SK14452001A3 - Kódovanie mikronosičov - Google Patents
Kódovanie mikronosičov Download PDFInfo
- Publication number
- SK14452001A3 SK14452001A3 SK1445-2001A SK14452001A SK14452001A3 SK 14452001 A3 SK14452001 A3 SK 14452001A3 SK 14452001 A SK14452001 A SK 14452001A SK 14452001 A3 SK14452001 A3 SK 14452001A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- microcarrier
- microcarriers
- code
- bound
- written
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
- C12Q1/6837—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase using probe arrays or probe chips
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J19/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J19/0046—Sequential or parallel reactions, e.g. for the synthesis of polypeptides or polynucleotides; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making molecular arrays
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
- G01N33/587—Nanoparticles
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
- G06K—GRAPHICAL DATA READING; PRESENTATION OF DATA; RECORD CARRIERS; HANDLING RECORD CARRIERS
- G06K1/00—Methods or arrangements for marking the record carrier in digital fashion
- G06K1/12—Methods or arrangements for marking the record carrier in digital fashion otherwise than by punching
- G06K1/126—Methods or arrangements for marking the record carrier in digital fashion otherwise than by punching by photographic or thermographic registration
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00277—Apparatus
- B01J2219/00497—Features relating to the solid phase supports
- B01J2219/005—Beads
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00277—Apparatus
- B01J2219/0054—Means for coding or tagging the apparatus or the reagents
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00277—Apparatus
- B01J2219/0054—Means for coding or tagging the apparatus or the reagents
- B01J2219/00542—Alphanumeric characters
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00277—Apparatus
- B01J2219/0054—Means for coding or tagging the apparatus or the reagents
- B01J2219/00547—Bar codes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
- B01J2219/00596—Solid-phase processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B70/00—Tags or labels specially adapted for combinatorial chemistry or libraries, e.g. fluorescent tags or bar codes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
- Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
- Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Predložený vynález . s týka kódovaných mikronosičov a hlavne mikronosičov, na ktorých sú zapísané kódy. Akýkoľvek odkaz v tomto zverejnení na kódy zapísané na” mikronosičoch zahŕňa kódy zapísané na povrchu mikronosičov a taktiež kódy zapísané vo vnútornej hĺbke mikronosičov. Prdložený vynález sa týka tiež spôsobov zapisovania kódov na mikronosiče, spôsobov čítania kódov a spôsobov použitia kódovaných mikrono'sičov. Uprednostnený spôsob kódovania mikronosičov zahŕňa vystavenie mikronosočov, ktoré nesú odfarbiteínú látku, svetelnému zdroju s vysokou priestorovou rozlišovacou schopnosťou s cieíom odfarbenia kódov na mikronosičoch. Kódované mikronosiče sa môžu použiť napríklad ako nosné materiály V chemických a biologických skúškach a syntézach.
Doterajší stav techniky
Výskum a skríning liečiv v chemických a biologických odboroch obyčajne zahŕňa uskutočňovanie skúšok na veími veľkom počte zlúčenín alebo molekúl. Tieto analýzy zahŕňajú typický skríning chemických knihovní významných zlúčenín, skríning špecifických cieľových molekúl v testovaných vzorkách a všeobecné testovanie významných chemických a biologických záujmových interakcií medzi molekulami. Vyššie opísané skúšky vyžadujú často realizovanie tisícov jednotlivých chemických alebo biologických reakcií. Napríklad skúšky pri výskume liekov môžu zahŕňať testovanie tisícov zlúčenín vzhladom na špecifický cieľový analyt. Akékolvek zlúčeniny, pri ktorých sa pozoruje, že reagujú, viažu sa alebo .iným spôsobom integrujú s cieľovým analytom, môžu byť vhodné na akékolvek použitie, pre ktoré by pozorovaná interakcia mohla byť významná.
Pri manipulácii s velkým počtom individuálnych reakcií vyžadovaných v skúškach opísaných vyššie, existuje vela praktických problémov. Možno najzávažnejším problémom je značenie a sledovanie každej reakcie. Napríklad ak sa sleduje významná reakcia samostatná alebo v skupine tisícov reakcií, výskumník musí byt schopný určiť, ktorá z tisícov východiskových zlúčenín alebo molekúl spôsobuje túto reakciu.
Jedným z konvenčných spôsobov sledovania identity reakcií je fyzikálna separácia každej reakcie do samostatnej reakčnej nádoby v rámci veľkokapacitného zoskupenia a udržiavania záznamu o jednotlivých reaktantoch, ktoré sa použili v každej nádobe. Teda napríklad, ak sa pozoruje významná reakcia v nádobe označenej číslom 5 z 1000, výskumník sa môže odvolávať na záznam o reaktantoch použitých v nádobách a zo záznamu o nádobe 5 zistí, ktoré špecifické reaktanty boli prítomné pri realizovaní tejto významnej reakcie. Príklady veľkokapacitných zoskupení s odvolaním sa na vyššie uvedené, sú kontejnery pre mikrotitračné platne s 384, 864, 1536, 3456 a s 9600 jamkami, kde každá jamka mikrotitračnéj platne predstavuje miniatúrnu reakčnú nádobu. Miniaturizované reakčné jamky sa používajú preto, že sa šetrí priestor a znižujú sa náklady na činidlá použité pri skúške.
Použitie kontejnerov s mikrótitračnými platňami pri chemických a biologických skúškach ale prinášajú vela • ·
·· nevýhod. Napríklad použitie platní vyžaduje opatrnú separáciu a velmi velký počet izolovaných reakčných nádob, skôr ako napríklad pre všetky reakcie pri volnej realizácii a často bežnejšie v jednej reakčnej nádobe. Ďalej požiadavka, aby reakčné objemy boli priestorovo oddelené, prináša s tým fyzikálne obmedzenie velkosti použitej mikrotitračnej platne, a teda obmedzenie množstva rozličných reakcií, ktoré sa môžu uskutočňoval na platni.
S prihliadnutím na vyššie opísané obmedzenia pri použití mikrotitračných platní sa urobili isté pokusy pre vývoj iných prostriedkov na sledovanie jednotlivých reakcií pri vysokovýkonných skúškach. Tieto spôsoby nesledovali koncept priestorovej separácie reakcií a namiesto toho sledovali individuálne reakcie pomocou iných prostriedkov. Napríklad sa vyvinuli spôsoby uskutočňovania vysokovýkonných skúšok a reakcií na mikronosičoch ako nosných materiáloch. Každý mikronosič môže obsahovať jeden špecifický ligand naviazaný na jeho povrchu na pôsobenie ako reaktant a mikronosič môže okrem toho obsahovat kód, ktorý identifikuje mikronosič, a tým identifikuje špecifický ligand naviazaný na jeho povrchu. Tieto vyššie opísané spôsoby umožňujú náhodný proces, ktorý znamená, že tisíce jedinečne kódovaných mikronosičov, z ktorých každý má na svojom povrchu naviazaný ligand, môžu byt zmiešané a súčasne podrobené skúške. Tieto mikronosiče, ktoré prejavujú priaznivú významnú reakciu medzi naviazaným ligandom a cielovým analytom, potom môžu zaistovat čítanie ich kódu, a tým viest k identifikácii ligandu, ktorý poskytuje priaznivú reakciu.
Uskutočňovanie vyššie opísaného náhodného procesu vyžaduje presné kódovanie každého z mikronosičov osobitne a vyžaduje presnú a dôslednú identifikáciu kódu. Pretože skúšky využívajúce náhodný proces sa často spoliehajú pri svojich výsledkoch na kódovanie mikronosičov, kvalita skúšok velmi závisí od kvality a čitatelnosti kódov na mikronosičoch.
• ·
Pokusy kódoval mikronosiče sú stále obmedzené rozdielnym sfarbením (mikroguličky Dye-Trak), fluorescenčným označením ( fluórosféry, tok v), takzvanými na diaľku programováteInými matricami sa pamäťou (IRORI, US patent č. 5,751,629), výmennými značkami, ako sú oligonukleotidy a jednoduché peptidy (US patent č. 5,565,324, US patent č. 5,721,099, US patent č. 5,789,172) a pevnými časticovými fázami, ktoré nesú sprostredkovače (US patent č. 5,736,332). Tieto vyššie uvedené zverejnenia patentov sú v tomto texte začlenené pomocou odkazu.
Všetky tieto vyššie opísané známe spôsoby kódovania mikronosičov majú nevýhody. Napríklad mikronosoče, ktoré sa odlišujú len na základe svojej veľkosti, tvaru, farby, intenzity fluorescencie alebo ich kombinácií, nemôžu často poskytnúť dostatočne jedinečné čitateľné kombinácie týchto premenných veličín na vytvorenie veľkého počtu jedinečných kódov na skombinovanie testovania príslušne veľkého počtu odlišných molekúl. Okrem toho akékoľvek mikronosiče nesúce cudzie telesá na svojom povrchu slúžiace ako kódy, ako sú napríklad výmenné značky alebo fluorescenčné markery, spôsobujú riziko, že naviazané zložky môžu interferovať prostredníctvom naviazania alebo reakcie molekúl s naviazanými ligandami na mikronosičoch, ktoré sa zameriavajú na analyty v skúškach. Po separácii významných mikronosičov, ktoré prejavujú priaznivú reakciu, zahŕňajú spôsoby kódovania mikronosičov s výmennými značkami často taktiež prídavný stupeň štiepenia a analyzovania značiek na konečné zistenie identity základných ligandov na mikronosičoch, ktoré poskytujú priaznivú reakciu. Tento stupeň štiepenia prirodzene predlžuje čas a úsilie, potrebné na určenie výsledkov testov.
Vzhíado na vyššie uvedené, pretrváva v odbore nevyhnutnosť jednoduchých spôsobov identifikácie jednotlivých
mikronosičov v masovej populácii inak identických mikronosičov, zvlášť spôsobov kódovania veľkého počtu jedinečných kódov, ktoré nemusia byt naviazané ako cudzie telesá na povrchu mikronosičov.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu je poskytnutie mikronosiča, ktorý je kódovaný bez nevyhnutnosti pripojenia cudzieho predmetu, ktorý by slúžil ako kód, na povrch mikronosiča. Iným predmetom predloženého vynálezu je poskytnutie spôsobu kódovania mikronosičov, ktorý môže poskytovať v podstate neobmedzené možnosti, čo sa týka rozmanitosti jedinečných kódov, ktoré sa môžu zapísať a čítať na mikronosičoch.
Predložený vynález spĺňa tieto predmety poskytnutím mikronosičov s kódmi, ktoré sú na nich zapísané. Prednostnými nosičmi sú mikronosiče, obsahujúce odfarbiteíné látky, napríklad fluoreskujúce molekuly. Výhodný spôsob kódovania mikronosičov zahŕňa vystavenie mikronosičov nesúcich odfarbiteínú látku svetelnému zdroju s vysokou priestorovou rozlišovacou schopnosťou s cieíom odfarbenia kódov na mikronosičoch. Tento spôsob môže uprednostnené zahŕňať odfarbovanie kódov na fluoreskujúcich mikronosičoch, kde odfarbenie tvorí rovnaké alebo odlišné úrovne intenzity fluorescencie na odfarbených častiach kódu. Ďalším uprednostneným spôsobom kódovania mikronosičov je zapísanie kódov do vnútornej hĺbky mikronosičov.
V ďalšom upredostnenom uskutočnení sa naviaže veíký počet chemických zlúčenín alebo biologických molekúl na príslušne veíký počet mikronosičov podía vynálezu, ligandy naviazané na mikronosičoch sa zmiešajú a súčasne reagujú podľa skríningového alebo skúšobného protokolu a tie ligandy, • · · · • · • · ktoré reagujú, sa identifikujú pomocou čítania kódu na mikronosičoch, na ktorých sú naviazané.
Kódované mikroguličky podía vynálezu umožňujú súčasné analýzy veíkého počtu analytov v jednotlivých reakčných nádobách použitím jednoduchého alikvotu vzorky. Použitie mikronosičov podía vynálezu pri vysokovýkonných skúškach a reskciách je preto omnoho lepšia v porovnaní s použitím konvenčnej techniky s miktotitračnými platňami.
Mikronosiče podía vynálezu poskytujú tiež prakticky neobmedzený počet kódov, ktoré môžu byt zapísané a čítané na mikroguličkách, a preto sú omnoho lepšie ako známe mikronosiče kódované farebnými alebo fluorescenčnými značkami, ktoré nesú viac obmedzený počet možnosti kódovania. Mikronosiče podía vynálezu sú tiež lepšie ako mikronosiče kódované zložkami naviazanými na povrchu mikronosičov. Je to preto, že zapisovanie na mikronosiče podía vynálezu nenesie riziko, spojené so známymi mikronosičmi potenciálne inter ferujúcimi s interakciami analytu/ligandu, ktoré sa uskutočňujú na povrchu mikronosičov.
Prídavné znaky a výhodný vynálezu sú zverejnené v nižšie uvedenom opise a čiastočne budú jasné z opisu alebo sa môžu zistit z uskutočnenia vynálezu. Výhody vynálezu sa realizujú a získajú pomocou kódovaných mikronosičov a spôsobov zdôraznených hlavne v písomnom opise a v nárokoch. Vyššie uvedený všeobecný opis a taktiež nasledujúci podrobný opis vynálezu sú len vzorové a vysvetľujúce a neobmedzujú nárkovaný vynález.
Prehíad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1 znázorňuje niektoré princípy konvenčnej mikrofotolýzy a SCAMP.
• ·
Obrázok 2a a 2b znázorňuje čiarový kód a kruhový kód za použitia odlišnej intenzity, pričom každá intenzita je vyznačená odlišnými farbami znázornenými na obrázkoch.
Obrázky 3a a 3b znázorňujú konfokálne obrazy stredovej roviny FD148-dex-ma-mikroguličky pred (hore) a po odfarbení (dolu) 3 /um pásika približné 10 um pod povrchom mikroguličky.
Obrázok 4 znázorňuje získané fluorescenčné krivky FD148 v 148-dex-ma-mikroguličkách (A) a FITC v dex-ma-mikrogulič kách vybavených FITC ponorením do roztoku FITC (B).
Obrázok 5 znázorňuje konfokálny obraz stredovej roviny FD 148-dex-ma-mikroguličky po odfarbení íubovolnej geometrie pomocou SCAMP.
Obrázky 6a a 6b znázorňujú konfokálne obrazy stredovej roviny v 45 yum latexovej perličke značenej pomocou FITC hodinu po odfarbení čiarového kódu ( obrázok 6a) a. čiarového kódu a čísla ( obrázok 6b).
Obrázok 7 znázorňuje konfokálne obrazy stredovej roviny v 45 Ann latexovej perličke značenej pomocou FITC hodinu po odfarbení kódu R1247.
Obrázok 8 znázorňuje konfokálne obrazy stredovej roviny v 45 A“n latexovej perličke značenej pomocou FITC hodinu po odfarbení loga Gentskej univerzity.
Obrázok 9 znázorňuje konfokálne obrazy stredovej roviny v 45 A»m latexovej perličke značenej pomocou FITC hodinu po odfarbení loga firmy Tibotec.
Obrázok 10a znázorňuje konfokálne obrazy kódov odfarbených na odlišnú intenzitu a obrázky 10b až lOd graficky znázorňujú odlišné intenzity v kódoch.
Obrázky 11 a 12a znázorňujú konfokálne obrazy kódov odfarbených na odlišnú intenzitu a obrázky 11b a 12b graficky znázorňujú odlišné intenzity v príslušných kódoch.
Nasleduje podrobný opis vynálezu:
V jednom uskutočnení sa predložený vynález týka • · • · · · ·«·· mikronosičov s kódmi zapísanými na nich. Mikronosiče podlá vynálezu môžu byt vyrobené napríklad z akéhokolvek materiálu, ktorý sa bežne používa vo vysokovýkonnej skríningovej technike a diagnostike. Mikronosiče môžu byt napríklad vyrobené z pevnej látky, polopevnej látky alebo z kombinácie pevnej a polopevnej látky. Neobmedzujúce príklady takých materiálov zahŕňajú latex, polystyrén, zosietované dextranty, metylstyrén, polykarbonáty, polypropylén, celulózu, polyakrylamid a dimetylakrylamid. Uprednostnené materiály zahŕňajú latex, polystyrén a zosietené dextranty. Mikronosičmi môžu byt tiež prokaryotické alebo eukaryotické bunky.
Mikronosiče môžu mat lubovolné tvary a velkosti, ktoré sa prepožičiavajú ku kódovaniu a použitiu mikronosičov. Napríklad mikronosiče môžu byt v tvare guličiek alebo v tvare perličiek, ktoré nie sú nevyhnutne gulovité. Mikronosiče môžu mat napríklad valcovitý alebo oválny tvar. Ak majú mikronosiče gulovitý tvar, môžu mat priemer napríklad 1 až 200 Aim.
Kódy zapísané na mikronosičoch môžu mat lubovolnú geometriu, dizajn alebo znak, ktorý sa môže zapísat a čítat na mikronosičoch. Napríklad kódy môžu byt zapísané ako čísla alebo znaky alebo ako kódy vo forme symbolov, obrázkov, čiarových kódov, kruhových kódov alebo trojrozmerných kódov. Kruhové kódy sú podobné ako čiarové kódy s tým rozdielom, že koncentrické kruhy sa skôr používajú ako rovné čiary. Kruh môže napríklad obsahovat rovnakú informáciu ako jedna čiara. Kódy sa môžu zapisovat na povrch mikronosičov alebo do vnútornej hĺbky mikronosičov. Napríklad kódy môžu byt zapísané vo vnútornej hĺbke mikronosičov a hlavne v stredovej rovine mikronosičov. V závislosti od tvaru mikronosičov môže byt stredová rovina prednostným miestom na zapísanie kódu, pretože môže poskytovat najväčšiu povrchovú plochu vhodnú na • · · • · • · zapisovanie. Ďalej môže byt pre mikronosiče so zakriveným povrchom výhodnejšie zapisovač kódy do vnútornej hĺbky ako na zakrivený povrch. Je to preto, že často môže byt vhodnejšie zapisovač a čítat kódy na plochej rovine ako na zakrivenom povrchu.
Mikronosiče podía vynálezu môžu obsahovat odfarbiteíné látky a kódy na mikronosičoch môžu byt vo forme odfarbených obrazcov v odfarbiteíných častiach mikronosičov. Mikronosiče môžu obsahovat odfarbiteíné látky na povrchu mikronosičov alebo iež vo vnútri mikronosiča. Akékoívek odkazy v tejto prihláške na odfarbovanie látok na mikronosičoch zahŕňajú odfarbovanie na povrchu mikronosiča a tiež odfarbovanie vo vnútornej hĺbke mikronosičov. Uprednostňované odfarbiteíné látky zahŕňajú odfarbiteíné látkz absorbujúce fluorescenčné alebo elektromagnetické žiarenie. Mikronosiče môžu obsahovat odfarbiteíné luminofory. Príklady luminoforov, ktoré sa môžu použit, zahŕňajú fluorescenčné, fosforescenčné alebo scintilačné látky. Môžu sa použit chemiluminiscenčné, bioluminiscenčné alebo farebné látky. Týmito odfarbiteínými látkami môžu byt konkrétnejšie fluoresceintisotiokyanát (FITC), fykoerytríny, kumaríny, luciferová žltá a rodamín. Odfarbiteíné látky by sa mali volit tak, aby pri odfarbovaní zostával kód na mikronosiči v čase, ktorý je potrebný na použitie mikronosičov a akékoívek potrebné čítanie kódov. Teda je prijateíné isté množstvo difúzie neodfarbených molekúl do odfarbených oblastí, kým sa zachováva životnost kódu.
Odfarbené kódy na mikronosičoch môžu byt zapísané tiež tak, aby mali odlišné intenzity fluorescencie alebo sfarbenia v odfarbených oblastiach mikronosiča. Odfarbené kódovanie môže odsahovat napríklad niekoíko rozdielnych stupňov odfarbenia, a tým celkovo niekoíko rozdielnych intenzít fluorescencie v odfarbenej oblasti. Teda mikronosiče môžu byt kódované nielen pomocou geometrie odfarbeného obrazca na mikronosičoch, ale tiež použitím rozdielnych intenzít ··«· · · < ·· «· fluorescencie v obrazcoch.
V inom uskutočnení sa vynález týka spôsobu zapisovania kódov na mikronosiče. Tento spôsob sa môže využívať, na zapisovanie kódov na povrch mikronosičov alebo do vnútornej hĺbky mikronosičov. Kódy sa môžu zapisovať napríklad za použitia zdroja svetla s vysokou priestorovou rozlišovacou schopnosťou, ako je napríklad laser, výbojka alebo zdroj, ktorý emituje rentgenové žiarenie, žiarenie a 6, lúče ióntov alebo akúkolvek formu elektromagnetického žiarenia. Kódy sa môžu na mikronosiče zapisovať taktiež pomocou svetlotlače alebo chemického leptania. Uprednostňovaným spôsobom zapisovania kódov je spôsob za použitia zdroja svetla s vysokou priestorovou rozlišovacou schopnosťou a hlavne lasera alebo výbojky v kombinácii s konfokálnym mikroskopom. Iným uprednostňovaným spôsobom zapisovania kódov je spôsob za použitia odfarbenia kódov v odfarbiteínej látke na mikronosiči. Uprednostnené odfarbiteíné látky pri tomto spôsobe zahŕňajú látky opísané vyššie v opise mikronosičov a zahŕňajú fluoreskujúce molekuly. Čo sa týka objemu materiálu, ktorý sa môže odfarbovať v mikrnosičoch, príkladom takého objemu je jeden kubický nanometer až osem milimetrov kubických mikronosiča.
Uprednostneným spôsobom zapisovania kódov na mikronosiče je spôsob za použitia snímacej (skenovacej) mikrofotolýzy (SCAMP). Technické znaky SCAMP boli prvýkrát opísané v práci P. Wedekind et al., Scanning microphotolysis: a new photo bleaching technique based on fast intensity modulation of scanned laser beam and confocal imaging, Journal of Microscopy, zv. 176, str. 23-32 ( 1994), pričom obsah tejto práce je tu začlenený pomocou odkazu. Vyššie uvedený článok zverejňuje použitie SCAMP na odfarbovanie a vizualizáciu obrazcov v tenkej fluorescenčnej vrstve laku na nechty. Článok nenavrhuje použitie SCAMP na kódovanie mikronosičov.
····
My sme použili SCAMP na zapisovanie kódov na mikronosiče pomocou odfarbenia fluoreskujúcich molekúl v mikronosičoch. Odfarbovanie svetlom je velmi dobre známy jav týkajúci sa slabnutia farieb dôsledkom tej skutočnosti, že isté vlnové dĺžky svetla pri dopade na dané farbivo zapríčiňujú rezonanciu molekúl farbiva a prípadne ich rozklad. To je tiež príčinou toho, prečo fluoreskujúce molekuly majú často tendenciu odfarbovat sa, ak sa excitujú vysokovýkonným laserovým lúčom špecifickej vlnovej dĺžky.
Vela rokov sa techniky fluorescenčnej mikrofotolýzy (MP), nazývanej tiež obnovenie fluorescencie po odfarbení svetlom (FRAP), používali na skúmanie pohyblivosti fluoreskujúcich molekúl v biologických prostrediach, ako sú bunky a tkanivá, a tiež v nebiologických prostrediach. Peters and Scholtz Fluorescence photobleaching technigues v New Techniques of Optical Microscopy and Microspectroscopy, R.J. Cherry (ed.), MacMillan, New York, str. 199-228 (1991), De Smedt at al., Scructural Information on Hyaluronic Acid Solutions as Studied by Próbe Diffusion Expoeriments, Macromolecules, zv. 27, str. 141 - 146 (1994), De Smédt et
Macromolecules in Dextran Methacrylate as Studied by Confocal Scanning Laser al., Diffusion of Solutions and Gels
Microscopy, Maclomolecules, sv. 30, str. 4863-4870 (1997).
Mobilita fluoreskujúcich molekúl sa môže merať odfarbením (fotolýzou) fluoreskujúcich molekúl pohybujúcich sa v ohniskovom priestore svetelného lúča, ktorým môže byt hlavne lasserový lúč ( obrázok 1: A ,B). Ihneď po krátkom odfarbovaní, typicky približne 10 milisekúnd, meria vysoko zoslabený lasserový lúč obnovenie fluorescencie v oblasti odfarbenej svetlom spôsobené difúziou fluoreskujúcich molekúl z okolitých neodfarbených oblastí do odfarbenej oblasti ( obrázok 1 : B, C). Charakteristická doba difúzie, meranie difúzneho koeficientu a frakcie imobilných a mobilných • · · *··· • · • ··« fluoreskujúcich molekúl sa môže odvodiť z obnovenia fluorescencie v odfarbenej oblasti ( obrázok 1 : D).
Mobilná frakcia R je definovaná ako:
F (oo) - F(0) R =------------ ,
F(i) - F(0) kde F(i) je intenzita fluorescencie odfarbenej plôšky pred odfarbením, F(0) je intenzita fluorescencie odfarbenej plôšky okamžite po odfarbení a F( <x>) je intenzita fluorescencie odfarbenej plôšky počas dlhej doby po odfarbení.
V pokusoh s odfarbovaním svetlom za použitia konvenčného (nesnímacieho) mikroskopu sa stacionárny (laserový) svetelný lúč sústredí na vzorku počas odfarbovania a tiež počas doby obnovenia. Stacionárna poloha ( laserového ) svetelného lúča počas odfarbovania má za následok oblasť odfarbenú svetlom, ktorá má kruhový tvar. Aj keď nesnímacie svetelné mikroskopy technicky poskytujú ožarovanú oblasť o priemere 2 yum alebo menej, vyskytuje sa často rozšírenie odfarbenej plôšky, spôsobené stacionárnym toho sú velké kruhové odfarbené priemer 10 /tím až 20 /um alebo znázorňuje obrázok l : B-II.
laserovým lúčom. Výsledkom plôšky, ktoré majú typický väčší, ako to schematicky
Použiteľnosť laserových svetelných snímacích mikroskopov otvorila nové možnosti pre mikrofotolytické metódy. Kombinácia fotolýzy, snímanie lúčom a konfokálna mikroskopia vedú k vývoju SCAMP. Pri SCAMP vystupuje odfarbovanie počas snímania vzorky pomocou prepínania medzi nízkou monitorovacou úrovňou intenzity a vysokou úrovňou intenzity lasera na odfarbovanie svetlom za menej ako jednu mikrosekundu za použitia zariadenia modulujúceho intenzitu, ako je optoakustický modulátor (AOM). Kombinácia odfarbovania počas snímania a použitie AOM, ktoré vytvára mimoriadne krátke impulzy • ··· ···· odfarbovania, zabraňuje rozširovaniu odfarbenej plôšky, ktoré existuje pri konvenčnej mikrofotolýze dôsledkom dlhších dôb odfarbovania svetlom a stacoinárneho laserového lúča. SCAMP poskytuje odfarbené plôšky menšie ako mikrometer vo vzorke.
Obrázok 1 schematicky znázorňuje, ako sa realizuje SCAMP pri meraní mobility fluoreskujúcich molekúl. Najskôr sa meria fluorescencia pozdĺž jednej priamky x záujmovej roviny vo vzorke pomocou snímania tejto priamky ( obrázok 1 : A bodkovaná priamka). Potom sa vyberie malý úsek ( napríklad 3 um) na tejto priamke x, na ktorom sa má skúmat difúzia, s cielom odfarbovania ( obrázok 1 : B-1). Dĺžka, poloha a počet úsekov sa môže volit íubovoíne pomocou programového vybavenia SCAMP. Odfarbovanie tohto úseku svetlom prebieha v tom čase, keď laserový lúč sníma tento úsek s dočasne veími zvýšenou intenzitou laserového lúča. Typicky je pomer úrovní intenzity laserového lúča pri odfarbovaní svetlom a pri monitorovaní väčší ako 100.
Pretože SCAMP využíva konfokálny mikroskop, fluorescenčná detekcia je možná nielen na povrchu vzorky, ale tiež v íubovoínej hĺbke vo vzorke s malou interferenciou rozptýleným žiarením z mimoohniskových úrovní preparátu ( ako sa stáva v konvenčnom mikroskope). Naopak, keď sa používa na osvetlenie žiarivka a konvenčný ( nefokálny) mikroskop, pozoruje sa typicky len povrch vnútornej hĺbke je preto všeobecne ale stáva sa Konfokálne a guličky. Kódovanie vo obtiažne na pozorovanie dobre viditeľné pomocou snímacie charakteristiky bežným mikroskopom, konfokálnej optiky.
mikroskopu poskytujú mikrooblasti fotolýzy a čítanie pri dobre definovaných polohách v mikronosiči. Tento vynález sa jasne odlišuje od iných aplikácií opísaných doteraz v stave techniky napríklad tým, že použitie vysokej priestorovej rozlíšiteľnosti SCAMP môže nevratne označovat mikroguličky vo vnútri v špecifickej hĺbke a čítat tento kód konfokálnou technikou.
·♦·· ·· ·· • · · • · ··· • · · « » · · « ·· ··
Spôsoby zapisovania kódov na mikronosiče podía vynálezu môžu zahŕňať: tiež odfarbovanie mikronosičov s cieíom vytvorenia rozdielnych úrovní intenzity v odfarbených látkach v kóde. Naviac k prenosu informácie vo vzore samotného kódu sa môže informácia prenášať: taktiež pomocou rozdielnych intenzít v odfarbených obrazcoch. Schopnosť: kódovať mikronosiče pomocou odlišných intenzít môže dovoíovat menšie kódy na mikronosičoch, teda šetrí priestor, ale stále prenáša rovnaký počet alebo viac jedinečných identifikátorov na kódovanie mikronosičov. Napríklad podía vynálezu je možno odfarbiť intenzity v perličke. To sa môže uskutočňovať spôsobov, napríklad opakovaným odfarbovaním perličky vzhíadom na iné alebo dôsledkom rozptylu rozdielnych úrovní akustickej energie v AOM s cieíom vytvorenia množiny rozdielnych výkonov lasera, ktoré budú tvoriť odfarbené obrazce s rozdielnymi intenzitami na základe energie laserového svetla použitého pre každú časť kódu. Obrázky 2a a 2b sú dva príklady kódov odfarbených použitím rozdielnych intenzít, jeden s čiarovým obrazcom a druhý s kruhovým obrazcom. Rozdielne intenzity kódov sú reprezentované rozdielnymi farbami na obrázkoch. Rozdielne úrovne intenzity sa môžu taktiež kombinovať s rozdielnymi rozlohami kódujúcich prvkov, ako sú čiary alebo čiarové kódy.
štyri odlišné veíkým počtom istých častí
Iné uskutočnenie vynálezu sa týka čítania kódov a kódovaných mikroguličkách podía vynálezu. Čítanie kódov sa môže uskutočňovať pomocou bežného mikroskopu, ak je kód na povrchu mikronosiča alebo vo vnútornej hĺbke mikronosiča, ak je mikronosič dostatočne priehladný. čítanie kódov sa môže uskutočňovať taktiež s použitím konfokálneho mikroskopu. Kódy sa môžu čítať hlavne pomocou suspendovania mikronosičov vo vodnom prostredí, umiestnenia mikronosičov medzi dve sklíčka alebo ich umiestnením do mikrokapilár a pozorovaním kódov mikroskopom alebo konfokálnym mikroskopom.
Iné uskutočnenie vynálezu sa týka spôsobov použitia • · ·· : : · kódovaných mikroguličiek podlá vynálezu. Mikronosiče sa môžu použit napríklad ako .nosné materiály na meranie biomolekulárnych interakcií, na výskum liečiv, overovanie viazania receptorov, terapiu, lekársku diagnostiku, kombinatorickú chémiu, izoláciu a purifikáciu delových molekúl, získanie a detekciu makromolekúl na analytické účely, selektívne odstraňovanie kontaminujúcich látok, enzymatickú katalýzu, chemickú modifikáciu, hybridizačné reakcie a forenznú aplikáciu.
Mikronosiče môžu uprednostnené slúžit ako nosné materiály v chemických a biologických skúškach a syntézach. V tomto prípade môžu mikronosiče obsahovat jeden alebo viac ligandov naviazaných na povrchu mikronosičov. Mikronosiče s naviazanými ligandami sa potom môžu priviest do styku s delovými analytmi s delom určenia prítomnosti alebo neprítomnosti špecificky významných analytov alebo môžu slúžit ako nosné materiály na reakcie kombinatorickej chémie robené na ligandoch naviazaných na mikronosičoch. Príklady delových analytov pre ligandy naviazané na mikronosičoch zahŕňajú antigény, protilátky, receptory, haptény, enzýmy, proteíny, peptidy, nukleové kyseliny, liečivá, hormóny, patogény, toxíny alebo akékolvek významné chemikálie alebo molekuly. Či ligand naviazaný na mikronosiči sa viaže alebo reaguje s cielovým analytom alebo nie, sa môže určit konvenčými technikami používanými v tomto odbore na také určenie. Reakcia sa môže dokázat napríklad pomocou luminomerickej odpovede. Reakcia sa môže dokázat pomocou kalorimetrickej,chemiluminometrickej alebo fluorimetrickej odpovede. Ligand naviazaný na mikronosiči sa môže navrhnút tak tak, aby v prítomnosti významného analytu, na ktorý je zameraný, sa menila optická signatúra mikroguličky. Taká zmena optickej signatúry môže byt napríklad výsledkom fotochemickej reakcie, ktorá prebieha, ak sa uskutočňuje naviazanie alebo reakcia medzi ligandom a analytom. Mikronosiče sa potom môžu pozorovat pod mikroskopom na
·· · · ·· ·· • · • · · · ·· detekciu fluorescencie spojenej s touto fotochemickou reakciou.
Ako ligandy sa k mikronosičom podía vynálezu môže viazal:
široké spektrum chemických a biologických funkčností. Tieto funkčnosti zahŕňajú všetky funkčnosti, ktoré sa bežne používajú vo vysokovýkonnej skríningovej technike a diagnostike. Ligandy môžu byt k mikronosičom naviazané konvenčným spôsobom všeobecne používaným na naviazanie ligandov k mikronosičom včítane kovalentnej väzby a priameho pripojenia alebo pripojenia cez linker. Ďalej sa mikronosiče môžu funkcionalizovat rôznymi spôsobmi s cieľom pripojenia k východiskovému reaktantu.
Mikronosiče podía vynálezu sa môžu použit pri spôsoboch detekcie prítomnosti alebo neprítomnosti jedného alebo viacerých cieľových analytov vo vzorke, ktoré zahŕňajú privedenie ligandu naviazaného na mikronosiči aspoň s jedným analytom, detekciu, či analyt reagoval alebo sa naviazal k ligandu a čítanie kódu ktoréhokoľvek mikronosiča, na ktorom sa vyskytla akákoľvek reakcia alebo naviazanie.
Konkrétnejšie sa vynález týka spôsobu detekcie prítomnosti alebo neprítomnosti jedného alebo viacerých cieľových analytov vo vzorke, ktorý zahŕňa výber jedného alebo viacerých ligandov, ktoré sa viažu alebo reagujú s jedným alebo viacerými analytmi, naviazanie ligandov na veľké množstvo mikronosičov podľa vynálezu, koreláciu identity ligandov s kódmi na mikronosičoch, na ktorých sú ligandy naviazané, privedenie jedného alebo viac analytov do styku s mikronosičmi s naviazanými ligandami, pozorovania ktorýchkoľvek mikronosičov, na ktoré sa analyt naviazal alebo reagoval s ligandom naviazaným na mikronosiči, a čítanie kódov na mikronosičoch s cieľom identifikácie akýchkoľvek ligandov, s ktorými reagoval jeden alebo viac analytov, a tým určenie prítomnosti alebo neprítomnosti jedného alebo ···· • · ·· ·· • · • ··· • · • · · ·· ·· viacerých analytov.
V uprednostnenom uskutočnení vyššie uvedeného spôsobu je cielovým analytom nukleová kyselina, hlavne DNA alebo RNA, a aspoň jeden ligand naviazaný na mikronosiči je reverzným kompolementom tejto nukleovej kyseliny. Mikronosiče podlá vynálezu sú teda užitočné pri hybridizácii DNA. Mikronosiče sú taktiež užitočné pre analýzy založené na enzýmoch a na imunoanalýzu. Mikronosiče sa môžu použiť tiež v skúškach realizovaných na skríning určitých zlúčenín vo vzorkách a taktiež na detekciu a izoláciu zlúčenín z týchto vzoriek. Mikronosiče sa môžu použiť tiež ako nosné materiály na vytváranie alebo reakciu členov knihovne kombinatorickej chémie.
Mikronosiče podlá vynálezu sa; môžu použiť tiež v spôsoboch a zariadeniach používaných na účinný a rýchly skrining velkého počtu zložiek, kde môže byť rozdiel v ligande naviazanom na mikronosičo alebo v rozpustnej analytovej zložke alebo v obidvoch, kde je záujem o určenie výskytu interakcie medzi týmito dvoma zložkami. Tieto zariadenia zahŕňajú mikrosystém, ako je napríklad pevný nosný materiál, na ktorom sú umiestnené naviazané ligandy v dopredu určenom zozname a snímač na detekciu interakcie medzi zložkami. Spôsob môže zahŕňať prípravu mikrosystému, ako je napríklad pevný nosný materiál na naviazanie ligandu, potom zmiešanie ligandu a analytu s cielom uskutočnenia interakcie medzi týmito zložkami a potom určenie prítomnosti interakcie medzi zložkami a presných polôh.
Mikrosystém bude obyčajne zahŕňať množinu rozdielnych zložiek. Teoreticky je potrebná len jedna zložka, ale môže ich byt až 10^. Kým počet zložiek nebude obyčajne presahovať 105, počet jednotlivých kódovaných mikronosičov môže byt podstatne vyšší.
···· • · • ·· ·· ·· • · · • · ··· • · · · • · · ;
·· ·· ····
Naviazaný ligand môže byť napríklad organického pôvodu, ako napríklad jednotlivá molekula alebo množina molekúl, ligandy a receptory, zložky naviazané na nukleovej kyseline, RNA,jednou alebo dvoma vetvami viažúcimi sa proteínmi, ktoré nevyžadujú, aby bol ligand viazaný k nukleovej kyseline, oligonukleotidmi a proteínmi.
Kódované mikronosiče v mikrosystéme môžu byt usporiadané v pásoch. Pre definované polohy sa poskytujú zberače tak, aby sa jednotlivé interakcie rýchlo detekovali. Hlavne kotúče s kruhovými pásmi so zberačmi definujúcimi polohy na pásoch tak, aby sa pozitívne signály mohli interpretovať vzhľadom na informácie poskytované zberačom. Kruhové pásy sú výhodne koncentrické a majú prierez v rozsahu 5 až 5000 /im. Možné sú rôzne modifikácie, ako dopredu pripravené úseky, ktoré sa potom môžu pripojiť ku kotúču na skúšku.
Predložený vynález sa v ďalšom texte ilustruje pomocou nasledujúcich príkladov, ktoré odborníkom v danom odbore ďalej vysvetľujú realizáciu vynálezu. Nasledujúce príklady len ilustrujú vynález a zverejňujú užitočné vlastnosti istých uskutočnení vynálezu. Nasledujúce príklady by sa nemali chápať ako obmedzujúce nárokovaný vynález.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Dextrán-metakrylát (dex-ma) použitý na prípravu dex-mamikroguličiek, sa syntetizoval a charakterizoval tak, ako sa opisuje podrobne vo W.N.E. van Dijk-Wolthius et al., Reaction of Dextran with Glycidyl Methacrylate : An Unexpected Transesterification, Macromolecules, zv. 30, str. 3411 až 3413 (1997), pričom toto zverejnenie je tu začlenené pomocou odkazu. Dex-ma-mikroguličky sa pripravili radikálovou polymeráciou použitím N,N,N', N-tetrametylénetyléndiamidu a ···· • · ·· ·· • · · • · ··· • · · · • · · e peroxosíranu draselného z emulzie dex-ma a polyetylénglykolu (PEG), vid Stekenes et al., The Preparation of Dextran Micropheres in aa All-Aqueous System: Effect of the
Formulation Parameters on Particle Characteristics , Phar maceutical Research, zv. 15, str. 557-561 (1998), pričom toto zverejnenie je sem začlenené pomocou odkazu. Koncentrácia roztoku dex.ma ( vo fosfátovom pufri pri pH 7) bola 10 % hmotn. Stupeň substitúcie dex-ma, ktoré predstavuje počet metakrylátových molekúl na 100 glykopyranosylových jednotiek bol 4. Koncentrácia roztoku PEG vo fosfátovom pufri pri pH 7 bola 24 % hmotn., pokial priemerná molárna hmotnosť PEG bola 10 000 g/mol (Merck). Jedna dávka mikroguličiek (FDl48-dexma-mikroguličiek ) sa pripravila v prítomnosti dextránu označovaného fluoresceinisotiokyanátom ( s molárnou hmotnosťou 148 000 g/mol). Druhá dávka mikroguličiek sa vybavila fluoresceinizotiokyanátom (FITC) ponorením dex-mamikroguličiek po kompletnej príprave do roztoku FITC ( 0,01 mg/ml vo fosfátovom pufri pri pH 7,2). FD148 a FITC sa získali od firmy Sigma. Experimenty s použitím SCAMP sa uskutočňovali na oboch dávkach mikroguličiek, ako sa vysvetľuje v príklade 2.
Príklad 2
SCAMP sa inštalovala na konfokálny laserový snímací mikroskop (CLSM) Bio-Rad MRC1024 podlá práce P. Wedekind et al., Scanning microphotolysis :a new photobleaching technigue based on fast intensity modulation of scanned laser beam and confocal imaging, Journal of Microscopy, zv. 176, str. 23-32 (1994) a P. Wedekind et al., Line-Scanning Microphotolysis for Diffraction-Limited Measurements of Lateral Diffusion, Biophysical Journal, zv. 71, str. 1621-1623 (1996), pričom obsah týchto zverejnení je tu začlenený pomocou odkazu. Argónový laser (Specträ Physics 2017) so 40x olejovým objektívom a výkonom 2 W (predstavujúcim maximálny • · · · · · • · · · · • · · · · • · · · • fl fl· možný výkon), používaný na získanie dostatočného odfarbenia svetlom počas veími krátkych časových úsekov odfarbovania svetlom, sa použil v pokusoch s použitím SCAMP na dex-mamikroguličkách zhotovených podía príkladu 1. Vlnová dĺžka laserového lúča bola počas doby odfarbovania 488 nm.
V tomto príklade sa uskutočňovali pokusy s použitím SCAMP približne 10 Aim pod povrchom dex-ma-mikroguličiek. Pokusy prebiehali nasledujúco: najskôr sa merala fluorescencia pozdĺž jednej priamky x stredovej roviny dex-ma-mikroguličky pomocou snímania tejto priamky v dobe 400 milisekúnd ( obr. 1:A -bodkovaná priamka). Potom sa vybral 3 /Um úsek na tejto priamke x s cieíom odfarbovania ( obrázok 1 :B-I). Dĺžka, poloha a počet úsekov sa môže voliť íubovoíne pomocou programového vybavenia SCAMP. Odfarbovanie tohto úseku svetlom prebiehalo v tom čase, ked laserový lúč snímal tento úsek s dočasne silne zvýšenou intenzitou laserového lúča. Typicky bol pomer úrovní intenzity laserového lúča pri monitorovaní a pri odfarbovaní svetlom 1 : 500. Na meranie obnovenia fluorescencie v odfarbenom pásiku sa robilo snímanie veími zoslabeným laserovým lúčom pozdĺž zvolenej priamky x približne 4 sekundy.
Obrázky 3a a 3b znázorňujú konfokálne obrazy stredovej roviny FD148-dex-ma-mikroguličky pred a 2 minúty po odfarbení 3 Am úseku. Priemer mikroguličky je približne 25 Zim. Neskorší obraz znázorňuje, že odfarbená plôška zostáva čierna naznačujúc tak, že po 2 minútach sa nepozorovalo žiadne obnvenie fluorescencie v odfarbenej oblasti mikroguličky. Obrázok 4 ( krivka A) znázorňuje, že fluorescencia v odfarbenom úseku v tomto príklade sa neobnovila, čo vedie k úsudku, že v časovom rozsahu pokusu sa pri skúmaní úplne imobilizovali veíké reťazce FD148 v oblasti dex-ma-mikroguličiek.
Kým reťazce FD148 by sa mohli stericky zachytiť v sieti dex-ma-polyméru, pretože sú prítomné počas tvorby mikroguličiek, nie je to možné pre malé molekuly FITC, ked sú vložené do dex-ma-mikroguličiek ponorením úplne polymerizovaných dex-ma-guličiek do roztoku FITC. V tomto prípade bolo komletné obnovenie fluorescencie vylúčené a experimentálne potvrdené. Obrázok 4 ( krivka B) znázorňuje, že molekuly FITC umiestnené približne 10 /um pod povrchom mikroguličky zostávajú mobilné.
lúč sa môže a počet úsekov
Okrem toho technická schopnosť odfarbovania malých úsekov svetlom vo vzorke s použitím snímacieho mikroskopu je otvorená na špecifické zvolenie mikrooblastí vo vzorke, kde sa vyskytlo odfarbenie, pretože laserový polohovat. Okrem toho, nakoíko dĺžka, poloha sa môžu v pokusoch s použitím SCAM voliť íubovoíne, môže sa vo vzorke odfarbovat svetlom akákoľvek geometria. Obrázok 5 znázorňuje konfokálny obraz stredovej roviny FDl48-dex-mamikroguličky 2 minúty po odfarbení kríža, kruhu a pravouholníka v mikroguličkách.
Príklad 3
Pokusy s použitím SCAMP sa uskutočnili taktiež na 45 /um latexových perličkách značených pomocou FITC zakúpených od firmy PolylaB v Antverpách v Belgicku.SCAMP sa inštalovala na CLSM Bio-Rad MRC1024 podía práce P. Wedekind et al., (1994) a P. Wedekind et al., (1996). Výkonný argónový laser (Spectra Physics 2017) sa lOOx objektívom, používaný na získanie dostatočného odfarbenia svetlom počas veími krátkych časových úsekov odfarbovania svetlom, sa použil v pokusoch s použitím SCAMP na 45 /um latexových perličkách označených pomocou FITC. Intenzita lasera Spectra Physics bola inštalovaná na 300 mW, výsledkom čoho bola monitorovacia intenzita lasera 75_ W a intenzita lasera pri odfarbovaní svetlom 20 mW (merané na ·
• ·
konci optického vlákna, ktoré vysiela laserový lúč do konfokálneho snímacieho laserového mikroskopu. Následkom toho bol pomer intenzity laserového lúča pri monitorovaní a intenzity pri odfarbovaní svetlom 1 :266. Vlnová dĺžka laserového lúča taktiež počas odfarbovania bola 488 nm.
Merania s použitím SCAMP sa robili v stredovej rovine 45 Aim latexových perličiek značených pomocou FITC. Najskôr sa zaostril obraz, kým latexová perlička celkom nepokryla obraz. Potom sa definovala značka a pomocou programového vybavenia SCAMP sa určilo, kde má byt odfarbená značka na latexovej perličke. Značenie prebiehalo počas snímania stredovej roviny 45 um latexových perličiek značených pomocou FITC laserovým lúčom. Dočasne veími zvýšená intenzita laserového lúča (od 75 _W do 20 mW) sa vyskytovala počas snímania úsekov laserovým lúčom, ktoré sa mali odfarbit, s cieíom vytvorenia značky. Pretoče snímanie trvalo 6 ms pre priamku x ( obrázok IA) a pretože jeden obraz konfokálnej roviny ( tj. stredovej roviny latexovej perličky) obsahuje 512 priamok x, značenie latexovej perličky trvalo 3 072 sekúnd.
Obrázky 6 až 9 znázorňujú konfokálne obrazy stredovej roviny v 45 /um latexových perličkách značených pomocou FITC jednu hodinu po odfarbení čiarového kódu (obrázok 6a), čiarového kódu a čísla ( obrázok 6b), čísla R1247 ( obrázok 7), loga Gentskej univerzity ( obrázok 8) a loga firmy Tibotec ( obrázok 9). Obrazy znázorňujú, že odfarbené úseky zostávajú čierne, naznačujúc tak, že v odfarbených úsekoch latexových perličiek sa nevyskytlo žiadne významné obnovenie fluorescencie.
Hodnoty voíby premennej ohniskovej vzdialenosti konfokálneho snímacieho laserového mikroskopu Bio-Rad MRC1024 boli nasledujúce: 1,61 na obrázku 6a, 1,00 na obrázku 6b, 3,07 na obrázku 7, 1,00 na obrázku 8 a 1,00 na obrázku 9.
• · · ·
• · • · • · · • ο · · ·
Vysoká priestorová rozlišovacia schopnosť SCAMP na odfarbovanie značiek sa pozoruje na obrázkoch 6a a 6b. Značka na obrázku 6a je tvorená 3 typmi odlišných čiar. Jedna má velkú šírku ( 2,5 /um), ďalšia má strednú šírku ( 1,25 /im) a ďalšia má malú šírku ( 0,62 /um). Všetky čiary sú umiestnené vo vzájomnej vzdialenosti 1,25 /um.
Príklad 4
Nasledujúce pokusy demonštrujú spôsoby odfarbenia kódu vo fluoreskujúcich mikronosičoch, pričom kódy obsahujú rozdielne úrovne intenzity spôsobené rozdielnými stupňami odfarbenia. Mikronosičmi použitými v nasledujúcich pokusoch boli 45 Aim latexové perličky značené pomocou FITC, zakúpené od firmy PolylaB v Antverpách v Belgicku.
Na jeden rad pokusov odfarbovania sa použil laser o velkosti 60x a s výkonom 300 mW na zhotovenie obrazcov
Štvorce
Štvorce v hornom rade majú ( 2,46 /um) v programovom vybavení a sú pixelami. Odfarbenie sa zväčšilo na v dolnom rade obrázka majú znázornených na obrázku 10a. rozlohu 32 pixelov oddelené inými 32 skutočnú velkosť. polovičnú velkosť.
Ako znázorňuje obrázok 10a, možné je odfarbenie s niekolkými intenzitami. Za predpokladu napríklad úrovne plató s 200 analógami digitálnych jednotiek (ADU) je možné odfarbenie približne aspoň od 50 do 200 ADU. Preto sa úrovne môžu odfarbiť v intervale približne od 25 % pôvodnej intenzity florescencie. Fotografia na obrázku 10a ukazuje, že je napríklad určite možných 6 úrovní odfarbenia. Týchto šesť úrovní odfarbenia je jasných zo šiestich štvorcov odfarbených v hornom rade na obrázku 10a. intenzita fluorescencie týchto štvorcov je znázornená v grafe na obrázku 10c. Šesť štvorcov • · Oy1 ··· ·· ·· ·· ·· ···· s odlišnou intenzitou fluorescencie sa získalo opakovaním odfarbovania ( 1 až 6-krát). S použitím šiestich kódovaných polôh so šiestimi rozdielnymi intenzitami fluorescencie £
poskytuje 6° alebo 46656 rozdielnych kódov.
Rad desiatich malých odfarbených štvorcov znázornených na obrázku 10a jasne ukazuje, že odfarbovanie opakovaným snímaním nie je lineárne. Tieto štvorce sú len dvakrát širšie ako predchádzajúca jednotka, ale zostávajú jasne rozlíšitelné. Úrovne intenzity týchto značiek sú znázornené na grafe obrázku lOd. Nakoniec intenzita jednej odfarbenej škvrny medzi dvoma radmi zo šiestich a desiatimi kódujúcimi polohami je znázornená na obrázku 10b.
Druhý pokus sa robil s cielom účinného odfarbovania kódu s 8 kódovanými polohami (softvérová šírka jednej čiary = 24 pix x 0,069 /im/pix = 1,66 yum, oddelená inými 24 pixelmi) a 8 rozdielnymi intenzitami (za poskytnutia 88 = 16777216 rozdielnych kódov). Zvolil sa výkon lasera 200 mW. Fotografia mikronosiča v tomto pokuse je znázornená na obrázku 11a a graf ukazujúci rozdielne úrovne intenzity jednotlivých kódov je znázornený na obrázku 11b. Jasne sú viditelné rozdielne intenzity. Kód na obrázku 11a je číslo 15263748.
obrázky 12a a 12b znázorňujú iný príklad ôsmich kódovaných polôh rozdielnej intenzity. V tomto prípade sa odfarbenie uskutočnilo pomocou 250 mW namiesto 200 mW ako v predchádzajúcom prípade a uskutočnilo sa za použitia 0,056 mm/pix. Kód v tomto prípade bol 13265874. Fotografia kódov a graf rozdielnych intenzít kódov je znázornený na obrázkoch 12a a 12b.
Iné uskutočnenia vynálezu budú jasné odborníkom v danom odbore z opisu a vynálezu, ktoré sú tu zverejnené. Uvažuje sa, že opis a príklady sú určené len ako príklady s rozsahom a podstatou vynálezu určenými nasledujúcimi nárokmi.
• · · · u c i sa životnosťou a ako je prenos
Claims (26)
1. Kódovaný mikronosič, vyznačuj t ý τη, že je kódovaný kódom so zachovanou zapísaným na mikronosiči inými prostriedkami, elektronických dát.
2. Kódovaný mikronosič podlá nároku 1, vy z n a č u júci sa tým, že kód je zapísaný vo vnútornej hĺbke mikronosiča.
3. Kódovaný mikronosič podía nároku 2,vyz nečujúci sa tým, že kód je zapísaný v stredovej rovine mikronosiča.
4. Kódovaný mikronosič podía ktoréhokoívek z nárokov 1 až 3,vyznačujúci sa tým, že mikronosičom je mikrogulička.
5. Kódovaný mikronosič podía nároku 3, vyznačuj ú ci sa tým, že mikronosič má priemer 1 až 200 yum.
6. Kódovaný mikronosič podía ktoréhokoívek z nárokov 1 až 5,vyznačujúci sa tým, že kód bol zapísaný pomocou vystavenia mikronosiča svetelnému zdroju s vysokou priestorovou rozlišovacou schopnosťou.
7. Spôsob kódovania mikronosiča, vyznačuj úci sa tým, že zahŕňa zapisovanie kódu so zachovávanou životnosťou na mikronosič inými prostriedkami, ako je prenos elektronických dát.
8. Spôsob podía nároku 7,vyznačujúci sa tým, že kód sa zapisuje do vnútornej hĺbky mikronosiča.
• · · • · · · · • · · · 4 • · · 4 ·· ·· • · · • ♦ · • · · ·· ··· ·
9. Spôsob podía nároku 8,vyznačujúci sa tým, že kód sa zapisuje do stredovej roviny mikronosiča.
10. Spôsob podía ktoréhokolvek z nárokov 7 až 9, vyznačujúci sa tým, že mikronosičom je mikrogulička.
11. Spôsob podía nároku 10, vyznačujúci s .a. tým, že mikrogulička má priemer 1 až 200 /um.
12. Spôsob podía ktoréhokolvek z nárokov 7 až 11, v yznačujúci sa tým, že zahŕňa vystavenie mikronosiča svetelnému zdroju s vysokou priestorovou rozlišovacou schopnosťou na zapisovanie kódu na mikronosič.
13. Spôsob podía nároku 12,vyznačujúci sa tým, že svetelným zdrojom je laser alebo výbojka.
14. Spôsob podía nároku 12 alebo 13, vyznaču júci sa tým, že kód sa zapisuje na mikronosič odfarbovaním mikronosiča.
15. Spôsob podía nároku 14, vyznačujúci sa tým, že mikronosič obsahuje fluoreskujúce molekuly a že sa kód zapisuje pomocou odfarbenia fluoreskujúcich molekúl.
16. Spôsob podía nároku 15,vyznačujúci sa tým, že sa kód zapisuje pomocou odfarbenia fluoreskujúcich molekúl za účelom vytvorenia dvoch alebo viacerých rozdielnych úrovní výslednej intenzity fluorescencie v odfarbených častiach kódu.
17. Spôsob podía ktoréhokolvek z nárokov 7 až 16, vyznačujúci sa tým, že mikronosič obsahuje materiál zvolený zo súboru zahŕňajúceho pevnú látku, polopevnú látku a kombináciu pevnej a polopevnej látky.
• · · ·
18. Spôsob podlá ktoréhokolvek z nárokov 7, 8 a 12, v yznačujúci sa tým, že mikronosičom je prekaryotická alebo eukaryotická bunka.
19. Spôsob čítania kódovaného mikronosiča podlá ktoréhokolvek z nároku 1 až 6,vyznačujúci sa tým, že zahŕňa pozorovanie kódu konfokálnym mikroskopom.
20. Spôsob detekcie prítomnosti alebo neprítomnosti jedného alebo viacerých cieľových analytov vo vzorke, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa výber jedného alebo viacerých ligandov, ktoré sa viažu alebo reagujú s jedným alebo viacerými analytmi, naviazanie ligandov na velké množstvo kódovaných mikronosičov podlá ktoréhokolvek z nárokov 1 až 6, koreláciu identity ligandov na mikronosičoch, na ktorých sú ligandy naviazané, privedenie jedného alebo viacerých analytov do styku s mikronosičmi s naviazanými ligandami, pozorovanie ktoréhokolvek mikronosiča, na ktorý sa analyt naviazal alebo reagoval s ligandom naviazaným na mikronosiči a čítanie kódov na mikronosičoch za účelom identifikácie ktorýchkolvek ligandov, s ktorými reagoval jeden alebo viac analytov, a tým určenie prítomnosti alebo neprítomnosti jedného alebo viacerých analytov.
21. Spôsob podlá nároku 20,vyznačujúci sa tým, že cielovým analytom je nukleová kyselina a že aspoň jeden ligand naviazaný na mikronosiči je reverzným kômplementom nukleovej kyseliny.
22. Spôsob podlá nároku 21,vyznačujúci sa tým, že zahŕňa hybridizáciu DNA.
23. Spôsob detekcie prítomnosti alebo neprítomnosti jedného alebo viacerých cielových analytov vo vzorke, vy značujúci sa tým, že zahŕňa privedenie ligandu • ·· · ·· ·· ·· ·· • · · ♦ · · • · ··· · · ·· ·· · · · · φ • · · · · · · ·· ·· ·· ··· naviazaného na mikronosiči aspoň s jedným analytom, pričom mikronosičom je kódovaný mikronosič podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, detekciu toho, či analyt reagoval alebo sa naviazal k ligandu a čítanie kódu ktoréhokoľvek mikronosiča, na ktorom sa vyskytla reakcia alebo naviazanie.
24. Mikronosič sa naviazaným ligandom, vyznačujúci sa tým, že obsahuje kódovaný mikronosič podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, s naviazaným ligandom na mikronosiči.
25. Chemická knihovňa, vyznačujúca sa tým, že obsahuje individuálne členy knihovne naviazané na množinu kódovaných mikronosičov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6.
26. Chemická knihovňa podľa nároku 25, vyznačujúca sa tým, že je kombinatorickou chemickou knihovňou.
• ···· ·· ·· ·· ·· ·♦ · ··· ···· • · · · ··· · · · 9 ··· · · ···.· · ο · · · « · · · · e ··· ·· ·· ·· ·· ····
Fluorescencia
Obr.l
T I B O T E Č RUG
Obr. 2a . , :·' Obr. 2b ····
I
I A /ľubovoľné jednotky/
1,2
J i
3/8 ,1.0 ···· ·« ·« • · · · · • · ···· • · · · · • · · · · • ·· ·» ··
PP ·· ·· • · · • » • · · • · · ·· ··· s
p o
w
P
I
0,8 i
0,6
10,4
-L-——j——:—i-.—'—p-1 i-i
0 1 2 3 4
Čas (s ) (tí
O
Í0,2
P
P
Pm
ÍO.O L í -1 ···· • ·· • · · ···· · ··· ·· ·· »· ·· θ')
4/8
T^ÍŔii: 6ä ôbr. 6b'.
• ···« ·« ·· ·· · · · · • ·. · · ··· • · · · · · · · • · · · · · , · ··· ·· ·· ·· ·· *· • · · ·
·. · · • · · • .· · '· · ·· · · /¥>
5/8 .Obr, 8i • é ·· · *··· ·· ·· ·· • · · · ···· • · · · · · · · · ··· ·♦ ··· « · • · · · · · ·· • · · · ·· · · · · · ·
6/8 . ObrJlOa ’ Obr. 10b .
Obr. 10c
Obr. 10d ·· ·· . · · · · « · · · ·· · · ··· · · φ • ·-·· ·· ··<'· · • · · · · · · « · · ····· -«· ·· . ······
Ί/6
50. '100 150 200 -250 300 35Ó 400 450. 500 í ' Obť 11a
Obr. 11b ····
8/8 .
50 100 ·. 150 200 250 - 300 . . 350 400 450 500.
Obr. 12a
Obr. 12b
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US12955199P | 1999-04-16 | 1999-04-16 | |
| PCT/EP2000/003280 WO2000063695A1 (en) | 1999-04-16 | 2000-04-12 | Encoding of microcarriers |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK14452001A3 true SK14452001A3 (sk) | 2002-10-08 |
| SK287052B6 SK287052B6 (sk) | 2009-10-07 |
Family
ID=22440543
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1445-2001A SK287052B6 (sk) | 1999-04-16 | 2000-04-12 | Kódovaný mikronosič a spôsob jeho výroby, spôsob jeho čítania, spôsob detekcie prítomnosti analytov vo vzorke a chemická knižnica |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US8939376B1 (sk) |
| EP (1) | EP1173760B1 (sk) |
| JP (1) | JP4500455B2 (sk) |
| KR (1) | KR100660600B1 (sk) |
| CN (1) | CN1271410C (sk) |
| AR (1) | AR023504A1 (sk) |
| AT (1) | ATE298888T1 (sk) |
| AU (1) | AU771517B2 (sk) |
| CA (1) | CA2370315C (sk) |
| CZ (1) | CZ301174B6 (sk) |
| DE (1) | DE60021070T2 (sk) |
| DK (1) | DK1173760T3 (sk) |
| HU (1) | HU227484B1 (sk) |
| IL (2) | IL145970A0 (sk) |
| MY (1) | MY132268A (sk) |
| NO (1) | NO329706B1 (sk) |
| NZ (1) | NZ515214A (sk) |
| PL (1) | PL209100B1 (sk) |
| RU (1) | RU2242746C2 (sk) |
| SK (1) | SK287052B6 (sk) |
| TW (1) | TWI249033B (sk) |
| WO (1) | WO2000063695A1 (sk) |
| ZA (1) | ZA200108305B (sk) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6919009B2 (en) | 1999-10-01 | 2005-07-19 | Nanoplex Technologies, Inc. | Method of manufacture of colloidal rod particles as nanobarcodes |
| US7045049B1 (en) | 1999-10-01 | 2006-05-16 | Nanoplex Technologies, Inc. | Method of manufacture of colloidal rod particles as nanobar codes |
| US7225082B1 (en) * | 1999-10-01 | 2007-05-29 | Oxonica, Inc. | Colloidal rod particles as nanobar codes |
| JP2004537712A (ja) * | 2000-10-18 | 2004-12-16 | バーチャル・アレイズ・インコーポレーテッド | 多重細胞分析システム |
| EP2275819B1 (en) * | 2000-10-19 | 2019-11-27 | Mycartis NV | Method for the manipulation of microcarriers for an identification purpose |
| DE10117274B4 (de) * | 2001-04-06 | 2005-03-03 | Hte Ag The High Throughput Experimentation Company | Verfahren zur Analyse und Archivierung von wenigstens einer Materialbibliothek |
| GB0109544D0 (en) * | 2001-04-18 | 2001-06-06 | Scient Generics Ltd | Chemical libraries based on coded particles |
| GB0111470D0 (en) * | 2001-05-10 | 2001-07-04 | Scient Generics Ltd | Homogenous photoresist functionalisation |
| DE10137864B4 (de) * | 2001-08-02 | 2005-05-19 | Picorapid Technologie Gmbh | Substanzträger mit Markierung |
| CN1295347C (zh) * | 2004-07-13 | 2007-01-17 | 东南大学 | 利用光子微粒编码的微通道阵列式生物芯片及应用方法 |
| US8124943B1 (en) | 2006-04-06 | 2012-02-28 | Lugade Ananda G | Methods and systems for altering fluorescent intensities of a plurality of particles |
| EP1903337B1 (en) * | 2006-09-20 | 2015-07-22 | Mycartis N.V. | Coating for microcarriers |
| KR100938491B1 (ko) | 2007-10-24 | 2010-01-25 | 한국생명공학연구원 | 생체분자 표지용 수용성 광변색 화합물 및 이를 이용한생체분자의 검출방법 |
| RU2515603C2 (ru) * | 2008-05-06 | 2014-05-20 | Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. | Осветительная система и способ обработки света |
| EP2367633B1 (en) * | 2008-12-23 | 2019-03-27 | MyCartis N.V. | Assay device and method for performing biological assays |
| RU2609630C2 (ru) | 2009-02-27 | 2017-02-02 | Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. | Геномный отбор и секвенирование с помощью кодированных микроносителей |
| CN101543755B (zh) * | 2009-04-01 | 2011-07-27 | 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 | 编码微球的制备方法 |
| EP2426214A1 (en) | 2010-09-01 | 2012-03-07 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Method for amplifying nucleic acids |
| CN102147872A (zh) * | 2011-01-05 | 2011-08-10 | 东南大学 | 一种微载体的编码方法 |
| EP2484447A1 (en) | 2011-02-07 | 2012-08-08 | Biocartis SA | Improved encoded microcarriers, assay system using them and method for performing an assay |
| CN102279261B (zh) * | 2011-06-20 | 2013-09-18 | 东南大学 | 一种图案编码微载体的喷墨打印制备方法 |
| EP2685262A1 (en) | 2012-07-11 | 2014-01-15 | Biocartis SA | Method and device for performing biological and/or chemical assays |
| EP2684605A1 (en) * | 2012-07-11 | 2014-01-15 | Biocartis SA | Method for injecting microparticles into a microfluidic channel |
| EP2690057A1 (en) | 2012-07-24 | 2014-01-29 | Biocartis SA | Method for producing structured microcarriers |
| EP2690059A1 (en) * | 2012-07-24 | 2014-01-29 | Biocartis SA | Method for producing microcarriers |
| EP2690058A1 (en) | 2012-07-24 | 2014-01-29 | Biocartis SA | Method for producing microcarriers and for performing biological assays |
| TWI737614B (zh) | 2015-06-11 | 2021-09-01 | 博錸生技股份有限公司 | 已編碼微載體及其製造方法以及用以進行多工分析之包含該等已編碼微載體之套件 |
| US10436776B2 (en) | 2015-11-20 | 2019-10-08 | Plexbio Co., Ltd. | Methods and systems for selection of detection area |
| US10019815B2 (en) | 2016-03-17 | 2018-07-10 | Plexbio Co., Ltd. | Methods and systems for image differentiated multiplex assays |
| US11796535B2 (en) | 2016-09-16 | 2023-10-24 | Plexbio Co., Ltd. | Methods and systems for multiplex assays |
| US10894975B2 (en) | 2016-12-09 | 2021-01-19 | Plexbio Co., Ltd. | Image differentiated multiplex assays for multiplex detection of DNA mutations |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3786237A (en) * | 1972-03-13 | 1974-01-15 | R Postal | Mechanically readable system using premarked substrate |
| US4390452A (en) * | 1979-08-20 | 1983-06-28 | Minnesota Mining & Manufacturing Company | Microparticles with visual identifying means |
| JP2690297B2 (ja) * | 1985-08-05 | 1997-12-10 | 東レ株式会社 | 有用たん白質の産生方法 |
| US6248319B1 (en) | 1989-10-16 | 2001-06-19 | Krisztina M. Zsebo | Method for increasing hematopoietic progenitor cells by stem cell factor polypeptides |
| US5129974A (en) * | 1990-08-23 | 1992-07-14 | Colorcode Unlimited Corporation | Microlabelling system and method of making thin labels |
| DK0670555T3 (da) * | 1992-09-28 | 2000-09-18 | Olympus Optical Co | Registreringsmedium med prikkode og informationsregistreringssystem |
| US5565324A (en) | 1992-10-01 | 1996-10-15 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags |
| US5721099A (en) * | 1992-10-01 | 1998-02-24 | Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags |
| US5492222A (en) * | 1994-04-13 | 1996-02-20 | Illinois Tool Works Inc. | Bar code blocking carrier |
| GB2318666B (en) | 1994-04-25 | 1998-07-15 | Univ Hertfordshire | Coded items for labelling objects |
| US5961923A (en) | 1995-04-25 | 1999-10-05 | Irori | Matrices with memories and uses thereof |
| CN1181720A (zh) * | 1995-04-25 | 1998-05-13 | 伊萝莉公司 | 可远程编程的存储器材料及其应用 |
| US5751629A (en) | 1995-04-25 | 1998-05-12 | Irori | Remotely programmable matrices with memories |
| US6329139B1 (en) * | 1995-04-25 | 2001-12-11 | Discovery Partners International | Automated sorting system for matrices with memory |
| GB9521943D0 (en) | 1995-10-26 | 1996-01-03 | Univ Hertfordshire | Coded particles for process sequence tracking in combinatorial compound library preparation |
| WO1997020074A1 (en) * | 1995-11-30 | 1997-06-05 | Wlodek Mandecki | Electronically-solid-phase assay biomolecules |
| US5736332A (en) * | 1995-11-30 | 1998-04-07 | Mandecki; Wlodek | Method of determining the sequence of nucleic acids employing solid-phase particles carrying transponders |
| US5838361A (en) * | 1996-01-11 | 1998-11-17 | Micron Technology, Inc. | Laser marking techniques |
| US6023540A (en) * | 1997-03-14 | 2000-02-08 | Trustees Of Tufts College | Fiber optic sensor with encoded microspheres |
| DE69838067T2 (de) | 1997-05-23 | 2008-03-13 | Bioarray Solutions Ltd. | Farbkodierung und in situ abfrage von matrix-gekoppelten chemischen verbindungen |
| US20020084329A1 (en) | 1997-07-16 | 2002-07-04 | Kaye Paul H. | Coded items for labeling objects |
| US7115884B1 (en) | 1997-10-06 | 2006-10-03 | Trustees Of Tufts College | Self-encoding fiber optic sensor |
| KR20010031140A (ko) | 1997-10-14 | 2001-04-16 | 루미넥스 코포레이션 | 정밀 형광염료 입자 및 그의 제조방법 그리고 그의 사용 |
| US6168913B1 (en) | 1997-10-14 | 2001-01-02 | Abbott Laboratories | Coding combinatorial libraries with fluorine tags |
| AUPP032897A0 (en) | 1997-11-12 | 1997-12-04 | University Of Queensland, The | Oligomer libraries |
| DE69907630T2 (de) | 1998-01-22 | 2004-02-26 | Luminex Corp., Austin | Mikropartikel mit multiplen fluoreszenz-signalen |
| US6844170B1 (en) | 1998-03-19 | 2005-01-18 | Human Genome Sciences, Inc. | Cytokine receptor common gamma chain like |
| US6214618B1 (en) | 1998-04-07 | 2001-04-10 | Solohill Engineering, Inc. | Microcarrier beads having a styrene copolymer core and a covalently linked tri-methylamine exterior |
| GB9820163D0 (en) * | 1998-09-17 | 1998-11-11 | Sentec Ltd | Micro-fabricated coded labels, reading systems and their applications |
| US6908737B2 (en) * | 1999-04-15 | 2005-06-21 | Vitra Bioscience, Inc. | Systems and methods of conducting multiplexed experiments |
| TWI220927B (en) * | 2000-05-12 | 2004-09-11 | Rong-Seng Chang | Method for producing a micro-carrier |
| EP2275819B1 (en) * | 2000-10-19 | 2019-11-27 | Mycartis NV | Method for the manipulation of microcarriers for an identification purpose |
| US6365312B1 (en) * | 2001-05-24 | 2002-04-02 | Xerox Corporation | Marking particles |
| US7350711B2 (en) * | 2006-02-28 | 2008-04-01 | Symbol Technologies, Inc. | Ambient light shield and color filter for imaging-based bar code reader |
-
2000
- 2000-04-12 AT AT00922629T patent/ATE298888T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-04-12 CA CA002370315A patent/CA2370315C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-12 PL PL351793A patent/PL209100B1/pl unknown
- 2000-04-12 US US09/958,655 patent/US8939376B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-12 IL IL14597000A patent/IL145970A0/xx active IP Right Grant
- 2000-04-12 HU HU0200802A patent/HU227484B1/hu unknown
- 2000-04-12 SK SK1445-2001A patent/SK287052B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-04-12 JP JP2000612749A patent/JP4500455B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-12 EP EP00922629A patent/EP1173760B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-12 RU RU2001130889/04A patent/RU2242746C2/ru active
- 2000-04-12 CZ CZ20013706A patent/CZ301174B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-04-12 NZ NZ515214A patent/NZ515214A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-04-12 AU AU42952/00A patent/AU771517B2/en not_active Expired
- 2000-04-12 WO PCT/EP2000/003280 patent/WO2000063695A1/en active IP Right Grant
- 2000-04-12 CN CNB008090157A patent/CN1271410C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-12 DE DE60021070T patent/DE60021070T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-12 DK DK00922629T patent/DK1173760T3/da active
- 2000-04-12 KR KR1020017012934A patent/KR100660600B1/ko active IP Right Grant
- 2000-04-14 MY MYPI20001599A patent/MY132268A/en unknown
- 2000-04-14 AR ARP000101747A patent/AR023504A1/es active IP Right Grant
- 2000-04-14 TW TW089106948A patent/TWI249033B/zh not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-10-09 ZA ZA200108305A patent/ZA200108305B/xx unknown
- 2001-10-15 NO NO20015019A patent/NO329706B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-10-16 IL IL145970A patent/IL145970A/en not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-12-27 US US11/319,153 patent/US20060097056A1/en not_active Abandoned
-
2014
- 2014-03-25 US US14/224,338 patent/US8967483B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-10-31 US US14/529,589 patent/US20150057190A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK14452001A3 (sk) | Kódovanie mikronosičov | |
| Braeckmans et al. | Encoding microcarriers: present and future technologies | |
| KR100991052B1 (ko) | 생체분자 기판 및 그것을 이용한 검사 및 진단의 방법 및장치 | |
| EP1388587A1 (en) | Biomolecular substrate and method and apparatus for examination and diagnosis using the same | |
| US20100075859A1 (en) | System and method for solution based multiparameter analysis of analytes | |
| US20100203572A1 (en) | Method for carrying out and evaluating mix & measure assays for the measurement of reaction kinetics, concentrations and affinities of analytes in multiplex format | |
| US7361515B2 (en) | Method and test kit for detecting analytes in a sample | |
| WO2002012897A2 (en) | Automated information processing in randomly ordered arrays | |
| WO2008091378A2 (en) | High throughput ligand binding assays and reagents | |
| WO2001062699A1 (en) | Micro-label biological assay system | |
| JP2005345186A (ja) | キャピラリービーズアレイ及び生体高分子の検出及び測定方法 | |
| JP2005214940A (ja) | ビーズ位置情報識別方法 | |
| WO2018168137A1 (ja) | 生体物質解析方法、生体物質解析装置、生体物質解析用プログラム及び生体物質解析システム |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Assignment and transfer of rights |
Owner name: MYCARTIS NV, ZWIJNAARDE / GHENT , BE Free format text: FORMER OWNER: BIOCARTIS SA, ECUBLENS, CH Effective date: 20150327 |
|
| MK4A | Expiry of patent |
Expiry date: 20200412 |