alebo protiión, pričom vzniká azidobutenolaktón všeobecného vzorca VIII:

(c) konverziu zlúčeniny všeobecného vzorca VIII na aminobutenolaktón všeobecného vzorca IX:

(IX) (d) redukciu dvojitej väzby v kruhu zlúčeniny všeobecného vzorca IX, pričom vzniká aminolaktón všeobecného vzorca IV:

CV) a

(e) kopuláciu zlúčeniny všeobecného vzorca IV s organickou kyselinou R²COOH, alebo jej reaktívnym ekvivalentom, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca I, kde R²COOH je výhodne P₂-, P₂-P₃alebo P₂-P₄ karboxylová kyselina. V metóde C, sú stupne (a) - (c) rovnaké ako zodpovedajúce stupne v metóde B a stupne (d) a (e) sú rovnaké ako zodpovedajúce stupne v metóde A. Z tohto dôvodu sa metóda C uskutočňuje rovnakým spôsobom s ohladom na zodpove30 dajúce stupne.

Do rozsahu tohto vynálezu spadajú aj určité tu opísané medziprodukty, ktoré sú užitočné na prípravu inhibítorov kaspáz a ich profarmák. Preto jedným aspektom tohto vynálezu sú zlúčeniny všeobecných vzorcov III alebo VIII:

v ktorých R¹ je vybrané zo skupiny zahŕňajúcej prípadne substituovanú alifatickú skupinu, aralkylovú skupinu alebo arylovú skupinu. Príklady R¹ zahŕňajú metylovú skupinu, etylovú skupinu, propylovú skupinu, 2-propylovú skupinu, butylovú skupinu, pentylovú skupinu, hexylovú skupinu, 4-metylpentylovú skupinu, 2-metylpropylovú skupinu, cyklopentylovú skupinu, cyklohexylovú skupinu, cyklopentylmetylovú skupinu, cyklohexylmetylovú skupinu, fenyletylovú skupinu, fenylpropylovú skupinu, fenylbutylovú skupinu, (d)-mentylovú skupinu, (1)-mentylovú skupinu, 1-adamantylovú skupinu, 2-adamantylovú skupinu, 1-indanylovú skupinu, 2-indanylovú skupinu, bornylovú skupinu, 3-tetrahydrofuranylovú skupinu, benzylovú skupinu, α-metylbenzylovú skupinu, 4-chlórbenzylovú skupinu, 4-fluórbenzylovú skupinu, 4-metylbenzylovú skupinu, 4-(2-propyl)benzylovú skupinu alebo 4-trifluórmetylbenzylovú skupinu. Užitočné sú najmä zlúčeniny všeobecného vzorca III a všeobecného vzorca VIII, v ktorých R¹ je benzylová skupina alebo alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, ako je etylová skupina.

Ďalší aspekt tohto vynálezu sa týka zlúčenín všeobecného vzorca V alebo všeobecného vzorca XI (V)

Ο

R₃P=N

r₃p=n

(XI) v ktorých substituent R¹ je vybraný z prípadne substituovaných alifatických skupín, aralkylových skupín alebo arylových skupín a najmä R¹ skupín opísaných skôr.

Pre bližšie objasnenie vynálezu sú uvedené nasledujúce príklady uskutočnenia. Tieto príklady sú formulované len tak, aby vynález bol objasnený a nie sú konštruované tak, aby vynález bol nimi akýmkoľvek spôsobom obmedzený.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Syntetické príklady

Príklad 1

Príprava 4-azido-5-etoxydihydrofuran-2-ónu (III, R¹ = Et)

Tento postup sa uskutočňuje analogickým postupom opísaným v práci D.J. Guerin, a kol., Org. Lett. (1999), 1, 1107-1109.

K roztoku azidotrimetylsilánu (25,8 ml, 0,32 mol) v dichlórmetáne (400 ml) sa pri teplote miestnosti a y atmosfére dusíka pridá kyselina octová (18,1 ml, 0,32 mol) a reakčná zmes sa mieša 20 minút. Potom sa prikvapká 5-etoxy-5H-furan-2-ón (II, R = Et) (8,10 g, 0,063 mol) nasledovaný 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7énom (1,9 ml, 0,013 mol). Reakčná zmes sa mieša 24 hodín, premyje sa hydrogenuhličitanom sodným, vysuší nad síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (S1O2) elúciou zmesou 1:9 etylacetátu:hexánu sa získa 4-azido-5-etoxydihydrofuran-2-ón (7,85 g, 73% výťažok) vo forme bezfarebného oleja.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 5,17 (s, IH) , 4,00 (dd, J=7,0, 1,0 Hz,

IH) , 3,71 (m, IH) , 3,49 (m, IH) , 2,77 (dd, J=17,0, 6,0 Hz, IH) , 2,32 (dd, J=8,0, 2,2 Hz, IH) , .1,08 (t, J=7,l Hz, 1,5H), 1,07 (t, J=7,l Hz, 1,5H) ppm.

Rovnakými spôsobom aký sa opísal skôr, okrem použitia 5-benzyloxy-5ŕf-furan-2-ónu (II, R¹ = Bn), ako východiskového materiálu sa pripraví 4-azido-5-benzyloxydihydrofuran-2-ón (III, R¹ = Bn) vo forme bielej pevnej látky, 1,62 g (72% výťažok).

^-NMR (500 MHz, CDCI3) δ 7,19 (m, 5H) , 5,25 (s, IH) , 4,71 (d, J=ll,5 Hz, IH) , 4,48 (d, J=ll,4 Hz, IH) , 4,07 (dd, J=6,9, 0,9 Hz, IH) , 2,82 (ddd, J=18, 1, 7,1, 1,0 Hz, IH) , 2,36 (ddd,

J=18,l, 4,3, 1,4 Hz, IH) ppm.

Príklad 2

Príprava 4-[(trifenylfosforanylidén)amino]-5-etoxydihydrofuran-2-ónu (V, R¹ = Et)

Roztok 4-azido-5-etoxydihydrofuran-2-ónu (0,05 g, 0,29 mmol) a trifenylfosfínu (0,078 g, 0,29 mmol) v. toluéne (5 ml) sa mieša pri teplote miestnosti a v atmosfére dusíka 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a získa sa 4-[ (trifenylfosforanylidén)amino]-5-etoxydihydrofuran-2-ón (0,12 g, 100% výťažok) vo forme takmer bielej voskovitej pevnej látky.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 7,50 (m, 6H) , 7,40 (m, 3H) , 7,33 (m,

6H) , 5,08 (d, J=3,l Hz, IH) , 3,63 (m, IH)·, .3,23 (m, IH) , 2,50 (dd, J=17,l, 5,9 Hz, IH) , 2,27 .(dd, J=17,l, 5,9 Hz, IH) , 0,91 (t, J=7,0 Hz, 3H) ppm.

Príklad 3

Príprava terc-butylesteru (R)-2-(2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (I, R¹ = Et)

Metóda 1

Príprava z 4-azido-5-etoxydihydrofuran-2-ónu hydrogenáciou:

Zmes 4-azido-5-etoxydihydrofuran-2-ónu (1,06 g, 6,2 mmol), terc-butylesteru (S)-pyrolidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (1,33 g, 6,2 mmol) a 10% paládia na uhlí (0,50 g) v etylacetáte dopredu odplyneného dusíkom (50 ml) sa mieša v atmosfére 0,1 MPa vodíka 1 hodinu pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedi dichlórmetánom, prefiltruje (Celit) a odparí. Surová zmes sa rozpustí v dichlórmetáne (100 ml), potom sa pridá diizopropyletylamín (5,4 ml, 30,8 mmol), EDC (1,48 g, 7,71 mmol) a HOBT (1,04 g, 7,71 mmol) a reakčná zmes sa mieša 24 hodín pri teplote miestnosti. Reakcia sa zriedi etylacetátom, premyje sa 10% hydrogensíranom sodným, nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (SÍO2) elúciou 1:1 etylacetátu:hexánu sa získa terc-butylester (R)-2-(etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (1,19 g, 56% výťažok) vo forme velmi viskózneho svetlo žltého oleja.

^XH-NMR (500 MHz, CDCI3) Ô 7,61 (br, 0, 6H) , 5,29 (s, 0, 6H) , 5,25 (br s, 0,4H), 4,29 (br, 1,2H), 4,20 (br s,. 0,8H), 3,78 (m, 1H) , 3,57 (m, 1H), 3,34 (br, 1,4H), 3,25 (br, 0, 6H) , 2,94 (br dd, J=14,9, 3,8 Hz, 1H) , 2,31 (dd, J=18,0,. 1,4 Hz, 1H) , 2,1-2,3 (br IH),· 1,82 (br s, 1H) , 1,39 (s, 9H) , 1,17 (m, 3H) ppm.

MS (ES⁺) : m/e=343 (M+H) .

Metóda 2

Príprava zo 4- [(trifenylfosforanylidén) amino]-5-etoxydihydrofuran-2-ónu

Roztok 1-terc-butylesteru (S)-pyrolidín-l, 2-dikarboxylovej kyseliny (0,11 g, 0,5 mmol), diizopropyletylamínu (0,18 ml, 1,0 mmol) a tetrametylfluórformamidínium hexafluórfosfátu (TFFH) (0,13 g, 0,5 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa mieša pri teplote miestnosti v atmosfére dusíka počas 3 hodín. Pridá sa roztok 4-[(trifenylfosforanylidén)amino]-5-etoxydihydrofuran-2-ónu (0,20 g, 0,5 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) a zmes sa mieša 24 ho34 dín. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom, premyje sa 10% hydrogensíranom sodným, nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (SÍO2) elúciou 1:1 etylacetátu:hexánu sa získa terc-butylester (R)-2-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (0,11 g, 65% výťažok) vo forme velmi viskózneho svetlo žltého oleja.

Metóda 3

Príprava z terc-butylesteru (R)-2-(2-etoxy-5-oxo-2,5-dihydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (X, R¹⁼Et) hydrogenáciou

K roztoku terc-butylesteru (R)-2-(2-etoxy-5-oxo-2,5-dihydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (X, R¹⁼Et) (0,09 g, 0,27 mmol) v toluéne dopredu odplyneného dusíkom (20 ml) vo vysokotlakovom reaktore sa v inertnej dusíkovej atmosfére pridá (-)-1,2-bis(2R, 5R)-2,5-dietylfosfolano)benzén (cyklooktadién) ródium-(I)-trif luórmetánsulfonát (515 mg). Reaktor sa uzavrie a natlakuje vodíkom (6,5 MPa) a nechá sa stáť 2 dni pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí a odparok sa čistí flash chromatografiou (SÍO2) elúciou zmesi 1,5:98,5 metanol:dichlórmetán. Získa sa terc-butylester (R)-2-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (0,092 g, kvantitatívny výťažok) vo forme bezfarebného oleja. Chirálna HPLC na kolóne (Chiralpak AD so zmesou 1:9, etanol: hexán) : eluuje izomér Ib 35,4%, izomér Id 56,4%, (zmes izomérov la a lc) 8,2%.

¹H-NMR (500 MHz, CDCI3) δ 7,60 (br s, 0,25H), 7,40 (br s, 0,25H),

6,5 (br m, 0,25H), 5,38 (d, J=5 Hz, 0,5H), 5,27 (s, 0,5H), 4,65 (br, 0,5H), 4,20 (br m, 1,5H), 3,85 (m, 0,5H), 3,77 (m, 0,5H), 3,57 (m, 1H) , 3,30 (m, 2H) , 2,95 (m, 0,5H), 2,80 (br m, 0,5H), 2,30 (br m, 2H) , 1,85 (br s, 3H) , 1,37 (s, 9H), 1,20 (t, J=7 Hz, 1,5H), 1,15 (t, J=7 Hz, 1,5H) ppm.

Príklad 4

Príprava terc-butylesteru (R)-2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (I, R¹ = Bn)

Roztok terc-butylesteru (S)-pyrolidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny (0,13 g, 0,6 mmol), 4-azido-5-benzyloxydihydrofuran-2-ónu (0,14 g, 0,6 mmol) a trifenylfosfínu (0,28 g, 1,0 mmol) v tetrahydrofuráne (5 ml) a vode (5 kvapiek) sa mieša v atmosfére dusíka 0,5 hodiny pri teplote miestnosti a potom 2 hodiny pri 65°C. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti a za miešania sa nechá reagovať s diizopropyletylamínom (0,52 ml, 5,0 mmol), EDC (0,15 g, 0,75 mmol) a HOBT (0,70 g, 0,75 mmol) pri teplote miestnosti a atmosfére dusíka počas 20 hodín. Reakcia sa zriedi, etylacetátom, premyje sa 10% hydrogensíranom sodným, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (SÍO2) elúciou 2:3 etylacetátu:hexánu sa získa terc-butylester (R)-2-(2-benzyloxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (0,12 g, 49% výťažok) vo forme lepivej živice.

¹H-NMR (500 MHz, CDCI3) δ 7,63 (br d, J=7,6 Hz, 0,7H), 7,28 (m,

5H) , 6,50 (br, 0,3H), 5,37 (br s, 0,5H), 5,33 (s, 0,5H), 4,77 (d, J=ll,6 Hz, IH), 4,56 (dd, J=ll,6, 3,7 Hz, IH) , 4,37 (br s, IH) , 4,18 (br s, IH) , 3,32 (br s, 1,4H), 3,24 (br s, 0, 6H) , 2,97 (br d, J=ll,6 Hz, IH) , 2,35 (dd, J=18,l, 1,7 Hz, IH) , 2,1-2,3 (br, IH), 1,81 (br s, 3H), 1,58 (s, 9H) ppm.

MS (ES+) : m/e=405 (M+H).

Rovnakým spôsobom se pripraví terc-butylester (R)-2-(2etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyro1idín-1-karboxylovej kyseliny (I, R¹ =Et) (0,07 g, 7% výťažok).

Príklad 5

Príprava 4-bróm-5-etoxy-5R-furan-2-ónu (VII, R¹ = Et)

Tento postup sa uskutočňuje rovnakým postupom ako sa opísal v práci C. Escobar a kol., Ann, Quim. (1971), 67, 43-57. K roztoku 5-etoxy-5fí-furan-2-ónu (II, R¹ = Et) (10,0 g, 78,0 mmol) v chloride uhličitom (50 ml) sa pridá v priebehu 0,5 hod. roztok brómu (4,05 ml, 78,2 mmol) v chloride uhličitom (25 ml). Reakčná zmes sa mieša 1 hodinu pri 0°C a potom 2 hodiny pri . teplote miestnosti. Rozpúšťadlá sa odparia pri zníženom tlaku. Odparok sa destiluje krátkou cestou vo vákuu (asi 0,5 mm). Frakcie odobraté pri 100 - 120°C poskytli 4-bróm-5-etoxy-5ŕf-furan-2-ón (13,2 g, 82% výťažok) vo forme žltého oleja.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 6,24 (s, IH) , 5,63 (s, IH) , 3,71 (m,

IH), 3,63 (m, IH) , 1,14 (t, J=7,l Hz, 3H) ppm.

Príklad 6

Príprava 4-azido-5-etoxy-5#-furan-2-ónu (VIII, R¹ = Et)

Zmes 4-bróm-5-etoxy-5íí-furan-2-ónu (2,07 g, 10,0 mmol) a azidu sodného (0,66 g, 10,2 mmol) v dimetylformamide (10 ml) sa mieša v dusíkovej atmosfére 24 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa potom zriedi etylacetátom, premyje pri 0°C vodou a roztokom chloridu sodného, vysuší nad síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (S1O2) elúciou zmesou 1:9 etylacetátu:hexánu sa získa 4-azido-5-etoxy-5ff-furan-2-ón (1,04 g, 62% výťažok) vo forme svetlo žltého oleja.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 5,83 (s, IH) , 5,63 (s, IH) , 3,99 (m,

IH) , 3,88 (ín, IH), 1,35 (t, J=7,l Hz, 3H) ppm.

Príklad 7

Príprava 4-amino-5-etoxy-5íf-furan-2-ónu (IX, R¹ = Et)

Metóda 1 Hydrogenáciou

Zmes 4-azido-5-etoxy-5Jí-furan-2-ónu (0,62 g, 3,67 mmol) a 10% paládia na uhlí (0,31 g) v etylacetáte zbavenom kyslíka (20 ml) sa mieša pri 0,1 MPa vodíka počas 24 hodín. Reakčná zmes sa potom prefiltruje (Celit) a odparením sa získa 4-amino-5-etoxy-5.tf-furan-2-ón (0,53 g, 100% výťažok) vo forme svetlo žl37 tého oleja.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 5,60 (s, 1H) , 4,85 (br s, 2H) , 4,81 (s, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,67 (m, 1H) , 1,22 (t, J=7,l Hz, 3H) ppm.

Metóda 2 Staudingerova reakcia

Zmes 4-azido-5-etoxy-5P-furan-2-ónu (0,10 g, 0,59 mmol) a trifenylfosfínu (0,15 g, 0,59 mmol) v tetrahydrofuráne (5 ml) a vode (0,5 ml) sa mieša 20 hodín pri teplote miestnosti a potom 3 dni v atmosfére dusíka pri teplote 65° C. Reakčná zmes sa zriedi dichlórmetánom, premyje vodou, vysuší nad síranom sodným a odparí. Získa sa 4-amino-5-etoxy-5Jí-furan-2-ón v zmesi s trifenylfosf ínoxidom (0,25 g, 100% výťažok).

Príklad 8

Príprava 4- [ (trifenylfosforanylidén) amino] -5-etoxy-5íf-furan-2ónu (XI, R¹ = Et)

Roztok 4-azido-5-etoxy-5P-furan-2-ónu (0,17 g, 1,0 mmol) a trifenylfosfínu (0,26 g, 1,0 mmol) v toluéne (5 ml) sa mieša v atmosfére dusíka 1 hodinu pri teplote miestnosti a potom sa zahrieva 8 hodín na 60 - 70°C. Reakčná zmes sa ochladí, zriedi etylacetátom, premyje sa hydrogensíranom sodným, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (SiO₂) elúciou zmesou 1:1 etylacetátu:hexánu sa získa 4-[(trifenylfosforanylidén)amino]-5-etoxy-5P-furan-2-ón (0,18 g, 45% výťažok) takmer bielej pevnej látky.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 7,73 (m, 6H) , 7,65 (m, 3H) , 7,55 (m, 6H) , 5,58 (s, 1H) , 4,33 (s, 1H) , 3,81 (m, 1H) , 3,64 (s, 1H) , 1,27 (t, J=7,l Hz, 3H) ppm.

MS (ES+) m/e = 404 (M+H).

Príklad 9

Príprava terc-butylesteru (P) -2-(2-etoxy-5-oxo-2,5-dihydrofuran-3-ylkarbamoyl)-pyrrolidín-l-karboxylovej kyseliny (X, R¹ =Et)

Metóda 1 Použitím peptidických kopulačných podmienok

Roztok 4-amino-5-etoxy-5H-furan-2-ónu (0,04 g, 0,30 mmol), terc-butylesteru (S)-pyrolidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny (0,07 g, 0,30 mmol), diizopropyletylamínu (0,12 ml, 0,66 mmol) a 0-benzotriazol-l-yl-N,N,N',Ν'-tetrametylurónium hexafluórfosfátu (HBTU) (0,14 g, 0,38 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa mieša 24 hodín, odparí sa, znova rozpustí v 1-metylpyrolidinóne (3 ml) a reakčná zmes sa mieša 3 dni. Reakčná zmes sa potom zriedi etylacetátom, premyje 10% hydrogensíranom sodným, nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a odparí. Čistením pomocou dvoch chromatografii (SiO₂) a s použitím najskôr zmesi 4:6 a potom zmesi 35:65 etylacetátu a hexánu sa získa terc-butylester (R)-2-(2-etoxy-5-oxo-2,5-dihydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (0,009 g, 9% výťažok) vo forme filmového povlaku.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 10,2 (br s, 0,7H) , 10,1 (br s, 0,3H) ,

6,21 (br s, 0,7H), 6,17 (br s, 0,3H), 5,68 (s, 0,7H), 5,60 (br s, 0,3H), 4,38 (br s, IH) , 3,85 (m, IH) , 3,72 (m, IH) , 3,25-3,45 (m, 2H) , 2,53 (br d, J=12,5 Hz, 0,7H), 2,1 (br, 0,3H), 1,87 (br m, 3H) , 1,44 (s, 9H), 1,21 (m, 3H) ppm.

MS (ES+): m/e = 341 (M+H).

Metoda 2 (A) Tvorbou aniónu/acyláciou

K roztoku 4-amino-5-etoxy-5.Jí-furan-2-ónu (0,08 g, 0,58 mmol) v tetrahydrofuráne (10 ml) sa pri -78°C v atmosfére dusíka prikvapká roztok IM lítium bis-(trimetylsilyl)amidu v tetrahydrofuráne (0,64 ml, 0,64 mmol). Reakčná zmes sa mieša 3 hodiny pri 0°C. Potom sa prikvapká roztok terc-butylesteru 2-fluórkarbonylpyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (0,20 g, 0,77 mmol) v tetrahydrofuráne (3 ml) . Reakčná zmes sa mieša 16 hodín pri teplote miestnosti, zriedi sa etylacetátom, premyje 10% hydrogensíranom sodným, nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, roztokom chloridu sodného, vysuší síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (S1O2) elúciou zmesou 35:65 etylacetát:hexán sa získa terc-butylester (R) -2-(2-etoxy-5-oxo-2,5-dihydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (0,05 g, 26% výťažok). Takisto sa izoluje východiskový 4-amino-5-etoxy-5íf-furan-2-ón (0,03 g, 36% výťažok).

Metóda 2 (B) Tvorbou aniónu/acyláciou

K roztoku 4-amino-5-etoxy-5.tf-furan-2-ónu (0,05 g, 0,35 mmol) a terc-butylesteru 2-fluórkarbonylpyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (0,09 g, 0,42 mmol), tetrahydrofuránu (5 ml) sa pri teplote miestnosti v atmosfére dusíka pridá terc-butoxid sodný (0,05 g, 0,49 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote varu pod spätným chladičom 3 hodiny. Po ochladení sa zmes zriedi etylacetátom, premyje 10% hyd.rogensíranom draselným,. nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného, vysuší sa a odparí. Čistením flash chromatografiou (SiO₂) elúciou zmesou 4:6 etylacetátu:hexánu sa získa terc-butylester {R}-2- (2-etoxy-5-oxo-2,5-dihydrofurán-3-y1karbamoy1)pyrolidín-1-karboxylovej kyseliny (0,075 g, 63% výťažok).· Takisto sa získa východiskový 4-amino-5-etoxy-5/í-furan-2-ón (0,016 g, 32% výťažok) .

Príklad 10

Príprava terc-butylesteru (R)-2-[(2R,3S)-2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl]pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (VI, R¹ = Et)

Zmes 4-amino-5-etoxy-5íf-furan-2-ónu (0,13 g, 0,75 mmol), 1-terc-butylesteru (S)-pyrolidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny (0,16 g, 0,75 mmol) a niekoľko kryštálikov indikátora Kongo červene v etanole (5 ml) sa nechá reagovať s kyanoborohydridom sodným (0,06 g, 0,90 mmol), potom sa prikvapká 4M chlorovodík v dioxáne až do trvalého modrého sfarbenia (pH asi 3). Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny, prefiltruje sa (Celit) a odparí. Odparok sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml), pridá sa diizopropyletylamín (0,52 ml, 3,0 mmol), EDC (0,18 g, 0,94 mmol) a HOBT (0,13 g, 0,94 mmol) a reakčná zmes sa mieša v atmosfére dusíka pri teplote miestnosti 20 hodín. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom, premyje 10% hydrogensíranom sodným, roztokom hydrogenuhličitanu sodného, roztokom chloridu sodného, vysuší nad síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (SiOz) , elúciou 1:1 etylacetát:hexán sa získa 4:1 zmes (podlá Ή-NMR) terc-butylesteru (R) -2-[(2R,3S)-2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3ylkarbamoyl]pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny a terc-butylesteru (R)-2-[(2S,3S)-2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl]pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (0,06 g, 23% výťažok) vo forme bezfarebného oleja.

^XH-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 7,60 (br, 0, 15H) , 7,44 (br s, 0,5H),

6,51 (0,35H), 5,38 (d, J=5,3 Hz, 0, 8H) , 5,29 (s, 0,2H), 4,65 (br m, 0,8H), 4,1-4,3 (br m, 1,2H), 3,84 (m, 0,8H), 3,78 (m, 0,2H),

3,59 (m, 1H), 3, 25-3, 45 (br m, 2H) , 2,95 (dd, J=17,6, 7,1 Hz,

0,2H), 2,78 (br m, 0,8H), 2,34 (dd, J=17,2, 10,4 Hz, 0,8H), 1,92,3 (br 1,7H), 1,83 (br s, 2,5H), 1,39 (s, 9H) , 1,19 (m, 3H) ppm.

Taktiež tento produkt, terc-butylester (R)-2-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny, sa izoloval ako zmes stereoizomérov (0, 030 g, 11% výťažok) vo forme bezfarebného oleja.

Príklad 11

Príprava (2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amid l-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2-kárboxylovej kyseliny

Stupeň A Benzylester {1-[2-(2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karbonyl]-2,2-dimetylpropyl}karbámovej kyseliny

K roztoku terc-butylesteru (R)-2-(2-etoxy-5-oxo-2,5-dihydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karboxylovej kyseliny (X, R¹ =Et) (0,14 g, 0,41 mmol) (¹H-NMR ukazuje na zmes 8:2 syn:anti epimérov) a lutidínu (0,48 ml, 4,1 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) sa v atmosfére dusíka a pri teplote miestnosti prikvapká trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát (0,48 ml, 2,46 mmol). Reakčná zmes sa potom mieša 0,5 hodiny, pridá sa nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje sa troma dávkami dichlórmetánu, vysuší sa síranom sodným a odparí. K surovému medziproduktu sa pridá 2-benzyloxykarbonylamino-3,3-dimetylbutánovej kyseliny (0,12 g, 0,45 mmol) v dichlórmetáne (5 ml), EDC (0,10 g, 0,51 mmol) a HOBT (0,07 g, 0,51 mmol). Vzniknutá zmes sa mieša 3 dni pri teplote miestnosti a v atmosfére dusíka. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom, premyje 10% hydrogensíranom draselným, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, roztokom chloridu sodného, vysuší nad síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (SiO₂) elúciou zmesou 1:1 etylacetátu:hexánu sa získa benzylester {1-[2-(2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl) pyrolidín-l-karbonyl]-2,2-dimetylpropyl}karbámovej kyseliny (0,12 g, 59% výťažok) vo forme bielej peny.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 7,43 (br d, J=7,7 Hz, 1H) , 7,28 (s,

5H) ,	5,40 (m,	2H) ,	5, 02	(AB q, J=12,l, 31,0 Hz, 2H) , 4,55 (m,
2H) ,	4,29 (d,	J=9,	6 Hz,	1H) , 4,23 (m, 0,2H), 3,85 (m, 0, 8H) ,
3, 73	(m, 1H) ,	3, 58	(m,	2H) , 2,90 (m, 0,2H), 2,74 (dd, J=17,0,
8,4	Hz, 0,8H),	2,30	(m,	2H), 2,05 (m, 1H) , 1,90 (m, 1H) , 1,80
(m,	1H) , 1,20	(t,	J=7,	0 Hz, 2,4H), 1,15 (t, J=7,0 Hz, 0,6H),

0,93 (s, 9H) ppm.

^-NMR ukazuje na prítomnosť asi 8:2 syn:anti epimérov. LC/MS (ES+): m/e=490,14 (M+H).

Stupeň B (2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amid

1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylové kyseliny

Roztok benzylesteru {1-[2-(2-etoxy-5-oxo-tetrahydrofuran-3-ylkarbamoyl)pyrolidín-l-karbonyl]-2,2-dimetylpropyl}karbámovej kyseliny (0,12 g, 0,24 mmol) v etanole (5 ml) sa zmieša s 10% paládium hydroxidu na uhlí (0,05 g) a mieša sa v atmosfére vodíka pri tlaku 0,1 MPa počas 4 hodín. Reakčná zmes sa prefiltruje cez Celit a odparí. Surový medziprodukt sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml) a pridá sa 4-amino-3-chlórbenzoová kyselina (0,04 g, 0,26 mmol) EDC (0,06 g, 0,29 mmol) a diizopropyletylamín (0,13 ml, 0,71 mmol) a reakčná zmes sa v atmosfére dusíka mieša pri teplote miestnosti počas 20 hodín. Zmes sa potom zriedi etylacetátom, premyje 10% hydrogensíranom draselným, nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného, potom sa vysuší síranom sodným a odparí. Čistením flash chromatografiou (SiO₂) , elúciou zmesou 7:3 etylacetát:hexán sa získa (2-etoxy-5-oxotetrahydrofuran-3-yl)amid 1-[2-(4-amino-3-chlórbenzoylamino)-3,3-dimetylbutyryl]pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (0,08 g, 62% výťažok) vo forme bezfarebného filmového povlaku.

¹H-NMR (500 MHž, CDC1₃) δ 7,67 (d, J=2,0 Hz, IH) , 7,50 (m, 0,2H),

7,44 (dd, J=8,4, 2,0 Hz, l,0H), 7,33 (d, J=8,0 Hz, 0, 8H) , 6,69 (d, J=8,4 Hz, IH), 6,55 (d, J=9,2 Hz, IH) , 5,39 (d, J=5,2 Hz,

0,8H), 5,29 (s, 0,2H), 4,79 (d, J=9,4 Hz, . IH) , 4,62 (m, 0,8H) ,

4,50 (m, l,0H), 4,25 (m, 0,2H), 3,83 (m, 0,8H), 3,77 (m, 0,2H),

3,62 (m, 0, 8H), 3,55	(m, 0,2H),	2,92 (m, 0,2H), 2,76	(dd,
J=17,2, 8,4 Hz, 0, 8H),	2,30	(m,	2H), 2,05 (m, IH) , 1,93	(m,
l,0H), 1,85 (m, IH) ,	1,22	(t,	J=7,1 Hz, 2,4H), 1,16	(t,
J=7,l Hz, 0,6H) , 1,00 (s	, 9H)	ppm.
^XH-NMR ukazuje na približnú	zmes	8:2 syn:anti epimérov. LC/MS

(ES+) : m/e= 509,08 (M+H).

Zatial čo sa opísal rad konkrétnych uskutočnení tohto vynálezu, je zrejmé, že tieto základné príklady sa môžu obmeniť tak, že vzniknú iné konkrétne uskutočnenia, ktoré používajú zlúčeniny a metódy podía tohto vynálezu. Rozumie sa preto, že rozsah tohto vynálezu je definovaný nasledujúcimi nárokmi a nie špecifickými konkrétnymi príkladmi, ktoré sú tu uvedené len na objasnenie.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny zahŕňajúcej alifatickú skupinu, aralkylovú skupinu, heterocyklylalkylovú skupinu alebo arylovú skupinu a R² je organický zvyšok, vyznačujúci sa tým, že postup zahŕňa stupne:

(a) získanie butenolaktónu všeobecného vzorca II, (b) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca II s azidom N₃-Y, kde Y je atóm vodíka, silylová skupina alebo protiión, pričom vzniká azidolaktón všeobecného vzorca III, (III) (c) prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca III na aminolakI . .

tón všeobecného vzorca IV alebo iminofosforan všeobecného vzorca V, (IV) alebo (d) kopuláciu obecného alebo všereaktívnym buď zlúčeniny všeobecného vzorca IV vzorca V s kyselinou R²COOH alebo jej ekvivalentom, pričom vznikne zlúčenina všeobecného vzorca I.
2. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku

1, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂ inhibítora kaspázy alebo jéj časť. '
3. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku

2, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂ inhibítora kaspázy a kde táto časť molekuly je jednou zo skupín uvedených v Tabulke 1.
4. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podía nároku

3, v ktorom R² je P₄-P₃-P₂ časť molekuly inhibítora kaspázy, kde táto časť molekuly je jednou zo skupín uvedených v Tabulke 2.
5. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku

4, v ktorom R² je P₄-P₃-P₂ časť molekuly, kde časť molekuly P₄ je vybraná zo skupiny zahŕňajúcej R-CO, ROC=O, RNHC=O, RC(O)C=O alebo RSO₂ a R je jedna zo skupín uvedených v Tabulke 3.
6. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku

5, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂ vybraná z jednej zo skupín uvedených v Tabulke 4.
7. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podía nároku 2, v ktorom R¹ je metylová skupiha, etylová skupina, propylová skupina, 2-propylová skupina, butylová skupina, pentylová skupina, hexylová skupina, 4-metylpentylová skupina, 2-metylpropylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina, cyklopentylmetylová skupina, cyklohexylmetylová skupina, fenyletylová skupina, fenylpropylová skupina, fenylbutylová skupina, (d)-mentylová skupina, (1)-mentylová skupina, 1-adamantylová skupina, 2-adamantylová skupina, 1-indanylová skupina, 2-indanylová skupina, bornylová skupina, 3-tetrahydrofuranylová skupina, benzylová skupina, α-metylbenzylová skupina, 4-chlórbenzylová skúpi45 na, 4-fluórbenzylová skupina, 4-metylbenzylová skupina, 4—(2— -propyl)benzylová skupina a 4-trifluórmetylbenzylová skupina.
8. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podľa nároku 2, v ktorom R¹ je etylová skupina alebo prípadne substituovaná benzylová skupina.
9. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku 8, v ktorom R¹ je etylová skupina alebo benzylová skupina.
10. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku 1 alebo 2, v ktorom N₃-Y je vybrané zo skupiny zahŕňajúcej LiN₃, NaN₃, TMS-N₃, HN₃ alebo EtAlN₃.
11. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku 1 alebo 2, v ktorom postup prebieha cez aminolaktón všeobecného vzorca IV.
12. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podľa nároku 1 alebo 2, v ktorom postup prebieha cez iminofosforan všeobecného vzorca V.
13. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny zahŕňajúcej alifatickú skupinu, aralkylovú skupinu, heterocyklylalkylovú skupinu alebo arylovú skupinu a R² je organický zvyšok, vyznačujúci satým, že postup pozostáva zo stupňov:

(a) získanie butenolaktónu všeobecného vzorca VII,

Ο (VII)

O-_R1

V ktorom X je atóm chlóru, atóm brómu alebo atóm jódu, (b) reakcia zlúčeniny všeobecného vzorca VII s azidom N₃-Y, kde Y je silylová skupina alebo protiión, pričom vzniká azidobutenolaktón všeobecného vzorca VIII, .O (VIII)

Na

O-r1 (c) prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca VIII na aminobutenolaktón všeobecného vzorca IX alebo iminofosforan všeobecného vzorca XI:

(d) kopulácie buď zlúčeniny všeobecného vzorca IX alebo zlúčeniny všeobecného vzorca XI s kyselinou R²COOH, alebo jej reaktívnym ekvivalentom, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca X:

(e) redukcie dvojitej väzby vo furanónovom kruhu v zlúčenine všeobecného vzorca X, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca

I.
14. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku

13, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂ inhibítora kaspázy alebo jej časť.
15. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podľa nároku

14, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂ inhibítora kaspázy, kde táto časť molekuly je jednou zo skupín uvedených v Tabuľke 1.
16. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podľa nároku

15, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂ inhibítora kaspázy, kde táto časť molekuly je jednou zo skupín uvedených v Tabuľke 2.
17. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podľa nároku

16, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂, kde jej časť P₄ je vybraná zo skupín RCO, ROC=O, RNHC=O, RC(O)C=O alebo RSO₂ a R je jedna zo skupín uvedených v Tabulke 3.
18. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podľa nároku

17, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂ vybraná z jednej zo skupín uvedených v Tabulke 4.
19. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podľa nároku 14, v ktorom R¹ je metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, 2-propylová skupina, butylová skupina, pentylová skupina, hexylová skupina, 4-metylpentylová skupina, 2-metylpropylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina, cyklopentylmetylová skupina, cyklohexylmetylová skupina, fenyletylová skupina, fenylpropylová skupina, fenylbutylová skupina, (d)-mentylová skupina, (1)-mentylová skupina, 1-adamantylová skupina, 2-adamantylová skupina, 1-indanylová skupina, 2-indanylová skupina, bornylová skupina, 3-tetrahydrofuranylová skupina, benz48 ylová skupina, α-metylbenzylová skupina, 4-chlórbenzylová skupina, 4-fluórbenzylová skupina, 4-metylbenzylová skupina, 4-(2-propyl)benzylová skupina alebo 4-trifluórmetylbenzylová skupina .
20. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku 14, v ktorom R¹ je etylová skupina alebo prípadne substituovaná benzylová skupina.
21. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku 20, v ktorom R¹ je etylová skupina alebo benzylová skupina.
22. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku 13 alebo 14, v ktorom N₃-Y je vybrané z LiN₃, NaN₃, TMS-N₃ alebo EtAlN₃.
23. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku 13 alebo 14, v ktorom postup prebieha cez aminolaktón všeobecného vzorca IX.
24. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podlá nároku 13 alebo 14, v ktorom postup prebieha cez iminofosforan všeobecného vzorca XI.
25. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ je prípadne substituovaná skupina, vybraná zo skupiny zahŕňajúcej alifatickú skupinu, aralkylovú skupinu, heterocyklylalkylovú skupinu alebo arylovú skupinu a R² je organický zvyšok, vyznačujúci sa tým, že tento postup pozostáva zo stupňov:

(a) získanie butenolaktónu všeobecného vzorca VII,

O (VII) v ktorom X je atóm chlóru, atóm brómu alebo atóm jódu, (b) reakcie zlúčeniny všeobecného vzorca VII s azidom N₃-Y, kde Y je silylová skupina alebo protiión, pričom vzniká azidobutenolaktón všeobecného vzorca VIII, (VIII) (c) konverziu zlúčeniny všeobecného vzorca VIII na aminobutenolaktón všeobecného vzorca IX, (IX) (d)

IX, redukcie dvojitej väzby v kruhu pričom vzniká aminolaktón IV, zlúčeniny všeobecného vzorca (IV) a

(e) kopulácie zlúčeniny všeobecného vzorca IV s kyselinou R²COOH, alebo jej reaktívnym ekvivalentom, pričom vzniká zlúčenina všeobecného vzorca I.
26. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I, podía nároku 25, v ktorom R² je časť molekuly P₄-P₃-P₂ inhibítora kaspázy alebo jej časť.
27. Zlúčenina všeobecného vzorca III alebo všeobecného vzorca VIII, (III) (VIII) v ktorých R¹ je vybrané zo skupiny zahŕňajúcej prípadne substituovanú alifatickú skupinu, aralkylovú skupinu alebo arylovú skupinu.
28. Zlúčenina všeobecného vzorca III alebo všeobecného vzorca VIII, podlá nároku 27, v ktorých R¹ je metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, 2-propylová skupina, butylová skupina, pentylová skupina, hexylová skupina, 4-metylpentylová skupina, 2-metylpropylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina, cyklopentylmetylová skupina, cyklohexylmetylová skupina, fenyletylová skupina, fenylpropylová skupina, fenylbutylová skupina, (d)-mentylová skupina, (1)-mentylová skupina, 1-adamantylová skupina, 2-adamantylová skupina, 1-indanylová skupina, 2-indanylová skupina, bornylová skupina, 3-tetrahydrofuranylová skupina, benzylová skupina, a-metylbenzylová skupina, 4-fluórbenzylová skupina,

4-(2-propyl)benzylová skupina alebo skupina, 4-chlórbenzylová 4-metylbenzylová skupina,

4-trifluórmetylbenzylová skupina.
29. Zlúčenina všeobecného vzorca III alebo všeobecného vzorca

VIII, podía nároku 27, v ktorých R¹ je etylová skupina alebo prípadne substituovaná benzylová skupina.
30. Zlúčenina všeobecného vzorca III alebo všeobecného vzorca VIII, podía nároku 29, v ktorých R¹ je etylová skupina alebo benzylová skupina.
31. Zlúčenina všeobecného vzorca V alebo všeobecného vzorca XI, v ktorých R¹ je vybrané zo skupiny zahŕňajúcej prípadne substituovanú alifatickú skupinu, aralkylovú skupinu alebo arylovú skupinu.
32. Zlúčenina všeobecného vzorca V alebo všeobecného vzorca XI, podía nároku 31, v ktorých R¹ je metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, 2-propylová skupina, butylová skupina, pentylová .skupina, hexylová skupina, 4-metylpentylová skupina, 2-metylpropylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina, cyklopentylmetylová skupina, cyklohexylmetylová skupina, fenyletylová skupina, fenylpropylová skupina, fenylbutylová skupina, (d)-mentylová skupina, (1)-mentylová skupina, 1-adamantylová skupina, 2-adamantylová skupina, 1-indanylová skupina, 2-indanylová skupina, bornylová skupina, 3-tetrahydrofuranyloVá

I skupina, benzylová skupina,' α-metylbenzylová skupina, 4-chlórbenzylová skupina, 4-fluórbenzylová skupina, 4-metylbenzylová skupina, 4-(2-propyl)benzylová skupina alebo 4-trifluórmetylbenzylová skupina.
33. Zlúčenina všeobecného vzorca V alebo všeobecného vzorca XI, podía nároku 31, v ktorých R¹ je etylová skupina alebo prípadne substituovaná benzylová skupina.
34. Zlúčenina všeobecného vzorca V alebo všeobecného vzorca XI, podía nároku 33, v ktorých R¹ je etylová skupina alebo benzylová skupina.